СПОСОБ СНИЖЕНИЯ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ МЕЛАНОМЫ В-16 Российский патент 2007 года по МПК G09B23/28 A61K31/502 A61P35/00 

Изобретение относится к антиметастазическим средствам.

Известно использование для иммунокоррекции при онкологических заболеваниях (в комбинации с химио- и лучевой терапией) различных иммуномодуляторов, в частности препарата Галавит - натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона. Препарат назначают по 100 мг через день до 5 инъекций, затем один раз в 3 дня. Общий курс - 20 инъекций (Справочник Видаль-2002).

Однако доза введения препарата не дифференцируется в зависимости от гистогенеза опухоли.

Наиболее близким к данному изобретению является известный способ снижения метастазирования меланомы В-16 путем введения инъекционного водного раствора натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона; при введении 50 мкг/мышь Галавита 1 раз в 3 дня показано достоверное снижение на 44% количества легочных метастазов (Л.И.Коробкова и др. Роль иммуномодулятора Галавит в онкологической и хирургической практике. Российский биотерапевтический журнал №3, том 3, 2004).

В большинстве экспериментов Галавит в определенной степени угнетал рост подкожного узла меланомы и увеличивал продолжительность жизни мышей-опухоленосителей, но статистически значимых различий с контролем выявлено не было.

Технической задачей изобретения является повышение антиметастазического эффекта.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе снижения метастазирования меланомы В-16 путем введения инъекционного водного раствора натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона осуществляют внутрибрюшинное введение инъекционного водного раствора натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона в дозе 40 мг соли/кг мыши однократно в сутки в течение 5 дней.

Антиметастазическую активность оценивали в экспериментах с использованием в качестве моделей мышей линий С₅₇ В1/₆, DBA/₂, СВА DDF₁, массой 20-25 г с подкожно трансплантированными опухолями и препарат Галавит в лиофилизированной лекарственной форме для инъекций во флаконах. Непосредственно перед применением препарат растворяли в дистиллированной воде для инъекций.

Оценку антиметастазической активности проводили в соответствии с Методическими рекомендациями по доклиническому изучению средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования и повышать активность цитостатической терапии злокачественных опухолей, утвержденных МЗ РФ 25 ноября 1995 г., в присутствии первичного опухолевого узла.

Антиметастазический эффект оценивали на момент начала гибели мышей в контрольной группе (оптимальный срок для регистрации эффекта). Животных умерщвляли передозировкой эфирного наркоза, вскрывали, визуально определяли наличие макроскопических метастазов и интенсивность метастазирования в легкие. Затем легкие, пораженные метастазами, взвешивали на торсионных весах и вычисляли показатель торможения роста метастазов (ТРМ, %) по формуле:

где А - средняя масса легких с метастазами в контрольной группе;

В - средняя масса легких с метастазами в группе леченых мышей.

Статистическую обработку результатов проводили по критериям Стьюдента.

Условия и результаты осуществления способа приведены в таблице.

Проведенные исследования показали, что внутрибрюшинное (в/бр) введение Галавита в дозе 40 мг соли/кг мыши однократно в сутки в течение 5 дней снижало и частоту, и интенсивность метастазирования меланомы В-16. Метастазы в легких выявлены у 50% животных, получавших лечение. У контрольных животных метастазы выявлены в 100% случаев. В группе леченых животных снижена также интенсивность метастазирования. Среднее число метастазов в легких животных, получавших Галавит в указанном режиме, равно 3,67 по сравнению с 5,75 в контрольной группе. В тоже время применение Галавита в том же режиме в дозах 10 и 100 мг соли/кг мыши, ингибирующего влияние на метастазирование меланомы В-16, не оказало (см. таблицу).

Иные результаты получены при использовании внутримышечного (в/м) способа введения Галавита. Применение Галавита в дозе 40 мг соли/кг мыши однократно в сутки в течение 5 дней, оказавшееся наиболее активным при внутрибрюшинном способе введения, на фоне некоторого снижения частоты метастазирования (метастазы выявлены в 71% случаев) повышало интенсивность метастазирования. Среднее число метастазов на мышь в этой группе животных равно 9,00 по сравнению с 5,75 в контроле. Применение Галавита в дозах 10 и 100 мг соли/кг мыши, неэффективных при внутрибрюшинном применении, при внутримышечном применении наоборот снижало интенсивность (но не частоту) метастазирования меланомы В-16 (см. таблицу).

Эксперименты проводили по следующей методике.

Каждой мыши трансплантировали подкожно в область подмышечной впадины правой передней лапы по 0,5 мл суспензии механически измельченной опухолевой ткани, разведенной в среде 199, в соотношении 1:9. В данном объеме суспензии гомогенизированной опухолевой ткани содержится около 1,0×10⁶ жизнеспособных опухолевых клеток.

Метастазы выявлены на момент гибели животных (27 сутки эксперимента).

Таким образом, наилучшие результаты получены в результате способа по изобретению, который позволяет снизить как частоту, так и интенсивность метастазирования.

Таблица№ВоздействиеСр. масса легких, мг ТРМ, %Частота метастазирования, % количества животных с метастазами от количества животных в группе^**1Контроль174-100%, (5,75)2Галавит в/бр    10 мг/кг×5 р.1730,6100% (3,71)3Галавит в/бр    40 мг/кг×5 р.157,7950% (3,67)4Галавит в/бр    100 мг/кг×5 р.171,71100% (8,29)5Галавит в/м    10 мг/кг×5 р.201,7+16^*71% (3,60)6Галавит в/м    40 мг/кг×5 р.155,61071% (9,00)7Галавит в/м    100 мг/кг×5 р.174,1085% (3,00)8    * значение со знаком «+» означает стимуляцию метастазирования
** в скобках указано среднее количество метастазических колоний в легких на животное

Изобретение относится к экспериментальной медицине, и может быть использовано для снижения метастазирования меланомы В-16. Для этого вводят инъекционный водный раствор натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона внутрибрюшинно в дозе 40 мг соли/кг мыши один раз в сутки в течение 5 дней. Способ позволяет снизить интенсивность и частоту метастазирования. 1 табл.

Способ снижения метастазирования меланомы В-16 путем введения инъекционного водного раствора натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона, отличающийся тем, что осуществляют внутрибрюшинное введение инъекционного водного раствора натриевой соли 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона в дозе 40 мг соли/кг мыши однократно в сутки в течение 5 дней.