СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ (ЭКО) У ПАЦИЕНТОК С АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ Российский патент 2009 года по МПК A61B10/00 G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно акушерству.

Исторически новое направление в лечении бесплодия - экстракорпоральное оплодотворение яйцеклетки и перенос эмбриона (ЭКО и ПЭ) возникло в 1978 г. в Англии. Метод был разработан Р.Эдвардсом и П.Стептоу и назван in vitro fertilization and embryo transfer. В России этот метод впервые был внедрен в 1985 г. в НИИ акушерства и гинекологии МЗ СССР под руководством Б.В.Леонова и В.И.Кулакова.

Частота наступления беременности после ЭКО, по данным всемирного регистра, составляет около 20%. Однако есть страны и центры, в которых этот показатель превышает 30%. По частоте наступления беременности в программе ЭКО результаты в ведущих центрах России практически не отличаются от европейских (26,2%).

Поэтому в повседневной работе врача-репродуктолога необходимо иметь недорогой, эффективный и желательно неинвазивный метод, определяющий вероятность наступления беременности и целесообразность применения методов ВРТ (вспомогательных репродуктивных технологий) у каждой женщины.

Уровень техники.

Аналоги. Существуют методики оценки овариального резерва у конкретной пациентки, позволяющие делать вывод о перспективах ответа яичников на гормональную стимуляцию. В основе этих методов лежит определение базального уровня ФСГ (фолликулостимулирующего гормона), тест с нагрузкой кломифенцитратом, уровень ингибина В, а также оценка объема яичников и количества фолликулов с помощью трансвагинального ультразвукового исследования [1, 3, 4, 7].

Прототип.

Известна прогностическая модель эффективности ЭКО, использующая показатели уровня цитокинов в фолликулярной жидкости, а также показателей иммунного статуса и фертилизации ооцитов у женщин на пике стимулированной суперовуляции [5], однако лабораторную оценку уровня цитокинов в фолликулярной жидкости пока еще нельзя признать доступной для широкого использования. К тому же, данные модели применимы уже в проводимом цикле ЭКО, а не на этапе подготовки.

Исследования последних лет выявили отчетливую связь между развитием аутоиммунных процессов в организме человека и репродуктивными неудачами в виде бесплодия, невынашивания беременности, неблагоприятного исхода программ ЭКО. Инфекционные процессы в органах репродукции, инвазивные манипуляции (оперативные вмешательства на матке и придатках) инициируют возникновение аутоиммунных реакций, направленных на органы и ткани репродуктивной системы.

К повышению титров аутоантител предрасполагают стресс, беременность, возрастной фактор и многие заболевания. Известно, что аутоиммунные процессы играют важную роль в т.н. синдроме репродуктивных потерь (Reproductive failure syndrome), к которому относятся эндометриоз, бесплодие неясной этиологии и спонтанные аборты в результате лечения бесплодия.

В успехе программы экстракорпорального оплодотворения особое значение имеет иммунологическая реактивность организма женщины, от состояния которой зависит имплантация перенесенных в полость матки эмбрионов и нормальное развитие беременности. Учитывая влияние аутоиммунных процессов на успех программ ЭКО, представляется важным прогнозировать результаты применения дорогостоящих технологий у пациенток, страдающих аутоиммунными заболеваниями.

Сущность изобретения.

Целью изобретения является прогнозирование конечных результатов применения экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса эмбриона в полость матки (ПЭ), т.е. наступление или отсутствие беременности у женщин, страдающих аутоиммунными заболеваниями на этапе подготовки к беременности.

Поставленная цель достигается с помощью вычисления прогностического индекса, что позволяет сделать вывод о целесообразности проведения ЭКО на данном этапе.

Данный способ прогнозирования применим к пациенткам с аутоиммунными заболеваниями (аутоиммунный тиреоидит, антифосфолипидный синдром и др.).

Способ осуществляется следующим образом: при изучении акушерско-гинекологического анамнеза уточняют наличие хронического аднексита.

Проводят гистотипирование по системе HLA: определяют HLA-антигены I класса у женщины. Для этого проводят забор 5 мл венозной крови натощак утром.

Лимфоциты выделяют в градиенте плотности фиколл-верографина. Для типирования HLA-антигенов I класса используют мононуклеары, полученные из периферической крови с помощью градиентного центрифугирования. Лимфоциты, используемые в реакциях серологического типирования, должны быть жизнеспособны.

Реакция учитывается под микроскопом по проценту лизиса клеток: негативная реакция (лизировано менее 10% клеток), сомнительная (лизировано от 11 до 20% клеток), слабо позитивная (лизировано от 21 до 50% клеток), позитивная (лизировано от 51 до 80% клеток), сильно позитивная (лизировано 81% и более клеток) [6].

В результате, после проведения реакции определяют фенотип человека по I классу HLA-антигенов, состоящий из 6 антигенов, по два аллеля на каждом локусе: А, В, Cw. В данном способе учитывают наличие в фенотипе женщины следующих HLA-антигенов: В 18, Cw3, Cw4.

Далее проводят определение количества тромбоцитов в крови фазово-контрастным методом (G.Brecher et al., 1953) с использованием микроскопа "Standart-20" (Германия) [2].

На основании полученных данных вычисляют прогностический индекс F по формуле:

F=1,4×X1-1,3×X2-2,4×X3-2,1×X4+0,019×X5-2,5;

где X1 - наличие в фенотипе женщины HLA-антигена В 18;

Х2 - наличие в фенотипе женщины HLA-антигена Cw3;

Х3 - наличие в фенотипе женщины HLA-антигена Cw4;

Х4 - наличие в анамнезе аднексита;

Х5 - количество тромбоцитов в коагулогоамме (10⁹/л).

При значениях F>0, прогнозируют удачный исход проведения ЭКО и ПЭ; при F<0, судят о нецелесообразности проведения ЭКО на данном этапе в связи с предполагаемым отсутствием положительного результата ЭКО.

Вероятность правильного распределения пациенток по группам составляет 100%.

Пример 1. Пациентка Кутдусова B.C., 35 лет.

Диагноз: Бесплодие II (сочетанного генеза). Спаечный процесс органов малого таза III-IV ст. Аденомиоз. Иммунодепрессия по HLA.

Соматические заболевания: Нефроптоз справа I ст. НЦД по гипотоническому типу. Хронический тонзиллит, стадия ремиссии. Диффузный узловой зоб I ст.

Гинекологический анамнез отягощен: хроническим аднекситом с 24 лет, привычным невынашиванием (с 1997 по 2001 гг. 5 самопроизвольных выкидышей в сроках 5-7 недель, 1 регрессирующая беременность в сроке 5 недель). С 2001 по 2004 гг. - вторичное бесплодие сочетанного генеза.

В 2003 г. установлен диагноз: АФС.

Гистотипирование по HLA:

HLA-фенотип: А 2, -; В 18, 51; Cw2

Количество тромбоцитов в коагулограмме - 232,0·10⁹/л.

Попытка ЭКО и ПЭ - первая.

При вычислении прогностического индекса по формуле:

F(x)=1,4×1-1,3×0-2,4×0-2,1×1+0,019×232-2,5=1,208

получено значение F=1,208, что >0, следовательно, у пациентки прогнозируют положительный результат данной попытки ЭКО и ПЭ.

Проведена процедура ЭКО и ПЭ, перенесено 4 эмбриона хорошего качества, зарегистрирована маточная беременность 1 плодом.

Пример 2. Пациентка Галимова Р.Д., 33 лет.

Диагноз: Бесплодие II абсолютно трубного генеза.

Соматические заболевания: Миопия II ст. Ортостатическая протеинурия. Аутоиммунный тиреоидит. Узловой зоб, компенсация.

Гинекологический анамнез отягощен: хроническим аднекситом с 24 лет, в 1999 г. и 2003 г. - тубэктомии (левосторонняя и правосторонняя) в связи с внематочными беременностями. С 2003 г. - вторичное бесплодие абсолютно трубного генеза.

Гистотипирование по HLA:

HLA-фенотип: А 10, -; В 27, 35; Cw4

Количество тромбоцитов в коагулограмме - 185,0·10⁹/л.

Попытка ЭКО и ПЭ - первая.

При вычислении прогностического индекса по формуле:

F(x)=1,4×0-1,3×0-2,4×1-2,1×1+0,019×185-2,5=-3,485

получено значение F=-3,485, что <0, следовательно, проведение ЭКО на данном этапе нецелесообразно.

Однако пациентка настояла на проведении процедуры ЭКО и ПЭ (перенесено 4 эмбриона хорошего качества), беременности не зарегистрировано.

Пример 3. Ольховская Е.А., 36 лет.

Диагноз: Бесплодие II абсолютно трубного генеза.

Соматические заболевания: Хронический бронхит, ремиссия. НЦЦ по гипертоническому типу. Субатрофический фарингит. Миопия II степени. Нарушение жирового обмена I степени. Узловой зоб.

С 2001 г. установлен диагноз: АФС.

Гинекологический анамнез отягощен: хроническим аднекситом с 22 лет, в 1987 г. - медицинский аборт в сроке 8 недель, в 1993 г. - сочетание левосторонней внематочной беременности с регрессирующей маточной беременностью (удалены обе маточные трубы, проведено выскабливание полости матки), послеоперационный период осложнился эндометритом.

С 1993 г. - вторичное бесплодие абсолютно трубного генеза.

С 1993 г. по 2003 г. - проведено 9 попыток ЭКО и ПЭ, беременностей не зарегистрировано.

Гистотипирование по HLA:

HLA-фенотип: А 1, 8; В 8, -; Cw2

Количество тромбоцитов в коагулограмме - 208,0·10⁹/л.

Попытка ЭКО и ПЭ - десятая.

При вычислении прогностического индекса по формуле:

F(x)=1,4×0-1,3×0-2,4×0-2,1×1+0,019×208-2,5=-0,648

получено значение F=-0,648, что <0, следовательно, прогнозируют нецелесообразность проведения ЭКО на данном этапе.

Однако пациентка настояла на проведении очередной процедуры ЭКО и ПЭ (перенесено 6 эмбрионов хорошего качества), беременности не зарегистрировано.

Пример 4. Жукова Н.В., 30 лет.

Диагноз: Бесплодие I неясного генеза (11 лет).

Соматические заболевания: Хронический холецистит, ремиссия. НЦД по гипертоническому типу. АИТ, эутиреоз.

Гинекологический анамнез отягощен: хроническим аднекситом с 19 лет, генитальным эндометриозом легкой степени тяжести, аденомиозом I степени.

Гистотипирование по HLA:

HLA-фенотип: А 25, -; В 16, 18; Cw2

Количество тромбоцитов в коагулограмме - 236,0·10⁹/л.

Попытка ЭКО и ПЭ - первая.

При вычислении прогностического индекса по формуле:

F(x)=1,4×1-1,3×0-2,4×0-2,1×1+0,019×236-2,5=2,684

получено значение F=2,684, что >0, следовательно, в данном случае прогнозируют положительный результат ЭКО.

После проведения ЭКО и ПЭ, зарегистрирована маточная беременность 1 плодом.

Таким образом, данный способ позволяет избежать ненужных попыток ЭКО, а следовательно, и финансовых затрат на проведение процедуры и в конечном счете улучшить результативность ЭКО за счет более точного отбора пациенток на этапе планирования беременности.

Источники информации

1. К.Ю.Боярский. Функциональные тесты, определяющие овариальный резерв, и вспомогательные репродуктивные технологии // Проблемы репродукции. - 1998. - №3. - с.36-39.

2. Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики системы гемостаза. М.: Ньюдиамед-АО, 1999. 224 с.

3. Т.А.Назаренко, Н.Г.Мишиева, Н.Г.Соловьева, Н.Д.Фанченко, С.М.Муллабаева, Н.А.Ревишвили. Ингибин В как маркер овариального резерва у женщин с различными формами бесплодия // Проблемы репродукции. - 2004. - №5. - с.93.

4. Т.А.Назаренко, Н.Г.Мишиева, Н.Д.Фанченко, Н.Г.Соловьева, С.М.Муллабаева, Н.А., Н.Ю.Белоусова. Значение оценки овариального резерва в лечении бесплодия у женщин старшего репродуктивного возраста // Проблемы репродукции. - 2005. - №2. - с.56-59.

5. А.А.Останин, Б.И.Айзикович, И.В.Айзикович, Е.Р.Черных. Прогностическая модель оценки эффективности лечения бесплодия с помощью ЭКО // Проблемы репродукции. - 2006. - №4. - с.63-69.

6. Теплова С.Н. Антигенные системы эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов / С.Н.Теплова. - Челябинск. - 2000, - 111 с.

7. Creus М., Penarrubia J., Fabregeus F. et al. Day 3 serum inhibin В and FSH and age as predictors of assisted reproduction treatment outcome // Hum. Reprod. - 2000. - Vol.15. - P.2341-2346.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и педиатрии, и может использоваться для прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) у пациенток с аутоиммунными заболеваниями. Способ обеспечивает при прогнозе 100% распределение пациенток по группам удачного или неудачного исхода проведения ЭКО. У женщины устанавливают наличие в анамнезе аднексита, наличие в фенотипе HLA-антигенов В 18, Cw3, Cw4 и количество тромбоцитов в коагулограмме. Вычисляют прогностический индекс F по следующей формуле: F=1,4×X1-1,3×X2-2,4×X3-2,1×X4+0,019×X5-2,5; где X1 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена В 18 (1, либо 0); Х2 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw3 (1, либо 0); Х3 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw4 (1, либо 0); Х4 - наличие (либо отсутствие) в анамнезе аднексита (1, либо 0); Х5 - количество тромбоцитов в коагулограмме (10⁹/л). Если F больше 0, прогнозируют удачный исход проведения ЭКО и ПЭ; при значениях F меньше 0, судят о нецелесообразности проведения ЭКО на данном этапе в связи с предполагаемым отсутствием положительного результата ЭКО.

Способ прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) у пациенток с аутоиммунными заболеваниями, отличающийся тем, что у женщины устанавливают наличие в анамнезе аднексита, определяют наличие в фенотипе HLA-антигенов В 18, Cw3, Cw4 и количество тромбоцитов в коагулограмме и вычисляют прогностический индекс F по формуле

F=1,4×X1-1,3×X2-2,4×X3-2,1×X4+0,019×X5-2,5,

где X1 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена В 18(1, либо 0);

Х2 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw3 (1, либо 0);

Х3 - наличие (либо отсутствие) в фенотипе женщины HLA-антигена Cw4 (1, либо 0);

Х4 - наличие (либо отсутствие) в анамнезе аднексита (1, либо 0);

Х5 - количество тромбоцитов в коагулограмме (10⁹/л);

и если F больше 0, прогнозируют удачный исход проведения ЭКО и ПЭ, а при значениях F меньше 0 судят о нецелесообразности проведения ЭКО на данном этапе.