3-ГИДРОКСИПРОПИЛАМИД 4,6-ДИМЕТИЛ-1Н-2-ОКСОНИКОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИКОАГУЛЯНТНУЮ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ И АНАЛЬГЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2008 года по МПК C07D213/82 A61K31/44 A61P7/02 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к 3-гидроксипропиламиду 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты формулы

обладающего антикоагулянтной, противовоспалительной, анальгетической активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с повышением (гиперкоагуляцией) свертываемости крови.

Ближайшим аналогом по структуре является 2,4-диметиланилид 2-оксоникотиновой кислоты [Михалев А.И., Коньшин М.Е., Зуева М.В., Закс А.С., Вахрин М.И. Синтез и противовоспалительная активность замещенных амидов 2-хлор-, 2-оксоникотиновых кислот. Деп. в ВИНИТИ, 19.03.97, №828-В97], который проявляет противовоспалительную активность, но не растворяется в воде

В медицинской практике широко используется антикоагулянтное средство гепарин [Машковский М.Д. Лекарственные средства, М., Новая волна, 2002, Т.1. С.455], который взят нами в качестве эталона сравнения антикоогулянтной активности.

Целью изобретения является поиск в ряду амидов никотиновой кислоты соединения, проявляющего высокую антикоагулянтную активность, обладающего при этом низкой токсичностью.

Поставленная цель достигается синтезом 3-гидроксипропиламида 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты взаимодействием этилового эфира 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты с 3-аминопропанолом-1 по следующей схеме:

Пример получения заявляемого соединения

1,94 г (0,01 моль) этилового эфира 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты [3] и 0,75 г (0,01 моль) 3-аминапропанола-1 нагревают при температуре 170-180°С в течение 6 часов, охлаждают, остаток обрабатывают гексаном. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола.

Выход 1,9 г (85%).

Т.пл. 203-205°С. С₁₁H₁₆N₂О₃.

Найдено, %: С 58,86; Н 7,25; N 12,54.

Вычислено, %: С 58,91; Н 7,19; N 12,49.

ИК-спектр, ИК-Фурье спектрометр (ФСМ-1201), вазелиновое масло, ν, см^-1: 1553, 1549 (СО); 3248, 3441 (NH); 4329 (ОН).

ПМР-спектр (спектрометр ЯМР MERCURY-300 фирмы Varian, 300 МГц), в ДМСО-d₆, внутренний стандарт ГМДС, σ, м.д.): 11,93 с (1Н, NH-кольца); 9,19 т (1Н, NH-амид); 6,0 с (1Н, С₅-кольца); 4,47 т (1Н, CH₂OH); 3,45 м 3,25 м 1,61 м 2,33 с (СН₃ при С₆ пиридина); 2,17 с (СН₃ при С₄ пиридина).

Полученное соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в воде. При хранении на воздухе соединение устойчиво. Заявляемое соединение изучено на наличие антикоагулянтного, противовоспалительного и анальгетического действия.

Острая токсичность полученного соединения изучена на белых мышах по методу [Прозоровский В.Б. Практическое пособие по ускоренному определению среднеэффективных доз и концентраций биологически активных веществ, С.-Петербург, НПП-Наука, 1992, с.42] при внутрибрюшинном введении и установлено, что ЛД₅₀ для заявляемого соединения больше 5000 мг/кг. Известно, что ЛД₅₀ гепарина 3000, диклофенака натрия 74, а анальгина 2900 мг/кг [Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М., Медицина, 1998, 263 с.].

Антикоагулянтная активность соединения изучена с помощью коагулометра "Минилаб 701" [Удодов В.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е., Сыропятов Б.Я., Вахрин М.И., Данилов Ю.Л., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б. Синтез и биологическая активность замещенных амидов 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты. Деп. в ВИНИТИ 13.04.2006, №478-В2006].

Для исследования использовали нитратную (3,8%) кровь (9:1) собаки. Влияние соединения на свертываемость крови изучали в концентрации 1 мг/мл. В качестве эталона антикоагулянтной активности использовали раствор гепарина в концентрации 1 ЕД/мл крови. Для фармакологических исследований заявляемое соединение использовали в виде раствора в воде. Проведено 7 опытов. Результаты обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента, результаты считали достоверными при р<0,05 [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград 1963, с.81-106].

Установлено, что 3-гидроксипропиламид 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты вызывает на 24,7% снижение свертываемости крови, а препарат - эталон гепарин - в этих же условиях на 22,4% оказывает аналогичное действие (таблица).

Положительным отличием заявляемого соединения от применяемого в медицине антикоагулянтного средства - гепарина, является меньшая токсичность, более выраженное действие по снижению свертываемости крови, наличие противовоспалительной и анальгетической активности, доступность получения, устойчивость вещества при хранении на воздухе.

Противовоспалительная активность (ПВА) изучена на белых крысах обоего пола массой 180-220 г на агаровой модели воспаления, создаваемой субплантантным введением в заднюю лапу крыс 0,15 мл 0,15% водного раствора агара. В качестве эталона сравнения использовался диклофенак натрия. Исследуемое вещество вводили в 2% крахмальной слизи внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг за один час до моделирования воспаления, препарат сравнения диклофенак натрия - в дозе 8 мг/кг (1/10 ЛД₅₀). Прирост объема воспаленной стопы оценивали онкометрически через 4 часа после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отека к контролю [Закс А.С., Суслина М.Л. О влиянии вегетотропных средств и их комбинаций с амидопирином на асептическое воспаление и сосудистую проницаемость. Фармакол. и токсикол. 1975, №3, с.308-310]. ПВА аналога по структуре изучена на модели каррагенинового воспаления (таблица) [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000, 398 с.].

Результаты опытов обрабатывали статистически с определением критерия достоверности [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград 1963, с.81-106].

Исследования показали, что заявляемое соединения при внутрибрюшинном введении в дозе 50 мг/кг через 4 ч после введения флогогенного агента тормозит развитие отека на 46,4% (таблица) и уступает по активности диклофенаку натрия.

Анальгетическую активность (АА) соединения изучали на модели "уксусных корчей" на беспородных белых мышах обоего пола массой 22-24 г. Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75% водный раствор уксусной кислоты из расчета 0,25 мл на 10 г массы животного и подсчитывали количество корчей в течение 10 минут [R.Koster, M.Anderson, E.J. de Beer. - Federation Proceedinys, 1959, vol.18, part 1, р.412. Acetic acid for analgetic screening]. Исследуемое вещество вводили перорально в 2% крахмальной слизи в дозе 50 мг/кг за 1 час до введения уксусной кислоты, а препарат сравнения анальгин - в дозе 55 мг/кг, соответствующей ED₅₀ по тесту "уксусных корчей" [Сюбаев Р.Ф., Машковский М.Д., Шварц Г.Я., Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов. Хим. фарм. журн. 1986, Т.20, № 1, с.33-39]. Результаты оценивали по способности тормозить количество корчей по сравнению с контрольными животными, получавшими крахмальную слизь. Данные опытов обрабатывали статистически с вычислением критерия достоверности [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград 1963, с.81-106].

По анальгетическому действию исследованное соединение в дозе 50 мг/кг вызывает снижение "уксусных корчей" на 67,6% (таблица) и не уступает активности анальгина в дозе 55 мг/кг.

ТаблицаСоединениеЛД₅₀, мг/кг в/бСвертываемость кровиПротивовоспалит. активность (ПВА), % торможения к контролю после введения флогогенного агента черезАнальгетическая активность (АА)время свертывания, сек% изменения свертываемостиконтрольопытдоза, мг/кг3 ч4 ч5 чдоза, мг/кг% торможения уксусных корчейЗаявляемое соединение>500059,8±1,5974,6±2,92***-24,750...46,4*...5067,6*Аналог по структуре............5052,0***...46,3**......Гепарин300029,9±0,4836,6±1,82**-22,4 ...............Диклофенак натрия74.........8...43,6*.........Анальгин2900.....................5574,6*ПВА заявляемого соединения на модели агарового воспаленияПВА аналога по структуре на модели каррагенинового воспаления* - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Источники информации

1. Михалев А.И., Коньшин М.Е., Зуева М.В., Закс А.С., Вахрин М.И. Синтез и противовоспалительная активность замещенных амидов 2-хлор-, 2-оксоникотиновых кислот. Деп. в ВИНИТИ, 19.03.97, № 828-В97.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства, М., Новая волна, 2002, т.1, с.455.

3. A.N.Osman, M.M.Jsmaeil, M.A.Brakat // Rev. roum. chim., 1986, Vol 31, № 6, P.615-624; РЖХим., 1987, № 4, Ж 273.

4. Прозоровский В.Б. Практическое пособие по ускоренному определению среднеэффективных доз и концентраций биологически активных веществ, НПП-Наука, С.-Петербург, 1992, с.42.

5. Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М., Медицина, 1998, 263 с.

6. Удодов В.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е., Сыропятов Б.Я., Вахрин М.И., Данилов Ю.Л., Аникина Л.В., Вихарев Ю.Б. Синтез и биологическая активность замещенных амидов 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты. Деп. в ВИНИТИ 13.04.2006, № 478-В2006.

7. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта, 2-е изд., Медгиз, Ленинград 1963, с.81-106.

8. Закс А.С., Суслина М.Л. О влиянии вегетотропных средств и их комбинаций с амидопирином на асептическое воспаление и сосудистую проницаемость. Фармакол. и токсикол. 1975, № 3, с.308-310.

9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000, 398 с.

10. R.Koster, M.Anderson, E.J. de Beer. - Federation Proceedinys, 1959, vol.18, part 1, p.412. Acetic acid for analgetic screening.

11. Сюбаев P.O., Машковский М.Д., Шварц Г.Я., Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов. Хим. фарм. журн. 1986, Т.20, № 1, с.33-39.

Изобретение относится к области органической химии, описывается 3-гидроксипропиламид 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты, проявляющий антикоагулянтную, противовоспалительную и анальгетическую активность. Технический результат: полученное соединение может найти применение в терапии заболеваний, связанных с повышением свертываемости крови, в качестве антикоагулянтного средства, обладающего, кроме того, противовоспалительным и анальгетическим действием. 1 табл.

3-Гидроксипропиламид 4,6-диметил-1Н-2-оксоникотиновой кислоты формулы

проявляющий антикоагулянтную, противовоспалительную и анальгетическую активность.