СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ БЫСТРОГО РОСТА ЛЕЙОМИОМЫ МАТКИ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования роста лейомиомы матки.

Актуальность изобретения определяется тем, что лейомиома матки является самым частым заболеванием у женщин репродуктивного возраста, встречаясь, по данным различных авторов, у 10-30% женщин. Быстрый рост лейомиомы является показанием к оперативному вмешательству, при этом в 50% случаев проведение радикальной операции приводит к полной утрате репродуктивной функции женщин, выраженным гормональным нарушениям, вегетососудистым и психоэмоциональным расстройствам (Васильченко Н.П., Фириченко В.И. Лечение больных миомой матки и его эффективность. // Акушерство и гинекология. - 1990. - № 2. - С.7-9). Так как в настоящее время разрабатываются принципиально новые средства консервативной терапии лейомиомы матки, то своевременное прогнозирование роста опухоли позволит выбрать врачу оптимальный метод лечения.

Ранее был предложен способ прогнозирования роста миомы матки, заключающийся в том, что в тканях миоматозных узлов, получаемых методом трансцервикальной пункционной биопсии, иммуногистохимическим методом предлагается определять плотность и интенсивность окрашивания рецепторов к прогестерону и при увеличении этих показателей прогнозируется рост миомы в течение года (Ichimura Т., Kawamura N., Ito F., Shibata S., Munakuchi K., Tsujimura A., Umesaki N., Ogita S. Correlation between the growth of uterine leiomyoma and estrogen and progesterone receptors in needle biopsy speciments // Fertil. Steril. - 1998. - v.70. - p.967-971).

Однако этот метод имеет ряд недостатков:

- метод является высокоинвазивным;

- иммуногистохимические исследования характеризуются низкой воспроизводимостью результатов, связанной с погрешностями при приготовлении срезов, неоднородным по интенсивности окрашивания тканей, особенностями используемых антител и субъективной оценкой результатов (Иммунологические методы / под. ред. Фримеля Г. - М.: Мир, 1987. - 472 с.);

- отсутствуют данные о точности способа.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования роста лейомиомы матки, заключающийся в том, что в периферической крови определяют относительное содержание CD38+ лимфоцитов и при значениях, равных или больших 23%, прогнозируют быстрый рост миомы матки в течение года с точностью 75,8%.

Данный способ был выбран в качестве прототипа. Однако он имеет недостаток:

- относительно низкая точность (75,8), чувствительность (71%), специфичность (81%) способа.

Указанный недостаток предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови женщин с лейомиомой матки определяют относительное количество IL-8+ моноцитов и при значении этого показателя, равного 63% или более, прогнозируют быстрый рост миомы в течение года с точностью 91,7%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать быстрый рост лейомиомы матки по определению относительного содержания IL-8+ моноцитов в периферической крови.

Ранее показатель содержания моноцитов, синтезирующих внутриклеточно IL-8, определяли у уремических больных перед диализом, при этом отмечали снижение уровня IL-8-позитивных моноцитов (Ando M., Shibuya A., Tsuchiya К., Akiba Т., Nitta К. Reduced capacity of mononuclear cells to synthesize cytokines against an inflammatory stimulus in uremic patients // Nephron Clin. Pract. - 2006. - Vol.104. - № 3. - Р.113-119). Кроме того, есть данные о повышении количества перитонеальных фагоцитов, продуцирующих внутриклеточно IL-8 у больных с аденосаркомой желудка и аденокарциномой прямой кишки (Olszewski W.L., Kubicka U., Tarnowski W., Bielecki K., Ziolkowska A., Wesolowska A. Activation of human peritoneal immune cells in early stages of gastric and colon cancer // Surgery. - 2007. - Vol.141. - № 2. - P.212-21) и об усилении продукции IL-8 периферическими моноцитами в ответ на инфицирование Bartonella henselae (McCord A.M., Resto-Ruiz S.I., Anderson B.E. Autocrine role for interleukin-8 in Bartonella henselae-induced angiogenesis // Infect Immun. - 2006. - Vol.74. - № 9. - Р.5185-5190). Для прогнозирования темпа роста лейомиомы матки этот показатель ранее не применяли.

Известно, что IL-8 относится к классу СХС-хемокинов, регулирующих активность фагоцитарных клеток и непосредственно участвующих в процессах неоваскуляризации (Koch A.E., Polverini P.J., Kunkel S.L., Harlow L.A., Di Pietro L.A., Einer V.M., e.a. Interleukin-8 as a macrophage-derived mediator of angiogenesis. // Science. - 1992. - V.258. - P.1798-1801). Ранее было показано изменение уровня продукции IL-8 непосредственно в ткани лейомиомы и усилении экспрессии в опухоли рецепторов к IL-8 (Sozen I., Arachi A., Senturk L., Gutierrez L. Interleukin 8 production and interleukin 8 receptor expression in human myometrium and leiomyoma // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2001. - Vol.184. - N4. - P.559-566). По-видимому, обнаруженное усиление системной продукции IL-8 в сочетании с высоким уровнем его рецепции в ткани самой лейомиомы является одним из важных факторов, обеспечивающих быстрое увеличение размеров опухоли.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом.

1) К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию мононуклеарных клеток стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в течение 40 минут.

2) Суспензию мононуклеарных клеток дважды отмывают физраствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶ кл/мл. Затем проводят процедуру внутриклеточного окрашивания клеток с использованием набора для пермеабилизации клеточной мембраны FIX & PERM cell permeabilization kit (CALTAG Laboratories, США) и моноклональных антител к IL-8 (R&D Systems, USA) в соответствии с инструкциями фирмы-производителя. Для этого к 50 мкл клеточной суспензии добавляют 100 мкл фиксирующего буфера А из набора FIX & PERM cell permeabilization kit и инкубируют клетки в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте. Далее клетки отмывают от фиксирующего буфера и добавляют 100 мкл пермеабилизирующего буфера В и 2 мкл моноклональных антител к IL-8, меченных фикоэритрином. Клетки инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix™ (BD Biosciences, Belgium).

3) Определяют относительное количество IL-8+ клеток в моноцитарном гейте на проточном цитометре.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью (91,7%) прогнозировать темп роста лейомиомы матки в течение года.

Отличительными признаками способа являются:

установлен прогностический параметр относительного содержания IL-8+ моноцитов при значении которого 63% или более прогнозируют быстрый рост лейомиомы.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Больная А. 37 лет. Наблюдается в женской консультации по поводу лейомиомы матки малых размеров 6-7 недель в течение 4 лет. Жалобы у больной на длительные менструации до 7 дней. В анамнезе 1 своевременные роды без осложнений, 2 мед. аборта без осложнений. Контрацепция: ВМС в течение 5 лет. ВМС удалена 2 года назад. В настоящее время контрацепция барьерными методами. При влагалищном исследовании шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 6-7 недель беременности с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются, своды свободные.

По данным УЗИ: тело матки размерами 58×68×65 мм неоднородной структуры. На передней стенке низкоинтрамуральный узел - 28 мм. Полость матки не деформирована. М-эхо 8 мм. Правый яичник - 35×28 мм, левый яичник - 30×27 мм. Анализ крови: НЬ - 114 г/л, эритроциты - 4,5 Т/л, ЦП - 0,9, лейкоциты - 7,4 Г/л, эозинофилы - 2%, сегментоядерные нейтрофилы - 63%, моноциты - 3%, лимфоциты - 32%, СОЭ - 15 мм/ч.

Клинический диагноз: интрамурально-субсерозная лейомиома матки малых размеров.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания IL-8+ моноцитов в периферической крови составил 30,4%, что ниже заявляемого параметра (63%).

Заключение: прогнозируется отсутствие роста лейомиомы матки в течение года.

При повторном осмотре через 1 год больная жалоб не предъявляла, гинекологический статус больной тот же (подтвержден данными УЗИ).

Пример 2. Больная М., 41 г. Обратилась в женскую консультацию с жалобами на обильные менструации. В анамнезе 3 своевременных родов, 2 мед. аборта без осложнений. ВМС - 7 лет, удалена 1 год назад. При влагалищном исследовании - шейка матки без дефектов слизистой, тело матки увеличено до 8 недель беременности, плотное, подвижное, безболезненное. Придатки не определяются.

По данным УЗС: тело матки неоднородной структуры 78×85×81 мм, на задней стенке узел 23 мм, правый яичник 36×18 мм, левый яичник 33×12 мм, оба яичника обычной структуры.

Анализ крови: НЬ - 110 г/л, эритроциты - 3,8 Т/л, ЦП - 0,9, лейкоциты - 6,3 Г/л, палочкоядерные нейтрофилы - 3%, сегментоядерные нейтрофилы - 67%, моноциты - 5%, лимфоциты - 27%, СОЭ - 10 мм/ч.

Клинический диагноз: интрамурально-субсерозная лейомиома матки, гиперполименорея.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания IL-8+ моноцитов в периферической крови составил 81,9%, что выше заявляемого параметра (63%).

Заключение: прогнозируется быстрый рост лейомиомы матки в течение года.

При обращении через 1 год больная предъявляет жалобы на слабость, обильные менструации, головокружение, боли внизу живота. При осмотре: шейка матки без дефектов слизистой, тело матки до 13 недель беременности, подвижное, плотное, безболезненное, структура бугристая за счет интрамурально-субсерозных узлов. Придатки не пальпируются. Данные УЗИ: тело матки 125×87×96 мм с несколькими интрамурально-субсерозными узлами, наибольшие - в области дна - 69 мм, на задней стенке - 43 мм, правый яичник 36×23 мм, левый яичник 35×18 мм. Оба яичника нормальной структуры. Анализ крови: НЬ - 95 г/л. Клинический диагноз: интрамурально-субсерозная лейомиома матки больших размеров, быстрый рост опухоли. Гиперполименорея, анемия 1 степени.

Больная направлена в стационар на обследование и оперативное лечение. То есть прогноз быстрого роста лейомиомы по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Больная С., 43 года. Наблюдается в женской консультации 2 года с лейомиомой небольших размеров - 7 недель. У больной жалобы на обильные длительные менструации, слабость. В анамнезе 2 своевременных родов, 2 мед. аборта без осложнений. ВМС в течение 6 лет, удалена 3 года назад. Контрацепция в настоящее время барьерными методами. При влагалищном исследовании: шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 7 недель беременности с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная. Придатки не пальпируются. Своды свободные.

По данным УЗИ: тело матки 73×69×75 мм, М-эхо 7 мм, полость не деформирована, на передней стенке узел - 18 мм, правый яичник 36×27, левый яичник 35×29 мм.

Анализ крови: НЬ - 105 г/л, эритроциты - 32 т/л, ЦП - 0,85, лейкоциты - 6,6 Г/л, сегментоядерные нейтрофилы 55%, моноциты 3%, лимфоциты 42%, СОЭ - 16 мм/ч.

Клинический диагноз: интрамуральная лейомиома матки малых размеров, гиперполименорея, анемия 1 степени.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель относительного содержания IL-8+ моноцитов в периферической крови составил 63,3%.

Заключение: прогнозируется быстрый рост лейомиомы матки в течение года.

При обращении больной через год жалобы прежние. При осмотре шейка матки без дефектов слизистой, матка увеличена до 12 недель беременности с неровной поверхностью, плотная, подвижная, безболезненная, придатки не определяются.

Данные УЗИ: тело матки 112×84×120 мм неоднородной структуры с несколькими интрамурально-субсерозными узлами, наибольшие - на передней стенке 67 мм и 49 мм, на задней стенке 55 мм, М-эхо 10 мм, правый яичник 38×30 мм, левый яичник 35×28 мм. В анализе крови - НЬ - 96 г/л.

Клинический диагноз: интрамурально-субсерозная лейомиома матки, быстрый рост. Гиперполименорея, анемия 1 степени.

Таким образом, прогноз быстрого роста лейомиомы по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 24 женщины с лейомиомой матки.

Данные исследований приведены в таблице.

ТаблицаПоказательКоличество обследованныхВсего женщин24истинноположительный результат14ложноположительный результат0истинноотрицательный результат8ложноотрицательный результат2Итого: точность заявляемого способа - 91,7%чувствительность заявляемого способа - 87,5%специфичность заявляемого способа - 100%

Преимущества заявляемого способа:

1) высокая точность - 91,7%, чувствительность - 87,5%, специфичность 100%;

2) хорошая воспроизводимость метода;

3) простота и доступность выполнения методики.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и касается способа прогнозирования быстрого роста лейомиомы матки. Способ заключается в том, что в периферической крови женщин с лейомиомой матки определяют относительное количество IL-8+ моноцитов и при значениях этого показателя 63% или более прогнозируют быстрый рост опухоли в течение года. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования роста лейомиомы матки. 1 табл.

Способ прогнозирования быстрого роста лейомиомы матки путем иммунологического исследования периферической венозной крови, отличающийся тем, что определяют относительное содержание IL-8+ моноцитов и при его значениях, равных 63% или больших, прогнозируют быстрый рост лейомиомы матки в течение года.