Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 317 999

(13)

(51)

МПК

C07K16/28(2006-01-01)

C12P21/00(2006-01-01)

C12N15/13(2006-01-01)

A61K39/395(2006-01-01)

A61P35/00(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2002125514/13, 2001-02-23

(24)

Дата начала отсчета патента

2001-02-23

(22)

дата подачи заявки

2001-02-23

(45)

опубликовано

2008-02-27

(72)

авторы

Пастан АйраБирс РичардЧоудхури Партха С.Биджнер Дарелл

(73)

патентообладатели

Те Гавернмент Оф Те Юнайтед Стейтс, Эз Репризентед Бай Те Секретари Оф Те Департмент Оф Хелт Энд Хьюман СервисезДюк Юниверсити

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

LORIMER et al., Recombinant immunotoxins specific for a mutant epidermal growth factor receptor: Targetting with a single chain antibody variable domain isolated by phage display, ProcNatlAcadSciUSA, Vol.93, pp.14815-14820, December 1996US 5212290 A, 18.05.1993.

SCFV ПРОТИВ EGFRvIII С УЛУЧШЕННОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬЮ И ВЫХОДОМ, ИММУНОТОКСИНЫ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2008 года по МПК C07K16/28 C12P21/00 C12N15/13 A61K39/395 A61P35/00

Описание патента на изобретение RU2317999C2

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Иллюстрации к изобретению RU 2 317 999 C2

Реферат патента 2008 года SCFV ПРОТИВ EGFRvIII С УЛУЧШЕННОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬЮ И ВЫХОДОМ, ИММУНОТОКСИНЫ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Изобретение относится к биотехнологии. Предложены: полипептид фрагмента антитела MR1-1, который сохраняет способность узнавать и связывать EGFRvIII, и нуклеиновая кислота, кодирующая его. Полипептид получен из известного антитела MR1 путем мутирования CDR3 V_H- и V_L-цепей. Описано применение полипептида для получения иммунотоксина, обладающего цитотоксичностью к клеткам, несущим антиген рецептора эпидермального фактора роста EGFRvIII. Раскрыт иммунотоксин на основе полипептида. Предложен способ получения полипептида, включающий аминокислотное замещение, по меньшей мере, одной аминокитслоты в гипервариабельной области CDR, аминокислотой, кодируемой кодоном, содержащим нуклеотид, принадлежащий к мотиву горячей точки. Мотив горячей точки выбирают из AGY или RGYW, где R представляет собой А или G, Y представляет собой С или Т и W представляет собой А или Т. Получаемый полипептид имеет Kd для EGFRvIII, равную 7 нМ или менее. Описан способ киллинга клетки, экспрессирующей антиген EGFRvIII с использованием полипептида. Использование изобретения обеспечивает антитела с повышенной цитотоксичностью и улучшенным связыванием EGFRvIII по сравнению с исходным антителом MR1, что может найти применение для целеноправленной доставки иммунотоксинов при лечении злокачественных образований. 6 н. и 28 з.п. ф-лы, 7 табл., 6 ил.

Формула изобретения RU 2 317 999 C2

1. Полипептид, представляющий собой фрагмент мутированного MR1 антитела, сохраняющий способность узнавать и связываться с антигеном рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFRvIII), содержащий мутированные вариабельную область тяжелой цепи (V_H) антитела и/или вариабельную область легкой цепи (V_L) антитела, причем каждая из трех гипервариабельных областей CDR 1-3 полипептида V_H цепи отличается от MR1:

(a) заменой серина на пролин в CDR3 в позиции 98 вариабельной области тяжелой цепи MR1 антитела,

(b) заменой треонина CDR3 в позиции 99 вариабельной области тяжелой цепи MR1 антитела на аминокислоту, отобранную из группы, состоящей из тирозина, аспарагина, триптофана, изолейцина, фенилаланина и валина, и,

(c) при необходимости, заменой фенилаланина на триптофан в позиции 92 CDR3 вариабельной области легкой цепи MR1 антитела и причем указанный пептид, при необходимости, содержит эффекторную молекулу, терапевтическую группу или детектируемую метку.

2. Способ получения полипептида, сохраняющего способность узнавать и связываться с антигеном рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFRvIII), содержащего мутированные вариабельную область тяжелой цепи (V_H) MR1 антитела и/или вариабельную область его легкой цепи (V_L), отличающиеся соответственно от V_H и V_L исходного антитела MR1 аминокислотным замещением, по меньшей мере, одной аминокислоты в гипервариабельной области (CDR) аминокислотой, кодируемой кодоном, содержащим нуклеотид, принадлежащий к мотиву горячей точки, выбранному среди AGY или RGYW, где R представляет собой А или G, Y представляет собой С или Т и W представляет собой А или Т, причем указанный полипептид имеет Kd для EGFRvIII, равную 7 нМ или менее.

3. Полипептид по п.1, где указанный полипептид представляет собой scFv.

4. Полипептид по п.1, где указанный полипептид представляет собой dsFv, Fab или F(ab')₂.

5. Полипептид по п.1, где замещениями в тяжелой цепи являются S98P-T99Y и замещением в легкой цепи является F92W.

6. Полипептид по п.1, дополнительно содержащий эффекторную молекулу, терапевтическую группу или детектируемую метку.

7. Полипептид по п.6, где терапевтической группой является токсичная группа.

8. Полипептид по п.7, где токсичная группа представляет собой экзотоксин Pseudomonas или его цитотоксичный фрагмент.

9. Полипептид по п.7, где токсичная группа представляет собой цитотоксичный фрагмент, представляющий собой РЕ38.

10. Полипептид по п.7, где указанный полипептид имеет IC₅₀ 7 нг/мл или менее.

11. Полипептид по п.7, где указанный полипептид имеет IC₅₀ 5 нг/мл или менее.

12. Полипептид по п.7, где указанный полипептид имеет IC₅₀ около 3,5 нг/мл.

13. Полипептид по п.10, где указанный полипептид имеет выход, по меньшей мере, 3%.

14. Полипептид по п.10, где указанный полипептид имеет выход примерно 7%.

15. Полипептид по п.7, где токсичную группу выбирают из группы, состоящей из дифтерийного токсина или его цитотоксичного фрагмента, сапорина или его цитотоксичного фрагмента, антивирусного токсина фитолакки американской или его цитотоксичного фрагмента, рицина или его цитотоксичного фрагмента и бриодина 1 или его цитотоксичного фрагмента.

16. Полипептид по п.10, где замещениями в тяжелой цепи являются S98P-T99Y и замещением в легкой цепи является F92W.

17. Полипептид по п.1, соединенный с белком гена бактериофага М13.

18. Иммунотоксин, обладающий цитотоксичностью по отношению к клеткам, несущим на своей поверхности антиген рецептора эпидермального фактора типа III (EGFRvIII), состоящий из полипептида, охарактеризованного в п.1, и токсической группы РЕЗВ.

19. Применение полипептида, охарактеризованного в п.1, для получения иммунотоксина, обладающего цитотоксичностью по отношению к клеткам, несущим на своей поверхности антиген рецептора эпидермального фактора роста III (EGFRvIII).

20. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, охарактеризованный в п.1.

21. Молекула нуклеиновой кислоты по п.20, где указанный полипептид имеет последовательность, отличающуюся от scFv MR1 аминокислотным замещением, по меньшей мере, одной аминокислоты в CDR1 или CDR2 мутированной вариабельной области тяжелой цепи или мутированной вариабельной области легкой цепи.

22. Молекула нуклеиновой кислоты по п.20, где замещениями в тяжелой цепи являются S98P-T99Y и замещением в легкой цепи является F92W.

23. Молекула нуклеиновой кислоты по п.20, операбельно связанная с промотором.

24. Молекула нуклеиновой кислоты по п.21, операбельно связанная с промотором.

25. Молекула нуклеиновой кислоты по п.22, операбельно связанная с промотором.

26. Способ киллинга клетки, экспрессирующей EGFRvIII антиген, включающий приведение клетки в контакт с полипептидом, охарактеризованным в п.1.

27. Способ по п.26, где в указанном полипептиде замещена, по меньшей мере, одна аминокислота в CDR1 или CDR2 мутированной вариабельной области тяжелой цепи фрагмента антитела или в CDR1 или CDR2 мутированной вариабельной области легкой цепи фрагмента антитела.

28. Способ по п.26, где CDR3 мутированной вариабельной области легкой цепи содержит замену фенилаланина на триптофан в позиции 92.

29. Способ по п.26, где замещениями в V_H являются S98P-T99Y, а замещением в V_L является F92W.

30. Способ по п.26, где клетка является злокачественной клеткой.

31. Способ по п.26, где злокачественная клетка является клеткой глиомы.

32. Способ по п.26, где злокачественная клетка является клеткой рака молочной железы.

33. Способ по п.26, где злокачественная клетка является клеткой рака легких.

34. Способ по п.26, где злокачественная клетка является клеткой рака яичников.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2317999C2

LORIMER et al., Recombinant immunotoxins specific for a mutant epidermal growth factor receptor: Targetting with a single chain antibody variable domain isolated by phage display, Proc
Natl
Acad
Sci
USA, Vol.93, pp.14815-14820, December 1996
ИММУНОКОНЬЮГАТ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОКОНЬЮГАТА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ	1994	Илка Фон Хеген Уве Хофманн Карлотта-Сильвия Еггле Вольфганг Штриттматтер Йорг Штадльмюллер Зигфрид Матцку	RU2129018C1
US 5212290 A, 18.05.1993.

RU 2 317 999 C2

Авторы

Пастан Айра

Бирс Ричард

Чоудхури Партха С.

Биджнер Дарелл

Даты

2008-02-27—Публикация

2001-02-23—Подача

название	год	авторы	номер документа
РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИММУНОТОКСИН, НАЦЕЛЕННЫЙ НА МЕЗОТЕЛИН	2012	Пастан Ира Х. Велдон Джон Биэрс Ричард	RU2600067C2
АНТИТЕЛО К ПРОТИВООПУХОЛЕВОМУ АНТИГЕНУ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ	2011	Чжо Юй Маркс Джеймс Д.	RU2598711C2
ЛЕЧЕНИЕ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОГО АНТИГЕНСПЕЦИФИЧЕСКОГО РЕЦЕПТОРА НА ОСНОВЕ ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ EGFRvIII	2014	Брогдон Дженнифер Джонсон Лаура Александра Джун Карл Х. Лев Андреас Маус Марсела Шоллер Джон Окада Хидехо	RU2708032C2
САЙТЫ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНО СВЯЗЫВАЮЩИЕ EGFRvIII	2014	Эллвангер Кристина Ройш Уве Фуцек Ивица Кнакмус Стефан Молкентин Вера Литл Мелвин Жуковски Евгений	RU2696892C2
АНТИТЕЛА, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТ ИНТЕГРИН АЛЬФА-V БЕТА-8	2012	Нишимура Стивен Лоу Цзяньлон Барон Джоди Линн Маркс Джеймс	RU2614252C2
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ ЭКЗОТОКСИН А ПСЕВДОМОНАД	2014	Пастан Ира Х. Мазор Ронит Онда Масанори Ли Бьюнькук Нидерфелльнер Герхард Имхоф-Юнг Забине Бринкманн Ульрих Георгес Гай	RU2687143C2
СПОСОБЫ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭФФЕКТОРНЫХ ФУНКЦИЙ АНТИ-EphA4 АНТИТЕЛ	2007	Накацуру Суити Йосикава Мегуми Хиросима Синити Киси Йосиро Кухара Мотоки Нисида Сийо Синохара Мидори	RU2429246C2
ЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ МУТАНТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ EGF	2007	Уэй Джефри С. Чао Джинджер Крессон Кетрин Лауффенбургер Дуглас Уиттрап К. Дейн	RU2429014C2
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К TIM-3 ЧЕЛОВЕКА	2019	Цзан, Синсин	RU2777336C1
ANTI-CXCR4 АНТИТЕЛА И КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВО	2014	Хо Вэй-Хсиен Лю Шу-Хуэй Пернасетти Флавиа Мерсер	RU2675516C2