ГЕМОСТАТИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ Российский патент 2006 года по МПК A61K35/14 A61L15/20 A61P3/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к местным гемостатическим средствам.

Коллагеновые материалы широко используются в качестве местных гемостатических средств. Известно использование микрокристаллического коллагена на основе набухшего в кислоте, диспергированного и затем высушенного коллагена из дермы коров в качестве гемостатического средства в форме порошка, нетканого материала, губки [1, 2, 3]. Гемостатическая активность этих материалов недостаточна. Для ее повышения в состав коллагеновой субстанции вводят вещества, влияющие на отдельные звенья процесса свертывания крови: фибриноген, тромбин, апротинин, эпсилон-аминокапроновая кислота и др. [4, 5]. После сублимационой сушки получают пористые губки. Недостатком этих материалов является отсутствие в них средства, обладающего мощным действием, резко усиливающим гемостатический эффект коллагена.

Известна гемостатическая губка на основе уксуснокислого щелочно-обработанного коллагена дермы коров с включением в раствор коллагена гидроксиаппатита и других веществ [6, 7]. Эти губки проявляют низкую гемостатическую активность при остановке капиллярных кровотечений.

Наиболее близкой к заявляемой является кровоостанавливающая губка, получаемая из смеси раствора коллагена и тромбоцитарной массы с последующей сублимационной сушкой [8]. При этом в композицию вводят свежеприготовленные тромбоциты, пригодные для трасфузионной терапии. Губки имеют достаточно хорошую кровоостанавливающую активность за счет тромбоцитов, поверхность которых активирует процессы свертывания в зоне аппликации. В то же время необходимость использования свежей тромбоцитарной массы и ее дефицит технологически ограничивает получение значительного количества гемостатического материала. Срок хранения тромбоцитарной массы ограничен (3 суток при 20-22°С). При этом следует отметить, что тромбоциты - крайне лабильные форменные элементы крови, и при малейших дефектах хранения легко агрегируют и распадаются. Поврежденные тромбоциты не используются для трансфузии, не утилизируются, а просто выбрасываются.

Целью изобретения является установление и использование возможности применения тромбоцитов длительных сроков хранения, поврежденных отморожением и оттаиванием (т.е. непригодных для трансфузий), для включения в состав гемостатической коллагеновой губки.

Данная цель достигается включением в коллагеновую основу продуктов криодеградации тромбоцитарной массы, не пригодной для трансфузии, при соотношении компонентов в массовых частях коллаген:тромбоциты =100:(0,5-2,5).

Свежеприготовленная или непригодная для трансфузий тромбоцитарная масса подвергается 2-кратному замораживанию до -25°С и последующему оттаиванию в течение 24 час, и затем она может сохраняться в замороженном состоянии при -25°С в течение месяца (до использования). В исходной массе тромбоцитов количество неповрежденных клеток составляет 2,0×10¹¹ кл/мл. После 3-кратного цикла замораживание-оттаивание количество их снижается до 2,0×10⁶ кл/мл.

При соотношении коллаген:тромбоциты меньше 100:0,5 влияние их несущественно, а при соотношении выше 100:2,5 дальнейшего повышения гемотатической активности не наблюдается.

Для придания нерастворимости в водных средах и повышения кровоостанавливающей активности после сублимации материал подвергается структурированию в парах формальдегида или глутарового альдегида в течение 8 час при комнатной температуре.

Для придания антибактериальных свойств гемостатическому материалу в его состав вводят дополнительно до 1,0% антисептиков, таких как сангвиритрин, полигексометиленгуанидин, или до 10% антибиотиков широкого спектра действия, таких как гентамицин, линкомицин, циклоспорин и др.

Высушенный сублимацией пористый материал, структурированный в парах альдегидов, быстро впитывают воду, биожидкость и кровь, способствуя ее свертыванию во всем объеме губки.

Готовый материал разрезают на пластины заданных размеров, упаковывают в полимерные пакеты и подвергают радиационной стерилизации. Примеры осуществления изобретения.

Пример 1.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 3 мл концентрата тромбоцитов (соотношение коллаген:тромбоциты 1:0,3) месячного хранения при -25°С и трехкратной процедуры замораживание-оттаивание (соотношение коллаген:тромбоциты =100:0,3), тщательно перемешивают и заливают в кювету толщиной слоя 7,0-9,0 мм и замораживают до температуры минус 25°С. Кюветы с замороженной массой переносят в аппарат сублимационной сушки и высушивают при вакууме до 100 мм ртутного столба, на стадии досушки температура подогрева +40°С. Общая продолжительность сушки 20 час.

Сухой продукт структурируют в парах формальдегида в течение 8 час при 22°С, проветривают, разрезают на пластины заданных размеров, упаковывают в полимерные пакеты и подвергают радиационной стерилизации дозой 25 кГр.

Пример 2.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 5 мл концентрата тромбоцитов того же срока хранения и трехкратной процедуры замораживание-оттаивание (как в примере 1) (соотношение коллаген:тромбоциты 100:0,5). Далее как в примере 1.

Пример 3.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 25 мл концентрата тромбоцитов после месячного хранения при -25°С 3-кратного цикла замораживание-оттаивание (соотношение коллаген:тромбоциты =100:2,5), тщательно перемешивают и заливают в кювету толщиной слоя 7,0-9,0 мм и замораживают до температуры -25°С. Далее как в примере 1.

Пример 4.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 50 мл концентрата тромбоцитов того же срока хранения и трехкратной процедуры замораживание-оттаивание (соотношение коллаген:тромбоциты =100:5). Далее как в примере 1.

Пример 5.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 10 мл концентрата тромбоцитов после месячного хранения и 3-кратного цикла замораживание-оттаивание, перемешивают и добавляют 50 мг полигексаметиленгуанидина (ПГМГ - 0,5% от массы сухого коллагена). После тщательного перемешивания смесь разливают по кюветам. Далее как в примере 1.

Пример 6.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 15 мл концентрата тромбоцитов после месячного хранения и 3-кратного цикла замораживание-оттаивание, перемешивают и добавляют 100 мг сангвиритрина (1,0% от массы сухого коллагена). После тщательного перемешивания смесь разливают по кюветам. Далее как в примере 1.

Пример 7.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 250 мл концентрата тромбоцитов, получаемых от донора в тот же день (интервал 1 час). Соотношение коллаген:тромбоциты =100:2,5 мл. Далее как в примере 1.

Пример 8.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 50 мл концентрата тромбоцитов после 6-дневного хранения (норма для трансфузии 3 дня). Далее как в примере 1.

Пример 9.

В 1000 мл 1% раствора коллагена вводят 15 мл концентрата тромбоцитов после месячного хранения и 3-кратного цикла замораживание-оттаивание, перемешивают и добавляют 1 г гентамицина (10% от массы сухого коллагена). После тщательного перемешивания смесь разливают по кюветам. Далее как в примере 1.

Пример 10.

В опыте на кроликах породы "Шиншилла" под тиопенталовым наркозом выполняется лапоротомия, и с помощью специального приспособления наносят бритвой на переднюю долю печени рану размером около 1,5 см² и глубиной около 0,1 см. Остановку проводят марлевой салфеткой и коллагеновыми губками, полученными по примерам 1-8. Время остановки кровотечения составило в губке по примеру 1 - 220 сек, 2 - 60 сек, 3 - 35 сек, 4 - 38 сек, 5 - 34 сек, 6 - 38 сек, 7 - 51 сек, 8 - 39 сек, 9 - 34 сек. Остановка кровотечения при использовании марлевой салфетки 300 сек. Таким образом, показатели остановки кровотечения при использовании пригодной (не более 3 суток хранения) и не пригодной для трансфузий тромбоцитарной массы достаточно близки.

Получаемый по данному изобретению кровоостанавливающий материал позволяет использовать тромбоциты, подвергнутые криодеструкции, а также тромбоциты, не пригодные для трансфузий (просрочен срок хранения) после их замораживания и хранения в замороженном состоянии. Это дает возможность полезного использования донорского материала, который в настоящее время подвергается списанию как непригодный.

Предложенный кровоостанавливающий материал обладает высокой гемостатической активностью при остановке капиллярно-паренхиматозных кровотечений различной этиологии, что позволяет его широко использовать в различных областях медицины.

Литература

1. Пат. США №3471598, 264-28, 14.02.66/07.10.69.

2. Пат. США №3632861, 106-122, 26.06.69/04.01.72.

3. Пат. США №4016877, 128-334, 23.02.76, 12.04.77.

4. Авт. свид. СССР №908357, А 61 К 35/12, А 61 13/00, 19.09.78/28.02.82.

5. Пат. США №4609910, А 61 15/00, 28.06.84/19.08.86.

6. Авт. свид. СССР №561564, А 61 К 37/00, 22.01.65/15.03.72.

7. Патент РФ №2034572, А 61 15/32, 15/44, 03.11.92/10.05.95.

8. Патент РФ №2122867, C 16 A 61 L 15/32, 14.10.92.

Изобретение относится к области фармацевтики и касается гемостатического материала. Предложенный гемостатический материал содержит коллаген и тромбоцитарную массу, высушен с помощью сублимационной сушки и структурирован в парах формальдегида, причем в его состав входят тромбоциты, непригодные для трансфузии, в соотношении коллаген:тромбоциты =100:(0,5-2,5). Дополнительно материал может содержать антисептики или антибиотики широкого спектра действия. Изобретение позволяет использовать тромбоциты, подвергнутые криодеструкции, а также тромбоциты, не пригодные для трансфузий (просрочен срок хранения), т.е. использовать материал, который в настоящее время подвергался списанию как непригодный. Предложенный материал обладает высокой гемостатической активностью. 1 з.п. ф-лы.

1. Гемостатический материал, содержащий коллаген и тромбоцитарную массу, полученный путем высушивания сублимационной сушкой и структурированный в парах формальдегида, отличающийся тем, что он содержит тромбоциты, непригодные к переливанию, в соотношении коллаген: тромбоциты =100:(0,5-2,5).2. Материал по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит антисептик или антибиотик широкого спектра действия.