Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при астенозооспермии Российский патент 2023 года по МПК G01N33/50 A61B5/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к области клинико-лабораторной диагностики, репродуктологии и эмбриологии, целью которого является прогнозирование уровня бластуляции получаемых эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и оптимизация проводимого лечения бесплодия у пациенток методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

В настоящее время проблема бесплодия приобретает не только медицинское, но и социально-демографическое значение. Необходимость в применении ВРТ непрерывно растет, однако частота наступления беременности при лечении методом экстракорпорального оплодотворения не превышает 38,5% в расчете на перенос эмбриона [1].

В связи с этим поиск методов повышения эффективности ВРТ является актуальной задачей современной репродуктивной медицины, а результативность программ ЭКО зависит не только от рецептивности эндометрия, но и от количества получаемых эмбрионов хорошего качества[2]. Несмотря на соблюдение асептических условий при работе с половыми клетками и эмбрионами человека на эмбриологическом этапе в ряде случаев возможна бактериальная контаминация культуральных сред, что в свою очередь может привести к остановке развития эмбрионов [12]. Одной из основных причин бактериальной контаминации является эякулят. При подготовке мужчин к ВРТ обязательным является исследование соскоба уретры (или эякулята) на ИППП, что, безусловно, не позволяет полноценно оценить другие микроорганизмы, вероятно являющиеся причиной стертых форм воспалительного процесса урогенитального тракта (УГТ) и неудачных протоколов ВРТ. Возможность прогнозировать количество получаемых эмбрионов хорошего качества на основании оценки микробного состава эякулята позволит оптимизировать подготовку пациентов к проведению ВРТ. Ранее было показано, что бактериоспермия ассоциирована с получением меньшего количества эмбрионов хорошего качества и снижением клинических беременностей, и присутствие бактерий в сперме в количестве более 10³ КОЕ/мл ассоциировано со снижением подвижности сперматозоидов (астенозооспермия)[3].

В настоящее время ведется поиск и апробация маркеров имплантационного потенциала эмбрионов, которые позволяют анализировать метаболомный, протеомный, транскриптомный статусы фолликулярной жидкости и культуральных сред, в которых культивируются эмбрионы [4, 5, 6, 7]. Влияние мужского фактора на эффективность ВРТ и в частности влияние микроорганизмов эякулята является недостаточно изученным вопросом.

Поиск дополнительных маркеров, позволяющих повысить эффективность проводимого лечения у конкретной пары, остается важнейшей задачей репродуктологии.

С точки зрения этапности подготовки пары к ВРТ представляется перспективным поиск взаимосвязи между микробиологическими показателями эякулята и эффективностью эмбриологического этапа.

Аналогами прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества с учетом микробного состава эякулята явились:

1. Способ прогнозирования эффективности программ ЭКО при трубно-перитонеальном бесплодии, ассоциированном с хроническим эндометритом (пат. РФ №RU2 677 467 С1, 2017) [8]. При концентрации в сыворотке крови лактоферрина до 1,8 мкг/мл и ИЛ-8 до 10 пкг/мл или изолированном повышении концентрации лактоферрина до 2,5 мкг/мл при уровне ИЛ-8 до 10 пкг/мл прогнозируют высокую вероятность положительного результата ЭКО и переносят в полость матки свежий эмбрион.

Недостатки метода. При использовании метода не учитываются анамнестические данные мужчины, не проводится оценка микробного состава эякулята за исключением обследования на ИППП. При использовании метода не указаны чувствительность и специфичность.

2. Способ прогнозирования исхода программы ЭКО и переноса эмбрионов (пат. РФ №RU2581027, 2015) [9]. При концентрации антимюллерова гормона в венозной крови менее 1,14 нг/мл и высоком уровне (более 45) тревожности по Спилбергу-Ханну прогнозируют неблагоприятный исход программы ЭКО для данной женщины.

Недостатки метода. При использовании метода При использовании метода не учитываются анамнестические данные мужчины и данные о микробном составе эякулята. Не приведены данные о расчете специфичности и чувствительности метода определения уровня тревожности, сам метод определения уровня тревожности не исключает определенной доли субъективизма.

3. Способ прогноза результата экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) (пат. РФ №RU 2476142С1, 2011)[10]. На первом этапе прегравидарной подготовки у женщины собирают анамнестические данные, на втором этапе проводят гинекологическое ультразвуковое исследование, на третьем этапе выявляют носительство мутации метилентетрагидрофолатредуктазы (MTFHR) в позиции С677Т. Полученные данные вводят в формулу и рассчитывают индекс Р; в результате значения индекса Р более 0,11 прогнозируют неблагоприятный исход ЭКО и ПЭ, при значении индекса менее -0,21 судят о благоприятном исходе ЭКО и ПЭ.

Недостатки метода. При описании метода не учитываются данные о микробиологическом исследовании эякулята, используемого для оплодотворения. Метод неудобен для клинического применения, т.к. имеет несколько этапов исследования.

4. Способ прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) у пациенток с аутоиммунными заболеваниями (пат. РФ №RU2345715C2, 2006)[11]. У женщины устанавливают наличие в анамнезе аднексита, наличие в фенотипе HLA-антигенов В18, Cw3, Cw4, количество тромбоцитов в коагулограмме и рассчитывают прогностический индекс F. Если F больше 0, прогнозируют удачный исход проведения ЭКО, при значении F меньше 0 судят о нецелесообразности проведения ЭКО на данном этапе в связи предполагаемым отсутствием положительного результата ЭКО.

Недостатки метода. Метод может быть использован только у пациенток с аутоиммунными заболеваниями. Метод предполагает определение большого количества вариабельных показателей: В18, Cw3, Cw4, количество тромбоцитов, что является материально затратным для пациентов. Не указаны чувствительность и специфичность метода.

В литературе не встречается прототипа предлагаемого метода.

Таким образом, перед авторами была поставлена задача разработать эффективный способ прогнозирования получения эмбрионов хорошего и отличного качества в программах вспомогательных репродуктивных технологий при астенозооспермии.

Поставленная задача достигается путем комплексного исследования эякулята на этапе предгравидарной подготовки, включающее оценку параметров спермограммы по стандарту ВОЗ, и определение микробного состава эякулята с помощью количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью тест-системы Андрофлор (ООО «ДНК-Технология ТС», Москва).

Материал для исследования (0,5 мл нативного эякулята) собирали в день оплодотворения яйцеклеток в пробирку Эппендорф, содержащую 0,5 мл физиологического раствора. ДНК выделяли с использованием комплекта реагентов ПРОБА-ГС (ООО «ДНК-Технология ТС», Москва). ПЦР-РВ проводили согласно инструкции производителя. (https://www.dna-technology.ru/equipmentpr/nabory-reagentov-dlya-pcr-nabory-reagentov-dlya-vydeleniya-nukleinovyh-kislot-i-3).

Проводилось определение 24 показателей: общей бактериальной массы (ОБМ) образца и 23 групп микроорганизмов, из них 4 определяли качественно, 19 - количественно. Количества выявляемых микроорганизмов в образце выражали в геномэквивалентах на мл (ГЭ/мл). Образец заключения представлен на Фиг. 1.

Для обработки и анализа полученных данных использовалась компьютерная программа StatPlus:mac 8.0.3 (AnalystSoft, США).

В предлагаемом способе прогнозирования получения эмбрионов хорошего и отличного качества впервые в репродуктологии предложена уникальная формула для определения вероятности получения не менее 40% эмбрионов хорошего и отличного качества до начала программы ВРТ. Наличие не менее 40% эмбрионов 5 дня развития (бластоцист) хорошего и отличного качества согласно классификации Istanbul consensus workshop on embryo assessment является одним из индикаторов успешности проведения эмбриологического этапа ВРТ [13]. Таким образом, предлагаемый способ соответствует критерию «изобретательский уровень».

Для исследования мужчины, проходящие лечение методом ВРТ, собирали эякулят в стерильный контейнер в соответствии с рекомендациями ВОЗ по сбору эякулята для микробиологических исследований (пункт 2.2.4 Руководства ВОЗ)[14]. Анализ концентрации и подвижности сперматозоидов проводили с использованием анализатора Биола АФС-500 (НПФ «Биола», Москва). Морфологию сперматозоидов оценивали в окрашенных препаратах при ЮООх увеличении микроскопа с использованием иммерсионного объектива. Для подсчета пероксидазо-положительных лейкоцитов использовали тест Лейкоскрин.

Способ позволяет рассчитывать прогноз для случаев астензоооспермии. Критериям астенозооспермии соответствовали пробы со снижением общей (a+b+с) подвижности сперматозоидов (менее 40%) или прогрессивной (а+b) подвижности (менее 32%). Остальные параметры спермограммы соответствовали норме: объем эякулята - не менее 1,5 мл, концентрация сперматозоидов - не менее 15 млн/мл, количество сперматозоидов с нормальной морфологией - не менее 4%, рН 7,2, количество лейкоцитов -менее 1 млн/мл.

В исследование были включены 80 пациентов. В зависимости от количества сформировавшихся бластоцист хорошего и отличного качества на эмбриологическом этапе культивирования пациенты были разделены на 2 группы. В первую группу включены 34 пациента, у которых были получены не менее 40% бластоцист хорошего и отличного качества. Во вторую группу включены 46 пациентов, у которых сформировалось менее 40% бластоцист хорошего и отличного качества.

Для удобства оценки вероятности получения не менее 40% эмбрионов хорошего и отличного качества для пар, в которых параметры спермограммы у мужчины соответствовали критериям астенозооспермии, нами был разработан способ прогнозирования с расчетом прогностического индекса ЭХО-Про-А (Эмбрионы Хорошего и Отличного качества Прогноз Астеноспермия) Для разработки прогностического индекса в полученных матрицах клинико-лабораторных показателей проведен дискриминантный анализ переменных в исследуемых группах.

Для определения относительного вклада каждого отдельного микроорганизма в формирование вероятности получения более 40% бластоцист хорошего и отличного качества и разработки прогностического индекса проведено ранжирование признаков с помощью расчета канонических коэффициентов дискриминантной функции (ККДФ).

Наиболее значимыми микроорганизмами, необходимыми для расчета вероятности получения эмбрионов отличного и хорошего качества, являлись следующие группы микроорганизмов: Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Corynebacterium spp., Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./ Burkholderia spp., Enterobacteriaceae/ Enterococcus spp., Gardnerella vaginalis. Eubacterium spp., Megasphaera spp/Veillonella spp./Dialister spp., Anaerococcus spp., Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum,. Также учитывалась общая бактериальная масса (ОБМ). Данные были определены в формате Lg ГЭ/мл.

Индекс ЭХО-Про-А рассчитывается по формуле:

ЭХО-Про-А=0,05*Х1-0,14*Х2+0,4*Х3-0,48*Х4+0,36*Х5-0,17*Х6+0,3*Х7-0,51*Х8+0,7*Х9+0,18*Х10-0,58*Х11+0,3*Х12-,17*Х13+0,98*Х14+0,11*Х15-0,41, где

X1 - возраст, лет

Х2 - ОБМ, Lg ГЭ/мл

Х3 - Staphylococcus spp., Lg ГЭ/мл

Х4 - Streptococcus spp., Lg ГЭ/мл

X5 - Corynebacterium spp., Lg ГЭ/мл

X6 - Gardnerella vaginalis, Lg ГЭ/мл

X7 - Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Lg ГЭ/мл

X8 - Ureaplasma urealyticum, Lg ГЭ/мл

X9 - Ureaplasma parvum, Lg ГЭ/мл

X10 - Mycoplasma hominis, Lg ГЭ/мл

X11 - Anaerococcus spp., Lg ГЭ/мл

X12 - Eubacterium spp., Lg ГЭ/мл

X13 - Haemophilus spp., Lg ГЭ/мл

X14 - Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp., Lg ГЭ/мл

X15 - Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp., Lg ГЭ/мл

Если значение Эхо-Про-А больше 0,2 - прогнозируют, что вероятность получения более 40% бластоцист хорошего и отличного качества низкая, если ЭХО-Про-А меньше 0 - высокая, при значениях 0-0,2 - прогноз неопределенный.

Среднее значение Эхо-Про-А в группах 1 и 2 составило соответственно - 0,26 (-0,43 - 0,23) и 0,37 (0 - 1,63). Различия статистически значимы (р<0,001).

На Фиг. 2 графически представлены значения индекса ЭХО-Про-N в группах 1 и 2.

Для оценки эффективности представленного способа прогнозирования был проведен ROC-анализ. ROC-кривая для индекса Эхо-Про-А изображена на Фиг. 3. Площадь под кривой (area under curve - AUC) составила 0,76 (ДИ 95% 0,65-0,87), что соответствует хорошему качеству модели прогнозирования.

Для определения чувствительности и специфичности представленного способа прогнозирования использовалась экзаменационная выборка. Показатели чувствительности и специфичности составили соответственно 76,47% и 67,39%, эффективность способа - 71,25%. Чувствительность и специфичность при различных значениях индекса ЭХО-Про-А представлены в таблице и на рисунке 3.

Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании показателей микробного состава эякулята, параметров спермограммы и возраста мужчины проводится высокоэффективное прогнозирование получения достаточного количества эмбрионов 5 дня развития отличного и хорошего качества.

Отличительные признаки способа: с помощью теста «Андрофлор» получают данные о микробном составе эякулята у пациентов с астенозооспермией и на основании полученных данных рассчитывают вероятность получения не менее 40% бластоцист отличного и хорошего качества.

Примеры практического использования заявляемого способа.

Пример 1. Супружеская пара К., обратились для проведения программы ЭКО по поводу вторичного бесплодия в течение 7 лет, причина бесплодия -отсутствие овуляции. Пациент К., 41 год, пациентка К., 40 лет, из анамнеза: 20 лет назад срочные оперативные роды; 8 лет назад регрессирующая беременность в 7 недель. Перенесенные гинекологические заболевания: эктопия шейки матки. Перенесенные гинекологические манипуляции: 10 лет назад ГСГ - маточные трубы проходимы, подозрение на аденоматозную гиперплазию эндометрия; результаты гистологии: небольшие фиброзные полипы в эндометрии, атрофичные железы. Имевшиеся попытки ВРТ: 4 года назад проведены 2 попытки внутриматочной искусственной инсеминации спермой мужа, без эффекта. 3 года назад была предпринята первая попытка ЭКО, беременность не наступила.

Данная попытка ЭКО вторая. Взят образец нативного эякулята в день аспирации ооцитов, параметры спермограммы соответствуют астенозооспермии. Заключение по результатам теста «Андрофлор»: ДНК патогенных микроорганизмов не выявлена. Candida spp.- ниже порогового уровня. Структура бактериального микробиома изменена: присутствуют условно-патогенные микроорганизмы. Результаты представлены на Фиг. 4.

Проведен расчет индекса ЭХО-Про-А.,

ЭХО-Про-А=0,05*Х1-0,14*Х2+0,4*Х3-0,48*Х4+0,36*Х5-0,17*Х6+0,3*Х7-0,51*Х8+0,7*Х9+0,18*Х10-0,58*Х11+0,3*Х12-0,17*Х13+0,98*Х14+0,11*Х15 -0,41,

где Х2=4,5 Lg ГЭ/мл, Х3=3,4 Lg ГЭ/мл, Х5=3,8 Lg ГЭ/мл, Х7=3,3 Lg ГЭ/мл, X11=3,8 Lg ГЭ/мл, Х12=4,3 Lg ГЭ/мл, Х15=3,2 Lg ГЭ/мл, индекс ЭХО-Про-N=2,116. Прогноз получения эмбрионов отличного и хорошего качества плохой. В результате пункции фолликулов получены 9 ооцитов, 7 из них -зрелые. В результате оплодотворения методом классического ЭКО получены 6 нормально оплодотворенных зигот, на 5 день из них выросла 1 бластоциста плохого качества. Количество бластоцист отличного и хорошего качества составило 16,7%.

Пример 2. Супружеская пара М., обратились для проведения программы ЭКО по поводу вторичного бесплодия в течение 7 лет, причина бесплодия - идиопатическое. Пациент М., 42 года, пациентка М., 37 лет, из анамнеза 12 лет назад медицинский аборт, 10 лет назад - срочные роды, без осложнений. Перенесенные гинекологические заболевания: эктопия шейки матки, 6 лет назад пролечена уреаплазменная инфекция в паре. Перенесенные гинекологические манипуляции: 4 года назад ГСГ - маточные трубы проходимы, подозрение на гиперплазию эндометрия. Данная попытка ЭКО первая.

В день аспирации ооцитов взят образец нативного эякулята, параметры спермограммы соответствуют астенозооспермии. Заключение по результатам теста «Андрофлор»: Структура бактериального микробиома соответствует норме. ДНК патогенных микроорганизмов не выявлена. Candida spp.ниже порогового уровня. Результаты представлены на Фиг. 5.

Проведен расчет индекса ЭХО-Про-А.,

ЭХО-Про-А=0,05*Х1-0,14*Х2+0,4*Х3-0,48*Х4+0,36*Х5-0,17*Х6+0,3*Х7-0,51*Х8+0,7*Х9+0,18*Х10-0,58*Х11+0,3*Х12-0,17*Х13+0,98*Х14+0,11*Х15-0,41, где X2=3,3Lg ГЭ/мл, Х4=3,1 Lg ГЭ/мл.

индекс ЭХО-Про-А=-2,36 или меньше 0. Прогноз получения эмбрионов отличного и хорошего качества хороший. В результате пункции фолликулов получены 40 ооцитов, 20 из которых - зрелые. В результате оплодотворения методом классического ЭКО получено 17 нормальных зигот, из которых на 5 день культивирования выросли 17 бластоцист, 16 из которых - хорошего и отличного качества. Количество бластоцист отличного и хорошего качества составило 80%.

Пример 3. Супружеская пара П. обратились для проведения программы ЭКО по поводу первичного идиопатического бесплодия в течение 5 лет. Пациент П., 37 лет, пациентка П., 35 лет; из анамнеза: 5 лет назад выполнена гистеросальпингография (ГСГ) - маточные трубы проходимы. Последние 4 года установлено нарушение менструального цикла, ациклические кровотечения, в текущем году по данным УЗИ выявлены признаки гиперплазии эндометрия. Данная попытка ЭКО первая.

В день пункции фолликулов для исследования микробного состава отобрали пробу нативного эякулята, параметры спермограммы соответствовали астенозооспермии. Заключение по результатам теста «Андрофлор»: Структура бактериального микробиома соответствует норме. ДНК патогенных микроорганизмов не выявлена. Candida spp.ниже порогового уровня. Результаты представлены на Фиг. 6.

Проведен расчет индекса ЭХО-Про-А.

ЭХО-Про-А=0,05*Х1-0,14*Х2+0,4*Х3-0,48*Х4+0,36*Х5-0,17*Х6+0,3*Х7-0,51*Х8+0,7*Х9+0,18*Х10-0,58*Х11+0,3*Х12-0,17*Х 13+0,98*Х14+0,11*Х15-0,41, где Х2 равно 3,9 Lg ГЭ/мл, X13 равно 3,4 Lg ГЭ/мл, остальные значения равны 0.

Индекс ЭХО-Про-А=0,166. Прогноз получения эмбрионов отличного и хорошего качества неопределенный. В день пункции фолликулов аспирировано 5 ооцитов, 4 из них - зрелые. В результате оплодотворения методом ЭКО получены 4 нормальные зиготы, на 5 день из них выросли 3 бластоцисты, одна из которых - хорошего качества. Количество бластоцист отличного и хорошего качества составило 25%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать эффективность эмбриологического этапа ВРТ у пар, планирующих процедуру ЭКО, при показателях эякулята, соответствующих критериям астенозооспермии.

Данный способ может быть использован на этапе предварительного обследования мужчин, планирующих проведение ВРТ. В случае выявления отклонений в микробном составе эякулята по результатам теста «Андрофлор» врач-андролог может провести корректирующую терапию до начала лечения методом ВРТ, а также подобрать тактику ведения эмбриологического этапа программы ВРТ. В случае если прогноз получения достаточного количества эмбрионов низкий, может быть рекомендовано проведение оплодотворения методом интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку (ИКСИ), а также применение более тщательного этапа «отмывки» сперматозоидов, используемых для оплодотворения.

Способ удобен в применении, так как не требует дополнительных инвазивных вмешательств, легкодоступен, обеспечивает быстрое получение необходимой информации, применим перед проведением начала лечения бесплодия методом ВРТ. Оценка микробиоты эякулята методом ПЦР-РВ может быть выполнена одновременно со спермограммой из одного образца.

Список литературы.

1. Национальный регистр РАРЧ// Российская ассоциация репродукции человека: ежегодн. отчет.2019. URL: https://rahr.ru/d_registr_otchet/RegistrART2019.pdf (Дата обращения: 01.02.2022).

2. Ильина А.А., Калинина И.И., Трошина Т.Г., Ильин К.А., Болтовская М.Н., Степанова И.И., Аншина М.Б. Фолликулярная жидкость как среда, определяющая качество ооцита и исход программ ВРТ (обзор литературы) // Проблемы репродукции. - 2008. - №4. - С.27-38.

3. Zeyad A. et al. Relationships between bacteriospermia, DNA integrity, nuclear protamine alteration, sperm quality and ICSI outcome //Reproductive biology. - 2018. - T. 18. - №. 1. - C. 115-121.

4. Валиахметова Э.З. и др. Неинвазивное тестирование преимплантационных эмбрионов человека in vitro как способ прогнозирования исходов программ экстракорпорального оплодотворения //Акушерство и гинекология. - 2021. - №. 5. - С.5-16.

5. Yanaihara A., Mitsukawa K., Iwasaki S., Otsuki K., Kawamura Т., Okai Т. High concentrations of lactoferrin in the follicular fluid correlate with embryo quality during in vitro fertilization cycles // Fertil. Steril - 2007. - Vol.87. - N.2. - P.279-282

6. Chang C.L., WangT.H., Horng S.G., WuH.M., Wang H.S., Soong Y.K. The concentration of inhibinBin follicular fluid: relation to oocyte maturation and embryo development // Hum.Reprod. - 2002. - Vol.17. - N.7. - P. 1724-1728.

7. Georgios A., Eleni K., Ioannis S., Vassilios L., Constantinos L., ThemisM., Nikolaos V. Serum and follicular fluid leptin levels are correlated with human embryo quality // Reproduction. - 2005. Vol.130 - P.917-921.

8. Патент на изобретение РФ №24677467 от 17.01.2019 «Способ прогнозирования эффективности программ ЭКО при трубно-перитонеальном бесплодии, ассоциированном с хроническим эндометритом» / Лихачева В.В., Зорина В.Н., Андронова Т.М. и др.

9. Патент на изобретение РФ №2581027 от 10.04.2016 «Способ прогнозирования исхода программы ЭКО и переноса эмбрионов» / Боташева Т.Л., Тян Ю.А., Линде В.А. и др.

10. Патент на изобретение РФ №2476142 от 27.02.2013 «Способ прогноза результата экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ)» / Мазуров Д.О., Ковалев В.В.

11. Патент на изобретение РФ №2345715 от 10.02.2009 «Способ прогнозирования результатов экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) у пациенток с аутоиммунными заболеваниями» / Ярыгина Т.В., Башмакова Н.В., Мазуров А.Д.

12.Stsepetova J. et al. The complex microbiome from native semen to embryo culture environment in human in vitro fertilization procedure //Reproductive Biology and Endocrinology. - 2020. - Т. 18.-№. 1. - C. 1-13.

13. The Vienna consensus: report of an expert meeting on the development of ART laboratory performance indicators //Reproductive BioMedicine Online. -2017.-Т. 35.-№. 5.-C. 494-510.

14. Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, пятое издание // Москва, 2012.

Изобретение относится к медицине, а именно клинико-лабораторной диагностике, репродуктологии и эмбриологии, и касается прогнозирования получения эмбрионов хорошего качества. Способ включает использование теста «Андрофлор» в эякуляте, параметры которого соответствуют критериям астенозооспермии, используемом для оплодотворения с последующим расчетом прогностического индекса. При этом на основании микробиологического анализа рассчитывается прогностический индекс ЭХО-Про-А по формуле, в которой учитывают возраст, общую бактериальную массу, содержание: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Gardnerella vaginalis, Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma hominis, Anaerococcus spp., Eubacterium spp., Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp., Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp. Если значение Эхо-Про-А больше 0,2 - вероятность получения более 40% эмбрионов хорошего и отличного качества низкая; если ЭХО-Про-А меньше 0 - высокая; при значениях 0-0,2 - прогноз неопределенный. Изобретение позволяет прогнозировать эффективность эмбриологического этапа ВРТ у пар, планирующих процедуру ЭКО, при показателях эякулята, соответствующих критериям астенозооспермии. 3 пр., 2 табл., 6 ил.

Способ прогнозирования получения эмбрионов отличного и хорошего качества, включающий тест «Андрофлор» в эякуляте, параметры которого соответствуют критериям астенозооспермии, используемом для оплодотворения, с последующим расчетом прогностического индекса, отличающийся тем, что на основании микробиологического анализа рассчитывается прогностический индекс ЭХО-Про-А, который вычисляется по формуле

ЭХО-Про-А=0,05*Х1-0,14*Х2+0,4*Х3-0,48*Х4+0,36*Х5-0,17*Х6+0,3*Х7-0,51*Х8+0,7*Х9+0,18*Х10-0,58*Х11+0,3*Х12-0,17*Х13+0,98*Х14+0,11*Х15-0,41,

где X1 - возраст, лет,

Х2 - ОБМ, Lg ГЭ/мл,

Х3 - Staphylococcus spp., Lg ГЭ/мл,

Х4 - Streptococcus spp., Lg ГЭ/мл,

X5 - Corynebacterium spp., Lg ГЭ/мл,

X6 - Gardnerella vaginalis, Lg ГЭ/мл,

X7 - Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp, Lg ГЭ/мл,

X8 - Ureaplasma urealyticum, Lg ГЭ/мл,

X9 - Ureaplasma parvum, Lg ГЭ/мл,

X10 - Mycoplasma hominis, Lg ГЭ/мл,

X11 - Anaerococcus spp., Lg ГЭ/мл,

X12 - Eubacterium spp., Lg ГЭ/мл,

X13 - Haemophilus spp., Lg ГЭ/мл,

X14 - Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp., Lg ГЭ/мл,

X15 - Enterobacteriaceae spp./Enterococcus spp., Lg ГЭ/мл,

если значение Эхо-Про-А больше 0,2 - вероятность получения более 40% эмбрионов хорошего и отличного качества низкая, если ЭХО-Про-А меньше 0 - высокая, при значениях 0-0,2 - прогноз неопределенный.