Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
Известен способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2 на основе обнаружения в лимфатических узлах увеличения количества клеток, объема мякотных тяжей и лимфоидных узелков, сокращения объема краевого синуса, уменьшения объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий, появления эритроцитов, увеличения численности зрелых плазмоцитов, нейтрофилов и тучных клеток (Майбородин И.В. Лимфоидные органы при воздействии интерферона. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. - Новосибирск, 1992. - 16 с.).
Недостатками известного прототипа является то, что:
- отсутствует критерий прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2;
- используется большой перечень критериев лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2 и не определены наиболее информативные из них, что увеличивает трудозатраты при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
В основу изобретения положена задача обеспечения информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
Задача решена тем, что согласно заявляемому способу в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α2, и прекращают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α2 и продолжают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к лимфаденотропному действию препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2 животные - мыши линии BALB/c; установлена необходимость использования нетоксичной для выбранных чувствительных животных дозы глицериносодержащего раствора рекомбинатного человеческого интерферона-α2; определено время забоя опытной и интактной мышей; определено сочетание двух критериев, обеспечивающих у выбранных чувствительных животных информативную, нетрудоемкую регистрацию прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2, а именно сравнительного определения в идентичных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей интенсивности специфического свечения при определении интерферона-α2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа и числа тканевых базофилов.
Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих обеспечение информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2 при использовании заявляемого способа.
Пример 1. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе 20 ME. Через 30 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α2 .В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил отсутствие усиления специфического свечения и отсутствие тканевых базофилов, поэтому было установлено отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α2, и были прекращены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
Пример 2. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе 100 ME. Через 45 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
Пример 3. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе 500 ME. Через 60 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-α2. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-α2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ОРАЛЬНОЙ МУКОЗАЛЬНОЙ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ | 2005 |
|
RU2288474C1 |
| СПОСОБ СУШКИ ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА | 2006 |
|
RU2299063C1 |
| СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОМИКРОБНЫМ ДЕЙСТВИЕМ | 2004 |
|
RU2247578C1 |
| СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ | 2004 |
|
RU2247576C1 |
| РЕКОМБИНАНТНЫЕ ШТАММЫ ВИРУСА ГРИППА, ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ МИКОБАКТЕРИАЛЬНЫЙ ПРОТЕКТИВНЫЙ АНТИГЕН ESAT-6, И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА | 2005 |
|
RU2318872C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАТРИКСА ТРАХЕИ ДЛЯ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ | 2010 |
|
RU2453291C1 |
| КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ПОЛЕЗНЫЕ ДЛЯ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА ПРОДУКТЫ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ | 2013 |
|
RU2535152C1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АРЕАКТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ПРОБИОТИКА | 2008 |
|
RU2375960C2 |
| СПОСОБ ТАБЛЕТИРОВАНИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ | 2006 |
|
RU2334503C1 |
| СПОСОБ УСТАНОВЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ПРОТИВОИНФЕКЦИОННОГО ДЕЙСТВИЯ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА | 2008 |
|
RU2394559C2 |
Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α2. Сущность изобретения состоит в том, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов определяют лимфоаденотропное действие препарата рекомбинатного человеческого интерферона-α2. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего установить наличие лимфоаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α2.
Способ определения лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α2 на основании оценки морфофункционального состояния лимфоидной ткани, отличающийся тем, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинантного человеческого интерферона-α2 в нетоксичной дозе, через 30-60 мин одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-α2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов - отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α2 и прекращают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов - наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-α2 и продолжают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-α2.
| МАЙБОРОДИН И.В | |||
| «Лимфоидные органы при воздействии интерферона», Автореф | |||
| канд | |||
| дисс., Новосибирск, 1992 | |||
| FLEISCHMANN WR JR et al | |||
| "Modulation of peripheral leukocyte counts in mice by oral administration of interferons", Proc Soc Exp Biol Med., 1991, Sep; 197(4), p.424-430 | |||
| KOREN S | |||
| et al | |||
| "Orally administered interferons suppress bone marrow |
