СПОСОБ ТЕРАПИИ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ НЕВРОТИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/475 A61P7/00 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и касается способа коррекции индивидуальных нарушений в системе крови при патологии различного генеза, в частности при невротических расстройствах.

Известен способ коррекции нарушений в системе крови при экспериментальных неврозах с помощью терапии, включающей в себя синаптотропные средства, в частности симпатолитик резерпин, когда препарат вводят внутрибрюшинно однократно за 5 минут до воздействия в дозе 2 мг/кг всем опытным группам животных [1].

Данный способ является наиболее близким к заявляемому по достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком данного способа является использование лекарственного средства без учета индивидуально-типологических особенностей высшей нервной деятельности, определяющих специфику механизма и метаболизма действия препаратов, что, в свою очередь, может приводить к их передозировке, поскольку при выборе лекарственных средств и их эффективной дозы не учитываются индивидуальные свойства организма.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение эффективности применения лекарственных средств и безопасности терапии соматических нарушений в различных системах организма, в частности в системе крови.

Поставленная задача достигается техническим решением, представляющим собой способ терапии индивидуальных реакций системы крови при экспериментальных невротических воздействиях путем введения однократно внутрибрюшинно за 5 мин до невротического воздействия синаптотропного препарата резерпина в дозе 1 мг/кг хорошо обучаемым мышам, в дозе 2 мг/кг плохо обучаемым.

Новым в предлагаемом изобретении являются оптимально эффективные дозы резерпина 1 мг/кг для хорошо обучаемых мышей и 2 мг/кг для плохо обучаемых мышей.

На сегодняшний день не вызывает сомнений, что индивидуальная чувствительность к фармакологическим препаратам во многом определяет эффективность лекарственной терапии. Считается, что личностные особенности во многом могут объяснить ряд побочных эффектов лекарств либо их неэффективность [2]. С использованием инбредных животных доказан генетический контроль эффектов практически всех психофармакологических средств, в том числе алкоголя, наркотиков. Многие зависимые от биотрансформации различия в реакциях больных воспроизведены на животных, в результате чего появились экспериментальные модели, имитирующие тот или иной тип метаболизма [2]. Получены важные корреляции между особенностями фармакологического эффекта и фенотипом нейрохимических систем, его опосредующих.

Известна важная роль нейромедиаторных систем в регуляции гемопоэза. Существует возможность эффективного воздействия препаратов, действующих на ЦНС (резерпин, галоперидол, ципрогептадин, скополамин), на систему крови при экспериментальных неврозах [3].

В этой связи представляют интерес особенности действия лекарственных препаратов, в частности симпатолитика резерпина, на костномозговой гемопоэз хорошо и плохо обучаемых мышей, перенесших экспериментальные невротические воздействия. При этом факт применения препарата в разных дозах при одинаковой патологической ситуации с достижением нового результата: коррекции нарушений в системе крови с учетом особенностей высшей нервной деятельности, для специалиста является не очевидным.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Способ может быть использован для повышения эффективности лекарственной терапии в эксперименте и клинике. Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 250 штук, массой 20-22 г. Животные первой категории, конвенциональные линейные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Способ осуществляют следующим образом. Предварительно животных разделяют по итогам обучения условному питьевому навыку со сложной пространственной ориентировкой в Т-образном лабиринте в течение 2 дней по 2 побежки с интервалом в 1 ч. К группе хорошо обучаемых животных относят особей, у которых средние значения 4 побежек вертикальной активности равны или ниже 12 условных единиц, количества ошибок, совершаемых животным при поиске поилки, равны или ниже 12 условных единиц, времени достижения поилки равны или менее 100 с, времени неподвижности равны или менее 3 с и отсутствуют невротические реакции. Животных, у которых 60% и более этих показателей были выше данных показателей и присутствуют невротические реакции, относят к плохо обучаемым. Затем животным дают неделю отдохнуть, далее внутрибрюшинно однократно вводят резерпин в дозе 1 мг/кг хорошо обучаемым животным и в дозе 2 мг/кг плохо обучаемым, затем через 5 минут моделируют экспериментальный невроз (конфликтную ситуацию), на 1, 2, 4, 5 сут после которого исследуют показатели костного мозга и периферической крови.

Изучение общего количества лейкоцитов, содержания ретикулоцитов, подсчет лейкоцитарных формул проводят стандартными гематологическими методами [4]. Мазки крови фиксируют в метаноле в течение 3-5 минут и после высушивания окрашивают по Нохту-Максимову.

Для изучения клеточности костного мозга выделяют бедренную кость мыши, очищают ее от мягких тканей и промывают центральный канал 1 мл 3% раствора уксусной кислоты. Костный мозг суспендируют шприцем через иглы уменьшающегося диаметра. Общее количество миелокариоцитов подсчитывают в камере Горяева. Для приготовления мазков костного мозга содержимое бедренной кости выдавливают на обезжиренное стекло, затем разводят изологичной сывороткой и делают мазок с помощью шлифованного стекла. Высохшие мазки фиксируют в метаноле 3-5 минут и окрашивают азур II - эозином. Миелограмму подсчитывают на 400 клеток, после чего определяют абсолютное содержание клеточных элементов отдельных ростков гемопоэза [4].

Моделью невротического состояния являлась конфликтная ситуация [5].

Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием непараметрического U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Пример.

После типирования животных в Т-образном лабиринте у них моделируют конфликтную ситуацию, за 5 минут до которой животным вводят резерпин в дозах 1 и 2 мг/кг.

Предварительное введение резерпина неоднозначно влияет на костномозговое кроветворение хорошо обучаемых мышей, перенесших конфликтную ситуацию. Так, резерпин в дозе 1 мг/кг препятствует выраженному падению числа нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов и лимфоцитов в костном мозге на 1-е сут опыта (табл.1). Вследствие этого ОКК в опытной группе (с резерпином) возрастает и на 95% (Р<0,05) превосходит таковое в контрольной группе (без препарата), не уступая при этом клеточности костного мозга в интактном контроле. В дальнейшем симпатолитик в этой же дозе статистически достоверно уменьшает количество нейтрофильных (2, 5-е сут) и эозинофильных (2-е сут) гранулоцитов, лимфоцитов (5-е сут) и эритрокариоцитов (2, 4, 5-е сут), что приводит не только к отмене гиперплазии гемопоэза, но и к ингибиции гранулоцитарного (2, 5-е сут), лимфоидного (5-е сут) и эритроидного (2, 4, 5-е сут) ростков кроветворения. Влияние резерпина в дозе 2 мг/кг в этой группе животных было аналогично выявленному для дозы этого препарата 1 мг/кг, с той разницей, что изменения в системе крови были более выражены.

Введение резерпина в обеих исследованных дозах способствует снижению содержания лимфоцитов (2, 4, 5-е сут), эозинофилов (2, 5-е сут) и палочкоядерных нейтрофилов (2, 4, 5-е сут) в периферической крови хорошо обучаемых мышей в конфликтной ситуации (табл.2). В этих условиях выраженность и продолжительность лимфоцитоза уступает таковым в контрольной группе, отмечался дефицит палочкоядерных нейтрофилов и эозинофилов. В то же время число сегментоядерных нейтрофилов (4, 5-е сут) и ретикулоцитов (1, 2, 4, 5-е сут) возрастает, что способствует развитию ретикулоцитоза, превосходившего выявленный в конфликте без препарата (5-е сут), и нейтрофильного лейкоцитоза (4, 5-е сут) (табл.2, 3).

Таким образом, резерпин отменяет развитие гиперплазии кроветворения в группе хорошо обучаемых животных, перенесших конфликтную ситуацию, как в дозе 2 мг/кг, так и 1 мг/кг.

При действии резерпина в дозе 2 мг/кг наблюдается угнетение гемопоэза у плохо обучаемых мышей в условиях конфликтной ситуации, о чем свидетельствует снижение клеточности костного мозга на 1, 2, 5-е сут опыта (табл.4). В основе ингибирующего действия препарата в этой дозе лежит статистически достоверное уменьшение количества незрелых и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов (1, 5-е сут), эозинофилов (4, 5-е сут), лимфоцитов (1-5-е сут) и эритрокариоцитов (1, 5-е сут). Однако на 2-е сут исследования число нейтрофильных гранулоцитов в опытной группе возрастает почти до уровня интактного контроля. В то же время в этой группе животных резерпин в дозе 1 мг/кг достоверно не изменяет показатели костномозгового кроветворения (табл.4).

Введение симпатолитика в дозе 2 мг/кг отменяет нейтрофильный лейкоцитоз (1-е сут) и лимфоцитоз (2-е сут) в циркулирующей крови плохо обучаемых животных в условиях конфликтной ситуации (табл.5). На 5-е сут опыта содержание сегментоядерных нейтрофилов, напротив, возрастает. Препарат препятствует развитию ретикулоцитопении на 1, 2-е сут исследования и увеличивает выраженность ретикулоцитоза на 4, 5-е сут (в 2-1,5 раза) (табл.3). Достоверного изменения под влиянием резерпина в дозе 1 мг/кг показателей периферической крови при невротическом воздействии у плохо обучаемых мышей не наблюдается (табл.3, 5).

Итак, у плохо обучаемых особей в условиях конфликтной ситуации резерпин только в дозе 2 мг/кг влияет на динамику показателей костного мозга и периферической крови.

Предлагаемый способ позволяет снизить токсическое действие резерпина на ЦНС на фоне сохраненной способности препарата корригировать нарушения в системе крови.

Литература

1. Скурихин Е.Г. Суслов Н.И., Провалова Н.В., Минакова М.Ю., Зюзьков Г.Н., Дыгай A.M. О роли центральных адренергических структур в регуляции кроветворения в условиях экспериментальных невротических воздействий // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1999. - Т. 127, Приложение 1. - С.7-11.

2. Середенин С.Б., Вальдман Е.А. Генетико-биохимическое развитие проблемы индивидуальной чувствительности к лекарственным средствам // Эксперим. и клиническая фармакология. - 2003. - Т.66, №2. - С.57-59.

3. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Провалова Н.В. и др. Роль нервной системы в регуляции кроветворения. - Томск: Изд-во Том. Ун-та, 2004. - С.43-49, 84-111.

4. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск, 1992. - С.208.

5. Скурихин Е.Г. Механизмы регуляции кроветворения при экспериментальных неврозах. - Дис....докт. мед. наук. - 2004. - С.78.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и может быть использовано при нарушениях в системе крови при экспериментальных невротических воздействиях. Для этого предварительно по итогам обучения условному навыку животных разделяют на хорошо и плохо обучаемых. Затем за 5 мин до невротического воздействия однократно внутрибрюшинно вводят симпатолитик резерпин. При этом хорошо обучаемым мышам его вводят в дозе 1 мг/кг, а плохо обучаемым в дозе 2 мг/кг. Способ позволяет повысить эффективность применения резерпина и обеспечить безопасность терапии нарушений в системе крови за счет учета индивидуально-типологических особенностей высшей нервной деятельности, определяющих специфику механизма и метаболизма действия препарата. 5 табл.

Способ терапии нарушений в системе крови при экспериментальных невротических воздействиях путем введения однократно внутрибрюшинно за 5 мин до невротического воздействия симпатолитика резерпина, отличающийся тем, что предварительно по итогам обучения условному навыку животных разделяют на хорошо и плохо обучаемых, после чего резерпин вводят в дозе 1 мг/кг хорошо обучаемым мышам и в дозе 2 мг/кг плохо обучаемым.