Настоящее изобретение относится к новому применению производных N-фенил-2-пиримидинамина формулы (I), в которой символы и заместители имеют значение, приведенное ниже, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, при получении фармацевтической композиции для лечения аллергических ринитов, аллергических дерматитов, лекарственной аллергии или пищевой аллергии, ангионевротического отека, крапивницы, синдрома внезапной смерти внешне здорового ребенка, бронхолегочного аспергиллеза, множественного склероза или мастоцитоза; и к способу лечения теплокровных млекопитающих, предпочтительно человека, при котором терапевтически эффективную дозу соединения формулы I вводят теплокровному млекопитающему, страдающему от одной из упомянутых выше болезней.
Настоящее изобретение относится к применению производных N-фенил-2-пиримидинамина формулы I
,
где
R1 означает 4-пиразинил; 1-метил-1H-пирролил; амино- или фенил, замещенный амино(низш.)алкилом, где аминогруппа в каждом случае свободна, алкилирована или ацилирована; 1H-индолил- или 1H-имидазолил, присоединенный по атому углерода пятичленного цикла; или незамещенный либо (низш.)алкилом замещенный пиридил, присоединенный по кольцевому атому углерода и незамещенный или замещенный по атому азота кислородом;
R2 и R3 означают каждый независимо от другого водород или (низш.)алкил; один или два из радикалов R4, R5, R6, R7 и R8 означают каждый нитро, замещенный фтором (низш.)алкокси или радикал формулы II
,
где
R9 означает водород или (низш.)алкил,
Х означает оксо, тио, имино, N-(низш.)алкил, гидроксимино или O-(низш.)алкилгидроксимино,
Y означает кислород или группу NH,
n означает 0 или 1, и
R10 означает алифатический радикал, имеющий, по крайней мере, 5 атомов углерода, или ароматический, ароматический-алифатический, циклоалифатический, циклоалифатический-алифатический, гетероциклический или гетероциклический-алифатический радикал, и оставшиеся радикалы
R4, R5, R6, R7 и R8 означают каждый независимо от других водород, (низш.)алкил, который не замещен или замещен свободной или алкилированной аминогруппой, пиперазинилом, пиперидинилом, пирролидинилом или морфолинилом, или (низш.)алканоил, тифторметил, свободный, эфирный или сложноэфирный гидроксил, свободную, алкилированную или ацилированную аминогруппу, или
свободный или сложноэфирный карбоксил, или соли такого соединения, содержащей, по меньшей мере, одну солеобразующую группу,
с целью получения лекарственного средства для терапии аллергического ринита, аллергического дерматита, лекарственной аллергии или пищевой аллергии, ангионевротического отека, крапивницы, синдрома внезапной смерти внешне здорового ребенка, бронхолегочного аспергиллеза, мастоцитоза или множественного склероза.
1-Метил-1H-пирролил означает предпочтительно 1-метил-1H-пиррол-2-ил или 1-метил-1H-пиррол-3-ил.
Замещенный аминогруппой или амино(низш.)алкилом фенил R1, в котором аминогруппа в каждом случае является свободной, алкилированной или ацилированной, означает фенил, замещенный по любому требуемому положению (орто, мета или пара), где алкилированная аминогруппа означает предпочтительно моно- или ди(низш.)алкиламино, например, диметиламино, и (низш.)алкильная часть амино(низш.)алкила означает предпочтительно линейный (С1-С3)алкил, особенно такой, как метил или этил.
1H-Индолил, присоединенный по углеродному атому пятичленного кольца означает 1H-индол-2-ил или 1H-индол-3-ил.
Незамещенный или замещенный (низш.)алкилом пиридил, присоединенный по углеродному атома кольца, означает замещенный (низш.)алкилом или предпочтительно незамещенный 2-, 4- или предпочтительно 3-пиридил, например, 3-пиридил, 2-метил-3-пиридил или 4-метил-3-пиридил. Пиридил, замещенный по атому азота кислородом, означает радикал, образованный из N-оксида пиридина, т.е. N-оксидопиридил.
Замещенный фтором (низш.)алкокси означает (низш.)алкокси, имеющий, по крайней мере, один, а предпочтительно несколько фторсодержащих заместителей, особенно трифторметокси или 1,1,2,2-тетрафторэтокси.
Когда Х означает оксо, тио, имино, N-(низш.)алкилимино, гидроксимино или O-(низш.)алкилгидроксимино, группа С=Х означает в вышеуказанном порядке радикал С=O, C=S, C=N-H, С=N-(низш.)алкил, C=N-OH или C=N-O-(низш.)алкил, соответственно.
Предпочтительно Х означает оксо.
Предпочтительно n означает 0, т.е. группа Y не присутствует.
Y, если присутствует, означает предпочтительно группу NH.
Термин "низший" в данном контексте означает радикалы, содержащие до включая до 7 включительно, предпочтительно до 4 включительно углеродных атомов.
(Низш.)алкил R1, R2, R3 означает предпочтительно метил или этил.
Алифатический радикал R10, содержащий, по крайней мере, 5 атомов углерода, предпочтительно не более чем 22 атома углерода, обычно не более чем 10 атомов углерода, означает такой замещенный или предпочтительно незамещенный алифатический углеводородный радикал, а именно такой замещенный или предпочтительно незамещенный алкинильный, алкенильный или предпочтительно алкильный радикал, такой, как (С5-С7)алкил, например, н-пентил. Ароматический радикал R10 содержит до 20 атомов углерода и означает незамещенный или замещенный, например, в каждом случае незамещенный или замещенный нафтил, такой как, в частности, 2-нафтил или предпочтительно фенил, причем заместители предпочтительно выбирают из циано, незамещенного или гидрокси-, амино- или 4-метилпиперазинилзамещенного (низш.)алкила, такого как, в частности, метил, трифторметил, свободной, эфирной или сложноэфирной гидроксигруппы, свободной, алкилированной или ацилированной аминогруппы и свободной или сложножноэфирной карбоксигруппы. В ароматическом-алифатическом радикале R10 ароматическая часть такова, как обозначено выше, а алифатическая часть означает предпочтительно (низш.)алкил, такой как, в частности, (С1-С2)алкил, который замещен или предпочтительно не замещен, например, бензил. Циклоалифатический радикал R10 содержит в основном до 30, главным образом до 20 и, в частности, до 10 атомов углерода, является моно- или полициклическим и означает замещенный или предпочтительно незамещенный радикал, например, такой как циклоалкильный радикал, в частности, такой как 5- или 6-членный циклоалкильный радикал, такой как предпочтительно циклогексил. В циклоалифатическом-алифатическом радикале R10 циклоалифатическая часть такова, как обозначено выше, а алифатическая часть означает предпочтительно (низш.)алкил, такой как, в частности, (С1-С2)алкил, который замещен или предпочтительно не замещен. Гетероциклический радикал R10 содержит, в частности, до 20 атомов углерода и означает предпочтительно насыщенный или ненасыщенный моноциклический радикал, содержащий 5 или 6 колец и 1-3 гетероатома, которые предпочтительно выбирают из азота, кислорода и серы, в частности, например, тиенил или 2-, 3- или 4-пиридил, или би- либо трициклический радикал, где, например, один или два бензольных радикала являются аннелированными (конденсированными) с упомянутым моноциклическим радикалом. В гетероциклическом-алифатическом радикале R10 гетероциклическая часть такова, как определено выше, а алифатическая часть означает предпочтительно (низш.)алкил, такой как, в частности, (С1-С2)алкил, который замещен или предпочтительно не замещен.
Этерифицированная гидроксигруппа означает предпочтительно (низш.)алкокси. Сложноэфирная гидроксигруппа означает предпочтительно гидроксильную группу, этерифицированную органической карбоновой кислотой, такой как (низш.)алкановая кислота, или минеральной кислотой, такой как галоидоводородная кислота, например, галоид в основном такой как йод, бром или, в частности, фтор или хлор.
Алкилированная аминогруппа означает, например, (низш.)алкиламиногруппу, такую как метиламино, или ди(низш.)алкиламиногруппу, такую как диметиламино. Ацилированная аминогруппа означает, например, (низш.)алканоиламино- или бензоиламиногруппу.
Этерифицированный карбоксил означает, например, (низш.)алкоксикарбонил, такой как метоксикарбонил.
Замещенный фенильный радикал может иметь до 5 заместителей, таких как фтор, но особенно в случае относительно крупных заместителей обычно замещен только 1-3 заместителями. Примерами замещенного фенила, который может быть упомянут особо, являются 4-хлорфенил, пентафторфенил, 2-карбоксифенил, 2-метоксифенил, 4-фторфенил, 4-цианофенил и 4-метилфенил.
Солеобразующие группы в соединении формулы I означают группы или радикалы, имеющие основные или кислотные свойства. Соединения, имеющие, по меньшей мере, одну основную группу или, по меньшей мере, один основный радикал, например, свободную аминогруппу, пиразинильный радикал или пиридильный радикал, могут образовать кислотно-аддитивые соли, например, с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота, или с соответствующими органическими карбоновыми или сульфоновыми кислотами, например, с алифатическими моно- или дикарбоновыми кислотами, такими как трифторуксусная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, гидроксималеиновая кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота или щавелевая кислота, или с аминокислотами, такими как аргинин или лизин, ароматическими карбоновыми кислотами, такими как бензойная кислота, 2-феноксибензойная кислота, 2-ацетоксибензойная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, с ароматическими-алифатическими карбоновыми кислотами, такими как миндальная кислота или коричная кислота, с гетероароматическими карбоновыми кислотами, такими как никотиновая кислота или изоникотиновая кислота, с алифатическими сульфоновыми кислотами, такими как метан-, этан- или 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, или с ароматическими сульфоновыми кислотами, например, бензол-, n-толуол- или нафталин-2-сульфоновой кислотой. В присутствии нескольких основных групп могут образоваться моно- или поликислотно-аддитивные соли,
Соединения формулы I, содержащие кислотные группы, например, свободную карбоксигруппу в радикале R10, могут образовать соли с металлом, такие как соли с щелочным металлом или щелочно-земельным металлом, например, соли с натрием, калием, магнием или кальцием, или аммониевые соли с аммиаком или соответствующими органическими аминами, такими как третичные моноамины, например, триэтиламин или три-(2-гидроксиэтил)амин, или с гетероциклическими аминами, например, с N-этилпиперидином или N,N'-диметилпиперазином.
Соединения формулы I, содержащие как кислотную, так и основную группы, могут образовать внутренние соли.
Для целей выделения и очистки, а также в случае соединений, которые используются в дальнейшем как промежуточные вещества, можно также использовать фармацевтически неприемлемые соли. Однако для терапевтических целей используют только фармацевтически приемлемые нетоксичные соли, и поэтому эти соли являются предпочтительными.
Соединения формулы I могут применяться в терапии или при получении лекарственных средств для лечения теплокровных млекопитающих, предпочтительно человека.
Термин "аллергический ринит", как он использован в контексте, означает любую аллергическую реакцию слизистой оболочки носа. Такая аллергическая реакция может случаться, к примеру, постоянно, например, весенний конъюнктивит, или временно, например, сенная лихорадка.
Термин "аллергический дерматит", как он использован в контексте, означает в основном атопический дерматит, аллергический контактный дерматит и экзематозный дерматит, но включает, например, также себорейный дерматит, красный плоский лишай, крапивницу и угри. Атопический дерматит, как он определен в контексте, означает хроническое воспалительное кожное поражение, наблюдаемое у индивидуума с наследственным предрасположением к сниженному порогу кожного зуда. В основном он характеризуется предельным зудом, приводящим к расчесыванию и натертости, что в свою очередь приводит к типичным для экземы поражениям. Аллергический контактный дерматит, как он определен в контексте, означает форму дерматита, которая объясняется аллергической сенсибилизацией к различным веществам, которые вызывают воспалительные реакции кожи у тех, кто имеет приобретенную гиперсенсибилизацию к аллергену как результат прежнего контакта с ним.
Термин "лекарственная аллергия или пищевая аллергия", как он использован в контексте, относится к аллергической реакции, вызываемой лекарственным средством или поглощаемыми с пищей антигенами, такой как, например, клубника, молоко или яйца.
Термин "бронхолегочный аспергиллез" относится к заражению легких грибом вида Aspergillus.
Термин "мастоцитоз", как он использован в контексте, относится к системному мастоцитозу, например, к мастоцитоме, и, в частности, к новообразованиям, связанным с патологией мастоцитов у собак.
Соединения формулы I упоминаются далее в собирательном значении как "соединения по изобретению".
Мастоциты играют важную роль в качестве первичных эффекторных клеток в аллергических нарушениях, упоминаемых в контексте. Антиген-специфическая опосредованная IgE дегрануляция мастоцитов приводит к последующему высвобождению химических медиаторов и многочисленных цитокинов и синтезу лейкотриенов. Кроме того, мастоциты вовлечены в патогенез множественного склероза.
Новообразования на основе мастоцитов встречаются как у человека, так и у животных. У собак новообразования на основе мастоцитов называются мастоцитомами, и заболевание является распространенным, составляя 7%-21% опухолей собак. Следует проводить различие между человеческим мастоцитозом, который является преходящим или безболезненным, и мастоцитной неоплазией собак, которая ведет себя непредсказуемо и часто является агрессивной и метастазирующей. Например, человеческие единичные мастоцитомы по существу никогда не метастазируют; в противоположность этому, 50% мастоцитом собак имеют злокачественную форму, как установлено Hottendorf и Nielsen (1969) после обзора 46 опубликованных сообщений об опухолях у 938 собак.
В популяции домашних животных рак является спонтанным заболеванием. Обладатели домашних животных, побуждаемые продлением качества жизни своих животных, часто ищут специализированный уход и лечение у ветеринарных онкологов в частных ветеринарных клиниках и ветеринарных клиниках при высших медицинских учебных заведениях по всей стране.
Терапевтические возможности ветеринарных пациентов со злокачественными опухолями подобны таковым для человека, включая хирургию, химиотерапию, радиотерапию и биотерапию. Установлено, что в Соединенных Штатах имеются 42 миллиона собак и приблизительно 20 миллионов кошек. По предварительным оценкам случаев рака, такой диагноз впервые ставится примерно 4 миллионам собак и сходному числу кошек каждый год.
Кожные мастоцитные опухоли собак являются общеизвестной проблемой. Большинство мастоцитных опухолей являются доброкачественными и вылечиваются простой резекцией; однако, если они являются рецидивирующими или метастазирующими в отдаленные участки, то терапевтические возможности ограничены. Возможности лечения рецидивирующих повреждений могут включать внешнюю направленную радиотерапию. Для отдаленных метастазов или диссеминированного заболевания применение протоколов, включающих химиотерапию ломустином® и винкристином, продемонстрировало некоторое преимущество. Местоположение метастазов мастоцитных опухолей включает кожу, регионарные лимфоузлы, селезенку, печень и костный мозг.
Вовлечение рецептора kit в патогенезе мастоцитоза предполагается на основе наблюдения о том, что во многих линях мастоцитов были определены некоторые мутации, приводящие к конститутивной активации kit. Например, точечная мутация в человеческом рецепторе c-kit, вызывающая замену Val на Asp816 в фосфотрансферазном домене и аутоактивацию рецептора, происходит в длительно культивируемой линии человеческого мастоцитного лейкоза (НМС-1) и в соответствующем кодоне в двух линиях мастоцитов грызунов. Более того, активирующая мутация найдена in situ в некоторых случаях человеческого мастоцитоза. Две другие активирующие мутации найдены во внутриклеточном расположенном рядом с мембраной участке рецептора kit, т.е. замена Val560Gly в линии мастоцитов человека НМС-1 и несколько аминокислотных делеций (Thr573-His579) в линии мастоцитов грызунов, называемой FMA3.
Можно показать с помощью общепринятых тест-моделей и особенно тех тест-моделей, которые описаны в контексте, что соединения по изобретению или в каждом случае фармацевтически приемлемая соль на этой основе приводят к эффективному предотвращению или предпочтительно лечению, по меньшей мере, одного из упомянутых в контексте заболеваний. Специалист в данной области вполне способен выбрать подходящую тест-модель, чтобы доказать упоминаемые ранее и впредь терапевтические показания и преимущественные эффекты. Например, фармакологическая активность может быть продемонстрирована в клиническом исследовании или в экспериментальной методике, как по существу описано ниже.
Часть А
Пример 1
Данный пример демонстрирует воздействия соединений по изобретению in vitro на зависимую от фактора стволовых клеток (SCF) эволюцию роста культивированных человеческих мастоцитов, генерированного пуповинными клетками крови CD34+ при использовании системы культивирования, описанной Kinoshita N., Sawai N., и др., Blood, 1999, 94, 496-508. По данным проточного цитометрического анализа более 90% выделенных клеток были положительными по рецептору CD34 (CD34+).
Реагенты и антитела
Соединения по изобретению растворяли в ЗФР в концентрации 10-2 М и хранили при -80°С. Полностью транс-ретиноевую кислоту (Sigma) растворяли в этаноле в концентрации 10-2 М и хранили в защищенных от света флаконах при -80°С. Очищенное моноклональное антитело (mAb) к триптазе (МАВ1222) можно приобрести у Chemicon International Inc., CA. Для проточного цитометрического анализа моноклональные антитела к CD34 [8G12, флуоресцеинизотиоцианат (FITC) в качестве метки] и CD11b [Leu 15, R-фикоэритрин (РЕ) в качестве метки] приобретали у Becton Dickinson Immunocytometry Systems (Mountain View, CA) и mAb к CD41 (SZ22, FITC) у Immunotech S.A. (Marseilles, France).
Моноклональное антитело к гликофорину A (GPA, JC159, FITC) можно получить от Dako (Glostrup, Denmark). Для Вестерн-блоттинга и иммунопреципитации моноклональные антитела к c-kit (NU-c-kit) и к фосфотирозину (4G10) можно приобрести у Nishirel and Upstate Biotechnology, Inc. (Lake Placid, NY), соответственно.
Суспензионные культуры
Бессывороточные жидкостные культуры поддерживали в 24-луночных планшетах для культивирования (#3047; Becton Dickinson). Двадцать тысяч CD34-положительных клеток культивировали в каждой лунке, содержащей 2 мл α-среды с добавлением 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), полностью насыщенного железом человеческого трансферрина (приблизительно 98% чистоты, Sigma), 16 мкг/мл лецитина из соевых бобов (Sigma), 9,6 мкг/мл холестерина (Nakalai Chemicals Ltd., Japan) и 20 нг/мл фактора стволовых клеток (SCF), 10 нг/мл гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), 2 ед/мл эритропоэтина (ЕРО), 10 нг/мл тромбопоэтиноксидазы (ТРО), различные концентрации соединения по изобретению, одного или в комбинации. Для того чтобы исследовать воздействия соединения по изобретению на SCF-зависимое развитие мастоцитов, культивированные в течение 10 недель клетки, выращенные в присутствии 20 нг/мл SCF из СD34-положительных пуповинных клеток крови, использовали в качестве клеток-мишеней. Культивированные в течение 10 недель 5×104-10×104 клеток инкубировали 2 недели в 24-луночных планшетах для культивирования, содержащих 20 нг/мл SCF с различными концентрациями или без соединения по изобретению. Планшеты инкубировали при 37°С в увлажненной атмосфере, продуваемой смесью 5% CO2, 5% О2 и 90% N2. После 4 недель культивирования половину среды культивирования заменяли каждые 2 недели свежей средой, содержащей фактор(ы). Число жизнеспособных клеток определяли с помощью теста вытеснения трипанового синего, используя гемоцитометр.
Культуры клональных клеток
Анализ колоний мастоцитов осуществляли в 35-мм чашках Lux для суспензионных культур (#171099; Nunc, IL). Культура состояла из 10-недельных культивированных клеток (4000 клеток/мл), выращенных в присутствии 10 нг/мл SCF, α-среды, 0,9% метилцеллюлозы (Shinetsu Chemical, Japan), 1% BSA, 300 мкг/мл полностью насыщенного железом человеческого трансферрина, 16 мкг/мл лецитина из соевых бобов, 9,6 мкг/мл холестерина и 100 нг/мл SCF с добавлением или без 10-6 М соединения по изобретению. Чашки инкубировали при 37°С в увлажненной атмосфере, продуваемой смесью 5% СО2, 5% О2 и 90% N2. После 4 недель культивирования агрегаты, состоящие из 30 клеток и более, оценивали в баллах как колонии мастоцитов, а агрегаты, содержащие 10-29 клеток, как кластеры мастоцитов. Тридцать индивидуальных колоний и кластеров вынимали и окрашивали с антитриптазным mAb или мышиным IgGI, используя методику щелочная фосфатаза-антищелочная фосфатаза (АРААР). Почти все из клеточных компонентов были положительны по триптазе.
Цитохимическое и иммунологическое окрашивания
Культивируемые клетки распределяли по поверхности предметных стекол, используя Cytospin II. Цитохимическую реакцию с пероксидазой (РОХ) проводили общеизвестным способом. Реакцию с mAb против триптазы детектировали, используя методику АРААР (Dako APAAP Kit System, Dako Corp., CA), как описано F. Ма, К. Koike и др., Brit. J. Hematol. 1998, 100, 427-35.
Иммунопреципитация и Вестерн-блоттинг
Иммунопреципитацию и Вестерн-блоттинг проводили, как описано Т.Kamijo, К.Koike и др., Leuk. Res. 1997, 21, 1097-106.
Проточный цитометрический анализ
Для анализа поверхностных маркеров на культивируемых клетках отбирали 1-2×105 клеток в пластиковые пробирки и инкубировали с соответствующим образом разбавленным FITC- или РЕ-mAb, как описано Kinoshita N., Sawai N. и др. Blood 1999, 94, 496-508. Клетки промывали дважды, после чего их поверхностные маркеры анализировали с помощью проточного цитометра FACScan. Жизнеспособные клетки отделяли в соответствии с их характеристиками прямого светорассеяния и характеристиками бокового рассеяния. Долю положительных клеток определяли сравнением с клетками, окрашенными FITC- или РЕ-конъюгированным мышиным совместимым по изотипу Ig.
Определение клеточного апоптоза
Исследование клеточного апоптоза проводили проточным цитометрическим анализом, используя йодид пропидия (PI, Sigma) в соответствии с методикой, описанной N.Sawai, К.Koike и др.. Stem Cells. 1999, 17, 45-53. Для того, чтобы уменьшить число клеток, подвергающихся апоптозу, некрозу или уже погибших, можно использовать центрифугирование в градиенте перколла. Десятинедельные культивируемые клетки наслаивали на 27% перколл (Sigma) в α-среде и 54% перколл в ЗФР. После центрифугирования клетки собирали с поверхности раствора с двумя различными концентрациями перколла, промывали ЗФР и обрабатывали 1 мл Ortho PermeaFixTM в течение 40 мин при комнатной температуре. Затем клетки инкубировали с системой ДНКаза-свободная РНКаза (Sigma) в течение 15 мин при 37°С и окрашивали с PI в течение 15 мин. Содержание ДНК 2×104 клеток контролировали с помощью проточного цитометра. Десятинедельные культивируемые клетки (2×10), подвергшиеся воздействию SCF или SCF, и соединения по изобретению лизировали в течение 10 мин на льду в 100 мкл гипотонического лизисного буфера [10 мМ трис-буфер (рН 7,5), 10 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), рН 8,0, 0,5% тритон Х-100]. После центрифугирования в течение 10 мин при 14000g супернатант переносили в новую пробирку и обрабатывали 0,2 мг/мл РНКазы А (Sigma) и 0,2 мг/мл протеиназы К (Sigma). Осаждали ДНК с 120 мкл изопропанола и 20 мкл 5 М хлористого натрия в течение ночи при -20°С. После центрифугирования при 14000g осадки сушили, растворяли в 20 мкл трис-EDTA и после этого образцы анализировали с помощью гель-электрофореза в 2% агарозе и окрашивания с бромидом этидия.
Анализ уровней гистамина, триптазы и цитокина
Концентрации гистамина в клеточных лизатах, полученных при обработке культивируемых клеток 0,5% неионным детергентом нонидет Р-40, и в супернатанте измеряли с помощью набора для радиоиммунологического анализа (RIA) гистамина (Immunotech), как описано Kinoshita Т., Sawai N. и др. Blood 1999, 94,496-508.
Статистический анализ
Все эксперименты должны были проводиться три раза. Чтобы определить значение различия между двумя независимыми группами, можно было использовать непарный t-критерий или U-критерий Манна-Уитни, когда данные не были нормально распределенными.
Результаты, полученные для мономезилата N-{5-[4-(4-метилпиперазинометил)-бензоиламидо]-2-метилфенил}-4-(3-пиридил)-2-пиримидинамина (STI571B)
Добавление STI571B в концентрации 10-6 М или выше в культуру с SCF почти полностью подавляет генерацию потомства.
В SCF с добавлением STI571B число жизнеспособных клеток остается неизменным на день 2, а затем уменьшается времязависимым способом. На день 14 общее число клеток достигает незначительного уровня. Совместимо с результатами, полученными на десятинедельных культивируемых мастоцитах, STI571B в концентрации 10 М заметно угнетает клеточную продукцию CD34-положительными клетками при стимуляции с SCF. Более того, STI571B индуцирует программированную гибель культивируемых мастоцитов, выращенных при стимуляции с SCF. Процент субдиплоидных ядер повышается по мере увеличения периода культивирования. Это наблюдение может быть подтверждено разделением ДНК в клетках, подвергшихся воздействию SCF с добавлением STI571B, при электрофорезе в геле. Соединение STI571B проявляет свои ингибирующие свойства в ранней фазе развития мастоцитов, а также в фазе роста поздних мастоцитов.
Полученные результаты демонстрируют подавление роста SCF-зависимых человеческих мастоцитов соединением по изобретению, например, STI571B. Из этого следует, что соединения по изобретению могут применяться для лечения заболеваний, упомянутых в контексте.
Часть Б: мастоцитоз
Пример 2: способы
Реагенты: Novartis Pharma; Basel, Switzerland обеспечили соль I для использования в данных экспериментах. Свежие 10 мМ исходные растворы ингибитора готовили перед каждым экспериментом, растворяя соединение в 1 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (ЗФР; Gibco-BRL).
Антитела: поликлональное кроличье анти-kit антитело (c-kit Ab-1) использовали при разбавлении 1:500 (c-kit Ab-1; Oncogene, Cambridge, MA). Антитело против фосфотирозина (PY20) использовали при разбавлении 1:1000 (PY20 Transduction Laboratories; Lexington, KY). Конъюгированное пероксидазой козье антимышиное антитело использовали при разбавлении 1:5000 и козье антикроличье антитело при разбавлении 1:10000 (Pierce; Rockford, IL).
Клеточные линии: клетки линий BR и С2 мастоцитомы собак получали от д-ра George Caughey (University of California at San Francisco, San Francisco, CA). Обе клеточные линии поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 2% бычьего сывороточного альбумина из телячьей сыворотки, 1 мМ L-глутамина, 12,5 мМ N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-2-этансульфоновой кислоты (HEPES), рН 7,5, 0,25 мг/мл гистидина, 1% пенициллина-стрептомицина и 1% фунгизона. Клетки BR и С2 происходили от собачьих мастоцитных опухолей и первоначально были адаптированы в долгоживущей культуре после исходного пассирования иммунодефицитным мышам (1; 2). Линия клеток BR имеет точечную мутацию (Т1752С), приводящую к замене лейцина на пролин при аминокислоте 575 (расположенной рядом с мембранным доменом). Линия клеток С2 имеет внутреннее тандемное удвоение (ITD) расположенного рядом с мембраной участка kit. Трансляция данного ITD приводит к повторному удвоению аминокислотных остатков на 3'-конце экзона 11 (3; 4).
Анализы пролиферации: клетки помещали в 96-луночные планшеты при плотности 40000 клеток/лунку с нормальной средой для культивирования и соли I в различных концентрациях. Пролиферацию измеряли через 48-72 ч, используя анализ, основанный на применении натриевой соли 2,3-бис(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил-2H-тетразолий-5-карбоксанилида (ХТТ) (Roche Molecular Biochemicals; Indianapolis, IN). (5).
Белковые лизаты: клетки BR и С2 промывали дважды в ЗФР и затем оставляли покоящимися в среде Optimem (Gibco-BRL) при 37°С в течение приблизительно 18 ч. Затем клетки инкубировали в течение 90 мин в присутствии соли I в различных концентрациях. После данной инкубации клетки осаждали и лизировали, используя 100-250 мкл белкового лизисного буфера (50 мМ трис, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,25% дезоксихолат с добавлением ингибиторов - апротинина, лейпептина, пепстатина, фенилметилсульфонилфторида (PMSF) и ортованадата натрия [Sigma]). Анализ по методике Вестерн-иммуноблоттинга проводили, как описано ранее (6).
Пример 3: соединение I ингибирует конститутивно активируемую kit-киназу. ассоциированную с мастоцитными опухолями собак
Для того чтобы исследовать эффективность соединения I при ингибировании киназной активности мутантных форм рецептора kit собак, заявители использовали две клеточных линии (BR и С2), которые экспрессируют две различные конститутивно активируемые изоформы kit. В этих клетках обе мутации kit расположены рядом с мембранным доменом и гомологичны мутациям, наблюдаемым у человека в желудочно-кишечных стромальных опухолях (GISTs) (7; 8). Лизаты, полученные из клеток BR и С2, зондировали с антифосфотирозиновым антителом, и активацию kit-рецептора оценивали измерением аутофосфорилирования. Как сообщалось ранее, аутофосфорилирование kit в данных клетках наблюдалось в отсутствие SCF [Steel Factor (SLF)=SCF] (4;9). Ингибирование аутофосфорилирования kit было дозозависимым, полное ингибирование наблюдали, используя дозы 10 и 1,0 мкМ. Почти полное ингибирование наблюдали, используя дозу 0,1 мкМ. Ограниченное аутофосфорилирование c-kit наблюдали, используя 0,01-0,01 мкМ дозы соединения I. Так, соединение I не только ингибирует аутофосфорилирование мутированного рецептора c-kit в этих клетках, но также является более мощным ингибитором данного мутированного рецептора, чем рецептора c-kit дикого типа (IC50 100-200 нМ) (5). Для того чтобы определить модулировало ли соединение I экспрессию белка kit, мембрану отслаивали и снова зондировали с антителом анти-c-kit. В клетках, обработанных соединением I, не было изменения в экспрессии белка c-kit. Следовательно, соединение I ослабляет аутофосфорилирование мутантного собачьего kit-полипептида скорее путем ингибирования киназной активности kit, чем путем понижающей регуляции экспрессии белка kit.
Пример 4: соединение I ингибирует пролиферацию клеточных линий мастоцитных опухолей собак
Для исследования биологического эффекта ингибирования киназной активности мутантного рецептора c-kit, заявители культивировали клетки BR или С2 в течение 48-72 ч в присутствии соединения I в различных концентрациях. При концентрации ингибитора 0,1-10 мкМ пролиферация снижалась на 90-95% по сравнению с клетками, обработанными только средой. Частичное ингибирование пролиферации наблюдали при дозах 0,001-0,01 мкМ соединения I. Снижение пролиферации, наблюдаемое при дозах ингибитора 0,01-10 мкМ, было статистически значимым (р<0,001). Следовательно, соединение I ингибирует пролиферацию клеток BR и С2 с ответной реакцией в том же дозовом диапазоне, что и найденный для ингибирования аутофосфорилирования рецептора. Морфологические наблюдения обработанных ингибитором клеток обнаружили изменения, соответствующие апоптозу (данные не приведены).
клетки BR
клетки С2
Таблицы 1 и 2: клетки BR и С2 помещали в 96-луночные планшеты при концентрации 40000 клеток/лунку и культивировали в нормальной ростовой среде и при изменении концентрации соединения I. Клеточную пролиферацию измеряли через 72 ч, используя основанную на применении ХТТ аналитическую систему. Каждую концентрацию соединения I анализировали троекратно. Результаты выражали как процент максимальной пролиферации (только клеток, не соединения I)±1 стандартное отклонение. Приведены репрезентативные результаты одного из шести независимых экспериментов.
Композиции для домашних животных и человека
Пример 5: капсулы с метансульфонатом 4-[(4-метил-1-пиперазин-1-илметил)-N-[4-метил-3-[[4-(3-пиридинил)-2-пиримидинил]амино]фенил]бензамида в β-кристаллической форме
Капсулы, содержащие 11,95 мг соединения, названного в заголовке (тождественное название соль I), соответствующего 10,0 мг соединения I (свободного основания) в качестве активного вещества, приготавливали в виде следующей композиции.
Капсулы приготавливали смешиванием компонентов и загрузкой смеси в твердые желатиновые капсулы, размер 1.
Пример 6: капсулы с метансульфонатом 4-[(4-метил-1-пиперазин-1-илметил)-N-[4-метил-3-[[4-(3-пиридинил)-2-пиримидинил]амино]фенил]бензамида в β-кристаллической форме
Капсулы, содержащие 10,0 мг соединения, названного в заголовке (тождественное название соль I) в качестве активного вещества, приготавливали в виде следующей композиции.
Капсулы приготавливали смешиванием компонентов и загрузкой смеси в твердые желатиновые капсулы, размер 1.
Пример 7: капсулы с метансульфонатом 4-[(4-метил-1-пиперазин-1-илметил)-N-[4-метил-3-[[4-(3-пиридинил)-2-пиримидинил]амино]фенил]бензамида в β-кристаллической форме
Капсулы, содержащие 119,5 мг соединения, названного в заголовке (тождественное название мезилат соединения I), соответствующего 100 мг соединения I (свободного основания) в качестве активного вещества, приготавливали в виде следующей композиции.
Капсулы приготавливали смешиванием компонентов и загрузкой смеси в твердые желатиновые капсулы, размер 1.
Пример 8: пример предполагаемого ряда заболеваний домашних собак с измеряемыми кожными мастоцитными опухолями.
Исследуемыми пациентами являлись домашние собаки с измеряемыми и гистологически подтвержденными мастоцитными опухолями. Случаи заболеваний ограничивались таковыми с измеряемыми повреждениями, поддающимися биопсии.
Приемлемыми критериями являлись:
- гистологически подтвержденные измеряемые кожные мастоцитные опухоли,
- случаи заболеваний, при которых потребуется серийная биопсия с 2-мм перфоратором Кейеса до и в ходе терапии,
- гистологическая стадия (II - промежуточная или III - недифференцированная),
- функциональный статус 0 или 1 (модификация Karnofsky - таблица 3),
- информированное согласие собственника.
(а) Исключающими критериями являлись:
- одновременная цитотоксическая химиотерапия,
- преднизон и нестероидные противовоспалительные препараты могли не начать действовать в течение 30 дней исследования; если преднизон или нестероидные противовоспалительные препараты были введены задолго до 30 дней, их прием можно было продолжать,
- аномальная проба на сывороточную желчную кислоту (функция печени).
Предшествующая лечению экспертиза во всех случаях включала полный анализ крови, лейкоцитной пленки, биохимический анализ сыворотки, анализ мочи, желчных кислот сыворотки (при голодании и после приема корма), информацию о размере регионарных лимфоузлов, рентгенографическое и ультразвуковое исследования брюшной полости. Схемой лечения состояла во введении 25 мг/кг соли I перорально четыре раза в день в течение 60 дней.
Лечение продолжалось во всех случаях в течение 60 дней, если не отмечалось прогрессирование заболевания. В случаях достижения в эксперименте частичного или полного ответа можно обсуждать продолжение терапии в течение дополнительных 60 дней. Желательно повторно исследовать случаи заболеваний с успешным завершением терапии.
Эффективность соединения I оценивается по измеряемым кожным мастоцитным опухолям с использованием клинических конечных точек. Биологические конечные точки могут быть взяты из данных сериальных биопсий, собранных от кожных опухолей, и от образцов крови, доступных на протяжении курса лечения.
Клинические конечные точки включают скорость ответа на лечение измеряемых опухолей, объективную реакцию против измеряемой опухоли и время прогрессирования измеряемой опухоли. Все неблагоприятные побочные эффекты будут регистрироваться.
"Объективные ответы опухолей", как определено ниже, наблюдаются при лечении соединением I и указывают на эффективность терапевтической схемы.
В частности, могут наблюдаться полные ответы и частичные ответы на лечение соединением I. Кроме того, можно наблюдать, что многочисленные животные, получающие лечение, демонстрируют стабильное заболевание, тогда как менее леченные животные демонстрируют прогрессирующее заболевание. Можно также наблюдать, что у меньшего количества животных, получающих лечение, обнаруживается рецидив заболевания по сравнению с необработанными животными. Срок до прогрессирования заболевания, продолжительность ремиссии и выживаемость можно увеличить при обработке соединением I.
"Полный ответ (CR)" определяется как полное исчезновение клинического подтверждения рака и любого симптома, связанного с ним.
"Частичный ответ (PR)" определяется как 50% или большее уменьшение суммы результатов измерений репрезентативных повреждений без увеличения по размеру любых повреждений или появления каких-либо новых повреждений.
"Стабильное заболевание (SD)" определяется как отсутствие ответа на лечение или реакция более слабая, чем определяемая при частичном ответе, или прогрессирование заболевания без появления любых новых повреждений или ухудшения клинических симптомов.
"Прогрессирующее заболевание (PD)" определяется как явное увеличение, по меньшей мере, на 50% по размеру любого измеряемого повреждения или появление новых повреждений.
"Рецидив (R)" определяется как появление новых повреждений или повторное возникновение старых повреждений у собак, у которых был полный ответ на лечение; у собак, которые имели только частичный ответ, рецидив определяется как, по меньшей мере, 50% увеличение суммы результатов измерений репрезентативных повреждений по сравнению с измерениями, полученными во время максимального ответа.
"Время до прогрессирования (ТТР)" регистрируется от дня 0 протокола. ТТР будет определяться как число дней от начала терапии (от дня 0) до рецидива (R),
"Продолжительность ремиссии" определяется как число дней от начала объективного ответа (PR или CR) до рецидива.
"Выживаемость" определяется как число дней от начала обработки соединением I до гибели. Случаи гибели будут констатированы, но могут включать прогрессирование заболевания, токсичность и др.
Полученные результаты демонстрируют ингибирование мастоцитных новообразований соединениями по изобретению, например, STI571B.
Предпочтение отдается соединениям по изобретению, где один или два из радикалов R4, R5, R6, R7 и R8 означают каждый нитро или радикал формулы II, где
R9 означает водород или (низш.)алкил,
Х означает оксо, тио, имино, N-(низш.)алкилимино, гидроксимино или O-(низш.)алкилгидроксимино,
Y означает кислород или группу NH,
n означает 0 или 1, и
R10 означает алифатический радикал, содержащий, по меньшей мере, 5 атомов углерода, или ароматический, ароматический-алифатический, циклоалифатический, циклоалифатический-алифатический, гетероциклический или гетероциклический-алифатический радикал, и оставшиеся радикалы
R4, R5, R6, R7 и R8 означают каждый независимо от других водород, (низш.)алкил, который не замещен или замещен свободной или алкилированной аминогруппой, пиперазинилом, пиперидинилом, пирролидинилом или морфолинилом, или (низш.)алканоил, трифторметил, свободную, эфирную или сложноэфирную гидроксигруппу, свободную, алкилированную или ацилированную аминогруппу или свободную или этерифицированную карбоксигруппу, и оставшиеся заместители имеют значения, определенные выше.
Предпочтение отдается особенно соединениям по изобретению,
где
R1 означает пиридил или N-оксидопиридил, каждый из которых связан с атомом углерода,
R2 и R3 означают каждый водород,
R4 означает водород или (низш.)алкил,
R5 означает водород, (низш.)алкил или трифторметил,
R6 означает водород,
R7 означает нитро, фторзамещенный (низш.)алкокси или радикал формулы II,
где
R9 означает водород,
Х означает оксо,
n означает 0, и
R10 означает пиридил, связанный с атомом углерода, фенил, который не замещен или замещен галоидом, циано, (низш.)алкокси, карбокси, (низш.)алкилом или 4-метилпиперазинилметилом, или (С5-С7)алкил, тиенил, 2-нафтил или циклогексил, и
R8 означает водород.
Особое предпочтение отдается соединениям по изобретению, в которых, по меньшей мере, один из радикалов R3 и R8 означает (низш.)алкил, и оставшиеся заместители имеют значения, определенные выше.
Предпочтение над всеми отдается соединениям по изобретению,
где
R1 означает пиридил, связанный с атомом углерода,
R2, R3, R5, R6 и R8 означают каждый водород,
R4 означает (низш.)алкил,
R7 означает радикал формулы II,
где
R9 означает водород,
Х означает оксо,
n означает 0, и
R10 означает 4-метилпиперазинилметил.
Предпочтение над всеми отдается особенно соединению по изобретению формулы I, которое означает CGP 57148B {мономезилат N-{5-[4-(4-метилпиперазино-метил)бензоиламидо]-2-метилфенил}-4-(3-пиридил)-2-пиримидинамина}.
Наиболее предпочтительно соединение по изобретению применяется в форме мономезилатной соли.
В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, выбирают из аллергического ринита, аллергического дерматита, лекарственной аллергии и пищевой аллергии. В другом предпочтительном варианте воплощения изобретения заболеванием, подлежащим лечению, является множественный склероз. В дополнительном варианте осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, выбирают из ангионевротического отека, крапивницы, синдрома внезапной смерти внешне здорового ребенка и бронхолегочного аспергиллеза. Кроме того, соединения по изобретению могут применяться для лечения системного мастоцитоза, особенно мастоцитомы. Последнее заболевание является злокачественным заболеванием с обширными метастазами, особенно у собак.
Таким образом, соединения по изобретению особенно полезны при получении лекарственного средства для обработки мастоцитных новообразований собак.
Соединения по изобретению в отношении родовых и специфических признаков раскрыты в заявках ЕР 0564409 А1 и WO 99/03854, особенно в пунктах формулы изобретения, касающихся соединений и конечных продуктов рабочих примеров, объекта конечных продуктов, фармацевтических средств, и тем самым пункты формулы изобретения включены в настоящую заявку путем ссылки на эти публикации. Включенными являются также соответствующие стереоизомеры, а также соответствующие полиморфы, например, кристаллические модификации, которые там раскрыты.
В заявке ЕР 0564409 А1 описано, что соединения по изобретению применимы в терапии рака, тромбоза, псориаза, фиброза, дерматосклероза и атеросклероза. В соответствии с настоящим изобретением найдено, что соединения по изобретению оказывают благотворное воздействие на аллергический ринит, аллергический дерматит, лекарственную аллергию или пищевую аллергию, ангионевротический отек, крапивницу, синдром внезапной смерти внешне здорового ребенка, бронхолегочный аспергиллез, множественный склероз и, помимо этого, мастоцитоз, особенно мастоцитные новообразования собак.
В соответствии с конкретными выводами по изобретению настоящее изобретение обеспечивает также способ лечения теплокровных млекопитающих, включая человека, при котором терапевтически эффективная доза соединения по изобретению вводится такому теплокровному млекопитающему, предпочтительно человеку или собаке, наиболее предпочтительно человеку, страдающему от одного из заболеваний, упомянутых в контексте.
Изобретение относится также к способу введения собаке-объекту с мастоцитными новообразованиями соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, который включает введение фармацевтически эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли собаке в течение периода времени, предпочтительно превышающего 1 месяц, 2 месяца или даже 3 месяца. Изобретение относится в основном к такому способу, при котором вводится суточная доза соли I примерно 20-200 мг, предпочтительно 80-160 мг, в частности, 125 мг.
Предпочтительно изобретение относится к применению или способу, где суточная доза монометансульфонатной соли 4-(4-метилпиперазин-1-илметил)-N-[4-метил-3-(4-пиридин-3-ил)пиримидин-2-иламино)фенил]бензамида формулы I вводится собаке, и упомянутая суточная доза содержит количество упомянутой монометансульфонатной соли, достаточное для поддержания ее уровня в плазме, составляющего, по меньшей мере, 0,2 мкМ.
Термин "способ обработки", как он использован в контексте, относится особенно к способу предупреждения упомянутых в контексте заболеваний, т.е. к профилактическому введению фармацевтической композиции, включающей соединение по изобретению, здоровым пациентам, чтобы предотвратить вспышку заболеваний, упомянутых в контексте.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции для лечения, по меньшей мере, одного из заболеваний, упомянутых в контексте, включающей соединение по изобретению. Фармацевтические композиции для лечения, по меньшей мере, одного из заболеваний, упомянутых в контексте, включают эффективное количество соединений по изобретению наряду с фармацевтически приемлемыми носителями, которые пригодны для местного, энтерального, например, перорального или ректального, или парентерального введения и могут быть неорганическими или органическими, твердыми или жидкими. Для перорального введения в основном используют таблетки или желатиновые капсулы, включающие соединения по изобретению наряду с разбавителями и/или смазками, например, кремневой кислотой, тальком, стеариновой кислотой или ее солями и/или полиэтиленгликолем, но также лосьоны, гели или кремы. Таблетки могут содержать связующие вещества, крахмалы, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу в натриевой форме и/или поливинилпирролидон, дезинтегрирующие вещества и/или шипучие смеси или адсорбенты, красители, ароматизаторы и подсластители. Соединения по изобретению могут также применяться в форме вводимых парентерально композиций или в форме растворов для инфузий. Местное введение означает, например, нанесение на кожу. Другая форма местного введения означает введение в глаз, например, для лечения весеннего конъюнктивита. Фармацевтические композиции могут стерилизоваться и/или могут включать наполнители, например, консерванты, стабилизаторы, увлажняющие агенты и/или эмульгаторы, вещества, способствующие растворению, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. Настоящие фармацевтические композиции приготовлены известным по существу способом, например, посредством методик обычного смешивания, грануляции, изготовления лекарства, растворения или лиофилизации, и содержат приблизительно 1-100%, особенно приблизительно 1-20% активного ингредиента, одного или нескольких.
Соединения по изобретению могут быть, например, разработаны в виде состава, который раскрыт в примерах 4 и 6 заявки WO 99/03854.
Диапазон доз соединений по изобретению, которые должны применяться, зависит от факторов, известных специалистам в данной области, включая вид теплокровного млекопитающего, массу тела и возраст, способ введения, конкретное вводимое вещество и подвергающееся обработке заболевание. Если в контексте не заявлено иначе, соединения по изобретению предпочтительно вводят от одного до четырех раз в сутки или незамедлительно, как только проявляется аллергическая реакция. Кроме того, соединения по изобретению, особенно N-{5-[4-(4-метил-пиперазинометил)бензоиламидо]-2-метилфенил}-4-(3-пиридил)-2-пиримидинамин (STI571B), предпочтительно вводят теплокровным млекопитающим, в основном человеку, в дозовом диапазоне примерно 10-750 мг/день, предпочтительно 30-600 мг/день, более предпочтительно 30-300 мг/день.
У собак, в зависимости от породы, возраста, индивидуального состояния, способа введения и рассматриваемой клинической картины, эффективные дозы, например, суточные дозы примерно 20-200 мг, предпочтительно 80-160 мг, в частности, 125 мг, вводят теплокровным млекопитающим с массой около 5 кг. Для взрослых собак массой около 5 кг с неоперабельной и/или метастазирующей злокачественной мастоцитной собачьей неоплазией можно рекомендовать начальную дозу 125 мг ежедневно. Для собак с неадекватным ответом после оценки реакции на терапию дозой 125 мг ежедневно может быть без риска рассмотрена эскалация дозы, и собаки могут обрабатываться до тех, пока они получают пользу от обработки в отсутствие лимитирующих токсичностей. Дозы можно титровать таким образом, чтобы достичь плазменных уровней, по меньшей мере, 0,2 мкМ (микромолярный уровень), предпочтительно, по меньшей мере, 0,5 мкМ, более предпочтительно, по меньшей мере, 1 мкМ. Достижение и/или поддержание плазменного уровня примерно 1 мкМ является особенно предпочтительным.
Изобретение относится к области медицины и фармакологии и касается применения производных N-фенил-2-пиримидинамида или их солей для получения лекарственного средства для лечения мастоцитоза, а также способа лечения млекопитающих, страдающих мастоцитозом. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл.
где R1 означает пиридил, присоединенный по атому углерода,
R2, R3, R5, R6 и R8 означают водород,
R4 означает низший алкил,
R7 означает радикал формулы II
где R9 означает водород,
Х означает оксо,
n равно 0 и
R10 означает 4-метилпиперазинилметил,
или соль такого соединения, содержащая по меньшей мере одну солеобразующую группу для получения лекарственного средства для терапии мастоцитоза.
| HEINRICH М С et al | |||
| Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды | 1923 |
|
SU571A1 |
| BLOOD UNITED STATES | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| ЩИТОВОЙ ДЛЯ ВОДОЕМОВ ЗАТВОР | 1922 |
|
SU2000A1 |
| AKIN СЕМ et al | |||
| Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды | 1923 |
|
SU571A1 |
| Устройство для электрической сигнализации | 1918 |
|
SU16A1 |
| Приспособление в пере для письма с целью увеличения на нем запаса чернил и уменьшения скорости их высыхания | 1917 |
|
SU96A1 |
| WEDEMEYER J | |||
| et | |||
