ВЕЩЕСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ НЕЙРОТРОПНОЙ - НЕЙРОМОДУЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/4015 A61P25/00 

Область техники

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и касается лекарственных средств, оказывающих комплексное, многокомпонентно-регулирующее влияние на функциональное состояние центральной нервной системы (ЦНС) и сосуды головного мозга.

Уровень техники

Известен широкий спектр нейротропных и цереброваскулярных лекарственных средств различных фармакологических групп, которые применяются в комплексной терапии патологии ЦНС при цереброваскулярных болезнях, среди которых ведущее место занимает инсульт различной этиологии. При этом каждый из препаратов различной фармакологической направленности, включенный в терапевтический комплекс, целенаправлен на специфическое устранение выраженности проявления того или иного симптома в симптомокомплексах психоневрологических синдромов и заболеваний. Полипрагмазия имеет ряд существенных недостатков, связанных как со сложностью составления схем рационального дозирования и схем рационального одновременного применения многих лекарственных средств, так и с составлением прогноза их эффективности и переносимости, а также возможного синергизма побочных действий.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является разработка универсального с точки зрения нейропсихофармакологии лекарственного препарата.

В результате решения данной задачи возможно получение технического результата, заключающегося в способности лекарственного вещества проявлять при монотерапии комплексное влияние на функциональное состояние ЦНС и сосуды головного мозга при нейроцеребральных и цереброваскулярных болезнях, а также обладающего лечебными и профилактическими свойствами, предупреждающими патологическое развитие болезней ЦНС.

Данные технические результаты достигаются тем, что в качестве вещества, обладающего нейротропной-нейромодуляторной, цереброваскулярной и противоинсультной активностью применен N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон (фенотропил), известный как гипотензивное и противоишемическое (при ИБС) вещество (Авт. св. СССР №797219, кл. А61К 21/403, C07D 207/26, Патент РФ №2183117 С1, кл. А61К 31/40, Евразийский Патент №002380 В1, кл. А61К 31/4015); вещество и фармацевтическая композиция, обладающие ноотропной активностью (Патент РФ №2050851, кл. А61К 31/40, С1, Патент РФ №2240783, кл. А61К 9/20 31/40, А61Р 25/28, С1), и вещество, обладающее антидепрессивной активностью (Патент РФ №2232578, кл. А61К 31/4152, А61Р 25/24, С1).

Эффекты этого вещества при острой цереброваскулярной патологии не описаны.

Предлагается использовать N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон (фенотропил) в качестве нейротропного-нейромодуляторного, цереброваскулярного и противоинсультного средства, которое имеет ряд преимуществ перед применением комплекса веществ различных фармакологических групп, а именно: выраженную многокомпонентную эффективность; простоту дозирования и применения в любой лекарственной форме; относительно низкую токсичность (ЛД₅₀=800 мг/кг); отсутствие выраженных побочных действий; при курсовом приеме не развивается привыкания, зависимости и толерантности, вещество не метаболизируется в организме и выводится из него в неизменном виде.

Моделью для оценки предлагаемых эффектов фенотропила избрана наиболее тяжелая и наиболее распространенная форма цереброваскулярной патологии - инсульт, в терапии которого до настоящего времени не достигнуто значимых результатов. В развитых странах сосудистые заболевания головного мозга являются третьей по значимости причиной смертности и чаще других приводят к инвалидности. Потери большого числа трудоспособного населения и длительные сроки госпитализации требуют по сравнению с большинством других заболеваний наибольших экономических затрат (Гусев Е.И., Скворцова В.И. и соавт., 2003; Верещагин Н.В., Варакин Н.В., 2001; Харрисон Т.Р. и соавт., 1997). Существует два основных направления в течении инсульта: тромболизис, нейромодуляция и нейропротекция. Эффективность тромболизиса доказана множеством клинических исследований, что касается лекарственных препаратов, обладающих нейромодуляторной и нейропротективной активностью, то на сегодняшний день ведется их активный поиск.

Исследования проведены в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» Минздрава Российской Федерации (2000).

Полученные результаты исследований обработаны статистически. Подсчитаны средние значения и их стандартные отклонения для каждой группы. Статистическая достоверность различий между опытными и контрольными группами определялась с помощью t-теста Стьюдента, теста χ-квадрат и теста Манна-Уитни. Различия считались достоверными при р<0,05. (Боровков В.П., 2001; Гланц С., 1999).

Пример 1. Изучение противоинсультного действия фенотропила на модели геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматическая гематома).

Опыты проведены на белых беспородных крысах-самцах массой 200-250 г. Крысы содержались в условиях вивария при свободном доступе к пище и воде, при естественной смене дня и ночи. С целью создания геморрагического инсульта (ГИ) у крыс, наркотизированных хлоралгидратом (400 мг/кг), проводилась стереотаксическая трепанация черепа и затем мандрен-ножом осуществляли деструкцию мозговой ткани в области capsula intema с введением в место повреждения крови, взятой из-под языка крысы (0,02-0,03 мл). Таким способом достигался локальный аутогеморрагический билатеральный инсульт в области внутренней капсулы (диаметр - 2 мм, глубина - 3 мм) без повреждений выше расположенных образований мозга и неокортекса. Контролем служили ложно оперированные животные и животные с ГИ, получавшие физиологический раствор. Фенотропил вводили в дозе 100 мг/кг интрагастрально, с использованием специального зонда, через 5 часов после операции и затем ежедневно в течение 7 дней в одно и то же время суток ±3 мин.

Во время операции и непосредственно после операции погибло 40% крыс. Выживших в первые часы после ГИ наблюдали 14 суток. Оценивали влияние фенотропила на выживаемость животных; на уровень неврологического дефицита по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В.Ганнушкиной (1977) и по методике «вращающегося стержня»; по сохранности мышечного тонуса в тесте подтягивания на горизонтальной перекладине; на ориентировочно-исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Исследование когнитивных функций проводили на стандартной установке условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). Тест на воспроизведение УРПИ (на сохранность памятного следа) осуществляли через 24 часа после обучения, а также на 3-й, 7-е, 14-е сутки после операции. При оценке сохранности норкового рефлекса регистрировали латентное время первого захода в темную камеру.

В первые сутки после операции практически у всех животных с ГИ выявлены неврологические отклонения (90%-100%) на фоне физиологического раствора, выразившиеся в виде вялости, замедленности движений, слабости конечностей, тогда как у ложно оперированных крыс эти нарушения отмечены у 30%-40% (табл.1). При ГИ на фоне фенотропила выраженность неврологического дефицита по этому тесту проявлялась в 40%-50% и практически не отличалась от группы ложно оперированных. Неврологические нарушения, проявившиеся в виде манежных движений по кругу, и параличи конечностей у инсультных животных с фенотропилом отсутствовали, а в группе с ГИ + физиологический раствор глубокие неврологические нарушения составили 40%, 30% и 30% соответственно.

Таким образом, в остром периоде ГИ фенотропил проявляет выраженную нейротропную и цереброваскулярную активность и ослабляет нарушения неврологического статуса.

Регистрация мышечного тонуса у крыс с ГИ показала, что на третьи сутки после инсульта ослабление мышечного тонуса отмечалось в среднем у 40-50%, а на седьмые - четырнадцатые у 38-36% животных (табл.2). У животных, получавших фенотропил, на первые - третьи сутки ослабление мышечного тонуса наблюдалось у 42-33%. На седьмые сутки после введения фенотропила ослабление мышечного тонуса наблюдалось у 25%, а к четырнадцатым суткам этот показатель снижался до 16% и был статистически достоверен по сравнению с показателями инсультных животных (табл.2).

Исследование динамики нарушений координации движений у крыс с ГИ показало, что на первые - третьи сутки нарушение координации движений отмечалось у 48-50%, а на седьмые - четырнадцатые у 38-45% выживших животных (табл.3). Фенотропил в дозе 100 мг/кг ослаблял нарушения координации движений у крыс. Выраженные и статистически достоверные результаты были получены на седьмые - четырнадцатые сутки после инсульта (табл.3).

Норковый рефлекс грызунов является врожденным стремлением к ограниченному затемненному пространству. В первые сутки после операции у всех животных сохраняется норковый рефлекс, но в группах с ГИ и на фоне однократного применения фенотропила увеличивалось латентное время выполнения рефлекса (табл.4).

В результате исследований установлено, что в контрольной группе крыс, получавших в течение всего эксперимента физиологический раствор (интактные), при воспроизведении УРПИ через 24 часа после обучения (получение болевого раздражения в темном отсеке камеры) 80% животных помнили об ударе током и не заходили в темную «опасную» камеру в течение всего времени наблюдения. Через сутки после обучения контрольные интактные и ложно оперированные крысы хорошо помнили об ударе током в темной камере и 70-80% животных не заходили в этот опасный отсек. Остальные крысы заходили в темный отсек с большим латентным периодом (табл.5а). У крыс с геморрагическим инсультом (ГИ) через сутки после обучения достоверно уменьшилось латентное время захода в темную камеру. Только 25% животных совсем не зашли в темную камеру, т.е. помнили об ударе током, а у 75% крыс память была нарушена (табл.5а).

Фенотропил в дозе 100 мг/кг при однократном введении через 5 ч после операции (воспроизведение УРПИ через сутки после обучения) увеличивал до 40% число животных с сохраненной памятью (животные с ГИ - 25%) и увеличивал латентное время захода в темный опасный отсек. Однако этот улучшающий эффект препарата после однократного введения был статистически недостоверен по сравнению с интактными животными, но в сравнении с инсультной группой увеличивал латентное время захода в темную камеру на 48% и на 60% увеличивал количество животных с сохранной памятью через сутки.

Через 3-е суток после операции нарушения памяти у животных с ГИ сохранялись на том же уровне (табл.5а). После 3-х кратного введения фенотропила отмечалось увеличение латентного времени захода в темную камеру и увеличение числа животных, не зашедших в камеру; но и эти эффекты фенотропила были статистически недостоверными (табл.5а) по сравнению с ложно оперированными, но значимо выраженными и достоверными по сравнению с инсультной группой с физиологическим раствором.

Через 7 и 14 суток после обучения интактные и ложно оперированные животные хорошо помнили о негативной ситуации и выполняли УРПИ (табл.5б). В сравнении с ними на 7-14 день после ГИ и обучения память животных на получение болевого раздражения в темной камере была достоверно нарушена. Причем это нарушение памяти было выражено в большей степени в сравнении с показателями через 1 и 3 суток после операции. Так, через 7 суток только 16% животных помнили о негативном раздражении, а остальные крысы заходили в темный опасный отсек уже через 28 секунд. А через 14 суток только 9% животных сохранили УРПИ (табл.5б).

Фенотропил, введенный крысам в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней, восстанавливал нарушения памяти в постинсультный период на 7 и 14 дни после операции ГИ. Под влиянием препарата наблюдалось статистически достоверное увеличение (до 40%) числа помнивших негативную ситуацию животных (у крыс с ГИ - 9%). Примерно в 3 раза увеличивалось по сравнению с инсультными крысами латентное время захода в темную опасную камеру (табл.5б).

Таким образом, фенотропил при повторном введении обладает способностью восстанавливать нарушенную при геморрагическом инсульте память на модели условного рефлекса пассивного избегания.

Изучение ориентировочно-исследовательского поведения в условиях методики открытого поля показало, что в первые сутки после операции у крыс ГИ отмечалось значительное, почти в 2 раза, снижение суммарных показателей двигательной активности и исследовательского поведения. Сходные показатели поведения крыс наблюдались и на 14-й день после ГИ, хотя животные были и несколько активнее (табл.6). Фенотропил при регистрации эффекта через 3-е суток после ГИ увеличивал суммарные показатели поведения до уровня показателей поведения интактных и ложно оперированных животных (табл.6). При регистрации эффекта после 7-ми дней введения фенотропила суммарный показатель двигательного поведения по сравнению с группой крыс с ГИ увеличивался в 2,7 раза (табл.6). Через 14 суток после операции активирующий эффект фенотропила на поведение сохранялся.

Как видно из табл.7, в течение 14-и суток после операции в группе ложно оперированных погибло одно животное. В группе с ГИ + физиологический раствор в течение первых суток погибло 23% животных, а к 14-му дню этот показатель достиг 57%. Фенотропил в дозе 100 мг/кг при ежедневном однократном введении в течение 7-и дней полностью предупреждал гибель животных.

В результате проведенных исследований показано, что по сравнению с ложно оперированными животными у крыс с геморрагическим инсультом (интрацеребральной посттравматической гематомой) наблюдаются: выраженный неврологический дефицит, нарушение координации движений, ослабление процессов обучения и памяти и повышение показателей гибели животных. При этом отмечалось углубление патологической симптоматики к 14-му дню наблюдения.

Фенотропил при введении животным в дозе 100 мг/кг через 5 часов после операции, а затем ежедневно в течение 7 дней вызывает значительное улучшение инсультных и постинсультных нарушений. Препарат улучшает показатели неврологического дефицита по шкале McGrow уже через сутки после инсульта, а при курсовом применении повышает мышечный тонус и улучшает координацию движений на 7 и 14 сутки после инсульта. Фенотропил при повторном применении восстанавливает нарушенную инсультом память, улучшая воспроизведение условного рефлекса пассивного избегания на 7 и 14 сутки после инсульта. Наиболее ярким эффектом фенотропила является его способность полностью предупреждать гибель животных с геморрагическим инсультом.

Таким образом, фенотропил (100 мг/кг, внутрь) при курсовом 7-ми дневном введении обладает отчетливым противоинсульным действием у крыс на модели геморрагического инсульта (интрацеребральная посттравматическая гематома), что выражается в улучшении неврологического статуса, общего поведения, когнитивных функций, и что самое главное - предотвращении гибели животных.

Пример 2. Оценка эффективности фенотропила на модели острого ишемического инсульта

В данном исследовании была применена модель локальной ишемии головного мозга у крыс с дистальной окклюзией средней мозговой артерии (ОСМА), впервые описанная S.T.Chen (1989). У наркотизированных хлоралгидратом животных (300 мг/кг, в/б) жестко фиксировали голову в боковом положении левой стороной кверху. После разреза кожи посередине между левой ушной раковиной и левым глазом раздвигали волокна височной мышцы до поверхности черепа. С помощью бормашины диаметр бора 0,5 мм, в месте шва чешуйчатой кости с лобной делали отверстие диаметром около трех-четырех миллиметров, обнажая место пересечения средней мозговой артерии с нижней мозговой веной.

С помощью микроскопа (Olympus SZ-CTV) под большим увеличением (14,0×3,3) под левую среднюю мозговую артерию подводили специальный металлический крючок. Методом электрокоагуляции производили окклюзию средней мозговой артерии проксимальнее места ее бифуркации на фронтальную и париетальную ветви. При этом в поле зрения микроскопа наблюдалось прекращение тока крови по средней мозговой артерии выше места окклюзии. После операции рана послойно ушивалась и проводилась ипсилатеральная окклюзия общей сонной артерии.

Для оценки влияния препарата на зону ишемии использовался метод гистохимического прокрашивания ткани головного мозга 2,3,5-трифенилтетразолия хлоридом (ТТХ) (Bederson J.B. и соавт., 1986).

Для этого через 72 часа после ОСМА животные под наркозом были декапитированы, их головной мозг извлекался из черепной коробки. Готовились 6 фронтальных срезов толщиной 1 мм, которые в дальнейшем окрашивались ТТХ. Далее для каждого окрашенного среза проводилось его двустороннее сканирование и компьютерная планиметрия с помощью программы MOCHA (Jandel Scientific, версия 1.2.0.0). Определяли площадь ипсилатерального полушария (ИП) и зону поражения (ЗП). Процентное отношение объема очага к объему ипсилатерального полушария вычислялось по следующей формуле:

V_(ЗП)/V_(ИП)=(S_(ЗП)1+S_(ЗП)2+...+S_(ЗП)6)/(S_(ИП)1+S_(ИП)+2...+S_(ИП)6),

где S_(ЗП) и S_(ИП) - площади ЗП и ИП для каждого среза (Roda J.M. и соавт., 1995).

Для оценки динамики нарушений поведения и состояния животных использовали комплекс методов, применяемых в нейропсихофармакологии (Воронина Т.А., 2000). Обучение и память крыс исследовали на модели условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ, установка Passive avoidance фирмы Lafayette Instrument Co США). Обучение животных УРПИ проводили через 24 часа после операции, а воспроизведение рефлекса через сутки после обучения в течение 3 мин (180 с).

Неврологический статус животных определяли по шкале Stroke-index McGrow для монгольских песчанок (McGrow, 1977) в модификации И.В.Ганнушкиной (1996). Оценку проводили по бальной системе. При наличии у животных нескольких симптомов неврологического дефицита тяжесть состояния определялась как сумма соответствующих балов. Отмечалось количество крыс с легкой (от 0,5 до 2,5 Stroke-index) и тяжелой (от 3 до 10 Stroke-index) неврологической симптоматикой.

Исследования проведены на крысах-самцах линии Vistar (250-300 г), содержащихся в виварии при свободном доступе к пище и воде при 12-и часовом режиме смены дня и ночи.

В ходе исследования животные были поделены случайным образом на 11 групп. Фенотропил в дозах 100 мг/кг, 200 мг/кг и 300 мг/кг вводили внутрибрюшинно трем группам животных за 60 мин до операции и трем группам животных через 5 мин после операции. Ложно оперированным животным вводили физиологический раствор. Затем вещества вводились однократно на 2-е и 3-й сутки. Вещества вводились строго в одно и то же время суток ±3 мин.

Анализ неврологического статуса животных, регистрируемый по шкале Stroke-index McGrow, показал, что у всех оперированных крыс наблюдались легкие нарушения неврологического статуса в виде тремора, снижения раздражимости, ограничения подвижности, одностороннего полуптоза. Динамика развития нарушений неврологического статуса за 72 часа после операции представлена в табл.8.

Следует отметить, что у животных, получавших фенотропил до операции, тремор и замедленность движений уже в 1 сутки отмечались реже (табл.8). Если в группе контрольных животных с окклюзией средней мозговой артерией без препарата вялость, замедленность движений, тремор выявлялись на 2 и 3 сутки, то у животных, получавших фенотропил в послеоперационном периоде, отмечалась более быстрая положительная динамика: на 2 сутки значительно уменьшилось количество животных с тремором и замедленность движений. Выраженность и нарастание левостороннего полуптоза у животных может отражать развитие послеоперационного отека.

В ходе исследования процессов обучения и памяти на модели УРПИ были получены следующие результаты, представленные в табл.9. У животных с ОСМА произошло выраженное нарушение памяти. На фоне фенотропила во всех группах животных с ОСМА латентное время первого захода в темный отсек камеры значительно увеличивалось по сравнению с группой №5. При профилактическом применении фенотропила за 60 мин до ОСМА эти показатели не имели достоверных различий с группами №1 и №2, что указывает на высокий нейротропный эффект препарата.

Через 72 часа после операции зона поражения у контрольных животных (группа №5) составила 11,5±0,98% от объема ипсилатерального полушария (формула расчета представлена выше). У животных, получавших фенотропил в дозе 100 мг/кг, 200 мг/кг, 300 мг/кг за 60 мин до операции, отмечались следующие показатели - 7,4±0,72% (группа №6); 6,52±0,58% (группа №7); 6,03±0,75% (группа №8) соответственно. Послеоперационное введение фенотропила (через 5 мин после окклюзии средней мозговой артерии) в дозах 100 мг/кг, 200 мг/кг, 300 мг/кг привело к следующим результатам: 11±0,87% (группа №9); 10,79±0,97% (группа №10); 9,5±0,94% (группа №11) соответственно (табл.10).

Полученные в результате работы данные показывают, что фенотропил сохраняет функции памяти, улучшает неврологический статус животных в послеоперационном периоде, что выражалось в увеличении латентного времени первого захода в темный отсек камеры при УРПИ, в более активном поведении животных, меньшей частоте тремора по сравнению с контрольной группой №5. Профилактическое введение препарата (за 60 мин до операции) вызывало выраженное уменьшение зоны очага поражения: 100 мг/кг - на 36%; 200 мг/кг - на 43%; 300 мг/кг - 48% относительно результатов в контрольной группе животных. Введение фенотропила в дозах 100 мг/кг, 200 мг/кг и 300 мг/кг через 5 минут после операции привело к сокращению зоны поражения мозга на 4%, 6% и 17% соответственно.

Показано, что зависимость доза-эффект при ишемическом инсульте имеет наибольшее значение в период острой манифестации инсульта, когда требуются более высокие дозы препарата. Наибольшую эффективность фенотропил проявляет в дозе 300 мг/кг и особенно при профилактическом применении.

Пример 3. Оценка противоинсультной активности фенотропила при курсовом 10-и дневном введении.

Исследования проведены по методике Примера 2 на 2-х группах животных (по 20 крыс в каждой группе). Фенотропил (300 мг/кг) и физиологический раствор в эквивалентном объеме вводили внутрибрюшинно в течение 10-и дней (в одно и то же время суток±3 мин), начиная с 1-го дня через 5 мин после операции. Крысы для экспериментальных исследований отбирались только с одинаковой массой тела (270 г ±10 г).

Определяли объем ипсилатерального полушария (мм³) на 3-и и 10-е сутки эксперимента, а также исследовали патолого-морфологическое состояние полушария и зоны поражения мозга.

В обеих группах на 10-е сутки было отмечено рубцевание зоны поражения. В контрольной группе в отличие от группы крыс, получавших фенотропил, наблюдалось сморщивание полушария (стягивание к зоне поражения), а в группе с фенотропилом на 10-е сутки не было выявлено сморщивания полушария. Объем ипсилатерального полушария в 1-й группе животных (табл.11) сократился в среднем на 10%. Достоверных изменений объема полушария во 2-й группе выявлено не было, что указывает на терапевтический эффект даже непродолжительного курсового применения фенотропила.

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что фенотропил обладает выраженной универсальной нейротропной и цереброваскулярной активностью, оказывая противоинсультное действие в условиях экспериментального геморрагического и ишемического инсульта как форм патологии ЦНС.

На фоне применения фенотропила в остром периоде расстройства ЦНС при цереброваскулярной патологии различной этиологии происходит реконструкция функциональной нормы памяти, поведенческих реакций и двигательной активности, мышечного тонуса и устранение проявления выраженности неврологических дефицитов с полным восстановлением психоневрологического статуса при курсовом введении препарата на достаточно ранних стадиях течения болезни.

При геморрагическом инсульте введение практически минимальной терапевтической дозы препарата (100 мг/кг) предотвращало смертность животных в 100% случаев. При этом в контрольной группе животных погибло 57% крыс.

При ишемическом инсульте фенотропил, введенный за 60 мин до операции и однократно в течение трех дней, сокращал зону поражения мозга в среднем на 42% (48% - в дозе 300 мг/кг), что указывает на его эффективность и перспективность использования с целью профилактики и лечения цереброваскулярных расстройств и развития заболеваний ЦНС. Введение фенотропила в дозах 100, 200 и 300 мг/кг через 5 мин после операции и по 3-х дневной схеме проявляло менее выраженный эффект (17% в дозе 300 мг/кг) по этому показателю в острый период манифестации инсульта, но увеличение продолжительности курса лечения до 10-и дней способствовало предотвращению деструктивных изменений мозга.

Выявленная эффективность фенотропила на примере инсульта различной этиологии выходит за рамки ранее описанных его отдельных фармакологических свойств и показывает, что фенотропил является родоначальником нового поколения лекарственных веществ, обладающих универсальной нейротропной активностью, обеспечивающей соразмерную (нейромодуляторную) перестройку функционального состояния ЦНС, что в свою очередь приводит к проявлению, в зависимости от наличия тех или иных расстройств или болезней ЦНС, различных многокомпонентных эффектов, включая цереброваскулярные-нейропротективные свойства.

Литература

1. Верещагин Н.В., Варакин Ю.Я. Регистры инсульта в России: результаты и методологические аспекты проблемы // Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова (приложение «Инсульт»). - М., 2001. - №1. - С.34-40.

2. Внутренние болезни, под ред. Т.Р.Харрисона и др. - М.: Медицина, 1997. - Т.10. - 494 с.

3. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ // В книге: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С.153-158.

4. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ // В книге: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С.126-130.

5. Ганнушкина И.В. Патофизиологические механизмы нарушений мозгового кровообращения и новые направления в их профилактике и лечении // Ж. невропатол. и психиатр. - М., 1996. - №1. - С.14-18.

6. Ганнушкина И.В. Функциональная ангиоархитектоника головного мозга. - М.: Медицина, 1977. - С.224.

7. Гусев Е.И. Проблема инсульта в России. // Журн. неврол. и психиатр. им. С.С.Корсакова (приложение «Инсульт»). - М., 2003. - №9. - С.3-7.

8. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М: Медицина, 2001.

9. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Стаховская Л.В. Эпидемиология инсульта в России. // Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова (приложение «Инсульт»). - М., 2003. - №8. - С.4-9.

10. Макаренко А.Н., Косицын Н.С., Карпенко С. В., Мишина В.А. Авторское свидетельство №1767518 от 03.11.1990.

11. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С.159-161.

12. Bederson J.B., Pitts L.H., Germano S.M., Nishimura M.C., Davis R.L., Bartkowski H.M. Evalution of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rat // Stroke. - 1986. - V.17. - P.1304-1308.

13. Chen S.T., Hsu C.Y., Hogan E.L., Maricq H., Balentine J.D. A model of focal ischemic stroke in the rat reproducible extensive cortical infarction // Stroke. - 1989. - V.17, №4. - P.738-743.

14. Jackowski A., Crockard A., Bumstock G., Ross Russell R., Kristek f. The time course of intracranial pathophysiological changes following experimental subarachnoid haemorrage in the rat // Journal of cerebral blood flow and metabolism. - 1990. - V.10. - P.835-849.

15. Roda J.M., Carceller F., Diez- Tejedor E., Avendano C. Reduction of infarct size by intra-arterial nimodipine administered at reperfusion in a rat model of partially reversible brain focal ischemia // Stroke. - 1995. - V.26, №10. - P.1888-1892.

16. Smith S., Hodges H., Sowinski P. Long-Term beneficial effects of BW619C89 on neurological deficit, cognitive deficit and brain damage after middle cerebral artery occlusion in the rat // Neuroscience. - 1997. - V.77, №4. - P.1123-1135.

Таблица 1.Влияние фенотропила (100 мг/кг, внутрь) на неврологический дефициту крыс в 1-е сутки геморрагического инсульта (по шкале McGrow)Неврологические симптомыКоличество животных с различной неврологической симптоматикой в %1 сутки после операцииГруппы животныхЛожно оперированные + физ. р-рИнсультные + физ. Р-рИнсультные + фенотропилВялость, замедленность движений4010050Слабость конечностей309040*Манежные движения0400*Парез 1-4 конечностей03030Паралич 1-4 конечностей0300** - достоверность отличий от инсультных крыс при р≤0,05 (χ²)

Таблица 2.Влияние фенотропила на мышечный тонус животных в тесте горизонтальной перекладины после геморрагического инсультаГруппа животныхКоличество животных, не подтянувшихся на горизонтальной перекладине в абс. ед. и %1-е сутки3-и сутки7-е сутки14-е суткиа.е.%а.е.%а.е.%а.е.%Интактные (без операции)0/1000/1000/1000/100Ложно оперированные1/10102/10201/10100/90Инсульт10/2343*9/1850*5/1338*4/1136*Инсульт + фенотропил5/12424/12333/12252/1216**а.е. - абсолютные единицы.* - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (χ²)** - достоверность отличий от инсультных крыс при р≤0,05 (χ²)

Таблица 3.Влияние фенотропила на координацию движений животных в тесте вращающегося стержня после геморрагического инсультаГруппа животныхКоличество животных, не удержавшихся на вращающемся стержне (3 об/мин), в течение 2-х минут, в абс. ед. и %1-е сутки3-и сутки7-е сутки14-е суткиа.е.%а.е.%а.е.%а.е.%Интактные (без операции)0/1000/1000/1000/100Ложно оперированные2/10203/10301/10101/910Инсульт11/2348*9/18505/1338*5/1145*Инсульт + фенотропил5/12424/12330/120**0/120**а.е. - абсолютные единицы.* - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (χ²)** - достоверность отличий от крыс с ГИ при р≤0,05 (χ²)

Таблица 4.Влияние фенотропила на выполнение норкового рефлекса.Группы животныхЛатентное время (с) захода в темную камеру при обучении норковому рефлексу1 сутки после операцииИнтактные животные (без операции)12,8±1,2Ложно оперированные13,03±0,9Инсультные35,2±10,1Фенотропил30,6±8,8

Таблица 5а.Влияние фенотропила на воспроизведение УРПИ у крыс с интрацеребральной посттравматической гематомойГруппы животныхВоспроизведение УРПИ через:24 часа после обучения3-е сутокЛатентное время захода в темную камеру(с)Кол-во крыс, не вошедших в темную камеру, %Латентное время захода в темную камеру(с)Кол-во крыс, не вошедших в темную камеру, %Интактные (без операции)156,0±24,080152,5±14,380Ложно оперированные143,7±16,370137,6±17,465Инсульт68,3±26,4*25*71,4±39,3*28Инсульт + фенотропил101,1±24,2**40**98,3±18,740*** - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (χ²)** - достоверность отличий от инсультной группы при р≤0,05 (χ²)

Таблица 5б.Группы животныхВоспроизведение УРПИ через:7 суток14 сутокЛатентное время захода в темную камеру (с)Кол-во крыс, не вошедших в темную камеру, %Латентное время захода в темную камеру(с)Кол-во крыс, не вошедших в темную камеру, %Интактные143,1±16,575133,6±25,160Ложно оперированные124,3±22,060114,2±20,655Инсульт28,0±2.9*16*23,7±11,2*9*Инсульт + фенотропил75,2±24,1**30**83,2±26,7**40*** - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (t-test Стьюдента; χ²)** - достоверность отличий от крыс с инсультом при р≤0,05 (t-тест Стьюдента; χ²)

Таблица 6.Влияние фенотропила на ориентировочно-исследовательское поведение и двигательную активность животных в условиях методики открытого поля после геморрагического инсультаГруппы животныхГоризонтальная двигательная активностьВертикальная двигательная активностьОбследование отверстийСуммарный показатель1-е сутки после операцииИнтактные15,6±2,35,6±1,43,3±0,924,5±5,4Ложно оперированные14,7±1,92,9±0,63,2±0,720,8±2,6ГИ + физ. р-р7,3±1,1*2,7±0,81,8±0,311,8±2,0*ГИ + фенотропил8,8±3,54,4±2,11,3±0,514,5±5,53-й сутки поле операцииИнтактные14,0±1,25,1±1,13,2±0,822,3±2,5Ложно оперированные13,7±2,33,2±0,83,1±0,520,0±2,3ГИ + физ. р-р6,2±1,2*2,7±0,41,7±0,510,6±1,5*ГИ + фенотропил15,2±5,44,5±1,51,9±0,721,6±6,1**7-е сутки после операцииИнтактные13,6±2,35,3±1,44,1±1,223,0±5,7Ложно оперированные13,4±2,14,1±2,82,9±0,620,4±3,5ГИ + физ. р-р7,8±1,93,2±1,32,4±0,513,4±2,9ГИ + фенотропил20,9±4,1**10,9±3,24,6±1,336,4±5,614-е сутки после операцииИнтактные12,4±2,55,6±1,33,5±1,221,5±5,9Ложно оперированные13,4±2,26,2±1,43,3±0,622,9±3,5ГИ + физ. р-р8,1±2,4*3,7±1,43,2±1,315,0±3,7*ГИ + фенотропил12,2±2,86,9±1,93,0±0,722,1±3,5*** - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (t-test Стьюдента)** - достоверность отличий от крыс с инсультом при р≤0,05 (t-тест Стьюдента)

Таблица 7.Влияние фенотропила на выживаемость животных после ГИГруппа животныхКоличество погибших животных в течение 14-ти суток после геморрагического инсульта1-е сутки3-й сутки7-е сутки14-е суткиа.е.%а.е.%а.е.%а.е.%Ложно оперированные0/1000/1000/1001/1010ГИ + физ. р-р7/3023*5/2322*5/1828*2/1315*ГИ + Фенотропил0/120**0/120**0/120**0/120*** - достоверность отличий от ложно оперированных крыс при р≤0,05 (χ²)
** - достоверность отличий от крыс с инсультом при р≤0,05 (χ²)

Таблица 8.Неврологические нарушения у животных с ОСМА. 1 сутки2 сутки3 суткиНомер группы животныхВялость, замедленность движенийТреморОдносторонний полуптозМанежные движенияВялость, замедленность движенийТреморОдносторонний полуптозМанежные движенияВялость, замедленность движенийТреморОдносторонний полуптозМанежные движения№3: физ Р-Р ложнооперир.632010301010№4: фенотропил 200 мг/кг ложнооперир.423000400000№5: физ. Р-Р + ОСМА8543525I5031№6: фенотропил 100 мг/кг + ОСМА224010501030№7: фенотропил 200 мг/кг + ОСМА334020400030№8: фенотропил 300 мг/кг + ОСМА224010500030№9: ОСМА + фенотропил 100 мг/кг534030502030№10: ОСМА + фенотропил 200 мг/кг533030401030№11: ОСМА + фенотропил 300 мг/кг434020501030Примечание: цифры отражают количество животных по каждой группе, у которых наблюдались перечисленные признаки.

Таблица 9.Влияние фенотропила на обучение (УРПИ) у крыс в острый период ишемического инсульта (ОСМА) через 24 часа после операции и при тестировании воспроизведения сохранности УРПИ через 24 часа после обучения№Группы животныхЛатентное время первого захода в темный отсек камеры, с1Контроль: физиологический раствор101,2±19,02Контроль: фенотропил без ОСМА105,9±25,73Физ. р-р, ложно оперированные69,7±20,74Фенотропил 200 мг/кг, ложно оперированные95,9±24,95Физ. р-р + ОСМА48,5±17,5*6Фенотропил 100 мг/кг + ОСМА93,6±22,3**7Фенотропил 200 мг/кг + ОСМА104,6±18,8**8Фенотропил 300 мг/кг + ОСМА90,6±22,6**9ОСМА + фенотропил 100 мг/кг83,3±26,1**10ОСМА + фенотропил 200 мг/кг84,5±19,6**11ОСМА + фенотропил 300 мг/кг67,6±18,4*** - достоверность отличий по отношению к группе №1 при р<0,05** - достоверность отличий по отношению к группе №5 при р<0,05

Таблица 10.Размер зоны поражения головного мозга при ОСМА.Группы животныхОбъем ипсилатерального полушария, мм³ (ИП)Объем зоны поражения, мм³ (ЗП)Процент отношения ЗП/ИП, %Группа №5765,6±3,7788±7,5711,5±0,98Группа №6786,6±4,7458,2±5,717,39±0,72*Группа №7739,77±4,849,2±6,136,52±0,58*Группа №8797±4,3348,1±5,996,03±0,75*Группа №9787,9±5,2486,5±6,5311±0,87Группа №10794,8±4,2785,9±7,7810,8±0,97Группа №11801,2±3,6376,2±7,599,5±0,94* - р<0.01 в сравнении с группой №5 (контрольные животные с ОСМА без препарата).

Таблица 11.Изменение объема ипсилатерального полушария при ОСМА№Группы животныхОбъем ипсилатерального полушария (мм³) на 3-й суткиОбъем ипсилатерального полушария (мм³) на 10-е сутки1ОСМА + физ. р-р770,74,±72693,53±4,12*2ОСМА + фенотропил 300 мг/кг772,4±4,5773,17±3,83* - достоверность отличий по отношению к контролю 3-х суток группы №1 при р<0,01

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и касается лекарственных средств, обладающих нейротропной-нейромодуляторной активностью. Показано, что N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон (карфедон, фенотропил, ранее известный как ноотропное, гипотензивное и противоишемическое средство) обладает универсальной нейротропной-нейромодуляторной активностью, оказывает комплексное многокомпонентно-регулирующее влияние на функциональное состояние центральной нервной системы (ЦНС). Изобретение может предупредить патологическое развитие ЦНС за счет соразмерной перестройки ее функционального состояния. 11 табл.

Применение N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон в качестве вещества, обладающего нейротропной - нейромодуляторной активностью.