ЧАСТИЧНЫЕ И ПОЛНЫЕ АГОНИСТЫ АДЕНОЗИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ А Российский патент 2008 года по МПК C07H19/16 A61K31/7076 A61P9/00 A61P25/00 

Область техники

Данное изобретение относится к новым соединениям, которые являются частичными или полными агонистами аденозинового рецептора А₁, и к их применению для лечения различных болезненных состояний млекопитающих, включая сердечно-сосудистые заболевания, в частности аритмию, и для предотвращения скоропостижной смерти в результате аритмии, ишемии, расстройств ЦНС, включая боль, эпилепсию, рвоту, и метаболических расстройств, включая диабет и ожирение. Изобретение также относится к способам их получения и к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения.

Предпосылки к созданию изобретения

Аденозин является встречающимся в природе нуклеозидом, который оказывает свои биологические воздействия при взаимодействии с семейством аденозиновых рецепторов, известных как А₁, А_2А, А_2В и А₃, все они регулируют важные физиологические процессы. Например аденозиновые рецепторы А_2А регулируют коронарную вазодилатацию, рецепторы А_2В, как полагают, имеют отношение к активации тучных клеток, астме, вазодилатации, регуляции роста клеток, функции кишечника и регулированию нейросекреции (См. Adenosine A_2B Receptors as Therapeutic Targets, Drug Dev Res 45:198; Feoktistov et al, Trends Pharmacol Sci 19:148-153), и аденозиновые рецепторы А₃ регулируют процессы пролиферации клеток.

Агонисты аденозинового рецептора А₁ регулируют кардиостимулирующие эффекты катехоламина (опосредуемые через ингибирование аденилатциклазы) и замедляют частоту сокращений сердца (HR) и продлевают прохождение импульса через AV-узел, что происходит в значительной мере благодаря активации I_KAdo (B. Lerman and L. Belardinelli Circulation, Vol. 83 (1991), p. 1499-1509 и J.C. Shryock and L. Belardinelli The Am. J. Cardiology, Vol. 79 (1997) p. 2-10). Стимуляция аденозинового рецептора А₁ сокращает длительность и уменьшает амплитуду потенциала действия клеток AV-узла и, следовательно, продлевает рефрактерный период клеток AV-узла. Таким образом, стимуляция рецепторов А₁ обеспечивает способ лечения суправентрикулярной тахикардии, включая прекращение узловой пароксизнальной тахикардии и контроль вентрикулярной частоты сокращений во время фибрилляции и трепетания предсердий.

Агонисты А₁ применимы также при рвоте и для лечения инсулин-независимого сахарного диабета, гипергликемии, эпилепсии (противосудорожная активность) и обеспечивают кардио- и нейрозащиту. Они также имеют антилиполитические эффекты в адипоцитах, приводящие к пониженному высвобождению свободных жирных кислот.

Соответственно, цель данного изобретения - предоставить соединения, которые являются сильными полными агонистами аденозинового рецептора А₁ или частичными агонистами рецептора А₁ с большим полупериодом существования, чем таковой у аденозина. Предпочтительные соединения по изобретению селективны в отношении аденозинового рецептора А₁, что сводит к минимуму нежелательные побочные эффекты, имеющие отношение к стимуляции или антагонизму других аденозиновых рецепторов.

Краткое описание изобретения

Соответственно, в первом аспекте изобретение относится к соединениям формулы I:

где:

R¹ означает необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил;

R² означает водород, галоген, трифторметил или циано;

R³ означает необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероарил или необязательно замещенный гетероциклил;

R⁴ и R⁵ означают независимо водород или необязательно замещенный ацил;

T и X означают независимо ковалентную связь или алкилен из 1-3 атомов углерода, необязательно замещенный алкилом или циклоалкилом;

Y означает -O-, -NH-, -S-, или ковалентную связь, и

Z означает алкилен из 1-3 атомов углерода, необязательно замещенный низшим алкилом или циклоалкилом.

Второй аспект данного изобретения относится к фармацевтическим композициям, содержащим терапевтически эффективное количество соединения формулы I и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель.

Третий аспект данного изобретения относится к способу применения соединений формулы I при лечении заболевания или состояния млекопитающего, которые обычно поддаются лечению частичным или полным селективным агонистом аденозинового рецептора А₁. К таким заболеваниям относятся фибрилляция предсердий, суправентрикулярная тахикардия и трепетание предсердий, застойная сердечная недостаточность, включая скоропостижную смерть в результате указанных состояний, посредством антилиполитического действия соединений, ишемия, включая ишемию из-за стабильной и нестабильной стенокардии, трансплантация сердца, инфаркт миокарда, расстройства ЦНС, включая эпилепсию и удар, рвота и метаболические расстройства, особенно гиперлипидемия вследствие диабета или ожирения, посредством антилиполитического воздействия агонистов А₁ на адипоциты.

Определения и общие параметры

Как правило, подразумевается, что используемые в данном описании следующие слова и выражения имеют значения, которые указаны ниже, за исключением того контекста, где они указаны иначе.

Термин "алкил" относится к монорадикалу разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 20 атомов углерода. Этот термин поясняется примерами групп, таких как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, н-гексил, н-децил, тетрадецил и тому подобное.

Термин "замещенный алкил" относится к

1) алкилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, имеющей от 1 до 5 заместителей, предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Если определение не обязывает иначе, все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2; или

2) алкилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, которая прервана 1-5 атомами или группами, независимо выбранными из кислорода, серы и -NR_a-, где R_a означает водород, алкил, циклоалкил, алкенил, циклоалкенил, алкинил, арил, гетероарил и гетероциклил. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2; или

3) алкилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, которая имеет от 1 до 5 заместителей, которые имеют значения, определенные выше, и к тому же прервана 1-5 атомами или группами, которые имеют значения, определенные выше.

Термин "низший алкил" относится к монорадикалу разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 6 атомов углерода. Этот термин поясняется примерами групп, таких как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, н-гексил и тому подобное.

Термин "замещенный низший алкил" относится к низшему алкилу, который имеет значение, определенное выше, имеющему от 1 до 5 заместителей, предпочтительно от 1 до 3 заместителей, которые указаны для замещенного алкила, или к низшей алкилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, которая прервана 1-5 атомами, как указано для замещенного алкила, или к низшей алкилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, которая имеет от 1 до 5 заместителей, которые имеют значения, определенные выше, и к тому же прервана 1-5 атомами, как указано выше.

Термин "алкилен" относится к бирадикалу разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепи, предпочтительно имеющей от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно 1-10 атомов углерода, более предпочтительно 1-6 атомов углерода. Этот термин поясняется примерами групп, таких как метилен (-CH₂-), этилен

(-CH₂CH₂-), изомеры пропилена (например -CH₂CH₂CH₂- и

-CH(CH₃)CH₂-) и тому подобное.

Термин "низший алкилен" относится к бирадикалу разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепи, предпочтительно имеющей от 1 до 6 атомов углерода.

Термин "замещенный алкилен" относится к

(1) группе алкилена, которая имеет значение, определенное выше, имеющей от 1 до 5 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила,

-SO₂-алкила, SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Если иначе не предписано определением, все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2; или

(2) группе алкилена, которая имеет значение, определенное выше, которая прервана 1-5 атомами или группами, независимо выбранными из кислорода, серы и NR_a-, где R_a означает водород, необязательно замещенный алкил, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероарил и гетероциклил, или группами, выбранными из карбонила, сложного карбоксиэфира, карбоксиамида и сульфонила; или

(3) группе алкилена, которая имеет значение, определенное выше, которая имеет от 1 до 5 заместителей, которые имеют значения, определенные выше, и к тому же прервана 1-20 атомами, как указано выше. Примерами замещенных алкиленов являются хлорметилен (-CH(Cl)-), аминоэтилен (-CH(NH₂)CH₂-), метиламиноэтилен (-CH(NHMe)CH₂-), изомеры 2-карбоксипропилена

(-CH₂CH(CO₂H)CH₂-), этоксиэтил (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-), этилметиламиноэтил(-CH₂CH₂N(CH₃)CH₂CH₂-), 1-этокси-2-(2-этокси-этокси)этан (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-OCH₂CH₂-OCH₂CH₂-) и тому подобное.

Термин "аралкил" относится к арилгруппе, ковалентно связанной с группой алкилена, где арил и алкилен имеют значения, которые определены здесь. "Необязательно замещенный аралкил" относится к необязательно замещенной арилгруппе, ковалентно связанной с необязательно замещенной группой алкилена. Такие аралкилгруппы поясняются примерами групп, таких как бензил, фенилэтил, 3-(4-метоксифенил)пропил и тому подобное.

Термин "алкокси" относится к группе R-O-, где R означает необязательно замещенный алкил или необязательно замещенный циклоалкил, или R означает группу -Y-Z, где Y означает необязательно замещенный алкилен и Z означает необязательно замещенный алкенил, необязательно замещенный алкинил или необязательно замещенный циклоалкенил, где алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил и циклоалкенил являются такими, как указано здесь. Предпочтительными алкоксигруппами являются алкил-O-, и к ним относятся, например, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, н-пентокси, н-гексокси, 1,2-диметилбутокси и тому подобное.

Термин "алкилтио" относится к группе R-S-, где R имеет такие значения, как указано для алкокси.

Термин "алкенил" относится к монорадикалу разветвленной или неразветвленной ненасыщенной углеводородной группы, предпочтительно имеющей от 2 до 20 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 10 атомов углерода и еще более предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода и имеющей 1-6, предпочтительно 1 двойную связь (винил). Предпочтительные алкенилгруппы включают этенил или винил (-CH=CH₂), 1-пропилен или аллил (-CH₂CH=CH₂), изопропилен (-C(CH₃)=CH₂), бицикло[2.2.1]гептен и тому подобное. В случае, когда алкенил присоединен к азоту, двойная связь не может быть в положении альфа по отношению к азоту.

Термин "низший алкенил" относится к алкенилу, который имеет значение, определенное выше, имеющему от 2 до 6 атомов углерода.

Термин "замещенный алкенил" относится к алкенилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, имеющей от 1 до 5 заместителей, и предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "алкинил" относится к монорадикалу ненасыщенного углеводорода, предпочтительно имеющего от 2 до 20 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 10 атомов углерода и еще более предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода, и имеющего, по меньшей мере, 1 и предпочтительно от 1 до 6 ненасыщенных по типу ацетилена мест (тройных связей). Предпочтительные алкинилгруппы включают этинил, (-C≡CH), пропаргил (или пропинил, -С≡CCH₃) и тому подобное. В случае, когда алкинил присоединен к азоту, тройная связь не может быть в положении альфа по отношению к азоту.

Термин "замещенный алкинил" относится к алкинилгруппе, которая имеет значение, определенное выше, имеющей от 1 до 5 заместителей, и предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "аминокарбонил" относится к группе -C(O)NRR, где каждый R означает независимо водород, алкил, арил, гетероарил, гетероциклил или где обе группы R соединены с образованием гетероциклической группы (например, морфолино). Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "ациламино" относится к группе -NRC(O)R, где каждый R означает независимо водород, алкил, арил, гетероарил или гетероциклил. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "ацилокси" относится к группам -O(O)C-алкил, -O(O)C-циклоалкил, -O(O)C-арил, -O(O)C-гетероарил и -O(O)C-гетероциклил. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "арил" относится к ароматической карбоциклической группе из 6-20 атомов углерода, имеющей единственное кольцо (например, фенил) или множественные кольца (например, бифенил) или множественные конденсированные (слитые) кольца (например, нафтил или антрил). Предпочтительные арилы включают фенил, нафтил и тому подобное.

Если определение иным образом не ограничивает заместитель арила, такие арилгруппы необязательно могут быть замещены 1-5 заместителями, предпочтительно 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила,

-SO₂-алкила, -SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано, или

-S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "арилокси" относится к группе арил-O-, где арилгруппа является такой, как указано выше, и включает необязательно замещенные арилгруппы, которые также определены выше. Термин "арилтио" относится к группе R-S-, где R имеет такие значения, как указано для арила.

Термин "амино" относится к группе -NH₂.

Термин "замещенный амино" относится к группе -NRR, где каждый R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, карбоксиалкила (например, бензилоксикарбонила), арила, гетероарила и гетероциклила при условии, что обе группы R не представлены водородом, или группы -Y-Z, где Y означает необязательно замещенный алкилен и Z означает алкенил, циклоалкенил или алкинил. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "карбоксиалкил" относится к группам -C(O)O-алкил,

-C(O)O-циклоалкил, где алкил и циклоалкил являются такими, как указано здесь, и могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, алкенилом, алкинилом, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "циклоалкил" относится к циклическим алкилгруппам из 3-20 атомов углерода, имеющим единственное циклическое кольцо или множественные конденсированные кольца. Такие циклоалкилгруппы включают, например структуры из единственного кольца, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклооктил и тому подобное, или структуры из нескольких колец, такие как адамантил и бицикло[2.2.1]гептан, или циклические алкилгруппы, с которыми конденсирована арилгруппа, например индан и тому подобное.

Термин "замещенный циклоалкил" относится к циклоалкилгруппам, имеющим от 1 до 5 заместителей, и предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, -SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано, или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2.

Термин "галоген" или "радикал галогена" относится к фтору, брому, хлору и иоду.

Термин "ацил" означает группу -C(O)R, где R означает водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил.

Термин "гетероарил" относится к ароматической группе (т.е., ненасыщенной), содержащей от 1 до 15 атомов углерода и от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, азота и серы, по меньшей мере, в одном кольце.

Если определение иным образом не ограничивает заместитель гетероарила, такие гетероарилгруппы могут быть необязательно замещены 1-5 заместителями, предпочтительно 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, -SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2. Такие гетероарилгруппы могут иметь единственное кольцо (например, пиридил или фурил) или множественные конденсированные кольца (например, индолизинил, бензотиазол или бензотиенил). Примеры гетероарилов включают, но без ограничения указанным, пиррол, имидазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, индол, индазол, пурин, хинолизин, изохинолин, хинолин, фталазин, нафтилпиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, фенантролин, тиазол, изотиазол, феназин, оксазол, изоксазол, феноксазин, фенотиазин, имидазолидин и имидазолин.

Термин "гетероарилокси" относится к группе гетероарил-O.

Термин "гетероциклил" относится к монорадикальной насыщенной или частично ненасыщенной группе, имеющей единственное кольцо или множественные конденсированные кольца, имеющие от 1 до 40 атомов углерода и от 1 до 10 гетероатомов, предпочтительно от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из азота, серы, фосфора и/или кислорода, в кольце.

Если определение не ограничивает иным образом заместитель гетероциклической группы, такие гетероциклические группы могут быть необязательно замещены 1-5 и предпочтительно 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO₂-алкила, -SO₂-арила и -SO₂-гетероарила. Все заместители могут быть необязательно дополнительно замещены алкилом, гидрокси, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R означает алкил, арил или гетероарил и n означает 0, 1 или 2. Гетероциклические группы могут иметь единственное кольцо или множественные конденсированные кольца.

Термин "тиол" относится к группе -SH.

Термин "замещенный алкилтио" относится к группе -S-замещенный алкил.

Термин "гетероарилтиол" относится к группе -S-гетероарил, где гетероарилгруппа является такой, как указано выше, включая необязательно замещенные гетероарилгруппы, которые также указаны выше.

Термин "сульфоксид" относится к группе -S(O)R, где R означает алкил, арил или гетероарил. "Замещенный сульфоксид" относится к группе -S(O)R, где R означает замещенный алкил, замещенный арил или замещенный гетероарил, которые являются такими, как описано здесь.

Термин "сульфон" относится к группе -S(O)₂R, где R означает алкил, арил или гетероарил. "Замещенный сульфон" относится к группе -S(O)₂R, где R означает замещенный алкил, замещенный арил или замещенный гетероарил, которые являются такими, как указано здесь.

Термин "кето" относится к группе -C(O)-. Термин "тиокарбонил" относится к группе -C(S)-. Термин "карбокси" относится к группе -C(O)-OH.

"Необязательный" или "необязательно" означает, что описанное вслед за ним событие или обстоятельство может произойти или может не произойти, и что описание включает случаи, где указанное событие или обстоятельство имеет место, и случаи, где их нет.

Термин "соединение формулы I" предназначен для охвата соединений по изобретению, которые раскрыты, и фармацевтически приемлемых солей, фармацевтически приемлемых сложных эфиров и полиморфов и пролекарственных форм таких соединений. Дополнительно, соединения по изобретению могут обладать одним или несколькими асимметричными центрами и могут быть получены в виде рацемической смеси или в виде отдельных энантиомеров или диастереоизомеров. Число стереоизомеров, присутствующих в каком-либо данном соединении формулы I, зависит от числа имеющихся асимметричных центров (возможно 2ⁿ стереоизомеров, где n означает число асимметричных центров). Отдельные стереоизомеры могут быть получены разделением рацемической или нерацемической смеси промежуточного соединения на какой-либо подходящей стадии синтеза или разделением соединения формулы I обычными средствами. Отдельные стереоизомеры (включая отдельные энантиомеры и диастереоизомеры), а также рацемические и нерацемические смеси стереоизомеров входят в объем данного изобретения, подразумевается, что все они описаны структурами в данном описании, если иное специально не указано.

"Изомеры" являются разными соединениями, которые имеют одну и ту же молекулярную формулу.

"Стереоизомеры" являются изомерами, которые отличаются только тем, как их атомы располагаются в пространстве.

"Энантиомеры" являются парными стереоизомерами, которые являются неналожимыми зеркальными изображениями друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров является "рацемической" смесью. Термин "(±)" используется для обозначения рацемической смеси, где свойственно.

"Диастереоизомеры" являются стереоизомерами, которые имеют, по меньшей мере, два асимметричных атома, но которые не являются зеркальными изображениями друг друга.

Абсолютная стереохимия установлена согласно системе Cahn-Ingold-Prelog R-S. Когда соединение является чистым энантиомером, стереохимия при каждом хиральном атоме углерода может быть определена как R или S. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, обозначены (+) или (-) в зависимости от направления (право- или левовращающие), в котором они вращают плоскость поляризованного света при длине волны линии D натрия.

Термин "терапевтически эффективное количество" относится к такому количеству соединения формулы I, которое достаточно для осуществления лечения, как указано ниже, когда его вводят млекопитающему при необходимости такого лечения. Терапевтически эффективное количество будет изменяться в зависимости от субъекта и болезненного состояния, которое требует лечения, веса и возраста субъекта, тяжести болезненного состояния, способа введения и тому подобного, что может быть легко определено специалистом в этой области.

Термин "лечение" или "процесс лечения" означает любое лечение болезни млекопитающего, включая:

(i) профилактику болезни, то есть предотвращение развития клинических симптомов болезни;

(ii) ингибирование болезни, то есть прекращение развития клинических симптомов, и/или

(iii) облегчение болезни, то есть вызывание регрессии клинических симптомов.

Во многих случаях соединения по данному изобретению способны к образованию солей с кислотой и/или основанием, благодаря наличию амино и/или карбоксильных групп или подобных им групп. Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений формулы I и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Фармацевтически приемлемые основноаддитивные соли могут быть получены из неорганических и органических оснований. Соли, полученные из неорганических оснований, включают, например, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния. Соли, полученные из органических оснований, включают, но без ограничения указанным, соли первичных, вторичных и третичных аминов, такие как алкиламины, диалкиламины, триалкиламины, замещенные алкиламины, ди(замещенный алкил)амины, три(замещенный алкил)амины, алкениламины, диалкениламины, триалкениламины, замещенные алкениламины, ди(замещенный алкенил)амины, три(замещенный алкенил)амины, циклоалкиламины, ди(циклоалкил)амины, три(циклоалкил)амины, замещенные циклоалкиламины, дизамещенные циклоалкиламины, тризамещенные циклоалкиламины, циклоалкениламины, ди(циклоалкенил)амины, три(циклоалкенил)амины, замещенные циклоалкениламины, дизамещенные циклоалкениламины, тризамещенные циклоалкениламины, ариламины, диариламины, триариламины, гетероариламины, дигетероариламины, тригетероариламины, гетероциклические амины, дигетероциклические амины, тригетероциклические амины, смешанные ди- и три-амины, где, по меньшей мере, два заместителя на амине являются разными и выбраны из группы, состоящей из алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, арила, гетероарила, гетероциклического радикала и тому подобного. Также включены амины, где два или три заместителя вместе с азотом аминогруппы образуют гетероциклическую группу или гетероарилгруппу.

Конкретные примеры подходящих аминов включают, например, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, три(изопропил)амин, три(н-пропил)амин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, трометамин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, N-алкилглюкамины, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, морфолин, N-этилпиперидин и тому подобное.

Фармацевтически приемлемые кислотноаддитивные соли могут быть получены из неорганических и органических кислот. Соли, полученные из неорганических кислот, содержат хлороводородную кислоту, бромоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и тому подобное. Соли, полученные из органических кислот, содержат уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту и тому подобное.

Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает какой-либо и все растворители, дисперсионную среду, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты и тому подобное. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в технике. За исключением того, когда какая-либо обычная среда или агент несовместимы с активным ингредиентом, предусматривается их применение в терапевтических композициях. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в композиции.

Используемый здесь термин "агонист" относится к способности соединения взаимодействовать с рецептором и вызывать максимальный эффект. Этот эффект известен как собственная эффективность. Многие полные агонисты аденозинового рецептора А₁ известны специалистам в этой области, например N⁶-циклопентиладенозин (СРА). Напротив, "частичные агонисты" взаимодействуют с аденозиновыми рецепторами А₁, но вызывают меньший чем максимальный ответ.

Собственная эффективность соединения может изменяться в различных тканях. Так, соединение может быть полным агонистом в данной ткани, но частичным в других. Соединения, идентифицированные этим изобретением, имеют терапевтически полезные сродства к аденозиновому рецептору А₁, но имеют диапазон собственных эффективностей от полного агониста до частичного агониста. То есть, некоторые соединения могут не иметь эффекта в отношении данной эффекторной системы в данном типе клеток, но быть полным агонистом в другом типе клеток и/или другой эффекторной системе. Частичный агонист, нацеленный на выбранную мишень, вероятно, будет вызывать меньше побочных эффектов, чем полный агонист. Например, частичный агонист рецептора А₁ может не влиять на сердце, но быть сильным антилиполитическим соединением.

Частичные агонисты A₁ могут иметь дополнительную пользу при длительной терапии, поскольку, как можно ожидать, менее вероятно, что они будут индуцировать десенсибилизацию рецептора A₁ (R. B. Clark, B. J. Knoll, R. Barber TiPS, Vol. 20 (1999) p. 279-286) и вызывать побочные эффекты. Длительное применение полного агониста (R-N⁶-фенилизопропиладенозина, R-PIA) в течение 7 дней ведет к десенсибилизации рецептора A₁ в смысле дромотропной ответной реакции у морских свинок (примечание: наблюдалось уменьшение числа рецепторов - D.M. Dennis, J.C. Shryock, L. Belardinelli JPET, Vol. 272 (1995) p. 1024-1035). Индуцируемое агонистом A₁ ингибирующее действие на продуцирование cAMP аденилатциклазой в адипоцитах, как было показано, также десенсибилизируется при длительном лечении агонистом A₁ (W.J. Parsons и G.L. J. Biol. Chem. Vol. 262 (1987) p. 841-847).

Номенклатура

Наименование и нумерация соединений по изобретению поясняется на примере соединения формулы I, где R¹ означает тетрагидрофуран-3-ил, R² означает водород, R³ означает 2-фторфенил и R⁴ и R⁵ означают оба водород

которое называется: (4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол.

Параметры реакции синтеза

Термины "растворитель", "инертный органический растворитель" или "инертный растворитель" означают растворитель, инертный в условиях реакции, описанной в связи с ним [включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран ("THF"), диметилформамид ("DMF"), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, метанол, пиридин и тому подобное]. Если не указано противоположное, растворители, используемые в реакциях по данному изобретению, являются инертными органическими растворителями.

Термин "q.s." означает количество, достаточное для достижения указанной функции, например для доведения раствора до желательного объема (например, до 100%).

Синтез соединений формулы I

Соединения формулы I, где R² означает водород, могут быть получены, исходя из соединения формулы (1), как показано на схеме реакции I.

Стадия 1 - Получение соединения формулы (2)

Исходные соединения формулы (1) коммерчески доступны (например, соединение формулы (1), где R² означает водород, доступно от Aldrich, Milwaukee), или их получают способами, хорошо известными в технике. 6-Хлоргруппу вытесняют из соединения формулы (1) путем реакции с соединением формулы R¹XNH₂, где X означает ковалентную связь или необязательно замещенный алкилен, в присутствии основания, предпочтительно триэтиламина. Реакцию проводят в инертном протонном растворителе, предпочтительно этаноле, при температуре около температуры кипячения с обратным холодильником в течение около 14-48 часов, предпочтительно около 24 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (2) изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении, с последующей хроматографией остатка на силикагеле.

Стадия 2 - Получение соединения формулы (3)

Соединение формулы (3) получают обычно из соединения формулы (2) при взаимодействии с 2,2-диметоксипропаном в инертном растворителе, предпочтительно диметилформамиде, в присутствии каталитического количества кислотного катализатора, предпочтительно п-толуолсульфоновой кислоты, при температуре около 40-90°C, предпочтительно около 70°C, в течение около 24-72 часов, предпочтительно около 48 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (3) изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении и очисткой остатка хроматографией.

Стадия 3 - Получение соединения формулы I

Чтобы получить соединение формулы I, где R³ означает арил или гетероарил, T означает ковалентную связь и Y означает -O- или -S-, соединение формулы (3) затем подвергают реакции с соединением формулы R³-YH, где R³ имеет значения, определенные выше, и Y означает -O- или -S-, в присутствии трифенилфосфина и диалкилазодикарбоксилата, предпочтительно диизопропилазодикарбоксилата, в инертном растворителе, предпочтительно простом эфире, более предпочтительно в тетрагидрофуране. Реакцию проводят при температуре около 40-100°C, предпочтительно около 65°C, в течение около 24-100 часов, предпочтительно около 72 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт, соединение формулы I, которое защищено ацетонидом, изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении и очисткой остатка колоночной хроматографией.

Соединение формулы I, где R³ означает циклоалкил или гетероциклил, или где R³ означает арил или гетероарил и T означает необязательно замещенный алкилен, и Y означает -O- или -S-, может быть получено таким же образом, как показано выше. Альтернативно, соединения формулы I, где Y означает -O-, могут быть получены при взаимодействии соединения формулы (3) с соединением формулы R³-T-галоген, где R³ означает арил или гетероарил и T означает необязательно замещенный алкилен или R³ означает циклоалкил или гетероциклил и T означает ковалентную связь или необязательно замещенный алкилен, и галоген означает хлор, бром или иод. Реакцию проводят в присутствии сильного основания, предпочтительно бутоксида калия, и продукт изолируют обычными приемами.

Защищенное соединение затем превращают в соединение формулы I обработкой кислотой, предпочтительно органической кислотой, например уксусной кислотой. Реакцию проводят в смеси кислоты и воды при около 50-100°C, предпочтительно около 80-90°C, в течение около 10-48 часов, предпочтительно около 16 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы I изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении, с последующей хроматографией остатка на силикагеле.

Следует отметить, что стадии 2 и 3 могут быть проведены в обратном порядке.

Получение соединения формулы I, где R² не водород

Получение соединения формулы I, где R² не водород, показано на схеме реакции II.

Стадия 1 - Получение соединения формулы (6)

Соединение формулы (4) коммерчески доступно, или его получают, как описано ниже. Соединение формулы (5) коммерчески доступно (Aldrich, Milwaukee). Соединения формулы (4) и (5) подвергают взаимодействию, получая соединение формулы (6) обычными приемами, хорошо известными специалистам в этой области.

Стадия 2 - Получение соединения формулы (7)

6-Хлоргруппу соединения формулы (6) затем вытесняют реакцией с соединением формулы R¹XNH, где R¹ и X имеют значения, определенные выше, в присутствии основания, предпочтительно триэтиламина. Реакцию проводят в инертном протонном растворителе, предпочтительно этаноле, при температуре около температуры кипячения с обратным холодильником в течение около 14-48 часов, предпочтительно около 24 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (7) изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении, с последующей хроматографией остатка на силикагеле.

Стадия 3 - Получение соединения формулы (8)

Соединение формулы (8) получают обычно из соединения формулы (7) при взаимодействии с 2,2-диметоксипропаном в инертном растворителе, предпочтительно диметилформамиде, в присутствии каталитического количества кислотного катализатора, предпочтительно п-толуолсульфоновой кислоты, при температуре около 40-90°C, предпочтительно около 70°C, в течение около 24-72 часов, предпочтительно около 48 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (8) изолируют обычными приемами, например удалением растворителя при пониженном давлении и очисткой остатка хроматографией в тонком слое.

Стадия 4 - Получение соединения формулы I

Соединение формулы (8) затем превращают в соединение формулы I таким же образом, как показано на схеме реакции I, стадия 3.

Следует отметить, что стадии 2 и 3 могут быть проведены в обратном порядке.

Исходные материалы

Соединения формулы (4), где R² не водород, могут быть получены способами, хорошо известными в технике. Например, препарат соединения формулы (4), где R² означает трифторметил, получают, как показано на схеме реакции III.

Препарат соединения формулы (4), где R² означает нитрил, получают, как показано на схеме реакции IV.

Исходный материал формулы (с)

Исходный материал формулы (с) приобретают коммерчески (Aldrich, Milwaukee).

Приготовление соединения, где Y означает NH

Синтез соединения формулы I, где Y означает NH, показан на схеме реакции V ниже.

Стадия 1 - Получение соединения формулы (9)

Соединение формулы (9) получают обычно из соединения формулы (3) при взаимодействии с метансульфонилхлоридом, растворенным в инертном растворителе, в течение 1-3 часов при около -10°C-20°C. Продукт формулы (9) изолируют обычными приемами и используют в следующей реакции без дополнительной очистки.

Стадия 2 - Получение соединения формулы (10)

Соединение формулы (9) превращают в соединение формулы (10) при взаимодействии с азидом натрия в инертном растворителе, предпочтительно диметилформамиде, нагревая до 55°C-75°C в течение 12-20 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (10) изолируют обычными приемами.

Стадия 3 - Получение соединения формулы (11)

Азидопроизводное формулы (10) восстанавливают до соответствующего амина каталитическим восстановлением, предпочтительно используя 10% Pd/C в этаноле в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 12-20 часов. Когда реакция по существу завершена, продукт формулы (11) изолируют обычными приемами.

Стадия 4 - Получение соединения формулы (12)

Соединение формулы (11) превращают в соединение формулы (12) таким же образом, как показано на схеме реакции I, стадия 3.

Стадия 5. Получение соединения формулы 1, где Y означает NH

Соединение формулы (12) превращают в соединение формулы I таким же образом, как показано на схеме реакции I, стадия 3.

Применимость, испытание и введение

Общая применимость

Соединения формулы I эффективны при лечении состояний, известных как реагирующие на введение частичного или полного агониста аденозинового рецептора А₁. К таким состояниям относятся, но без ограничения перечисленным, острые и хронические нарушения сердечного ритма, особенно такие заболевания, характеризующиеся повышенной частотой сердечных сокращений, когда данная частота сокращений обусловлена нарушениями в синусно-предсердной, предсердной тканях и ткани узла AV. Такие расстройства включают, но без ограничения перечисленным, фибрилляцию предсердий, суправентрикулярную тахикардию и трепетание предсердий, застойную сердечную недостаточность и скоропостижную смерть в результате аритмии, инсулиннезависимый сахарный диабет, гипергликемию, эпилепсию (противосудорожная активность) и кардио- и нейрозащиту. Агонисты А₁ по изобретению имеют также антилиполитические эффекты, приводящие к замедленному высвобождению неэтерифицированных жирных кислот.

Таким образом, аденозиновые агонисты А₁ применимы для лечения острых и хронических нарушений сердечного ритма, особенно таких заболеваний, которые характеризуются повышенной частотой сердечных сокращений, когда данная частота сокращений обусловлена нарушениями в синусно-предсердной, предсердной тканях и ткани узла AV. Такие расстройства включают, но без ограничения перечисленным, фибрилляцию предсердий, суправентрикулярную тахикардию и трепетание предсердий. Воздействие агонистами А₁ вызывает снижение частоты сердечных сокращений и нормализацию аномального ритма, улучшая тем самым сердечно-сосудистую функцию.

Агонисты А₁, благодаря их способности ингибировать эффекты катехоламинов, снижают cAMP клеток и поэтому оказывают полезное воздействие на слабеющее сердце, когда повышенный симпатический тон увеличивает уровни cAMP клеток. Последнее состояние, как было показано, связано с повышенной вероятностью вентрикулярной аритмии и скоропостижной смерти. Смотри, например, B. Lerman and L. Belardinelli, Circulation, Vol. 83 (1991), p 1499-1509 и J.C. Shryock and L. Belardinelli, Am. J. Cardiology, Vol. 79 (1997) p. 2-10.

Агонисты А₁, в результате их ингибирующего действия на образование циклического AMP, имеют антилиполитические эффекты в адипоцитах, что ведет к уменьшенному высвобождению неэтерифицированных жирных кислот (NEFA) (E. A. van Schaick et al, J. Pharmacokinetics and Biopharmaceutics, Vol. 25 (1997) p. 673-694 и P. Strong, Clinical Science, Vol. 84 (1993) p. 663-669). Инсулиннезависимый сахарный диабет (NIDDM) характеризуется резистентностью к инсулину, что приводит к гипергликемии. Факторами, привносящими свой вклад в наблюдаемую гипергликемию, являются недостаточность нормального усвоения глюкозы и активация гликогенсинтазы скелетной мускулатуры (GS). Повышенные уровни NEFA, как было показано, ингибируют стимулируемое инсулином усвоение глюкозы и синтез гликогена (D. Thiebaud et al, Metab. Clin. Exp. Vol. 31 (1982) p. 1128-1136 и G. Boden et al, J. Clin. Invest. Vol. 93 (1994) p. 2438-2446). Гипотеза глюкозно-жирнокислотного цикла была предложена P.J. Randle уже давно, в 1963 г. (P.J. Randle et al, Lancet (1963) p. 785-789). Таким образом, ограничение поступления жирных кислот к периферическим тканям усиливает утилизацию углеводов (P. Strong et al, Clinical Science Vol. 84 (1993) p. 663-669).

Была проверена польза агониста А₁ при нарушениях центральной нервной системы (L.J.S. Knutsen and T.F. Murray In Purinergic Approaches in Experimental Therapeutics, Eds. K.A. Jacobson and M.F. Jarvis (1997) Wiley-Liss, N.Y., p. 423-470). Коротко, на основе экспериментальных моделей эпилепсии было показано, что смешанный агонист А_2А:А₁, метрифудил, является сильным противосудорожным средством против припадков эпилепсии, вызванных обратимым бензодиазепиновым агонистом метил 6,7-диметокси-4-этил-бета-карболин-3-карбоксилатом (DMCM, H. Klitgaard, Eur. J. Pharmacol. (1993) Vol. 224 p. 221-228). В других исследованиях с использованием CGS 21680, агониста А_2А, был сделан вывод, что противосудорожная активность обусловлена активацией рецептора А₁ (G. Zhang et al. Eur. J. Pharmacol. Vol. 255 (1994) p. 239-243). Более того, было показано, что селективные аденозиновые агонисты А₁ имеют противосудорожную активность в модели DMCM (L.J.S. Knutsen In Adenosine and Adenne Nucleotides: From Molecular Biology to Integrative Physiology; eds. L. Belardinelli and A. Pelleg, Kluwer: Boston, 1995, p.p. 479-487). Вторая область, где аденозиновый агонист А₁ имеет полезный эффект, находится в животных моделях ишемии переднего отдела головного мозга, как продемонстрировано Knutsen et al, (J. Med. Chem. Vol. 42 (1999) p. 3463-3477). Полезный эффект в нейрозащите, вероятно, частично является результатом ингибирования высвобождения возбуждающих аминокислот (там же).

Испытание

Испытание активности проводят как описано в тех патентных и литературных источниках, на которые даны ссылки выше, и в примерах ниже и методами, очевидными для специалистов в этой области.

Фармацевтические композиции

Соединения формулы I обычно вводят в виде фармацевтических композиций. Поэтому данное изобретение предлагает фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента одно или несколько соединений формулы I или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей, носителей, включая инертные твердые разбавители и наполнители, разбавителей, включая стерильный водный раствор и различные органические растворители, улучшители проницаемости, солюбилизаторы и адъюванты. Соединения формулы I могут быть введены одни или в сочетании с другими терапевтическими агентами. Такие композиции получают таким же образом, как хорошо известно в фармацевтической практике (смотри, например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA, 17th Ed. (1985) и "Modern Pharmaceutics", Marcel Dekker, Inc. 3rd Ed. (G.S. Banker & C.T. Rhodes, Eds.).

Введение

Соединения формулы I могут быть введены единой или дробными дозами любым из приемлемых способов введения агентов подобного назначения, например, как описано в патентах и патентных заявках, которые приобщены к сему ссылкой, включая ректальный, буккальный, интраназальный и трансдермальный пути, а также внутриартериальной инъекцией, внутривенно, интраперитонеально, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, местно, путем ингаляции или посредством пропитанного или покрытого устройства, такого как стент, например, или посредством вставляемого в артерию цилиндрического полимера.

Одним из путей введения является парентеральный, в частности инъекцией. Формы, в которых новые композиции по данному изобретению могут быть приготовлены для введения путем инъекции, включают водные или масляные суспензии или эмульсии с кунжутным маслом, кукурузным маслом, хлопковым маслом или арахисовым маслом, а также эликсиры, маннит, декстрозу или стерильный водный раствор и подобные фармацевтические носители. Водные растворы в физиологическом растворе также обычно используют для инъекции, но они менее предпочтительны в контексте данного изобретения. Этанол, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное (и их подходящие смеси), производные циклодекстрина и растительные масла также могут быть использованы. Должная текучесть может быть обеспечена, например, применением покрытия, такого как лецитин, поддерживанием необходимого размера частиц в случае дисперсии и применением поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть обеспечено различными антибактериальными и противогрибковыми агентами, например парабенами, хлорбутанолом, фенолом, сорбиновой кислотой, тимерозалом и тому подобным.

Стерильные растворы для инъекций получают введением соединения формулы I в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными другими ингредиентами из тех, которые перечислены выше, когда требуется, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают введением различных стерилизованных активных ингредиентов в стерильный носитель, который содержит базовую дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из тех, которые перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными способами приготовления являются технологии вакуумной сушки и сушки вымораживанием, которые дают порошок активного ингредиента и какого-либо дополнительного желательного ингредиента из их предварительно стерилизованного фильтрованием раствора.

Пероральное введение является другим путем введения соединений формулы I. Введение может быть посредством капсулы или таблеток с энтеросолюбильным покрытием или тому подобного. При приготовлении фармацевтических композиций, которые содержат, по меньшей мере, одно соединение формулы I, активный ингредиент обычно разбавляют наполнителем и/или заключают в такой носитель, который может быть в форме капсулы, саше, бумаги или другого контейнера. Когда наполнитель служит разбавителем, он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом (как выше), который действует в качестве носителя или среды для активного ингредиента. Так, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, пастилок, саше, облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (как твердое вещество или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, вплоть до 10% по весу активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, стерильных растворов для инъекций и стерильно упакованных порошков.

Некоторые примеры подходящих наполнителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, камедь акации, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, стерильную воду, сироп и метилцеллюлозу. Препараты дополнительно могут включать смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгирующие и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подслащиватели и ароматизирующие агенты.

Композиции по изобретению могут быть приготовлены с использованием известных в технике процедур так, чтобы обеспечивать быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту. Системы регулируемого высвобождения лекарственного средства для перорального введения содержат системы осмотического насоса и системы по принципу растворения, содержащие резервуары с полимерным покрытием или препараты лекарственное средство - полимерная матрица. Примеры систем с регулируемым высвобождением даны в патентах США №№ 3845770, 4326525, 4902514 и 5616345. Для других препаратов для применения в способах по данному изобретению используются устройства для трансдермальной доставки ("пластыри"). Такие трансдермальные пластыри могут быть использованы для обеспечения непрерывного или периодического введения соединений по данному изобретению в контролируемых количествах. Конструкция и применение трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны. Смотри, например, патенты США №№ 5023252, 4992445 и 5001139. Такие пластыри могут быть созданы для непрерывной, пульсирующей доставки фармацевтических агентов или для доставки их по потребности.

Композиции предпочтительно готовят в унифицированной дозированной форме. Термин "унифицированные дозированные формы" относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для получения желательного терапевтического эффекта, в сочетании с подходящим фармацевтическим наполнителем (например, таблетка, капсула, ампула). Соединения формулы I эффективны в широком диапазоне и обычно вводятся в фармацевтически эффективном количестве. Предпочтительно, для перорального введения каждая единичная доза содержит от 10 мг до 2 г соединения формулы I, более предпочтительно от 10 до 700 мг и для парентерального введения - предпочтительно от 10 до 700 мг соединения формулы I, более предпочтительно около 50-200 мг. Следует понимать, однако, что действительно вводимое количество соединения формулы I будет определяться лечащим врачом в свете релевантных обстоятельств, включая состояние, которое требует лечения, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение и его относительную активность, возраст, вес и реакцию отдельного пациента, тяжесть симптомов у пациента и тому подобное.

Для приготовления твердых составов, таких как таблетки, главный активный ингредиент смешивают с фармацевтическим наполнителем, чтобы получить предварительную твердую композицию, содержащую гомогенную смесь соединения по данному изобретению. Когда указанные предварительные композиции упоминаются как гомогенные, это означает, что активный ингредиент диспергирован равномерно по всей композиции, так что композиция легко может быть подразделена на равно эффективные унифицированные дозы, такие как таблетки, пилюли и капсулы.

Таблетки или пилюли по данному изобретению могут быть покрыты или иным образом составлены, чтобы обеспечить дозированную форму, дающую преимущество пролонгированного действия, или для защиты от кислотных условий желудка. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний компонент дозы и внешний компонент дозы, причем последний в виде оболочки вокруг предыдущего. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для противостояния дезинтеграции в желудке и позволяет внутреннему компоненту проходить нетронутым в двенадцатиперстную кишку или высвобождаться с отсрочкой по времени. Разнообразные материалы могут быть использованы для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий, такие материалы включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.

Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые наполнители, как описано выше. Предпочтительно композиции вводят через ротовой или носовой дыхательный путь для местного или системного эффекта. Композиции предпочтительно в фармацевтически приемлемых растворителях могут быть распылены с помощью инертных газов. Распыленные растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства, или распыляющее устройство может быть прикреплено к маске для лица или к машине для искусственного дыхания, работающей при пульсирующем положительном давлении. Композиции в виде раствора, суспензии или порошка могут быть введены, предпочтительно через рот или нос, из устройства, которое доставляет препарат подходящим образом.

Следующие примеры приведены, чтобы продемонстрировать предпочтительные варианты осуществления изобретения. Для специалистов в данной области техники будет понятно, что методики, раскрытые в следующих далее примерах, представляют собой разработанные автором настоящего изобретения методики, которые хорошо работают при осуществлении на практике настоящего изобретения, и поэтому их можно рассматривать в качестве предпочтительных способов для осуществления на практике. Однако для специалистов в данной области, в свете данного раскрытия, будет понятно, что многие изменения могут быть сделаны в конкретных раскрытых вариантах осуществления и все еще можно получить аналогичный или подобный результат, не выходя за пределы объема и сути изобретения.

ПРИМЕР 1

Приготовление соединения формулы (2)

А. Приготовление соединения формулы (2), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R² означает водород и Х означает ковалентную связь

Соединение формулы (2), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R² означает водород и X означает ковалентную связь, а именно 2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол, получают, как описано в патенте США No. 5789416.

Например:

1) Смесь 3-тетрагидрофуранкарбоновой кислоты (3,5 г, 30 ммоль), дифенилфосфорилазиды (6,82 мл, 32 ммоль), триэтиламина (5 мл, 36 ммоль) в диоксане (35 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут, затем нагревали на масляной бане при 100°C в атмосфере сухого азота в течение 2 часов. Затем добавляли бензиловый спирт (4,7 мл, 45 ммоль) и нагревание продолжали при 100°C в течение 22 часов. Смесь охлаждали, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в 2н HCl и экстрагировали дважды этилацетатом. Экстракты объединяли и промывали водой, затем бикарбонатом натрия и, наконец, насыщенным раствором соли и сушили над сульфатом магния. Продукт концентрировали при пониженном давлении до масла. Масло подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя смесью 30%-60% этилацетата с гексанами, получая 3,4 г N-бензилоксикарбонил-3-аминотетрагидрофурана в виде масла.

2) Полученный таким образом N-бензилоксикарбонил-3-аминотетрагидрофуран (3,4 г, 15 ммоль) растворяли в метаноле (50 мл) и концентрированной хлороводородной кислоте. Добавляли Pd-C (10%, 300 мг) и смесь гидрировали при 1 атмосфере в течение 18 часов при комнатной температуре. Смесь фильтровали через прокладку целита, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток дважды выпаривали вместе со смесью этилацетата и метанола и затем подвергали перекристаллизации из смеси этилацетата и метанола, получая 1,9 г 3-аминотетрагидрофурана в виде желтого твердого вещества.

Если исходная 3-тетрагидрофуранкарбоновая кислота является хиральной, тогда продукт (3-аминотетрагидрофуран) также хиральный, т.е. синтез является стереоспецифическим.

3) Смесь рибозида 6-хлорпурина (0,5 г, 1,74 ммоль), 3-аминотетрагидрофурана (0,325 г, 2,6 ммоль) и триэтиламина (0,73 мл, 5,22 ммоль) в метаноле (10 мл) нагревали до 80°C в течение 40 часов. Смесь охлаждали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на короткой колонке силикагеля, элюируя смесью метиленхлорид/метанол/пропиламин (90/10/1). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на хроматотроне (2 мм пластина, 92,5/7,5/1, метиленхлорид/метанол/пропиламин). Полученное белое твердое вещество подвергали перекристаллизации из смеси метанол/этилацетат, получая 0,27 г (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола в виде белых кристаллов (т.пл. 128°C-130°C).

B. Получение соединения формулы (2), где R¹ означает циклопентил, R² означает водород и X означает ковалентную связь

Подобным образом, следуя указанным выше процедурам, но заменив 3-аминотетрагидрофуран циклопентиламином, получали (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол.

Подобным образом получали следующие соединения формулы (2):

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(циклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(4-гидроксициклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(бензиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(4-гидроксициклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(2-бензилоксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(2-гидроксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол; и

(4S,2R,3R,5R)-2-[6-({[(3-хлор(2-тиенил))метил]пропил}амино)пурин-9-ил]-5-(гидроксиметил)оксолан-3,4-диол.

C. Получение соединений формулы (2) с различными R1, R2 и X

Подобным образом, следуя процедурам примера 1A выше, получают другие соединения формулы (2).

ПРИМЕР 2

Получение соединения формулы (3)

Получение соединения формулы (3), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R² означает водород и X означает ковалентную связь

К раствору (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (2) (2,0 г, 6,0 ммоль) и 2,2-диметоксипропана (1,2 г, 11,8 ммоль) в диметилформамиде (20 мл) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (50 мг, 0,26 ммоль) при 70°C. После 48 часов при 70°C реакционную смесь концентрировали в вакууме до получения твердого вещества. Твердое вещество растворяли в метаноле (3 мл), затем растирали с простым этиловым эфиром (50 мл), получая ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола.

B. Получение соединения формулы (3), где R¹ означает циклопентил, R² означает водород и X означает ковалентную связь

Подобным образом, следуя указанной выше процедуре, но заменяя 2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол 2-гидроксиметил-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диолом, получали ацетонид 2-гидроксиметил-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола.

Подобным образом получали следующие соединения формулы (3):

(4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(циклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(4-гидроксициклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола;

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(бензиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола;

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(4-гидроксициклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола;

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(2-бензилоксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола;

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(2-гидроксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола и

ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-[6-({[(3-хлор(2-тиенил))метил]пропил}амино)пурин-9-ил]-5-(гидроксиметил)оксолан-3,4-диола.

C. Получение соединений формулы (3) с различными R¹, R² и X

Подобным образом, следуя процедуре примера 2A выше, получали другие соединения формулы (3).

ПРИМЕР 3

Получение соединения формулы I

A. Получение соединения формулы I, где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R² означает водород, R³ означает 2-фторфенил, Y означает кислород, T и X оба означают ковалентные связи, и Z означает метилен

К раствору ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола (500 мг, 1,33 ммоль), 2-фторфенола (179,4 мг, 1,6 ммоль) и трифенилфосфина (418,3 мг, 1,6 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) добавляли DIAD (диизопропилазодикарбоксилат, 320 мкл, 1,6 ммоль) и нагревали при температуре кипячения с обратным холодильником в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель выпаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией (элюируя смесью этилацетат:гексан 50:50), получая ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфенокси)метил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола в виде чистого белого твердого вещества.

Это соединение обрабатывали смесью 80% уксусная кислота/вода (6 мл) и нагревали при 85°C в течение 16 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель выпаривали. Остаток растворяли в метаноле и охлаждали, получая продукт, (4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол, в виде белых кристаллов. MS 432,1 (M+l).

B. Получение соединения формулы I, где Y означает -O-, с изменяемыми R¹, R², R³, T, X и Z

Подобным образом, следуя процедуре примера 3A выше, получали следующие соединения формулы I, где Y означает -O-:

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-циклопентиламинопурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-циклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-хлорфеноксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-метилфеноксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(4-фторфеноксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(3-фторфеноксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-(2-бензилоксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-(1S,2S)-(2-гидроксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[2-трифторметил-6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-(4-гидроксициклогексиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-(1R,2R)-(2-гидроксициклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(бензотиазол-2-илоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]-тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-метилбензотиазол-5-илоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(бензоксазол-2-илоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(пиридин-3-илоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(бензофуран-3-онилоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(4-хинолинилоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол; и

(4S,2R,3R,5R)-2-(5-изохинолинилоксиметил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол,

(4S,2R,3R,5R)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]-2-{[3-(трифторметил)пиразол-5-илокси]метил}тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-метилизоксазол-3-илокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-метилизоксазол-3-илокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[5-(бензилоксиметил)]-2-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-(2-фторфенилокси)метил]-2-[6-(бензиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[5-(2-фторфенилокси)метил]-2-[6-[(3-хлор-2-тиенил)метил]пропиламино]пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-фторфеноксиметил)-5-[6-циклопентиламинопурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3,5-диметилизоксазол-4-илтио)метил]-2-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-5-[(5-метилизоксазол-3-илтио)метил]-2-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-(2-хлорфенилтиометил)-5-[6-циклопентиламинопурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]-5-[2-(фенилметокси)этил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]-5-[2-(2-фторфеноксиэтил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(2-хлорфенил)изоксазол-5-илтио)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-хлорфенил)изоксазол-5-илтио)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-метоксифенил)изоксазол-5-илтио)метил]-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[1,2,4-оксадиазол-3-илтиометил]-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[1,2,4-оксадиазол-3-илоксиметил]-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3,5-диметилизоксазол-4-илокси)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-метилизоксазол-3-илокси)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(2-хлорфенокси)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-метилизоксазол-3-илтио)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-фенилизоксазол-5-илтио)метил]-2-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(2-фенилэтокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(2-фенилметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[5-трет-бутил-1,2,4-оксадиазол-3-илтио)метил]-5-[6-(циклопентиламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-фенилизоксазол-5-илметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-метоксифенил)изоксазол-5-илметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-хлорфенил)изоксазол-5-илметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(2-метилтиазол-4-илметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-трет-бутил-1,2,4-оксадиазол-3-илметокси)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[1,2,4-оксадиазол-3-илметоксиметил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(2-метилтиазол-4-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(5-трет-бутил-1,2,4-оксадиазол-3-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-хлорфенил)изоксазол-5-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-фенилизоксазол-5-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол;

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(4-метоксифенил)изоксазол-5-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол и

(4S,2R,3R,5R)-2-[(3-(3,5-диметилизоксазол-4-илметилтио)метил]-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол.

C. Получение соединения формулы I с заменой значений R¹, R², R³, Y, T, X и Z

Подобным образом, следуя процедуре примера 3A выше, но заменяя ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола другими соединениями формулы (3) и необязательно заменяя 2-фторфенол другими соединениями формулы R³-YH, получают другие соединения формулы I.

ПРИМЕР 4

Получение соединения формулы (9)

Получение соединения формулы (9), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил

Стадия 1 - Получение соединения формулы (9)

Метансульфонилхлорид (0,477 мл, 4,77 ммоль) добавляли по каплям к раствору ацетонида 2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (3) (1,5 г, 3,9 ммоль), в сухом пиридине (15 мл), охлажденном до 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов при 0°C. Растворитель выпаривали, и остаток растворяли в этилацетате (50 мл), промывали водой, сушили безводным MgSO₄ и выпаривали, получая соединение формулы (9), 2-метилсульфонат ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола.

ПРИМЕР 5

Получение соединения формулы (10)

Получение соединения формулы (10), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил

Азид натрия (300 мг, 4,6 ммоль) добавляли к раствору 2-метилсульфоната ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (9) (1,4 г, 3 ммоль), в сухом диметилформамиде (10 мл) и смесь нагревали при 65°C в течение 16 часов. Растворитель выпаривали и остаток подвергали водной переработке и очищали на колонке в тонком слое (100% этилацетат), получая ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-азидометил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединение формулы (10).

ПРИМЕР 6

Получение соединения формулы (11)

Получение соединения формулы (11), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил

10% Pd/C (100 мг) добавляли к раствору ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-азидометил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (10) (314 мг), в этаноле (20 мл) и перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 16 часов. Катализатор удаляли фильтрованием и растворитель выпаривали из фильтрата, получая ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-аминометил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединение формулы (11).

ПРИМЕР 7

Получение соединения формулы (12)

Получение соединения формулы (12), где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R³ означает бензоксазол-2-ил и T означает ковалентную связь

К раствору ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-аминометил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (11) (100 мг), в этаноле (5 мл) добавляли триэтиламин и 2-хлорбензоксазол, и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 часов. Растворитель выпаривали и остаток очищали препаративной ТСХ (5% MeOH/DCM), получая ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-(бензоксазол-2-иламинометил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединение формулы (12).

ПРИМЕР 8

Получение соединения формулы I

A. Получение соединения формулы I, где R¹ означает 3-тетрагидрофуранил, R² означает водород, R³ означает бензоксазол-2-ил, Y означает -NH-, T и X оба означают ковалентные связи и Z означает метилен

Раствор ацетонида (4S,2R,3R,5R)-2-(бензоксазол-2-иламинометил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола, соединения формулы (12), в 80% уксусной кислоте в воде (10 мл) нагревали до 80°C в течение 16 часов. Растворитель выпаривали из продукта реакции, и остаток очищали препаративной ТСХ (5% MeOH/DCM), получая (4S,2R,3R,5R)-2-(бензоксазол-2-иламинометил)-5-[6-(тетрагидрофуран-3-ил)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол в виде белой пены. MS (M+1).

B. Получение соединения формулы I, где R¹ означает циклопентил, R² означает водород, R³ означает пиримидин-2-ил или 3-метилизоксазол-5-ил, Y означает -NH-, T и X оба означают ковалентные связи и Z означает метилен

Подобным образом, следуя процедурам примеров 4, 5, 6 и 7, необязательно заменяя ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола другими соединениями формулы (12), получают следующие соединения формулы I, где Y означает -NH-:

2-(пиримидин-2-иламинометил)-5-[6-циклопентиламинопурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол и

2-(3-метилизоксазол-5-иламинометил)-5-[6-циклопентиламинопурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диол.

С. Получение соединения формулы I, где Y означает -NH-, с изменяемыми R¹, R², R³, Т, Х и Z

Подобным образом, следуя процедуре примера 3А выше, но заменяя ацетонид (4S,2R,3R,5R)-2-гидроксиметил-5-[6-(тетрагидрофуран-3-иламино)пурин-9-ил]тетрагидрофуран-3,4-диола другими соединениями формулы (12), получают другие соединения формулы I.

ПРИМЕР 9

Получают твердые желатиновые капсулы, содержащие следующие ингредиенты:

ИнгредиентКоличество (мг/капсула)Активный ингредиент30,0Крахмал305,0Стеарат магния5,0

Указанные ингредиенты смешивают и заполняют ими твердые желатиновые капсулы.

ПРИМЕР 10

Состав для таблеток готовят, используя следующие ингредиенты:

ИнгредиентКоличество (мг/таблетка)Активный ингредиент25,0Целлюлоза микрокристаллическая200,0Коллоидальный диоксид кремния10,0Стеариновая кислота5,0

Компоненты смешивают и прессуют, чтобы получить таблетки.

ПРИМЕР 11

Получают состав сухого порошка для ингаляции, содержащий следующие компоненты:

ИнгредиентВес %Активный ингредиент5Лактоза95

Активный ингредиент смешивают с лактозой, и смесь добавляют в устройство для ингаляции сухого порошка.

ПРИМЕР 12

Таблетки, содержащие по 30 мг активного ингредиента, готовят следующим образом:

ИнгредиентКоличество (мг/таблетка)Активный ингредиент30,0 мгКрахмал45,0 мгЦеллюлоза микрокристаллическая35,0 мгПоливинилпирролидон (как 10% раствор в стерильной воде)4,0 мгНатриевая соль карбоксиметилкрахмала4,5 мгСтеарат магния0,5 мгТальк1,0 мгВсего120 мг

Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито № 20 меш. США и тщательно смешивают. Раствор поливинилпирролидона смешивают с полученным порошком, который затем пропускают через сито 16 меш. США. Полученные таким образом гранулы сушат при 50-60°С и пропускают через сито 16 меш. США. Натриевую соль карбоксиметилкрахмала, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито № 30 меш. США, добавляют затем к гранулам, которые после смешивания прессуют на таблетировочной машине, чтобы получить таблетки, каждая весом 120 мг.

ПРИМЕР 13

Суппозитории, каждый из которых содержит 25 мг активного ингредиента, получают следующим образом:

ИнгредиентКоличествоАктивный ингредиент25 мгГлицериды насыщенных жирных кислот до2000 мг

Активный ингредиент пропускают через сито № 60 меш. США и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных с использованием минимально необходимого тепла. Смесь затем заливают в форму суппозитория номинальной емкостью 2,0 г и оставляют остывать.

ПРИМЕР 14

Суппозитории, каждый из которых содержит 50 мг активного ингредиента на дозу 5,0 мл, получают следующим образом:

ИнгредиентКоличествоАктивный ингредиент50,0 мгКсантановая камедь4,0 мгНатриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (11%) Микрокристаллическая целлюлоза (89%)50,0 мгСахароза1,75 гБензоат натрия10,0 мгАроматизатор и красительq.v.Очищенная вода до 5,0 мл

Активный ингредиент, сахарозу и ксантановую камедь смешивают, пропускают через сито № 10 меш. США и затем смешивают с предварительно приготовленным раствором микрокристаллической целлюлозы и натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы в воде. Бензоат натрия, ароматизатор и краситель разбавляют некоторым количеством воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество воды, чтобы получить необходимый объем.

ПРИМЕР 15

Препарат для подкожного введения может быть приготовлен следующим образом:

ИнгредиентКоличествоАктивный ингредиент5,0 мгКукурузное масло1,0 мл

ПРИМЕР 16

Препарат для инъекций готовят следующего состава:

ИнгредиентКоличествоАктивный ингредиент2,0 мг/млМаннит, USP50 мг/млГлюконовая кислота, USPq.s. (pH 5-6)Вода (дистиллированная, стерильная)q.s. до 1,0 млГазообразный азот, NFq.s.

ПРИМЕР 17

Препарат для местного применения готовят следующего состава:

ИнгредиентыграммыАктивный ингредиент0,2-10Span 602,0Tween 602,0Минеральное масло5,0Петролатум0,10Метилпарабен0,15Пропилпарабен0,05ВНА (бутилированный гидроксианизол)0,01Водаq.s. до 100

Все указанные ингредиенты, кроме воды, объединяют и нагревают до 60^оС при перемешивании. Достаточное количество воды при 60^оС добавляют затем при энергичном перемешивании, чтобы эмульгировать ингредиенты, и затем добавляют воду q.s. до 100 г.

ПРИМЕР 18

Состав замедленного высвобождения

ИнгредиентВесовой диапазон
(%)Предпочтительный
диапазон (%)Наиболее
предпочтительныйАктивный ингредиент50-9570-9075Микрокристаллическая целлюлоза (наполнитель)1-355-1510,6Сополимер метакриловой кислоты1-355-12,510,0Гидроксид натрия0,1-1,00,2-0,60,4Гидроксипропилметилцеллюлоза0,5-5,01-32,0Стеарат магния0,5-5,01-32,0

Препараты замедленного высвобождения по данному изобретению получают следующим образом: соединение и рН-зависимое связующее и какие-либо необязательные наполнители тщательно смешивают (сухое смешивание). Смешанную в сухом состоянии смесь затем гранулируют в присутствии водного раствора сильного основания, который разбрызгивают на смешанный порошок. Гранулят сушат, пропускают через сито, смешивают с необязательными смазывающими добавками (такими как тальк или стеарат магния) и прессуют в таблетки. Предпочтительными водными растворами сильных оснований являются растворы гидроксидов щелочных металлов, таких как гидроксид натрия или калия, предпочтительно гидроксид натрия, в воде (необязательно содержащей вплоть до 25% смешивающихся с водой растворителей, таких как низшие спирты).

Полученные таблетки могут быть покрыты необязательным пленкообразующим агентом для целей идентификации и маскирования вкуса и для облегчения проглатывания. Пленкообразующий агент обычно будет присутствовать в количестве в пределах от 2% до 4% от веса таблетки. Подходящие пленкообразующие агенты хорошо известны в технике и включают гидроксипропилметилцеллюлозу, катионные сополимеры метакрилата (сополимеры диметиламиноэтилметакрилат/метилбутилметакрилат - Eudragit® E - Ruhm. Pharma) и тому подобное. Эти пленкообразующие агенты необязательно могут содержать красители, пластификаторы и другие добавочные ингредиенты.

Прессованные таблетки предпочтительно имеют достаточную твердость, чтобы противостоять давлению 8 кПа. Размер таблетки будет зависеть, главным образом, от количества соединения в таблетке. Таблетки будут содержать от 300 до 1100 мг соединения в форме свободного основания. Предпочтительно, таблетки будут содержать количества соединения в форме свободного основания в пределах от 400-600 мг, 650-850 мг и 900-1100 мг.

Чтобы повлиять на скорость растворения, контролируют время, в течение которого смешивают во влажном состоянии порошок, содержащий соединение. Предпочтительно, общее время перемешивания порошка, т.е. время, в течение которого порошок подвергается воздействию раствора гидроксида натрия, будет находиться в пределах от 1 до 10 минут и предпочтительно от 2 до 5 минут. После гранулирования частицы удаляют из гранулятора и помещают в сушилку с псевдоожиженным слоем для сушки при около 60°С.

ПРИМЕР 15

МАТЕРИАЛЫ

Аденозиновые антагонисты А₁, 8-циклопентил-1,3-дипропилксантин (CPX) и 8-циклопентил-1,3-диметилксантин (СРТ), аденозиновые агонисты А₁ N⁶-циклопентиладенозин (СРА), 2-хлор-N⁶-циклопентиладенозин (ССРА) и N⁶-циклогексиладенозин (СНА), ингибитор аденозиндезаминазы эритро-9-(2-гидрокси-3-нонил)аденин (EHNA), ингибитор аденозинкиназы иодтуберцидин и форсколин закуплены у Research Biochemicals (Natick, MA). {[(5-{6-[(3R)оксолан-3-ил]амино}пурин-9-ил)(3S,2R,4R)-3,4-дигидроксиоксолан-2-ил]метокси}-N-метилкарбоксамид молекулярной массы 394,38 является производным селективного полного агониста аденозинового рецептора А₁ CVT-510 и синтезирован соавторами J.A. Zablocki и V. Palle в CV Therapeutics. Аденозин закуплен у Sigma Chemical (St. Louis, MO). Радиолиганд 8-циклопентил-1,3-дипропил[2,3-³Н(N)]ксантин ([³Н]СРХ) закуплен у New England Nuclear (Boston, MA). Концентрированные базовые растворы (10-100 мМ) CVT-2759, CPX, CPT, CPA, CCPA, CHA и форсколин растворяли в диметилсульфоксиде, хранили как аликвоты при -80^оС и разбавляли в физиологическом растворе для применения в экспериментах. Конечное содержание диметилсульфоксида в физиологическом растворе во время экспериментов было не более чем 0,1%. Аденозин и EHNA растворяли в физиологическом растворе непосредственно перед использованием.

Анализ связывания - клетки DDT₁

Культура клеток

Клетки DDT (линия гладкомышечных клеток семявыносящего протока хомячка) выращивали как монослои в чашках Петри, используя модифицированную по способу Дульбекко среду Игла (DMEM), содержащую 2,5 мкг/мл амфотерицина В, 100 ед./мл пенициллина G, 0,1 мг/мл сульфата стрептомицина и 5% фетальной телячьей сыворотки, в увлажненной атмосфере из 95% воздуха и 5% СО₂. Клетки субкультивировали дважды в неделю диспергированием в сбалансированном солевом растворе Хенка (HBSS) без двухвалентных катионов, содержащем 1 мМ EDTA. Клетки затем высевали в ростовую среду при плотности 1,2×10⁵ клеток на планшет и эксперименты проводили через 4 дня приблизительно за день до слияния.

Препараты мембран

Слои клеток промывали дважды HBSS (2×10 мл), отскабливали от планшета с помощью каучукового скребка в 5 мл 50 мМ буфера Tris-HCl с рН 7,4 при 4^оС и суспензию гомогенизировали в течение 10 с. Гомогенат центрифугировали при 27000×g в течение 10 мин, ресуспендировали в буфере и снова центрифугировали, как указано выше. Содержание белка определяли с помощью набора для анализа белка Biorad (Richmond, CA), используя альбумин бычьей сыворотки в качестве стандарта. Эту суспензию мембран хранили в диметилсульфоксиде (DMSO) в буфере Не (10 мМ HEPES, 1 мкМ EDTA при рН 7,4) в жидком азоте при -80^оС.

Анализы конкурентного связывания

Соединения формулы I подвергали анализу для определения их сродства к сайтам аденозинового рецептора А₁ на мембранах клеток DDT. Коротко, 50-70 мкг мембранного белка инкубировали в смеси, содержащей 2 ед./мл аденозиндезаминазы, 10 мМ GTR-γS в 5 мМ буфера НЕ, содержащего 5 мМ MgCl₂, в стеклянных пробирках. Базовые растворы соединений по изобретению, серийно разбавленные (от 10^-10 М до 10^-4 М) в буфере НЕ, или один буфер НЕ (контроль для определения неспецифического связывания) добавляли к смеси для инкубирования. И наконец, меченный тритием 8-циклопентиладенозин (³Н-СРХ) добавляли до конечной концентрации 1,5 нМ. После инкубирования при 23^оС в течение 90 минут реакцию прекращали фильтрованием на сборщике клеток Brandel MR24 и промыванием охлажденным льдом буфером Tris-EDTA (три раза, приблизительный объем 10 мл/промывание) через фильтры Watman GF/B (предварительно замоченные в течение 1 ч в 0,3% полиэтиленимине для уменьшения неспецифического связывания). Фильтры переносили в сцинтилляционные ампулы и добавляли 5 мл Scintisafe (VWR, Brisbane, CA). Количество радиоактивности, удержанной на фильтрах, определяли жидкостной сцинтилляционной спектрометрией. Определения белка производили по методу Бредфорда (1976. Anal. Biochem. 72:248), используя альбумин бычьей сыворотки в качестве стандарта. Результаты представлены как средние значения из трех + SEM после вычитания количества радиоактивности из-за неспецифического связывания.

ПРИМЕР 16

Анализы связывания [³⁵S]GTPγS

Способность агонистов активировать белки G определяли, используя меченный радиоизотопом GTP ([³⁵S]GTPγS). Коротко, мембранные белки (30-50 мкг/пробирка для анализа) помещали в стеклянные пробирки, содержащие 50 мМ буфера Tris-HCl рН 7,4, 5 мМ MgCl₂, 100 мМ NaCl, 1 мМ дитиотреитола, 0,2 ед./мл аденозиндезаминазы, 0,5% BSA, 1 мМ EDTA, 10 мМ GDP и 0,3 нМ [³⁵S]GTPγS. Переменные концентрации соединений по изобретению (предполагаемые агонисты аденозинового рецептора А₁), известный полный агонист аденозинового рецептора А₁ N-циклопентиладенозин (CPA) добавляли в отдельные пробирки, контрольная пробирка содержала 10 мкМ GTPγS, но без агониста (для определения неспецифического связывания). Пробирки для анализа инкубировали в течение 90 мин при 37°С. Стимулированное агонистом связывание оценивали путем определения разницы между общим связыванием в присутствии предполагаемых агонистов и базовым связыванием, определяемым в отсутствие CPA. Результаты выражали как стимулирование в процентах предполагаемыми агонистами по отношению к полному агонисту СРА после вычитания неспецифического связывания.

Изолированные перфузируемые сердца морских свинок

Морских свинок (Hartley) любого пола, весящих 300-350 г, анестезировали метоксифлураном и умерщвляли обезглавливанием. Грудную клетку вскрывали, и сердце быстро удаляли и промывали охлажденным льдом модифицированным раствором Krebs-Henseleit (К-Н). Модифицированный раствор К-Н содержит (в мМ) 117,9 NaCl, 4,8 KCl, 2,5 CaCl₂, 1,18 MgSO₂, 1,2 KH₂PO₄, 0,5 Na₂EDTA, 0,14 аскорбиновой кислоты, 5,5 декстрозы, 2,0 пировиноградной кислоты (натриевая соль) и 25 NaHCO₃. Раствор К-Н непрерывно газировали смесью 95% О₂ - 5% СО₂, и рН доводили до величины 7,4. Для перфузии сердца по методу Лангендорфа разрезанную поперек аорту натягивали на стеклянную канюлю и закрепляли лигатурой. Ретроградную перфузию аорты начинали немедленно при постоянном потоке 10 мл/мин модифицированным раствором К-Н, подогретым до 36,0±0,5^оС. Боковое отверстие канюли использовали для соединения перфузионной линии с преобразователем давления Gould для измерения коронарного перфузионного давления. Коронарное перфузионное давление непрерывно регистрировали на ленте самописца (Gould RS3400, Cleveland, OH) в продолжение каждого эксперимента. Коронарную проводимость (в мл·мин^-1·мм Hg^-1) рассчитывали как отношение коронарного потока (10 мл/мин) к перфузионному давлению (в мм Hg). Чтобы облегчить выход жидкости из левого желудочка, створки митрального клапана подрезали тонкими подпружиненными ручными ножницами. Когда предопределено, сердцам задавали ритм постоянной частоты, используя внешние электроды. После завершения вскрытия и оснащения техническими средствами непрерывно отслеживали интервал проведения стимула до пучка Гиса (S-H) и коронарное перфузионное давление, каждому сердцу позволяли прийти в состояние равновесия в течение 20-40 мин перед введением лекарственного средства. Экспериментальные вмешательства всегда предваряли и сопровождали контрольными измерениями. Критерием для исключения сердец из исследования были 1) коронарное перфузионное давление <50 мм Hg, 2) отсутствие стабильного коронарного перфузионного давления во время периода достижения равновесного состояния и 3) невозможность задавать постоянный ритм сердцу на всем протяжении эксперимента.

Для электрической стимуляции сердец биполярный покрытый тефлоном электрод размещали в стенке межпредсердной перегородки. Части тканей левого и правого предсердий, включая участок синусно-предсердного узла, удаляли, чтобы уменьшить спонтанную частоту сердечных сокращений и чтобы открыть доступ к предсердной перегородке для размещения электрода. Сердца электрически стимулировали при фиксированной частоте 3,2 Гц. Стимулы обеспечивали интервальным генератором (модель 1830, WPI, Sarasota, FL) и доставляли через устройство изоляции стимула (модель 1880, WPI) как импульсы прямоугольных колебаний с длительностью 3 мс и, по меньшей мере, двойной пороговой интенсивностью.

Интервал S-H. Продолжительность интервала S-H использовали как меру негативного дромотропного воздействия аденозиновых агонистов А₁ на проводимость через AV-узел. Электрограмму пучка Гиса регистрировали от униполярного электрода, размещенного на правой стороне межпредсердной перегородки в непосредственной близости к AV-границе. Сигнал непрерывно воспроизводили в реальном времени на экране осциллографа при частоте развертки 10 мс/см. Длительность времени от первого стимулирующего артефакта до максимального восходящего отклонения сигнала пучка Гиса использовали как интервал S-H.

Сердцам позволяли достичь равновесного состояния, пока интервал S-H и СРР не станут постоянными. Лекарственное средство подавали в перфузионную линию в конечной концентрации 0,3, 3, 10 и в каком-то сердце вплоть до 30 мкМ. Если возникает AV-блокада второй степени при какой-либо концентрации до 30 мкМ, лекарственное средство отменяли, чтобы его смыть. После смывания первого соединения второе соединение могло быть применено в том же сердце, если только интервал S-H и СРР вернулся к контрольному значению или интервал S-H увеличился менее чем на 2 мс по сравнению с контролем. Вплоть до трех соединений могло быть применено в одном и том же сердце.

Хотя данное изобретение описано со ссылкой на его конкретные варианты, специалист в этой области должен понимать, что могут быть произведены различные изменения и найдены эквивалентные решения, не выходя за пределы объема и сути изобретения. Кроме того, может быть сделано много модификаций, чтобы приспособить конкретную ситуацию, материал, композицию вещества, способ, стадию или стадии способа к цели, сути и объему изобретения. Все такие модификации рассматриваются в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

Все патенты и публикации, процитированные выше, приобщены к сему ссылкой.

Изобретение относится к новым соединениям, которые являются частичными и полными агонистами аденозинового рецептора A₁, формулы 1

где R¹ означает циклопентил, циклогексил или тетрагидрофуранил, необязательно замещенные гидроксигруппой или -СО₂СН₂СН₃; R² означает водород; R³ означает фенил, изоксазол, тиофенил или тиазолил, необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из группы, содержащей метил, метокси, фтор и хлор; R⁴ и R⁵ означают водород; Т означают ковалентную связь или метилен; Х означает ковалентную связь; Y означает -О-, -NH- или ковалентную связь, и Z означает алкилен из 1-3 атомов углерода, которые применимы для лечения различных болезненных состояний, в частности тахикардии и трепетания предсердий, стенокардии, инфаркта миокарда и гиперлипидемии, а также к фармацевтической композиции на основе этих соединений. 3 н. и 19 з.п. ф-лы.

1. Соединение формулы I

где R¹ означает циклопентил, циклогексил или тетрагидрофуранил, необязательно замещенные гидроксигруппой или -CO₂СН₂СН₃;

R² означает водород;

R³ означает фенил, изоксазол, тиофенил или тиазолил, необязательно замещенные одним или более заместителями, выбранными из группы, содержащей метил, метокси, фтор и хлор;

R⁴ и R⁵ означают водород;

Т означает ковалентную связь или метилен

Х означает ковалентную связь;

Y означает -О-, -NH- или ковалентную связь и

Z означает алкилен из 1-3 атомов углерода.