СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА ИЗЪЯЗВЛЕНИЯ ТКАНЕЙ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ ПУТЕМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИДНОГО СОСТАВА ВЕНОЗНОЙ КРОВИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/92 

Область применения: медицина, экспериментальная фармакология.

В экспериментальной фармакологии для испытания препаратов с противоязвенной активностью рекомендовано проводить исследования на крысах линии Вистар, так как они обладают наименьшей устойчивостью к изъязвлению желудочно-кишечного тракта. Однако даже у крыс одной популяции, одного пола и возраста в одно и то же время года наклонность к изъязвлению разная.

В экспериментальной медицине оценка процессов язвообразования проводится путем измерения диаметра язвенного дефекта после забоя животных (Окабэ С., 1970). Однако визуальный контроль язвообразования в экспериментальных условиях связан с определенными трудностями. Визуальный контроль невозможно провести без наркотизирования, забоя животных и извлечения пораженного органа. На наш взгляд, представляется целесообразным перед началом экспериментов по определению противоязвенной активности препаратов выявлять животных с низким риском развития эрозивно-язвенных повреждений, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента. Это позволит получить более объективные данные о противоязвенной активности испытуемого препарата.

Кроме того, будут снижаться материальные затраты на приобретение и содержание лабораторных крыс.

Цель изобретения: улучшение прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта, позволяющее без забоя животных определять предрасположенность к изъязвлению.

Через 7 сут с момента моделирования на 21 крысе линии Вистар обоего пола ацетатной язвы по методу Окабэ С.(1970) извлекали желудок, рассекали по большой кривизне и визуально оценивали диаметр язвенного дефекта с последующим вычислением площади изъязвления. У 13 крыс площадь язвенного дефекта составляла 7,67±1,31 мм² (группа 1), у 9 крыс площадь язвенного дефекта составляла 25,67±4,22 мм² (группа 2). В крови из подключичной вены, полученной в исходном состоянии, у крыс 1-й группы по отношению ко 2-й методом тонкослойной хроматографии было выявлено: а) более высокое содержание фосфолипидов и холестерола; б) более низкое содержание эфиров холестерола (табл.1).

Таблица 1Липидный состав крови у подопытных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. Кровь из подключичной веныгруппа 1 (n=13)группа 2 (n=9)РФосфолипиды, %33,0±3,1425,67±1,80<0,05Холестерол, %22,92±1,9914,63±1,19<0,01Триглицериды, %12,64±1,5615,0±1,76>0,1Свободные жирные кислоты, %4,67±0,584,56±0,58>0,1Эфиры холестерола, %33,82±2,8041,5±2,32<0,05Общие липиды, г/л2,52±0,12,71±0,21>0,1Площадь изъязвления, мм²7,67±1,3125,67±4,22<0,001Р - достоверность различия между показателями в 1-й и 2-й группах.

Анализ липидного спектра у 53 интактных крыс подтвердил правомерность разделения крыс на 2 группы. На 53 крысах были выявлены те же особенности липидного состава плазмы крови в исходном состоянии, что и в подопытных группах (табл.2).

Таблица 2Липидный состав крови у интактных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. Кровь из подключичной веныгруппа I (n=33)группа II (n=20)РФосфолипиды, %28,03±1,5823,18±1,30<0,05Холестерол,%22,36±1,2215,53±0,87<0,001Триглицериды, %15,41±1,2816,35±1,26>0,1Свободные жирные кислоты, %5,89±0,554,56±0,41>0,1Эфиры холестерола, %33,04±2,3339,71±1,38<0,05Общие липиды, г/л2,51±0,072,53±0,12>0,1Р - достоверность различия между показателями в I и II группах.

Примеры конкретного выполнения экспериментов из подопытной серии.

Опыт 1.

Половозрелого самца массой 240 г, находящегося на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil. [1]. (см. таблицу 3).

Таблица 3Фракции липидов в исходном состоянииФЛ, %ХС, %ТГ,%ЖК, %ЭХС, %ОЛ, г/л352284312,31

Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×2 мм, что позволяет отнести животное к 1-й группе с низким риском изъязвления.

Опыт 2.

Половозрелую самку массой 190 г, находящуюся на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil [1] (см. таблицу 4).

Таблица 4Фракции липидов в исходном состоянииФЛ, %ХС, %ТГ, %ЖК, %ЭХС, %ОЛ, г/л2713185373,52

Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×4 мм, что позволяет отнести животное ко 2-й группе с высоким риском изъязвления.

Выявленные закономерности соответствия характера липидного спектра и степени предрасположенности к изъязвлению отмечались у 18 из 21 подопытных крыс. У 3 животных эта закономерность не прослеживалась.

1) Половозрелый самец, масса животного 230 г.

Таблица 5Фракции липидов в исходном состоянииФЛ, %ХС, %ТГ, %ЖК, %ЭХС, %ОЛ, г/л338195353,52

Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм².

2) Половозрелая самка, масса животного 200 г.

Таблица 6Фракции липидов в исходном состоянииФЛ, %ХС, %ТГ, %ЖК, %ЭХС, %ОЛ, г/л17102210413,2

Площадь язвенного дефекта желудка 4 мм².

3) Половозрелый самец, масса животного 220 г.

Таблица 7Фракции липидов в исходном состоянииФЛ,%ХС,%ТГ,%ЖК,%ЭХС,%ОЛ, г/л3232112233,2

Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм².

Таким образом, по липидному составу венозной крови можно прогнозировать риск изъязвления тканей желудочно-кишечного тракта. При низком содержании холестерола и фосфолипидов и высоком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта большей площади (25,67±4,22 мм²), что свидетельствовало о более высоком риске изъязвления. При высоком содержании холестерола и фосфолипидов и низком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта меньшей площади (7,67±1,31 мм²), что свидетельствовало о более низком риске изъязвления.

Источники информации

1. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2х ч. - М.: Мир, 1980. - 621с.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для осуществления способа прогнозирования риска изъязвлениия тканей гастродуоденальной зоны определяют липидный состав плазмы крови. При этом высокий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 23,18±1,30%, холестерола 15,53±0,87%, эфиров холестерола 39,71±1,38%. Низкий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 28,03±1,58%, холестерола 22,36±1,22%, эфиров холестерола 33,04±2,33%. Использование изобретения позволяет выявлять животных с низким риском возникновения эрозивно-язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента по определению противоязвенной активности испытуемых препаратов. Испытания препаратов с противоульцерогенной активностью рекомендуется проводить на крысах, предрасположенных к изъязвлению, что позволяет более объективно оценивать противоульцерогенную активность тестируемых препаратов. 7 табл.

Способ прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта в эксперименте, отличающийся тем, что определяют липидный состав плазмы крови, при этом высокий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (23,18±1,30)%, холестерола (15,53±0,87)%, эфиров холестерола (39,71±1,38)%, а низкий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (28,03±1,58)%, холестерола (22,36±1,22)%, эфиров холестерола (33,04±2,33)%.