СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У БОЛЬНЫХ С ОГРАНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА С СУДОРОЖНЫМ СИНДРОМОМ Российский патент 2007 года по МПК A61B10/00 G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, нейроиммунологии, и может быть использовано для диагностики степени тяжести клинических и иммунологических и нарушений у больных с органическими заболеваниями головного мозга, протекающими с эпилептическими припадками, в зависимости от выраженности нейросенсибилизации к белку S-100.

Нейроглиальный белок S-100 является иммунобиологическим маркером многих нервно-психических заболеваний, включая эпилепсию, так как антитела к белку S-100, взаимодействуя с нейроантигеном, оказывают влияние на электрические характеристики нейрональной мембраны (Корнева Е.А., Григорьев В.А., Клименко В.М., Столяров И.Д. Электрофизиологические феномены головного мозга при иммунных реакциях).

Кроме того, белок S-100, экспрессируемый нейронами и глиальными клетками, выполняет ряд функций, направленных на поддержание нормального функционирования головного мозга, включая регуляцию метаболических процессов в нейрональных тканях, оказывает нейропротекторное действие.

По нашим данным, белок S-100 при эпилепсии выявляется у 90,4% больных, при рассеянном склерозе - у 80-85,7%, при резидуально-органических заболеваниях головного мозга - у 67% больных.

Известен способ лабораторной диагностики содержания белка S-100 в цереброспинальной жидкости методом люмбальной пункции (Мухаринская B.C., Ветрогон Ф.Г. Состояние клеточного и гуморального иммунитета в крови и спинномозговой жидкости у больных эпилепсией. - Регуляция иммунного гомеостаза. Тез. Докл. 3 Всесоюзн. Симпоз. - Л., 1982. - С.218-219).

Возможно определение сенсибилизации лимфоцитов к специфическому мозговому антигену белку S-100 путем постановки реакции взаимодействия антигена и антител (1) с использованием LAT (Leucocytes adhesion test) в присутствии белка S-100 (фирма "Sigma", США) при исследовании периферической крови.

Микрометод теста торможения адгезии лейкоцитов (реакция торможения адгезии лейкоцитов - РТАЛ (LAT-leucocytes adhesion test): в лунки 60-луночного микропланшета фирмы "Медполимер" (Россия) вносится по 0,02 мл взвеси из пробирок, содержащих предварительно внесенные 0,5 мл среды 199 с 10% телячьей сывороткой и 0,1 мл раствора нейроспецифического антигена и 0,02 мл плазмы периферической гепариноизрованной крови человека. Реакция ставится в триплетах. В контрольных лунках раствор антигена заменяется соответствующим количеством среды. Планшеты инкубируются в эксикаторе при 37° с 5% CO₂ в течение 3 часов, после чего планшеты переворачиваются и и помещаются в эксикаторе в холодильник при t +4-6°С° на 24 часа. Затем жидкость удаляется из планшетов вытряхиванием, а количество адгезированных клеток подсчитывается на микроскопе фирмы "Карл-Цейс-Иена" (Германия).

Рассчитывается индекс адгезии (ИА) как отношение среднего числа прилипших клеток в опытных лунках (содержащих раствор нейроспецифического антигена) к таковому в контрольных лунках. Индекс менее 0,7 расценивается как положительная реакция. В РТАЛ используется нейроспецифический антиген-белок S-100 фирмы "Sigma" (США): 10 мкг/мл.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ диагностики иммунодефицитного состояния (ИДС) у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом (Калинина Н.М. Методы оценки иммунного статуса и их интерпретация "Справочник по иммунотерапии". - Изд-во "Диалог", 2002. - С.23-48).

Известных способ диагностики иммунодефицитного состояния включает изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета: определение численности Т- и В-лимфоцитов в периферической крови (общего числа лимфоцитов, процентного и абсолютного числа зрелых Т-лимфоцитов (CD 3+), двух основных субпопуляций - хелперов (CD 4+) и киллеров-супрессоров (CD 8+), иммунорегуляторного индекса (ИРИ), определение фагоцитарной активности полиморфоядерных лейкоцитов (процент клеток-фагоцитов и средней способности каждого фагоцита к поглощению: НСТ-базальный, НСТ-стимулированный, РК НСТ-теста), содержание сывороточных иммуноглобулинов.

Однако описанный способ является трудоемким и дорогостоящим для выявления ИДС, т.к. включает необходимость определения многих параметров иммунного статуса и не связывает эти изменения с уровнем сенсибилизации к белку S-100.

Технический результат, на достижение которого направлено настоящее изобретение, заключается в снижение трудоемкости и повышение экономичности способа диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом, включающем оценку выраженности нейроиммунологических и клинических нарушений, согласно изобретению оценку выраженности нейроиммунологических и клинических нарушений проводят путем определения уровня сенсебилизации к нейроантигену белку S-100 и при значениях данного уровня в пределах 0,2-0,69 диагностируют иммунодефицитное состояние (ИДС).

Предложенный способ диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга и судорожным синдромом позволяет распознать специфику и выраженность иммунологического дефицита в зависимости от уровня сенсибилизации к нейроспецифическому белку S-100, что является новым обоснованием для дополнительной диагностики заболевания и оптимизации патогенетического лечения с включением иммунокорректоров, динамический контроль за которым позволяет определить прогноз заболевания и возможную степень его регресса.

Методы визуализации являются объективным контролем, регистрирующим морфологические изменения мозга, но не отвечают на вопрос о патогенетических механизмах развития заболевания, особенно при осложнении его эпилептическими припадками. Предлагаемый нами способ позволяет раскрыть один из таких механизмов, в частности, протекающий на уровне нейроиммунных нарушений.

Способ обосновывает диагностику дизрегуляторной вторичной иммунологической недостаточности (ВИН) у больных с органическими заболеваниями головного мозга, протекающих с судорожным синдромом (эпилепсии). ВИН обосновывает причинно-следственное формирование затяжных осложненных резистентных к терапии форм заболевания.

Способ диагностики ИДС у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом включает оценку выраженности нейроиммунологических и клинических нарушений путем определения уровня сенсибилизации к нейроантигену белку S-100.

ИДС - лабораторно-клинический синдром, отражающий недостаточность клеточной и гуморальной защитной системы организма, который характеризуются снижением показателей клеточного (субпопуляций Т-лимфоцитов: CD 3+, CD 4+, CD 8+, ИРИ, фагоцитоза - НСТ-теста базального, НСТ-теста стимулированного, РК НСТ-теста) и гуморального звена (содержания сывороточных иммуноглобулинов). Клинически ИДС проявляется, прежде всего, инфекционным и аллергическим синдромами, реже - аутоиммунным синдромом.

В табл.1 и на чертеже представлены показатели клеточного иммунитета больных с органическими заболеваниями головного мозга в зависимости от уровня сенсибилизации к белку S-100, полученные лабораторными методами исследования крови. В норме показатели сенсибилизации лимфоцитов к белку S-100 находятся в пределах 0,7-1,33 у.е. Эти показатели в пределах 0,6-0,69 у.е. оценены как низкая степень чувствительности лимфоцитов к НАГ, 0,5-0,6 у.е. - средняя; 0,2-0,5 - высокая, выше 1,33 также является отклонением от нормы и свидетельствует о наличии высокого уровня связанных антителами антигенов (ЦИК).

Таблица 1.
Показатели клеточного иммунитета в зависимости от уровня сенсибилизации к белку S-100Уровень сенсибилизацииCD 3+CD 4+CD 8+ИРИНСТ базНСТ стимРК НСТ-тестаВысокий (<0,5), (n=20)40,89±12,3525,84±8,7814,83±5,61,84±0,825,11±18,0543,16±18,162,73±2,03Средний (>0,5-0,6), (n=44)46,26±12,6829,44±8,6616,51±5,951,97±0,7422,83±19,7844,91±19,332,59±2,07Низкий (>0,6-0,7), (n=38)44,66±12,9830,13±10,9914,76±6,052,24±1,1521,13±16,6336,72±17,222,59±2,07>1,33 (n=16)51,66±11,6429,5±9,1529,5±9,151,31±0,2725,66±13,4253,33±22,232,31±0,99Нормальные значения иммунограммы52-7631-4623-401-1,76-1040-80>6,5

Приведенные в табл.1 и на чертеже данные свидетельствуют о том, что в группе больных с высоким уровнем сенсибилизации к белку S-100 показатели клеточного иммунитета значительно снижены по отношению к норме (низкие индексы субпопуляций Т-лимфоцитов, подавлена фагоцитарная активность - НСТ базальный, НСТ стимулированный, РК НСТ-теста. С нарастанием сенсибилизации усиливается выраженность ИДС (снижаются показатели CD 3+, CD 4+, CD 8+, ИРИ, фагоцитарная активность).

В табл.2 и на чертеже представлены показатели гуморального иммунитета больных с органическими заболеваниями головного мозга в зависимости от уровня сенсибилизации к белку S-100, полученные лабораторными методами исследования крови.

Таблица 2.
Показатели гуморального иммунитета в зависимости от уровня сенсибилизации к белку S-100УровеньCD 20+IgAIgGIgMЦИКсенсибилизации     Менее 0,5 (n=20)17,53±1,461,6±0,5910,81±4,121,11±0,520,047±0,018>0,5-0,6 (n=44)17,48±1,471,57±0,659,38±3,141,18±0,550,046±0,016>0,6-0,7(n=38)17,8±0,992,55±2,0410,11±3,161,12±0,620,058±0,048>1,33 (n=16)18,6±0,891,9±1,297,95±1,521,2±0,850,032±0,01Норма6-180,9-4,58-180,6-2,5<0,08

У сенсибилизированных к НАГ больных отмечается раздражение гуморального звена (повышение количества В-лимфоцитов) и снижение резерва защиты (на нижней границе нормы находятся показатели иммуноглобулинов сывороточного спектра).

На чертеже графически представлены данные табл.1 и табл.2.

Способ диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом поясняется на конкретных примерах его осуществления.

Пример №1. Больной Б.А., 1985 г.р., длительность заболевания - 20 лет. Клинический диагноз: Резидуально-органическое заболевание головного мозга перинатального генеза в виде аномалии развития ликворной системы (киста межжелудочковой перегородки, киста промежуточного паруса), кистозного церебрального арахноидита с гипертензионно-гидроцефальным и эпилептическим синдромом.

Клиническая картина представлена цефалгическим, диэнцефальным (вегетативно-сосудистой дистонией и вегетативно-висцеральными кризами), эпилептическим (частыми парциальными припадками) и инфекционно-аллергическим синдромами.

Иммунный статус больного Б.А. (см. табл.3) характеризуется выраженной нейросенсибилизацией к нейроантигену белку S-100 и значительной иммуносупрессией клеточного звена (основных субпопуляций Т-лимфоцитов: CD 3+, CD 4+, CD 8+, снижением иммунорегуляторного индекса, подавлением фагоцитоза: показатели НСТ-теста и РК НСТ-теста снижены в 2-3 раза), уменьшением количества иммуноглобулинов сывороточного спектра IgG и IgM, показатели которых находятся на нижней границе нормы, что является проявлением иммунодефицитного состояния, отражающего клинико-иммунологическую тяжесть энцефалопатии.

Таблица 3.
Иммунный статус больного Б.А.Иммунные показателиУровень сенсибилизации к белку S-100CD 3+CD 4+CD 8+ИРИHCT-тест баз.НСТ-тест стим.РК НСТ-тестаПациент0,23416170,946183,0Норма0,7-1,3352-7631-4623-401-1,76-1040-80>6,5 Иммунные показателиУровень сенсибилизации к белку S-100CD 20+IgAIgGIgMПациент0,2181,68,40,8Норма0,7-1,336-180,9-4,58-180,6-2,5

Пример №2. Больной К.Е., 1973 г.р., длительность заболевания 14 лет. Клинический диагноз: Кистозный церебральный арахноидит со смешанной гидроцефалией, эпилептическим синдромом (редкими судорожными припадками).

Клиническая картина представлена цефалгическим, эпилептическим (парциальными, вторично генерализованными припадками) синдромами.

Таблица 4.
Иммунный статус больного К.Е.Иммунные показателиУровень сенсибилизации к белку S-100CD 3+CD 4+CD 8+ИРИHCT-тест баз.НСТ-тест стим.РК НСТ-тестаПациент0,695827320,8448400,83Норма0,7-1,3352-7631-4623-401-1,76-1040-80>6,5 Иммунные показателиУровень сенсибилизации к белку S-100CD 20+IgAIgGIgMПациент0,69193,016,41,0Норма0,7-1,336-180,9-4,58-180,6-2,5

Иммунный статус больного К.Е. (см. табл.4) характеризуется незначительной нейросенсибилизацией к нейроантигену белку S-100 и менее выраженной супрессией клеточного звена (снижение показателей отдельной субпопуляции Т-лимфоцитов (CD 8+) при нормальных значениях CD 3+ и CD 4+, подавлением фагоцитоза), при этом количественные показатели иммуноглобулинов сывороточного спектра IgA, IgG и IgM находятся в пределах средней нормы, что является проявлением иммунодефицитного состояния меньшей степени выраженности и, следовательно, отражающего меньшую клинико-иммунологическую тяжесть энцефалопатии.

Предлагаемый способ диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом может быть использован при затруднениях в лечебно-реабилитационной работе у больных с органической энцефалопатией, сочетающейся с эпилептическими припадками, и эпилепсией.

Способ диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом является наименее трудоемким и наиболее экономичным, по сравнению с известными способами, т.к. оценка одного показателя (сенсибилизации лимфоцитов к белку S-100) позволяет оценить иммунный статус комплексно, что не требует затрат для проведения дополнительных дорогостоящих иммунологических тестов. Кроме того, способ является щадящим, неинвазивным, позволяет избежать осложнений, возможных при осуществлении люмбальной пункции.

Способ был апробирован в Санкт-Петербургском психоневрологическом институте им. В.М.Бехтерева.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики степени тяжести клинических и иммунологических нарушений у больных с органическими заболеваниями головного мозга, протекающими с эпилептическими припадками. Способ обеспечивает снижение трудоемкости и повышение экономичности способа диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга. У больных оценивают выраженность нейроиммунологических и клинических нарушений, причем эту оценку проводят путем определения уровня сенсебилизации к нейроантигену белку S-100 и при значениях данного уровня в пределах 0,2-0,69 диагностируют иммунодефицитное состояние. 1 ил., 4 табл.

Способ диагностики иммунодефицитного состояния у больных с органическими заболеваниями головного мозга с судорожным синдромом, включающий оценку выраженности нейроиммунологических и клинических нарушений, отличающийся тем, что оценку выраженности нейроиммунологических и клинических нарушений проводят путем определения уровня сенсебилизации к нейроантигену белку S-100 и при значениях данного уровня в пределах 0,2-0,69 диагностируют иммунодефицитное состояние (ИДС).