АМИДЫ ПИПЕРАЗИНИЛ- ИЛИ ПИПЕРИДИНИЛАМИНСУЛЬФАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ СТЕРОИДНОЙ СУЛЬФАТАЗЫ Российский патент 2008 года по МПК C07D295/26 C07D211/58 A61K31/4468 A61K31/495 A61P17/10 

Настоящее изобретение относится к амидам сульфаминовой кислоты, полезным, например, при лечении расстройств, опосредованных действием стероидной сульфатазы.

Объектом настоящего изобретения является соединение формулы

в которой

R₁ и R₂ совместно с атомом азота, к которому они присоединены, обозначают пиперазинил, в котором второй атом азота замещен (С₁-С₆)алкокси-карбонилом или (С₆-С₁₈)арилом, где (С₆-С₁₈)арил замещен одним или более атомами галогена, галоид(С₁-С₆)алкилом, например CF₃, аминокарбонилом;

или

R₁ обозначает водород, a R₂ обозначает пиперидинил, присоединенный через атом углерода пиперидинильного цикла, в котором атом азота замещен (C₁-С₆)алкоксикарбонилом или (С₆-С₁₈)арилом,

и

R₃ обозначает (С₆-С₁₈)арил или (С₆-С₁₈)арил(С₁-С₄)алкил, в котором арил в свою очередь замещен одним или более атомами галогена, аминокарбонилом или галоид(С₁-С₆)алкилом.

Если не указано иное, (С₆-С₁₈)арил, например фенил, может быть замещен одним или более атомами галогена, галоид (С₁-С₆)алкилом, например CF₃, или аминокарбонилом.

(С₁-С₆)алкоксикарбонил включает незамещенные или замещенные (C₁-С₆)алкоксикарбонилы, например алкоксикарбонил, в котором алкильная группа замещена (С₆-С₁₈)арилом, таким как фенил, например бензилоксикарбонил. Галоген включает фтор, хлор, бром, иод, например фтор, хлор. (С₆-С₁₈)арил(С₁-С₄)алкил предпочтительно является фенил(С₁-С₄)алкилом, например фенилэтилом, в котором фенил замещен аналогично тому, как это описано для замещенного (С₆-С₁₈)арила.

Предпочтительно в соединении формулы I:

R₁ и R₂ совместно с атомом азота являются пиперазинилом, в котором второй атом азота замещен

(С₁-С₆)алкоксикарбонилом, например трет-бутоксикарбонилом,

бензилоксикарбонилом,

фенилом, замещенным аминокарбонилом, галоид(С₁-С₆)алкилом

или

R₁ является водородом, a R₂ является пиперидинилом, присоединенным через атом углерода пиперидинильного цикла, в котором атом азота замещен (С₁-С₆)алкоксикарбонилом, например трет-бутоксикарбонилом,

бензилоксикарбонилом,

фенилом, замещенным аминокарбонилом, галоид(С₁-С₆)алкилом,

и

R₃ является фенилом, замещенным одним или более

атомами галогена,

галоид(С₁-С₆)алкилом, например CF₃,

аминокарбонилом, или является

(С₁-С₄)алкилом, замещенным фенилом, который в свою очередь замещен одним или более атомами галогена,

галоид(С₁-С₆)алкилом, например CF₃,

аминокарбонилом.

Еще одним объектом настоящего изобретения является соединение формулы I, выбранное из группы, состоящей из соединений формулы

в котором

а) R_3ss является 3,5-бис(трифторметил)фенилом, a R_4ss является 2-аминокарбонил-5-трифторметилфенилом,

б) R_3ss является 2,3-дихлорфенилом, а R_4ss является 2-аминокарбонил-5-трифторметилфенилом,

в) R_3ss является 3,5-дихлорфенилом, а R_4ss является 2-аминокарбонил-5-трифторметилфенилом,

г) R_3ss является 3,5-бис(трифторметил)фенилом, а R_4ss является трет-бутоксикарбонилом;

предпочтительно R_3ss является 3,5-бис(трифторметил)фенилом.

Еще одним объектом настоящего изобретения является соединение формулы I, выбранное из группы, состоящей из соединений формулы

в которых

а) R_3s является 3,5-бис(трифторметил)фенилом, a R_4s является трет-бутоксикарбонилом,

б) R_3s является 2,3-дихлорфенилом, а R_4s является трет-бутоксикарбонилом,

в) R_3s является 3,5-дихлорфенилом, а R_4s является трет-бутоксикарбонилом,

г) R_3s является 3,5-бис(трифторметил)фенилом, а R_4s является бензилоксикарбонилом,

д) R_3s является 2,3-дихлорфенилом, а R_4s является бензилоксикарбонилом,

е) R_3s является 3,5-дихлорфенилом, а R_4s является бензилоксикарбонилом,

ж) R_3s является 3,5-дихлорфенилом, а R_4s является бензилоксикарбонилом,

з) R_3s является 3,5-бис(трифторметил)фенилом, а R_4s является 2-аминокарбонил-5-трифторметифенилом,

и) R_3s является 3,5-дихлорфенилом, а R_4s является 2-аминокарбонил-5-трифторметифенилом,

к) R_3s является 2,3-дихлорфенилом, а R_4s является 2-аминокарбонил-5-трифторметифенилом,

л) R_3s является 2-(3,5-бис(трифторметил)фенил)этилом, а R_4s является трет-бутоксикарбонилом.

Соединения, являющиеся объектом настоящего изобретения, здесь и далее именуются соединением(ями) по (или согласно) настоящему изобретению. Соединение формулы I включает соединение формулы I_s и соединение формулы I_ss. Каждый отдельный вышеописанный заместитель в соединении по настоящему изобретению может сам по себе являться предпочтительным заместителем независимо от остальных указанных заместителей. Соединение по настоящему изобретению включает соединение в любой форме, например в свободной форме, в форме соли, в форме сольвата и в форме соли и сольвата.

Еще одним объектом настоящего изобретения являются соединения по настоящему изобретению в форме соли.

Подобные соли включают предпочтительно фармацевтически приемлемые соли, хотя также включаются и фармацевтически неприемлемые соли, например, для препаративных целей и целей выделения и очистки.

Соль соединения по настоящему изобретению включает соль металла, кислотно-аддитивную соль или соль с аминами. Соли металлов включают, например, соли щелочных или щелочноземельных металлов; кислотно-аддитивные соли включают соли соединения по настоящему изобретению с кислотой, например с HCl; соли с аминами включают соли соединения по настоящему изобретению с амином. Соединение по настоящему изобретению в форме соли предпочтительно является солью металла.

Соединение по настоящему изобретению в свободной форме может быть преобразовано в соответствующее соединение в форме соли и наоборот. Соединение по настоящему изобретению в свободной форме или в форме соли и в форме сольвата может быть преобразовано в соответствующее соединение в свободной форме или в форме соли в несольватированой форме и наоборот.

Соединение по настоящему изобретению может существовать в форме изомеров и их смесей, например, оптических изомеров, диастереомеров, цис-транс-конформеров. Соединение по настоящему изобретению может, например, содержать асимметрические атомы углерода и может, таким образом, существовать в форме энантиомеров или диастереомеров и их смесей, например рацематов. Любой асимметрический атом углерода может присутствовать в (R)-, (S)- или (R,S)-конфигурации, предпочтительно в (R)- или (R,S)-конфигурации.

Изомерные смеси могут быть разделены соответствующим образом, например, согласно или аналогично общепринятому способу, для получения чистых изомеров. Настоящее изобретение включает соединение по настоящему изобретению в любой изомерной форме и в любой изомерной смеси.

Настоящее изобретение также включает таутомеры соединения формулы I, в тех случаях когда таутомеры могут существовать.

Любое из описанных здесь соединений, например соединение по настоящему изобретению, может быть получено соответствующим образом, например, согласно или аналогично общепринятому способу, или, например, как это описано здесь.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ получения предлагаемого в настоящем изобретении соединения, заключающийся в том, что

А) соединение формулы

в котором R₁ и R₂ принимают указанные выше значения, вводят в реакцию с соединением формулы

в котором R₃ принимает указанные выше значения и присутствует, например, в активированной форме, такой как хлорангидрид карбоновой кислоты, или, например, реакцию проводят в присутствии сочетающего агента;

или

Б1) соединение формулы II, в которой R₁ и R₂ совместно с атомом азота, к которому они присоединены, являются незамещенным пиперазинилом, вводят в реакцию с соединением формулы III, в котором R₃ принимает указанные выше значения и присутствует, например, в активированной форме, такой как хлорангидрид карбоновой кислоты, или, например, реакцию проводят в присутствии сочетающего агента, для получения соединения формулы

в котором R₃ принимает указанные выше значения;

и

Б2) соединение формулы IV вводят в реакцию с необязательно замещенным фтор(С₆-С₁₈)арилом, например фторфенилом, в котором необязательные арильные заместители соответствуют указанным для соединения формулы I, в присутствии основания, например К₂СО₃, для получения соединения формулы I, в котором R₁ и R₂ совместно с атомом азота, к которому они присоединены, являются пиперазинилом, замещенным по второму атому азота, необязательно замещенным (С₆-С₁₈)арилом;

или

В1) соединение формулы

в котором R_SUB является (С₁-С₆)алкоксикарбонилом, вводят в реакцию с бензальдегидом в присутствии NaBH₄ для получения соединения формулы

в котором R_SUB принимает указанные выше значения, a Bnz является бензилом;

В2) соединение формулы VI вводят в реакцию с NH₂-SO₂-NH₂ для получения соединения формулы

в котором R_SUB и Bnz принимают указанные выше значения;

В3) соединение формулы VII вводят в реакцию с R₃-СООН, в котором R₃ принимает указанные выше значения, а карбоксильная группа присутствует, например, в активированной форме, для получения соединения формулы

в котором R_SUB, Bnz и R₃ принимают указанные выше значения;

В4) соединение формулы VIII вводят в реакцию с HCl в эфире для получения соединения формулы

в которой Bnz и R₃ принимают указанные выше значения;

B5) соединение формулы IX вводят в реакцию с необязательно замещенным фтор(С₆-С₁₈)арилом, например фторфенилом, в котором необязательные арильные заместители соответствуют указанным для соединения формулы I, в присутствии основания, например К₂СО₃, для получения соединения формулы X, являющегося соединением формулы IX, в котором Bnz и R₃ принимают указанные выше значения, а пиперидинильный азот замещен необязательно замещенным (С₆-С₁₈)арилом;

B6) гидрируют соединение, полученное на стадии В5, в присутствии палладиевого катализатора для получения соединения формулы I, в котором R₁ является водородом, R₂ является пиперидином, замещенным необязательно замещенным (С₆-С₁₈)арилом, а R₃ принимает указанные выше значения

и выделяют соединение формулы I, полученное в реакции А, на стадии Б2 или на стадии В6, из реакционной смеси.

Соединения формулы II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX и Х являются промежуточными соединениями (исходными веществами) при получении соединения формулы I. В подобных промежуточных соединениях (исходных веществах) функциональные группы, если таковые присутствуют, могут быть необязательно в защищенной форме или в форме соли, если присутствует солеобразующая группа. Защитные группы, присутствующие необязательно, могут быть удалены на соответствующей стадии, например, согласно или аналогично общепринятому способу. Полученное таким образом соединение формулы I может быть преобразовано в другое соединение формулы I, или соединение формулы I, полученное в свободной форме, может быть преобразовано в соль соединения формулы I и наоборот.

Вышеприведенные реакции могут быть осуществлены соответствующим образом, например, в соответствующем растворителе и при соответствующих температурах, например, согласно или аналогично общепринятому способу или согласно способу, описанному здесь. Промежуточные соединения (исходные вещества) известны или могут быть получены соответствующим образом, например, согласно общепринятому способу, или, например, как это описано выше. Любое из описанных здесь соединений, например, соединение по настоящему изобретению, может быть получено соответствующим образом, например, согласно или аналогично общепринятому способу, или, например, как это описано здесь.

Стероидные гормоны в определенных тканях связаны с некоторыми болезнями, такими как опухоли молочной железы, слизистой оболочки матки и предстательной железы и расстройства волосяных фолликул и сальных желез, например угри, андрогенетическое облысение и волосатость. Важными предшественниками местного образования этих стероидных гормонов являются стероидные 3-O-сульфаты, которые десульфатируются ферментом стероидной сульфатазой в целевых тканях. Ингибирование данного фермента приводит к понижению локальных уровней соответствующих активных стероидных гормонов и, как ожидается, имеет терапевтическое значение. Более того, ингибиторы стероидной сульфатазы могут быть полезны в качестве иммунодепрессантов и, как было показано, улучшают память при введении в мозг.

Угри являются полиэтиологическим заболеванием, вызванным взаимодействием многочисленных факторов, таких как наследственность, секреты сальных желез, гормоны и бактерии. Наиболее важным причинным фактором при возникновении угрей является выработка секрета сальных желез; практически у всех пациентов с угревыми заболеваниями сальные железы крупнее и вырабатывают больше секрета, чем у людей со здоровой кожей. Развитие сальных желез и степень выработки секрета контролируется гормонально с помощью мужских половых гормонов; поэтому мужские половые гормоны играют решающую роль в патогенезе угрей. В человеческом организме имеются два основных источника, поставляющих мужские половы гормоны в целевые ткани: (I) половые железы, выделяющие тестостерон, (II) надпочечники, производящие дегидроэпиандростерон (DHEA), выделяющийся в виде сульфатного конъюгата (DHEAS). И тестостерон, и DHEAS, преобразуются в целевой ткани, например в коже, в наиболее активный из мужскими половых гормонов, дигидротестостерон (ДГТС). Имеются свидетельства того, что данные механизмы местного синтеза ДГТС в коже являются более важными, чем прямое снабжение активными мужскими половыми гормонами посредством кровообращения. Поэтому снижение эндогенных уровней мужских половых гормонов в целевой ткани с помощью специфических ингибиторов должно приносить благоприятный эффект при терапии угрей и себореи. Более того, это открывает перспективу лечения данных расстройств с помощью модуляции местных уровней мужских половых гормонов путем местного лечения, вместо того чтобы воздействовать на уровень гормонов в крови с помощью системной терапии.

Андрогенетическое мужское облысение весьма распространено среди белых рас, к нему относятся около 95% случаев из всех видов облысения. Облысение по мужскому типу вызывается повышенным количеством волосяных фолликул в коже головы, входящих в фазу телогена, и увеличением длительности фазы телогена. Это генетически детерминированная потеря волос, вызванная действием мужских половых гормонов. Повышенный уровень сывороточного DHEA при нормальных уровнях тестостерона наблюдался у лысеющих мужчин, сравнивавшихся с нелысеющей контрольной группой, что подразумевает важность выработки мужских половых гормонов в целевой ткани при андрогенетическом облысении.

Волосатость является патологическим утолщением и упрочнением волос, характеризуемых мужским типом роста, у женщин и детей. Волосатость вызывается мужскими половыми гормонами: либо в результате их повышенной выработки, либо при повышенной чувствительности к ним волосяных фолликул. Поэтому терапия, приводящая к снижению эндогенетических уровней мужских половых гормонов и/или эстрогенных гормонов в целевой ткани (коже), должна быть эффективна при угрях, андрогенетическом облысении и волосатости.

Как было описано выше, ДГТС, наиболее активный мужской половой гормон, синтезируется в коже из распространенного системного предшественника, DHEAS, и первый шаг метаболического процесса, ведущего от DHEAS к ДГТС, является десульфатирование DHEAS ферментом стероидной сульфатазой, приводящее к DHEA. Описано присутствие данного фермента в кератиноцитах и производных от кожи фибробластах. Потенциальная применимость ингибиторов стероидной сульфатазы для снижения эндогенных уровней стероидных гормонов была подтверждена использованием известных ингибиторов стероидной сульфатазы, таких как 3-O-сульфамат и 4-метилумбеллиферил-7-О-сульфамат эстрона. Было обнаружено, что ингибиторы плацентарной стероидной сульфатазы также ингибируют стероидную сульфатазу, приготовленную как из человеческих кератиноцитов (НаСаТ), так и из производной от человеческой кожи клеточной линии фибробластов (1BR3GN). Подобные ингибиторы, как было показано, также блокируют стероидную сульфатазу в неповрежденных слоях кератиноцитов (НаСаТ).

В связи с этим ингибиторы стероидной сульфатазы могут быть использованы для понижения уровней мужских половых и эстрогенных гормонов в коже. Они могут быть использованы в качестве ингибиторов фермента стероидной сульфатазы для местного лечения зависящих от мужских половых гормонов расстройств волосяных фолликул и сальных желез (таких как угри, себорея, андрогенетическое облысение, волосатость) и для местного лечения плоскоклеточного рака.

Более того, нестероидные ингибиторы стероидной сульфатазы, как ожидается, могут быть полезны при лечении расстройств, опосредованных действием стероидных гормонов, при которых играют роль стероидные продукты сульфатазного расщепления. Показания для этого нового типа ингибиторов включают зависящие от мужских половых гормонов расстройства волосяных фолликул и сальных желез (такие как угри, себорея, андрогенетическое облысение, волосатость); зависящие от мужских половых или эстрогенных гормонов опухоли, такие как плоскоклеточный рак и неоплазмы, например молочной железы, слизистой оболочки матки и предстательной железы; воспалительные и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, диабет типов I и II, системная красная волчанка, рассеянный склероз, злокачественная миастения, воспаление щитовидной железы, васкулит, язвенный колит, болезнь Крона, псориаз, контактный дерматит, реакция "трансплантат против хозяина", экзема, астма и отторжение органов после трансплантации. Ингибиторы стероидной сульфатазы также полезны при лечении рака, особенно при лечении форм рака, зависящих от эстрогенных и мужских половых гормонов, таких как рак молочной железы и слизистой оболочки матки, плоскоклеточный рак и рак предстательной железы. Ингибиторы стероидной сульфатазы также полезны для укрепления познавательных функций, особенно при лечении старческого слабоумия, включая болезнь Альцгеймера, путем повышения уровней DHEAS в центральной нервной системе.

Активность соединений в ингибировании активности стероидной сульфатазы может быть показана с помощью следующих систем испытания:

Очистка человеческой стероидной сульфатазы

Человеческую плаценту, получаемую непосредственно после доставки, очищают от мембран и соединительных тканей. Для хранения материал замораживают при минус 70°С. После оттаивания все последующие стадии проводят при 4°С, тогда как значения рН устанавливают при 20°С. Гомогенизируют 400 г ткани в 1,2 литра буферного раствора А (50 мМ трис-HCl, рН 7,4, 0.25М сахарозы). Полученный гомогенизат центрифугируют при 10000×g в течение 45 минут. Надосадочную жидкость сливают, а полученный осадок повторно гомогенизируют в 500 мл буферного раствора А. После центрифугирования две полученных фракции надосадочной жидкости смешивают и подвергают ультрацентрифугированию (100000×g, 1 час). Полученный осадок снова суспендируют в буферном растворе А и повторно центрифугируют. Полученный осадок суспендируют в 50 мл 50 мМ трис-HCl, рН 7,4, и хранят при -20°С до дальнейших действий. После оттаивания микросомы собирают посредством ультрацентрифугирования (как описано выше) и суспендируют в 50 мл буферного раствора Б (10 мМ трис-HCl, рН 7,0, 1 мМ этилендиамин-тетрауксусная кислота (ЭДТК), 2 мМ 2-меркаптоэтанол, 1% тритон Х-100, 0,1 % апротинин). После одного часа выдерживания на ледяной бане при осторожном помешивании суспензию центрифугируют (100000×g, 1 час). Собранную надосадочную жидкость, содержащую активное начало фермента, доводят до рН 8,0 с помощью 1М трис. Полученный раствор наносят на гидроксиапатитовую колонку (2,6×20 см) и уравновешивают буферным раствором Б, рН 8,0. Колонку промывают буферным раствором Б со скоростью 2 мл/мин. Активность определяют в потоке. Объединенные фракции доводят до рН 7,4 и подвергают хроматографической очистке на сефарозной колонке с конканавалином А (1,6×10 см), уравновешенной буферным раствором В (20 мМ трис-HCl, рН 7,4, 0,1% тритон Х-100, 0,5М NaCl). Колонку промывают буферным раствором В, а связанный белок вымывают с помощью 10% раствора метилманнозида в буферном растворе В. Активные фракции объединяют и подвергают диализу против буферного раствора Г (20 мМ трис-HCl, рН 8,0, 1 мМ ЭДТК, 0,1% тритон Х-100, 10% глицерин (об./об.)).

Полученную фракцию наносят на колонку с сефарозой голубой (0,8×10 см), уравновешенную буферным раствором Г; колонку промывают, причем элюирование проводят с помощью раствора с линейным градиентом буферного раствора Г к 2М NaCl в буферном растворе Г. Активные фракции объединяют, концентрируют согласно требованиям (Centricon 10), подвергают диализу против буферного раствора Г и хранят в виде аликвот при -20°С.

Анализ человеческой стероидной сульфатазы

Известно, что очищенная человеческая стероидная сульфатаза не только способна расщеплять стероидные сульфаты, но также легко расщепляет арисульфаты, такие как 4-метилумбеллиферилсульфат, используемый в настоящей системе испытания в качестве индикатора активности. Смеси для анализа приготовляют путем последовательного дозирования следующих растворов в ячейки белых планшетов для титрования:

50 мкл раствора субстрата (1,5 мМ 4-метилумбеллиферилсульфата в 0,1М трис-HCl, рН 7,5)

50 мкл исследуемого соединения, разведенного в 0,1М трис-HCl, рН 7,5, 0,1% тритон Х-100 (маточные растворы исследуемых соединений приготавливают в ДМСО; конечные концентрации растворителя в смеси для анализа не превосходят 1%)

50 мл разбавленного раствора фермента (приблизительно 12 единиц фермента на миллилитр).

Единицу фермента определяют как количество стероидной сульфатазы, гидролизующей 1 нмоль 4-метилумбеллиферилсульфата в час при начальной концентрации субстрата 500 мкМ в 0,1М трис-HCl, рН 7,5, 0,1% тритон Х-100, при 37°С.

Пластины инкубируют при 37°С в течение 1 часа. После этого реакцию останавливают посредством добавления 100 мкл 0,2М NaOH. Интенсивность флуоресценции определяют с помощью прибора Titertek Fluoroskan II при длинах волн λ(возбуждения)=355 нм и λ(эмиссии)=460 нм.

Расчет относительных величин IC₅₀

Из данных по интенсивности флуоресценции (I), полученных при различных концентрациях (с) исследуемого соединения в анализе человеческой стероидной сульфатазы, как это описано выше, концентрацию, отвечающую 50% ингибированию ферментативной активности (IC₅₀), рассчитывают с использованием уравнения

I=I₁₀₀/(1+(с/IC₅₀)^s),

в котором I₁₀₀ обозначает интенсивность, наблюдаемую в отсутствие ингибитора, a s - параметр наклона. В качестве стандарта используется сульфамат эстрона, для которого значения IC₅₀ определяются параллельно со всеми исследуемыми соединениями. Относительные величины IC₅₀ определяют следующим образом:

отн. IC₅₀=IC₅₀ исследуемого соединения/IC₅₀ сульфамата эстрона.

Согласно исследованиям и расчетам, значение IC₅₀ для сульфамата эстрона составляет приблизительно 60 нМ.

Соединения по настоящему изобретению в описанном анализе проявляют активность (отн. IC₅₀ в диапазоне от 0,0046 до 350).

Анализ CHO/STS

Клетки яичников китайского хомячка (СНО), стабильно зараженные человеческой стероидной сульфатазой (CHO/STS), помещают в планшеты для титрования. По достижении приблизительно 90% слияния их инкубируют в течение ночи с возрастающими концентрациями исследуемых соединений (например, соединений по настоящему изобретению). После этого их фиксируют с помощью 4% параформальдегида в течение 10 минут при комнатной температуре и промывают четыре раза с помощью забуференного фосфатом физиологического раствора (ЗФР), после чего термостатируют с добавлением 100 мкл/ячейка 0,5М 4-метилумбеллиферилсульфата (MUS), растворенного в 0,1М трис-HCl, рН 7,5. Ферментативную реакцию проводят при 37°С в течение 30 минут. После этого добавляют 50 мкл/ячейка останавливающего раствора (1М трис-HCl, рН 10,4). Реакционные растворы фермента переносят на белые планшеты (Microfluor, Dynex, Chantilly, VA) и исследуют с помощью измерителя флуоресценции для планшетов для титрования Fluoroscan II. Из всех значений вычитают сигналы чистых реагентов. При исследовании лекарственных средств единицы флуоресценции делят на значения оптической плотности после окрашивания клеточного белка сульфородамином Б (ОП₅₅₀) для введения поправки на различия в числе клеток. Величины IC₅₀ определяют с помощью линейной интерполяции между двумя ближайшими точками. В каждом анализе с участием ингибиторов в качестве соединения сравнения используют 3-O-сульфамат эстрона, причем значения IC₅₀ нормируют по отношению к 3-O-сульфамату эстрона (отн. IC₅₀=IC₅₀ соединения/IC₅₀ 3-O-сульфамата эстрона).

Соединения по настоящему изобретению в описанном анализе проявляют активность (отн. IC₅₀ в диапазоне от 0,05 до 226).

Анализ с использованием гомогената человеческой кожи

Замороженные образцы кожи трупа человека (около 100 мг на образец) измельчают на мелкие кусочки (примерно 1×1 мм) с помощью острых ножниц. Полученные кусочки суспендируют в десяти объемах (мас./мас.) буферного раствора (20 мМ трис-HCl, рН 7,5), содержащего 0,1% тритона Х-100. Исследуемые соединения (например, соединения по настоящему изобретению) добавляют в возрастающих концентрациях из исходных растворов в этаноле или ДМСО. После этого добавляют DHEAS в качестве субстрата (1 мКи/мл [³H] DHEAS, специфическая активность около 60 Ки/ммоль, и 20 мкМ немеченого DHEAS). Образцы инкубируют в течение 18 часов при 37°С. В конце периода инкубирования добавляют 50 мкл 1М трис, рН 10,4 и 3 мл толуола. Отбирают аликвоту в 1 мл органической фазы и подвергают ее анализу с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Измеренные значения числа распадов в минуту в аликвотах преобразуют в число наномолей DHEA, полученного в результате расщепления, на грамм кожи в час.

Соединения по настоящему изобретению в описанном анализе проявляют активность (IC₅₀ в диапазоне от 0,03 до 10 мкМ).

Предпочтительное соединение по настоящему изобретению включает соединение по примеру 1. Это соединение характеризуется в анализе человеческой стероидной сульфатазы величиной отн. IC₅₀ в диапазоне от 0,0046 до 0,071, в анализе CHO/STS величиной отн. IC₅₀ в диапазоне от 0,02 до 0,39, а в анализе с использованием гомогената человеческой кожи величиной IC₅₀ в диапазоне от 0,03 до 0,27 мкМ и является, таким образом, высокоактивным ингибитором стероидной сульфатазы.

Соединения по настоящему изобретению проявляют активность в указанных выше системах испытания. Соединение по настоящему изобретению в форме соли и/или сольвата демонстрирует тот же порядок активности, что и соединение в свободной и/или несольватированной форме.

Соединения по настоящему изобретению, таким образом, показаны для применения в качестве ингибиторов стероидной сульфатазы при лечении расстройств, опосредованных действием стероидной сульфатазы, например, включающих зависящие от мужских половых гормонов расстройства волосяных фолликул и сальных желез, такие как

угри,

себорея,

андрогенетическое облысение,

волосатость,

раковые заболевания, такие как раковые заболевания, зависящие от мужских половых и эстрогенных гормонов,

расстройства познавательных функций, такие как старческое слабоумие, включая болезнь Альцгеймера.

Соединения по настоящему изобретению предпочтительно используются при лечении угрей, себореи, андрогенетического облысения, волосатости, раковых заболеваний, зависящих от мужских половых и эстрогенных гормонов; наиболее предпочтительно - при лечении угрей. Лечение включает терапию и профилактику.

Еще одним объектом настоящего изобретения является применение предлагаемого в настоящем изобретении соединения для изготовления лекарственного средства, например фармацевтической композиции, для лечения расстройств, опосредованных действием стероидной сульфатазы, например, расстройств, реагирующих на ингибирование действия стероидной сульфатазы, наиболее предпочтительно - угрей.

Для подобного применения соединение по настоящему изобретению включает одно или более соединений по настоящему изобретению, например комбинацию двух или более соединений по настоящему изобретению, предпочтительно - одно соединение.

Еще одним объектом настоящего изобретения является применение соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в качестве лекарственного препарата.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения расстройств, опосредованных действием стероидной сульфатазы, таких как угри, себорея, андрогенетическое облысение, волосатость, раковые заболевания, такие как раковые заболевания, зависящие от мужских половых и эстрогенных гормонов, расстройства познавательных функций, такие как старческое слабоумие, включая болезнь Альцгеймера, предпочтительно - угрей, причем данное лечение включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по настоящему изобретению, например, в форме фармацевтической композиции.

Лечение включает лечение и профилактику.

При подобном лечении дозировка, конечно, будет варьироваться в зависимости, например, от химической природы и фармакокинетических данных применяемого соединения по настоящему изобретению, от индивидуального реципиента, от способа введения и от природы и тяжести состояния, подвергаемого лечению. Однако в общем случае удовлетворительные результаты могут быть получены при введении соединений в суточной дозе от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг на килограмм массы тела животного, например, введение удобно производить в разделенных дозах от двух до четырех раз в день. Для большинства млекопитающих общую суточную дозу, составляющую от приблизительно 5 мг до приблизительно 5000 мг, удобно вводить, например, в разделенных дозах до четырех раз в день или в форме с замедленным высвобождением. Формы со стандартной дозой включают, например, от приблизительно 1,25 мг до приблизительно 2000 мг соединения по настоящему изобретению в смеси по крайней мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем, например, носителем, разбавителем.

Соединение по настоящему изобретению может быть введено любым общепринятым способом, например через тонкий кишечник, например, введение через нос, трансбуккальное введение, введение через прямую кишку, пероральное введение; или местное введение; например, включая чрескожное, интраназальное, интратрахеальное введение; например, в форме таблеток с покрытием и без, капсул, растворов для инъекций или суспензий, например, в виде ампул, пузырьков, в форме мазей, кремов, гелей, паст, порошков для ингаляции, пен, тинктур, губной помады, капель, спреев или, например, в форме суппозиториев.

Соединение по настоящему изобретению может быть введено в форме фармацевтически приемлемой соли или в свободной форме и, необязательно, в форме сольвата. Соединения по настоящему изобретению в форме соли демонстрируют тот же порядок активности, что и соединения по настоящему изобретению в свободной форме и, необязательно, в форме сольвата.

Соединение по настоящему изобретению может быть использовано для фармацевтического лечения согласно настоящему изобретению само по себе или в комбинации с одним или более другими фармацевтическими активными средствами. Подобные иные фармацевтически активные средства включают, например, ретиноиды, например ретиноевую кислоту, такие как изотретиноин; третиноин (Roche); адапален (6-[3-(1-адамантил)-4-метоксифенил]-2-нафтойную кислоту); пероральные контрацептивы, например 19-нор-17а-прегна-1,3,5(10)-триен-20-ин-3,17-диол, 6-хлор-17-гидрокси-1а,2а-метилен-4,6-прегнадиен-3,20-дион, такие как Diane® (Sobering), антибактериальные препараты, такие как эритромицины, включая эритромицин А, азитромицин, кларитромицин, рокситромицин; тетрациклины, линкозамидные антибиотики, такие как клиндамицин (метил-7-хлор-6,7,8-тридезокси-6-(транс-1-метил-4-пропил-L-2-пирролидинкарбоксиламидо)-1-тио-L-трео-а-D-галактооктопиранозид), азелаиновая кислота (нонандионовая кислота), надифлоксацин; дапсон, перекись бензоила; кератолитики, такие как салициловая кислота; противовоспалительные средства, такие как кортикостероиды, пимекролимус; ингибиторы стероидной 5α-редуктазы.

При лечении рака молочной железы и рака слизистой оболочки матки другие фармацевтически активные средства включают ингибиторы ароматазы, такие как анастрозол, летрозол, экземестан.

Комбинации включают:

фиксированные комбинации, в которых два или более фармацевтически активных средства присутствуют в одной и той же фармацевтической композиции,

наборы, в которых два или более фармацевтически активных средства в различных композициях продаются в общей упаковке, например, с указанием по совместному применению, и

свободные комбинации, в которых фармацевтически активные средства упакованы отдельно, но даны указания по их одновременному или последовательному применению.

Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая соединение по настоящему изобретению в сочетании с по крайней мере одним фармацевтическим наполнителем, например соответствующим носителем и/или разбавителем, например, включая наполнители, связующие вещества, дезинтегрирующие средства, регуляторы текучести, смазывающие вещества, сахара и подсластители, ароматизаторы, консерванты, стабилизаторы, смачивающие средства и/или эмульгаторы, солюбилизаторы, соли для регулирования осмотического давления, буферные растворы.

Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению, также включающая другое фармацевтически активное средство.

Подобные фармацевтические композиции могут быть произведены согласно, например, аналогично, общепринятому способу, например, с помощью смешения, гранулирования, покрытия, растворения или лиофилизации.

В следующем примере указания на температуру даны в градусах Цельсия и нескорректированы. ЯМР-исследования на ядрах ¹Н проводились в CDCl₃, если не указано иначе.

Используются следующие сокращения:

t_пл - температура плавления,

EtAc - этилацетат,

ВОС - трет-бутоксикарбонил,

ДМФ - N,N-диметилформамид,

КТ - комнатная температура,

ДМСО - диметилсульфоксид.

Пример 1

N-[[4-[1-(2-Аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]амино]-сульфонил-3,5-бис-трифторметилбензамид

А) трет-Бутиловый эфир 4-[N-(аминосульфонил)бензиламино]пиперидин-1-карбоновой кислоты

Раствор 2,05 г трет-бутилового эфира 4-бензиламинопиперидин-1-карбоновой кислоты и 3,39 г сульфамида в 100 мл 1,2-диметоксиэтана кипятят с обратным холодильником в течение около 10 часов. Растворитель выпаривают из полученной смеси, полученный остаток после выпаривания обрабатывают EtAc, нерастворимый осадок отфильтровывают. Полученный фильтрат подвергают хроматографической очистке на силикагеле. Получают дузеот-бутиловый эфир 4-[N-(аминосульфонил)бензиламино]пиперидин-1-карбоновой кислоты, t_пл 140-142°С. ¹H-ЯМР (ДМСО) δ: 7,30-7,41 (s/m, 9+2H), 1,64 (m, 2H), 2,53-2,72 (уш., 2Н), 3,71 (tt, 1H), 8,83-8,96 (уш., 2H), 4,26 (s, 2H, СЭД, 6,86 (уш. s, 2H, NH), 7,19 (t, 1H), 7,28 (t, 1H), 7,36 (d, 1H). ¹³С-ЯМР (ДМСО) δ: 28,51, 30,13, 43,35, 47,11, 56,52, 79,12, 127,06, 127,48, 128,49, 140,59, 154, 156.

Б) N-(1-ВОС-4-пиперидинилбензиламино)сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамид

280 мг диизопропилэтиламина и 1,28 мл ангидрида н-пропилфосфиновой кислоты (50% раствор в ДМФ) добавляют к раствору 400 мг трет-бутилового эфира 4-бензиламинопиперидин-1-карбоновой кислоты и 560 мг 3,5-бис-(трифторметил)бензойной кислоты в 15 мл ДМФ. Полученную смесь перемешивают в течение около 4 дней при КТ, раствор выпаривают, а остаток после выпаривания обрабатывают EtAc и промывают 1н. HCl, насыщенным раствором NaHCO₃ и соляным раствором, после чего высушивают. Растворитель выпаривают из высушенного остатка, после чего полученный остаток после выпаривания подвергают хроматографической очистке на силикагеле. Получают N-(1-ВОС-4-пиперидинилбензиламино)сульфонил-3,5-бис(трифторметил)-бензамид. ¹Н-ЯМР (ДМСО) δ: 1,28-1,40 (m, 9+2H), 1,60 (m, 2H), 2,54-2,70 (m, 2H), 3,80-3,94 (m, 2+1H), 4,55 (s, 2H, СН₂), 7,27 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,46 (s, 2H), 12,6 (уш., 1H, NH).

В) N-(4-Пиперидинилбензиламино)сульфонил-3,5-бис(трифторметил)-бензамид в форме гидрохлорида

Раствор 650 мг N-(1-ВОС-4-пиперидинилбензиламино)сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамида в 5 мл CH₂Cl₂ обрабатывают 60 мл 3н. HCl(газ) в диэтиловом эфире. Полученную смесь перемешивают в течение около 12 часов, после чего растворитель выпаривают. Получают N-(4-пиперидинил-бензиламино)сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамид в форме гидрохлорида. ¹H-ЯМР (ДМСО) δ: 1,72-1,76 (m, 4H), 2,90 (m, 2H), 3,20-3,3 (m, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,60 (s, 2H, CH₂), 7,31 (t, 1H), 7,40 (t, 1H), 7,48 (d, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,48 (s, 2H), 8,48 и 8,75 (уш., 2H, NH).

Г) N-[[4-[1-(2-Аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]-бензиламино]сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамид

430 мг 2-фтор-4-трифторметилбензамида и 430 мг К₂СО₃ добавляют к раствору 570 мг гидрохлорида N-(4-пиперидинилбензиламино)-сульфонил-3,5-бис-трифторметилбензамида в 15 мл ДМСО. Полученную смесь перемешивают в течение около 4 часов при 150°С, после чего К₂СО₃ удаляют фильтрованием. Из полученного фильтрата выпаривают растворитель, остаток после выпаривания подвергают хроматографической очистке на силикагеле. Получают N-[[4-[1-(2-аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]бензиламино]сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамид. ¹H-ЯМР (ДМСО) δ: 1,60-1,76 (m, 4H), 2,72 (m, 2H), 3,13 (m, 2H), 3,78 (m, 1H), 4,55 (s, 2H, CH₂), 7,14 (t, 1H), 7,23 (t, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,59 (уш., 1H, NH), 7,68 (d, 1H), 8,08 (уш., 1H, NH), 8,12 (s, 1H), 8,45 (s, 2H).

Д) N-[[4-[1-(2-Аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]-амино]сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамид

830 мг N-[[4-[1-(2-аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]-бензиламино]сульфонил-3,5-бис(трифторметил)бензамида растворяют в 20 мл метанола, полученную смесь гидрируют в течение около 12 часов при 40°С в присутствии 10% палладия на активированном угле. Катализатор отфильтровывают, а полученный фильтрат подвергают хроматографической очистке на силикагеле. Получают N-[[4-[1-(2-аминокарбонил-5-трифторметилфенил)]пиперидинил]амино]сульфонил-3,5-бис-(трифторметил)бензамид. t_пл 192-195°С. ¹H-ЯМР (ДМСО) δ: 1,58 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 2,77 (m, 2H), 3,11-3,21 (m, 3Н), 5,8 (уш., 1H, NH), 7,32 (s, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,69 (уш., 1H), 7,74 (d, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,22 (уш., 1H), 8,48 (s, 2H).

Аналогично способу, описанному в примере 1, но с использованием соответствующих исходных веществ получают соединения формулы

в которых R_3ss и R_4ss принимают указанные в таблице 1 значения, и характеризуются указанными в таблице 1 температурами плавления.

Таблица 1ПримерR_3ssR_4sst_пл1192-195°C2215-220°C3149-152°C4190°C разложение

Пример 5: N-BOC-Пиперазинамид 3,5-бис(трифторметил)бензоилсульфаминовой кислоты

А) N-ВОС-пиперазин-N′-сульфамат

612 мг амидосульфонилхлорида в 20 мл CH₂Cl₂ добавляют к раствору 1 г ВОС-пиперазина и 1,085 г триэтиламина. Полученную смесь перемешивают в течение около 6 часов при 0°С и оставляют нагреваться до КТ в течение ночи. Из полученной смеси выпаривают растворитель, остаток после выпаривания растворяют в этилацетате, промывают водой, высушивают и концентрируют. Полученный остаток после концентрирования подвергают хроматографической очистке на силикагеле. Получают N-ВОС-пиперазин-N′-сульфамат в кристаллической форме. Т_пл: 167-171°С.

Б) N-BOC-пиперазинамид 3,5-бис(трифторметил)бензоилсульфаминовой кислоты

К раствору 195 мг N-ВОС-пиперазин-N′-сульфамата и 148 мг триэтиламина добавляют 408 мг 3,5-бис(трифторметил)бензоилхлорида в 50 мл CH₂Cl₂. Полученную смесь перемешивают в течение около 20 часов при КТ, после чего растворитель выпаривают, а полученный остаток от выпаривания растворяют в EtAc, промывают водой, высушивают и концентрируют. Остаток после концентрирования подвергают хроматографической очистке на силикагеле.

Получают N-BOC-пиперазинамид 3,5-бис(трифторметил)бензоилсульфаминовой кислоты в кристаллической форме. Т_пл: 185-190°С. ¹Н-ЯМР δ: 1,4 (s, 9Н, ВОС), 3,0-3,2 (m, 4Н), 3,3-3,5 (m, 4H), 7,78 (s, 1H), 8,28 (s, 2H).

Аналогично способу, описанному в примере 5, но с использованием соответствующих исходных веществ получают соединения формулы

в которых R_3s и R_4s принимают значения, указанные в таблице 2 и характеризуются температурами плавления, указанными в таблице 2.

Таблица 2ПримерR_3sR_4st_пл5185-190°6172-175°7200-203°8208-211°963-67°10205-208°11195-197°12193-197°13154-157°14186-189°

Описываются амиды пиперазинил- или пиперидиниламинсульфаминовой кислоты формулы (I),

в которой R₁ и R₂ совместно с атомом азота, к которому они присоединены, обозначают 6-членный алифатический гетероциклил, содержащий два атома азота в качестве гетероатомов, причем указанный дополнительный атом азота замещен радикалом R, где R обозначает COOR′, a R′ представляет собой (С₁-С₆)алкил или бензил, либо фенил, замещенный трифторметилом и аминокарбонилом, или R₁ обозначает водород, a R₂ обозначает группу формулы , в которой R₉ обозначает (С₁-С₈)алкоксикарбонил или фенил, замещенный галоид(С₁-С₆)алкилом или аминокарбонилом; R₃ обозначает фенил или фенил(С₁-С₄)алкил, содержащий два заместителя, выбранные из галогена и галоид(С₁-С₆)алкила. Соединения обладают активностью ингибитора стероидной сульфатазы. Описывается применение соединения формулы (I) в качестве ингибитора стероидной сульфатазы. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Амид пиперазинил- или пиперидиниламинсульфаминовой кислоты формулы

в которой R₁ и R₂ совместно с атомом азота, к которому они присоединены, обозначают 6-членный алифатический гетероциклил, содержащий два атома азота в качестве гетероатомов, причем указанный дополнительный атом азота замещен радикалом R, где R обозначает COOR′, a R' представляет собой (С₁-С₆)алкил или бензил, либо фенил, замещенный трифторметилом и аминокарбонилом,

или

R₁ обозначает водород, a R₂ обозначает группу формулы

в которой R₉ обозначает (С₁-С₈)алкоксикарбонил или фенил, замещенный галоид(С₁-С₆)алкилом или аминокарбонилом; и

R₃ обозначает фенил или фенил(С₁-С₄)алкил, содержащий два заместителя, выбранные из галогена и галоид(С₁-С₆)алкила.

в которой R обозначает COOR′, где R′ обозначает (С₁-С₆)алкил или бензил, либо фенил, замещенный трифторметилом и аминокарбонилом, а

R₃ обозначает фенил или фенилметил, содержащий два заместителя, выбранные из галогена и трифторметила.

в которой R обозначает COOR′, n равно 0 и

R′ обозначает трет-бутил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают CF₃;

R′ обозначает трет-бутил, R₆, R₇ и R₈ обозначают водород и R₄ и R₅ обозначают хлор;

R′ обозначает трет-бутил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают хлор;

R′ обозначает фенилметил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают CF₃;

R′ обозначает фенилметил, R₆, R₇ и R₈ обозначают водород и R₄ и R₅ обозначают хлор; или

R′ обозначает фенилметил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают хлор;

или

R обозначает COOR′, n равно 2 и

R′ обозначает трет-бутил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают трифторметил;

или

R обозначает пара-трифтор-, орто-аминокарбонилфенил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород и R₅ и R₇ обозначают трифторметил, n равно 0;

R обозначает пара-трифтор-, орто-аминокарбонилфенил, R₄, R₆ и R₈ обозначают водород R₅ и R₇ обозначают хлор, n равно 0;

R обозначает пара-трифтор-, орто-аминокарбонилфенил, R₄, R₅ и R₆ обозначают водород R₇ и R₈ обозначают хлор, n равно 0.

в которой R₁₀, R₁₂ и R₁₄ обозначают водород и R₁₁ и R₁₃ обозначают трифторметан;

R₁₀, R₁₁ и R₁₂ обозначают водород и R₁₃ и R₁₄ обозначают хлор или

R₁₀, R₁₂ и R₁₄ обозначают водород и R₁₁ и R₁₃ обозначают хлор.