СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП РИСКА ПО РАЗВИТИЮ ВНУТРИУТРОБНОЙ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ В РАННЕМ НЕОНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/53 

Область применения.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.

Уровень техники

Аналогами данного изобретения являются описанные в отечественной и зарубежной литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью диагностику внутриутробной хламидийной инфекции. В настоящее время общепринятым критерием для постановки диагноза внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных является обнаружение возбудителя или антигена, а также выявление специфических IgM. в пуповинной крови (1, 2, 3, 5, 8). Это не всегда обеспечивает правильную постановку диагноза, так как в раннем периоде новорожденности даже при использовании современных высокочувствительных методов, вероятность определения возбудителя или антигена невелика и часто дает ложноположительные результаты. Оценка специфического противохламидийного иммунитета вызывает определенные сложности из-за иммуносупрессии клеточных и гуморальных реакций новорожденного. Кроме того, инфицирование новорожденного не всегда завершается развитием инфекционного процесса, что не позволяет при использовании данных методов исследования прогнозировать осложнения в раннем неонатальном периоде адаптации, и формировать группу риска по развитию хламидийной инфекции у данной категории детей.

Прототипом предложенного способа данного изобретения является описанный в отечественной литературе дополнительный диагностический критерий перинатальной патологии, заключающийся в определении уровней сывороточного IgG, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), активности комплемента - в сыворотке крови; и фиксированных иммунных комплексов в последе (4). Данные критерии позволяют прогнозировать развитие внутриутробной инфекции у новорожденных без дифференцировки, но не позволяют прогнозировать развитие именно хламидийной инфекции, поскольку не используют определение специфических антител к хламидиям.

Сущность изобретения

Цель изобретения заключается в разработке способа выявления групп риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных детей в отсутствии выявления антигена к хламидиям на основании лабораторного исследования сыворотки крови в раннем неонатальном периоде новорожденности, ориентированного на определение содержания IgG антител к липополисахаридам хламидий (IgG к LPS), функциональной активности IgG к антигенам главного белка наружной мембраны (IgG к МОМР) хламидий, а также концентрации циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой, содержащих IgG (ЦИК низкомол.).

Способ осуществляют следующим образом.

Определение концентрации антител класса IgG к LPS хламидий проводят иммуноферментным анализом в сыворотке крови согласно инструкции фирмы производителя ("MEDAK", Германия). Количество IgG к LPS хламидий рассчитывают по формуле: Величину функциональной аффинности (Relative High Affinity Vallue - RHAV) оценивают методом Luxton R.W., Thompson E.J. (1990) в нашей модификации (6, 9), при этом используют тест-системы «Хлами Вест-IgG-стрип Ch. trachomatis, pneumoniae, psittaci», НПО «Вектор-Бест» (Россия).

Определение функциональной аффинности антител осуществляют следующим образом: в предварительно промытые фосфатным буфером лунки полистиролового планшета вносят контрольные (положительные и отрицательные) сыворотки и опытные образцы (положительную на хламидий сыворотку пациентов берут в разведении, дающем при длине волны 492 нм оптическую плотность 1000-1500 единиц). После 30 минутной инкубации в термостате при 37°С и последующей отмывки фосфатным буфером в лунки добавляют аммоний роданистый (CH₄N₂S -о.с.ч.) ("MERCK", Германия) в различных концентрациях (1,0; 1,5; 2,0; 2,5 М) и инкубируют 10 минут при комнатной температуре. Затем лунки планшета отмывают фосфатным буфером и добавляют конъюгат. Далее ход реакции проводят по инструкции используемой тест-системы. Интенсивность окрашивания оценивают по величине оптической плотности с помощью фотометра.

Величину функциональной аффинности (RHAV) IgG антител определяют по формуле: RHAV=А₁×7+А₂×6+А₃×5+А₄×4, где A₁, А₂, А₃, А₄ - процент от начального количества антител, оставшихся в лунке после их обработки роданистым аммонием в концентрациях 2,5; 2,0; 1,5; 1,0 М соответственно.

Определение IgG-содержащих ЦИК выполняют с помощью 3% и 4% концентраций полиэтиленгликоля (ПЭГ) - 6000. Иммунные комплексы, выделенные при 4% концентрации ПЭГ, оценивают как содержащие крупные, средние и малые по размеру агрегаты (полный состав ЦИК). При использовании 3% концентрации выделяют крупные ЦИК. Содержание средне- и низкомолекулярных ЦИК определяют по разности концентраций IgG в комплексах, полученных соответственно в 4% и 3% ПЭГ(7).

На основании математической обработки, методом дискриминантного анализа выведено решающее правило прогноза развития хламидийной инфекции, основанное на выявлении иммунологических признаков (в раннем периоде новорожденности), которое заключается в определении дискриминантного показателя F по формуле:

F=X1×K₁+Х2×К₂+Х3×К₃+const 1, где значения Х соответствуют иммунологическим параметрам:

X1 - концентрация ЦИК с низкой молекулярной массой, содержащих IgG (усл.ед.),

Х2 - содержание IgG к LPS хламидий (усл.ед.),

Х3 - функциональная аффинность IgG к МОМР хламидий (усл.ед.), а

К₁=0,04,

К₂=0,002,

К₃=- 0,002

и const 1=- 0,48

Далее установлено, что при F<0 делают заключение о принадлежности новорожденных к группе условно здоровых детей, а при F>0 - к группе риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции.

Предлагаемый способ дает вероятность правильной классификации (специфичность метода) - 94,7% для нормы, для патологии (информативность метода) - 100%. Эффективность метода 97,1%.

Пример 1. Новорожденная Кондратьева (истор. развития новорожденного №55958), родилась от доношенной беременности, отягощенной урогенитальным хламидиозом (мать в течение беременности была пролечена). Проведено углубленное клинико-лабораторное обследование ребенка на 3 сутки жизни. Иммунологические показатели крови: содержание IgG к LPS хламидий - 178,3 усл.ед., титр IgG к МОМР хламидий 1/80, функциональная активность IgG к МОМР хламидий - 581,1 усл.ед., концентрация ЦИК низкой молекулярной массы, содержащих IgG - 0,0. Результаты исследования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на антигены к хламидиям в моче и соскобе с задней стенки глотки - отрицательны.

По формуле определили значение показателя F. Получили значение F=-1,28 что меньше 0, а значит, подтверждает отсутствие признаков внутриутробного инфицирования. Клинический диагноз при рождении "Хроническая гипоксия легкой степени тяжести. Группа здоровья II (новорожденный от инфицированной матери)".

На 5 сутки ребенок выписан домой в удовлетворительном состоянии.

Пример 2. Ребенок Дубровина (истор. развития новорожденного №1072), родилась от доношенной беременности, отягощенной урогенитальным хламидиозом (мать в течение беременности была пролечена). Проведено углубленное клинико-лабораторное обследование ребенка на 3 сутки жизни. Иммунологические показатели крови: содержание IgG к LPS хламидий - 639,8 усл.ед., титр IgG к МОМР хламидий 1/160 функциональная активность IgG к МОМР хламидий - 128,6 усл.ед., концентрация ЦИК низкой молекулярной массы, содержащих IgG - 36,0 усл.ед. Результаты исследования на ПЦР (антигены к хламидиям) в моче и соскоб с задней стенки глотки - отрицательны. По уравнению определили значение показателя F. Получили значение F=1,98; что больше 0, а значит, подтверждает наличие признаков внутриутробного инфицирования. Клинический диагноз при рождении ″Инфекция перинатального периода (острый инфекционный энтероколит, гипотоксические нарушения центральной нервной системы″). На 3-и сутки переведена в отделение ранней реабилитации новорожденных. После антибактериального лечения выписана домой на 26 сутки в удовлетворительном состоянии.

Таким образом, предлагаемый нами способ выявления групп риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции позволяет своевременно решить вопрос о необходимости проведения терапевтической коррекции выявленных нарушений. Способ высокочувствителен, позволяет быстро получить результаты и однозначно их трактовать.

Источники информации

1. Воропаева С.Д. Диагностика и лечение хламидийной инфекции половых путей у женщин // Акуш. и гин. - 1997. - №5. - С.60-63.

2. Евсюкова И.И. Антибиотикотерапия хламидийной инфекции у беременных и новорожденных детей // Рос.вестник перинат. и педиатр.-2001. - №3. - C.11-15.

3. Запруднов А.М., Мазанкова Л.Н., Панкратова В.Н. Хламидийная инфекция у детей: диагностика, лечение, профилактика // Рос. вестник перинат. и педиат. - 2002. - №3. - С.46-49.

4. Королева Л.И. Роль факторов гуморального иммунитета в развитии перинатальной патологии при беременности, осложненной генитальным хламидиозом // Рос.вести, перинат. и педиатр. - 2000.

5. Ожегов А.М., Мякишева Л.С., Плахотина Н.Г. Частота выявления инфекций, относимых к внутриутробным, в соматическом стационаре у детей Удмуртии // Педиатрия. - 2000. - №4. - С.61-63.

6. Способ определения функциональной активности антихламидийных антител Заявка на изобретение от 7.06.04 №2004117369 (Ремизова И.И., Чистякова Г.Н., Черданцева Г.А.).

7. Туманова И.А. Определение молекулярных масс и концентраций иммунных комплексов методом светорассеивания: Автореф. дис... канд. биол. наук - М., 1986. - 22 с.

8. Царегородцев А.Д., Рюмина И.И. Заболеваемость новорожденных внутриутробными инфекциями и задачи по ее снижению в Российской Федерации // Рос.вестн.перинат. и педиатр. - 2001. - №2. - С.4-7.

9. Luxton R.W., Thompson E.J. Affinity distributions of antigen-specific in patients with multiple sclerosis and patients with viral encephalitis // Journal of lmmunological Methods. - 1990. - vol.131. - P.277-282.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для определения групп риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде. Сущность способа состоит в том, что определяют содержание IgG к липополисахаридам хламидий (Х2), функциональную аффинность IgG к главному белку внешней мембраны хламидий (Х3), концентрацию циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой, содержащих IgG (X1), вычисляют дискриминационную функцию F по формуле: F=Х1×0,04+Х2×0,002+Х3×(-0,002)-0,48, и при значении F меньше 0 новорожденных относят к группе условно здоровых детей, а при F больше 0 - к группе риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции. Техническим результатом является создание способа, позволяющего установить критерии для определения групп риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде.

Способ определения групп риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде на основании иммунологических показателей, отличающийся тем, что определяют содержание IgG к липополисахаридам хламидий (Х2), функциональную аффинность IgG к главному белку внешней мембраны хламидий (Х3), концентрацию циркулирующих иммунных комплексов с низкой молекулярной массой, содержащих IgG (X1), вычисляют дискриминационную функцию F по формуле F=X1·0,04+Х2·0,002+Х3·(-0,002)-0,48 и при значении F меньше 0 новорожденных относят к группе условно здоровых детей, а при F больше 0 - к группе риска по развитию внутриутробной хламидийной инфекции.