СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА "ЯНТАРНЫЙ БИОСТИМУЛЯТОР" ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ Российский патент 2007 года по МПК A61K31/194 A61K31/245 A61K35/12 A61P37/04 

Изобретение относится к ветеринарии и касается способов получения комплексных препаратов для инъекций для повышения резистентности организма животных.

Известен способ получения препарата для повышения резистентности организма животных путем гидролиза тканей паренхиматозных органов янтарной кислотой (Евглевский А.А. и др. Патент РФ № 2237485 от 10 октября 2004 года). Биологическое действие препарата основано на повышении общей резистентности организма животных, однако он не обладает антисептической активностью. Кроме того, данный препарат не производится биологической промышленностью. Несмотря на простоту его получения, тем не менее, техническое выполнение представляет определенные трудности.

Для устранения указанных недостатков и повышения иммуностимулирующего действия в сочетании с антисептическим действием для упрощения процесса приготовления препарата предлагается способ получения комплексного препарата, включающего раствор янтарной кислоты, в который дополнительно вводится тканевый препарат - антисептик - стимулятор Дорогова второй фракции (АСД Ф-2). (Ветеринарное законодательство СССР, т.№ 2. Наставление по применению АСД второй фракции в ветеринарной практике от 16 июля 1958 года с.87-89). Однако недостатком данного препарата является чрезвычайно высокая щелочная реакция, что не позволяет его применение для инъекций. Известно, что препараты, предназначенные для инъекций, при меньшей концентрации биологически активных веществ, тем не менее, обладают более выраженными и более быстрым биологическим действием нежели их лекарственные формы, применяемые через рот. У применяемых через рот препаратов основные потери действующего вещества происходят в результате разрушительного воздействия ферментов желудочного сока.

Включение препарата АСД Ф-2 в состав комплексного препарата устраняет негативные свойства АСД Ф-2, препятствующие применению его в виде инъекций. Предлагаемый способ получения комплексного препарата, повышающего устойчивость организма животных к неблагоприятным факторам внешней среды, нормализующего обменные процессы в клетках при различного рода иммунодефицитах, нарушениях обмена веществ, экзо- и эндогенных интоксикациях, заключается в приготовлении водного раствора, компоненты которого производятся промышленностью, относительно недороги и доступны, что весьма важно для животноводства.

Новым является то, что состав комплексного препарата включает 1% раствор янтарной кислоты, 4% АСД второй фракции; 0,25% новокаина. При этом 1% концентрация янтарной кислоты соответствует ее количественному содержанию 10 мг в 1 мл, что позволяет стандартизировать раствор и обеспечить необходимый количественный уровень при инъекциях для запуска процесса восстановления здоровья клетки и усиления эффективности действия других лекарств, в частности антисептика стимулятора АСД второй фракции. Последнее делает возможным применение АСД второй фракции в минимальных дозах при парентеральном методе введения. Низкомолекулярные компоненты данной фракции по своей структуре родственны продуктам клеточного обмена и, следовательно, не воспринимаются организмом как чужеродные, что исключает индуцирование аллергических реакций при инъекциях.

Включение в состав комплексного препарата новокаина в 0,25% концентрации диктуется необходимостью снятия болевой реакции при инъекциях. Кроме того известно, что тканевые препараты на растворе новокаина оказывают более быстрое действие, чем взвеси, приготовленные на физрастворе.

Пример 1 осуществления способа. Для приготовления комплексного препарата использовали 950 мл дистиллированной воды, в которой последовательно растворили 10 г янтарной кислоты, что соответствовало ее 1% концентрации; 25 мг новокаина. Добавление 40 мл АСД второй фракции позволило нейтрализовать повышенную кислотность, доведя ее рН от 3,0 до рН 8,0. Добавлением к указанному раствору едкого натрия нейтрализовали остаточную повышенную кислотность, доведя ее до требуемой (рН 6,9-7,0). Полученный готовый продукт имел слабо-зеленовато-коричневую окраску и был прозрачным. Препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и провели стерилизацию автоклавированием в режиме 1-1,1 атм в течение 20 минут.

Полученный комплексный препарат проверили на стерильность, безвредность, протективную активность.

При контрольных высевах комплексного препарата на мясопептонный агар (МПА), мясопептонный бульон (МПБ) и МПБ под вазелиновое масло рост микрофлоры отсутствовал, что свидетельствовало о его стерильности.

При внутрибрюшинном введении препарата в дозе 0,5 мл белым мышам массой 16-18 г состояния угнетения или их гибели в течение 10 дней не наблюдали.

Испытание защитных свойств провели на белых мышах при моделировании острого инфекционного процесса культурой синегнойной палочки и острого токсикоза экзотоксином кишечной палочки. В качестве активного контроля для сравнения использовали белых мышей, которым в аналогичной дозе были сделаны инъекции АСД второй фракции, разведенной дистиллированной водой в соотношении 4:100(4%), и сукцината натрия однопроцентной концентрации. Комплексный препарат, как и его составные компоненты, вводились внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Спустя два дня после инъекций одну группу мышей заразили смертельной дозой синегнойной палочки, а другую подвергли интоксикации токсином кишечной палочки. Результаты изучения защитного действия препаратов представлены в таблице 1 и 2.

Таблица 1Уровень защиты белых мышей при заражении культурой синегнойной палочкиВид препаратаКоличество мышейЧисло погибших мышей после заражения в дни наблюденияОсталось живых на 10 день  2 день3 день4 день5 день6 день 4% АСД - второй фракции102(20%)1(10%)---7 (70%)1% сукцинат натрия104(40%)2(20%)1(10%)--3 (30%)Комплексный препарат101(10%)1(10%)---8 (80%)Контроль (интактные белые мыши)32(66,6%)1(33,3%)----        Таблица 2Уровень защиты белых мышей при моделировании острого токсикоза токсином кишечной палочкиВид препаратаКоличество мышейЧисло погибших мышей после введения токсина в дни наблюденийОсталось живых на 10 день  2 день3 день4 день5 день6 день 4% АСД - второй фракции104 (40%)1 (10%)---5 (50%)1% сукцинат натрия102 (20%)1 (10%)1 (10%)--6 (60%)Комплексный препарат102 (20%)1 (10%)---7 (70%)Контроль33 (100%)     

Исходя из полученных данных можно утверждать, что АСД второй фракции оказал выраженное антиинфекционное, а сукцинат натрия - антитоксическое действие, однако при парентеральном введении эти препараты вызывают выраженную болевую реакцию. Препарат, изготовленный из этих двух компонентов, обладал выраженным антиинфекционным и антитоксическим свойствами и отличался отсутствием болевой реакции при введении..

Пример 2 осуществления способа. В стеклянной биобутыли, содержащей 9 л 500 мл дистиллированной воды, последовательно растворили 100 г янтарной кислоты, добавление 400 мл АСД второй фракции позволило практически инактивировать повышенную кислотность. В указанную смесь добавили 250 г новокаина и довели рН 6,9-7,0 дробным добавлением 10% раствора едкого натрия. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 200 мл и провели на стерилизацию автоклавированием в режиме 1,0-1,1 атмосферы в течение 30 минут.

Полученную серию препарата после проверки на стерильность и безвредность вышеуказанными методами испытали на телятах с симптомокомплексом диареи, бронхопневмонии, гипотрофии.

Изучение лечебного действия комплексного препарата при диареи провели на 12 телятах в возрасте 7-10 дней. Препарат ввели внутримышечно в дозе 2,0 мл. В качестве контроля служили 10 телят с аналогичным симптомокомплексом заболевания, которым ежедневно проводился курс антибиотикотерапии гентамицином. Результаты наблюдения за подопытными телятами свидетельствовали о том, что уже на второй день исчезли признаки диареи у 3 телят (25%), а у остальных наметилась выраженная тенденция улучшения клинического состояния. Симптомы заболевания полностью редуцировались еще у 7 (58,3%) на 3-4 и 5 сутки. У остальных 2 телят клинические признаки диареи были слабо выражены. Повторно сделанные инъекции комплексного препарата этим 2 телятам в дозе 1,5 мл обеспечили полное клиническое выздоровление на второй день. В контрольной группе ежедневный курс антибиотикотерапии обеспечил клиническое выздоровление 4 телят (40%) на 3 день; 3 телят (30%) на 4 день и у 3 телят на 5 и 6 день.

Изучение лечебного действия комплексного препарата при бронхопневмонии провели на 9 телятах в возрасте 30-40 дней. Комплексный препарат применяли внутримышечно в дозе 2,5 мл. Контролем служили 9 телят с аналогичным симптомокомплексом, для лечения которых использовали антибиотик гентамицин согласно наставлению по его применению. Тенденция улучшения клинического состояния у опытных телят обозначилась уже на второй день после инъекций комплексного препарата. На 4 день подопытным телятам сделали повторные инъекции комплексного препарата в дозе 2,0 мл. Это обеспечило еще более выраженное улучшение их клинического состояния. На 7 день клиническое выздоровление было диагностировано у 5 (55%) подопытных телят. У остальных 4 телят диагностировались остаточные симптомы заболевания, которые после третьей инъекции препарата в дозе 1,5 мл исчезли на 2 и 3 сутки.

В контрольной группе полное клиническое выздоровление было достигнуто у 2 телят на 7 день; у 5 телят на 9-10 сутки. У одного теленка заболевание перешло в хроническую форму.

Иммуностимулирующее действие комплексного препарата изучено на 5 телятах 20-25 дневного возраста с признаками гипотрофии, которым были сделаны его внутримышечные инъекции в дозе 2,0 мл. В качестве контроля служила аналогичная группа телят-гипотрофиков. Оценка влияния препарата на гематологические показатели и факторы неспецифической резистентности была проведена на 5 и 10 сутки, данные которой представлены в таблице 3.

Таблица 3Динамика гематологических показателей и факторов неспецифической резистентности телят-гипотрофиков на фоне применения комплексного препаратаПоказателиОпытные телятаКонтрольные телята Исходные данные5 сутки10 суткиИсходные данные5 сутки10 суткиГемоглобин (г/л)85,4+2,093,5±1,794,0±1,286,2±1,487,3±1,587,8±2,1Эритроциты(10¹²/л)6,4±0,37,7±0,27,8±0,16,5±0,16,6±0,26,6±0,3Общий белок (г/л)56,8±0,762,4±1,563,7±1,257,2±1,357,4±1,258,2±0,7Бактерицидная активность сыворотки крови (%)47,9±1,663,2±1,465,1±1,847,8±1,449,2±1,349,3±1,1Лизоцимная активность сыворотки крови (%)1,7±0,13,6±0,23,8±0,21,7±0,41,8±0,31,8±0,4Фагоцитарная активность нейтрофилов (%)47,8±1,968,3±2,179,6±2,249,2±1,451,4±1,152,7±1,3

Полученные данные свидетельствуют о том, что применение комплексного препарата оказало позитивное влияние на гемопоэз и выраженное стимулирующее воздействие на факторы неспецифической резистентности.

Таким образом, предложенный способ получения комплексного препарата на основе янтарной кислоты и антисептика - стимулятора АСД - второй фракции дает возможность получить высокоактивный иммуностимулирующий препарат для инъекций, обладающий выраженным антиинфекционным действием. Преимущество предложенного способа заключается также в том, что он прост в техническом выполнении в условиях производства.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к получению препаратов для повышения резистентности организма животных. Способ получения препарата "Янтарный биостимулятор" для повышения резистентности организма животных дает возможность получить биологически активный препарат в виде водного раствора, включающий в своем составе 1% янтарной кислоты, 4% антисептика стимулятора Дорогова второй фракции (АСД-2), 0,25% новокаина, рН 6,9-7,0. Препарат стерилизуют автоклавированием в режиме 1,0-1,1 атм в течение 20-30 минут. Изобретение обеспечивает техническую простоту выполнения способа в условиях производства, а также пригодность препарата для инъекционного использования, что позволяет добиться более выраженного и быстрого стимулирующего воздействия на иммунорезистентность организма животных при значительно меньшем по сравнению с применением через рот количестве указанных компонентов. 2 з. п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ получения препарата для повышения резистентности организма животных, включающий смешивание янтарной кислоты с тканевым препаратом, доведение рН препарата до 6,9-7,0, стерилизацию полученного препарата автоклавированием, отличающийся тем, что в качестве тканевого препарата используют АСД Ф-2, дополнительно вводят новокаин и готовят водный раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Янтарная кислота1АСД Ф-24Новокаин0,25Дистиллированная водаостальное