СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K36/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, касается способа профилактики вирусных заболеваний крупного рогатого скота и может быть использовано для защиты молодняка от заражения вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС).

Этиология заболевания связана с наличием в лимфоцитах крови больных лейкозом животных РНК-содержащего вируса экзогенного происхождения, онковируса типа С. У инфицированных животных появляется гуморальный ответ на структурные белки вируса с персистентным лимфоцитозом. В крови увеличивается количество циркулирующих В-лимфоцитов, которые составляют 40-80% от общей популяции лимфоцитов, у здоровых они составляют 15-20%.

Известны способы снижения вирулентности заболевания стимуляцией иммунологической резистентности организма, особенно находящегося в инкубационном периоде, с использованием иммуномодуляторов. Так, для профилактики лейкоза использовали интерферон альфа-2 в пяти модификациях телятам 1-6-месячного возраста /1/. Однако продолжительность курса и низкий профилактический эффект поставили под сомнение целесообразность практического применения этого способа. Коррекцию клеточных и гуморальных факторов активности иммунной системы и естественной резистентности, особенно на фоне иммунодефицита, обеспечивает использование иммуномодуляторов природного происхождения Т- и В-активинов /2/, для чего 6 мг лиофилизированного порошка В-активина растворяют в 0,01% растворе Т-активина. Т- и В-активины в комбинации вводят телятам 20-30-суточного возраста, т.е. в период завершения колострального иммунитета и начала активного функционирования собственной иммунной системы, когда под влиянием негативных факторов внешней среды возможно развитие иммунодефицитных состояний, на фоне которых животные чаще заражаются возбудителями бактериальной и вирусной природы, для восстановления активности иммунной системы и естественной резистентности до показателей физиологической нормы, что позволяет профилактировать появление РИД-положительных реакций у животных раннего возраста при слабой профилактической роли у животных более старшего возраста. Предпочтительными являются препараты, способные контролировать пролиферацию вируса в клетках за счет стимуляции эффекторных клеток иммунитета и проявляющих свойства стресс-корректоров, например лигфол. Лигфол в качестве действующего начала содержит гуминовые вещества, полученные при гидролизе древесного лигнина. В его состав входят натрия пирофосфат десятиводный, натрия хлорид и диминерализованная вода. Он обладает адаптогенной и стресс-корректорной активностью, проявляет свойства антиоксиданта, иммуномодулятора, является гепатопротектором и противоопухолевым средством, повышает резистентность к неблагополучным воздействиям, способствует сохранению здоровья и продуктивности животных. В основе его фармакологической активности лежат иммуноантиоксидантные механизмы /3/.

Лигфол исследован в качестве препарата для улучшения качества жизни и продуктивных свойств животных, а также снижения лимфоцитоза на трех группах взрослых коров (группа 1 - условно здоровые животные без клинических или серологических признаков заболевания; группа 2 - больные животные с серологическим подтверждением болезни без клинических проявления лейкоза; группа 3 - больные животные с серологическим подтверждением болезни и клиническими проявлениями лейкоза). Лигфол вводили в дозе 5,0 мл на корову 1 раз в месяц в течение 10 месяцев, что вызывало положительную динамику основного гематологического показателя развития лейкозного процесса - абсолютного лимфоцитоза в периферической крови - у условно здоровых животных (группа 1) при отсутствии статистически значимого отличия от контроля (физиологический раствор) в других группах /4/. Более интенсивная схема применения Лигфола была испытана на больных животных в возрасте 12-18 месяцев с серологическим подтверждением болезни без ее клинических проявлений. Лигфол применяли по следующей схеме: в разовой дозе 5,0 мл на корову 1 раз в 7 дней в течение месяца, затем 1 раз в месяц в течение 3 месяцев. По результатам серологических исследований (РИД, ПЦР) установлена тенденция к сдерживанию развития лейкозного процесса /5/ (прототип).

Задачей изобретения является профилактика лейкоза крупного рогатого скота у молодняка путем коррекции и сохранения в пределах физиологической нормы активности иммунной системы и показателей естественной резистентности и снижения лимфоцитоза.

Актуальность эффективной защиты молодняка от заражения вирусом лейкоза крупного рогатого скота обусловлена тем, что инфицированные ВЛКРС телята 6-месячного возраста заболевают лейкозом в гематологической стадии в соотношении один больной на 23 инфицированных, а с возрастом это соотношение изменяется - 5:1.

Эта задача решена сочетанным применением лигфола и янтарной кислоты.

Сущность способа профилактики заключается в том, что телкам с 6-месячного возраста применяют лигфол двумя однократными циклами (1 раз в месяц в течение 3 месяцев) в дозе 5,0 мл на животное (первый цикл) и 10,0 мл на животное (второй цикл) и янтарную кислоту в дозе 100 мг на корову 1 раз в сутки в течение 10 суток с интервалом в 10 суток.

Опыты проведены на телках 6-месячного возраста черно-пестрой породы в условиях хозяйства с уровнем инфицированности ВЛКРС 5%. Животных подбирали по принципу аналогов (возраст, живая масса, клиническое состояние, иммунологический статус). Были сформированы 3 группы телок 6-месячного возраста с отрицательными результатами серологических исследований (РИД с гликопротеиновым антигеном ВЛКРС) и ПЦР: 1 группа (опыт) - животные 6-месячного возраста, которым внутримышечно вводили лигфол в дозе 5,0 мл на животное 1 раз в месяц в течение 3 месяцев и в дозе 10,0 мл на животное 1 раз в месяц в течение 3 месяцев (9 голов) и дополнительно применяли янтарную кислоту в дозе 100,0 мг на животное 1 раз в сутки в течение 10 суток с интервалом в 10 суток в течение 6 месяцев; 2 группа (контроль) - животные 6-месячного возраста, которым внутримышечно вводили лигфол в дозе 5,0 мл на животное 1 раз в месяц в течение 3 месяцев и в дозе 10,0 мл на животное 1 раз в месяц в течение 3 месяцев (8 голов); 3 группа (контроль) - животные 6-месячного возраста, которым препараты на назначали (13 голов). За животными вели клинические наблюдения. Лабораторные исследования на лейкоз и иммунобиохимические исследования проводили каждые три месяца с применением современных общепринятых тестов. Результаты представлены в таблицах 1, 2 и 3.

Как видно из таблицы 1, в группах, в которых применяли лигфол,. отмечалась положительная тенденция динамики уровня лимфоцитов - снижение количества лимфоцитов в периферической крови и иммунобиохимических показателей, более выраженная в опыте. Так, абсолютное количество лимфоцитов в 1 мкл крови через 6 месяцев составило в опыте 6324 по сравнению с 5589 в контроле с применением лигфола и 6156 в контроле без применения препаратов, а процентное содержание лимфоцитов в 1 мкл крови снизилось в опыте с до 68,0±2,17% по сравнению с 69,0±2,3% (контроль с применением лигфола) и 76,0±2,16% (контроль без применения препаратов). Концентрация веществ средней и низкой молекулярной массы как показатель степени эндогенной интоксикации через 6 месяцев составила в опыте 15,093±0,51 у.е. по сравнению с 18,246±1,54 у.е. (контроль с применением лигфола) и 18,675±1,94 у.е. (контроль без применения препаратов). Как известно, при эндогенной интоксикации наблюдается выраженное изменение иммунного статуса, проявляющееся иммунодепрессией, а основным патофизиологическим механизмом эндогенной интоксикации является активация перекисного окисления липидов, иницированных свободными кислородными радикалами, поэтому активация системы антиоксидантной защиты организма воздействует непосредственно на этот механизм. У животных, не получавших лигфол, РИД-положительные реакции в течение 6 месяцев отмечались у 3 животных, у которых они повторялись 2 раза, что указывало на развитие лейкозного процесса (таблица 2). Телки опытной группы отличались большей упитанностью, они лучше развивались и у них отмечали получение полноценной половой охоты (таблица 3).

Таблица 1Реакция иммунной системы и иммунобиохимические показатели телок 5-7-месячного возрастаПоказателиДо начала работыКонтрольОпытбез применения препаратов (n=13)с применением лигфола
(n=8)с применением лигфола и янтарной кислоты (n=9)Через 3 месяцаЧерез 6 месяцевЧерез 3 месяцаЧерез 6 месяцевЧерез 3 месяцаЧерез 6 месяцевЛейкоциты, 10⁹/л10,8±1,169,5±0,518,1±0,7311,1±0,388,1±0,697,9±0,519,3±1,06Лимфоциты, %74±1,2366,0±1,876,0±2,1672,0±2,3369,0±2,3259,0±2,2968,0±2,17абс.7992627061567992558946616324ВНСММ, у.е.11,81±0,2719,63±1,7218,675±1,9418,91±0,8418,246±1,5417,031±1,0315,093±0,51Общий белок, г/л69,77±1,172,06±1,577,74±1,6179,97±1,0277,12±0,8968,13±1,0378,78±1,09Альбумины, г/л30,06±0,5130,68±0,2731,91±0,5631,04±0,3030,53±0,1831,4±0,3130,91±0,39%43,87±0,8142,8±0,9639,73±0,7643,67±0,6639,64±0,3846,16±0,9239,31±0,66α1-глобулины, г/л4,21±0,074,34±0,14,54±0,234,25±0,074,65±0,064,03±0,074,73±0,06%6,04±0,026,02±0,025,69±0,315,98±0,026,03±0,0096,05±0,026,01±0,03α2-глобулины, г/л6,37±0,116,55±0,166,99±0,196,4±0,17,0±0,086,05±0,127,5±0,35%9,15±0,049,08±0,048,73±0,288,99±0,039,08±0,028,88±0,049,03±0,07β-глобулины, г/л7,37±0,127,68±0,188,92±0,227,58±0,128,41±0,127,21±0,138,66±0,27%10,56±0,0310,65±0,0311,09±0,2110,66±0,0210,89±0,0510,58±0,0311,45±0,25γ-глобулины, г/л21,22±0,7722,81±1,1325,38±1,8930,7±0,6726,53±0,5319,44±0,8526,98±0,71%30,38±0,7231,46±0,8731,79±2,3226,08±0,5934,36±0,3328,47±0,8234,20±0,61Имунноглубины, г/л       G-9,86±0,5712,4±0,629,53±0,5211,92±0,498,68±1,0511,54±0,56M-2,61±0,123,82±0,192,72±0,23,33±0,172,13±0,253,63±0,15A-2,12±0,193,08±0,152,01±0,112,43±0,41,57±0,212,97±0,14A/Г0,79±0,020,75±0,030,74±0,080,78±0,020,66±0,010,86±0,030,65±0,02Общий холестирин, мМоль/л2,48±0,312,94±0,114,06±0,193,23±0,093,72±0,043,15±0,073,75±0,16Холестирин ЛПВП, мМоль/л0,81±0,070,94±0,031,24±0,050,97±0,021,18±0,040,95±0,031,16±0,03Холестирин ЛПВП, мМоль/л1,3±0,121,64±0,062,27±0,061,92±0,072,18±0,092,34±0,072,23±0,05Холестирин ЛПОНП, мМоль/л0,34±0,080,34±0,040,69±0,080,31±0,060,64±0,030,69±0,040,74±0,06Коэффициент атерогенности1,94±0,222,14±0,12,47±0,112,33±0,092,23±0,041,86±0,062,23±0,11Триглецирин общ., мМоль/л0,73±0,040,73±0,020,32±0,040,67±0,030,29±0,010,32±0,020,34±0,03β-липопротеиды, г/л-2,55±0,153,91±0,223,01±0,143,48±0,,092,91±0,13,49±0,19

Таблица 2Динамика РИД-положительных реакций у телок 5-7-месячного возрастаПоказателиКонтрольОпытбез применения препаратов (n=13)с применением лигфола (n=8)с применением лигфола и янтарной кислоты (n=9)через 3 месяцачерез 6 месяцевчерез 3 месяцачерез 6 месяцевчерез 3 месяцачерез 6 месяцевРИД3 полож.3 полож.отриц.отриц.отриц.отриц.Титр антител1:21:2    

Таблица 3Динамика клинико-физиологических показателей№ п/п контрольных* / опытных животныхЖивая масса тела контрольных / опытных телок до начала опыта, кгЖивая масса тела контрольных / опытных телок через 4 месяца, кг% прироста живой массы контрольных / опытных телокТелки 5-7-месячного возраста1/1150/150220/23046,7/53,32/2140/140170/21021,4/50,03/3170/175240/24541,2/40,04/4140/135210/21050,0/55,65/5145/145240/22065,5/51,76/6150/150205/23036,7/53,37/7150/155190/22526,7/45,28/8150/155225/24550,0/58,19/9140/135210/2150,0/55,6Общий вес1335/13401910/202543,1/51,1Средне151±4,0/153±3,3212,2±10,8/225±5,87 Примечание: контроль с применением Лигфола

Проведенные исследования подтвердили эффективность сочетанного применения лигфола и янтарной кислоты молодняку крупного рогатого скота для защиты от заражения ВЛКРС, о чем свидетельствует отсутствие выявления зараженных животных среди опытных телок 5-7-месячного возраста в течение 6 месяцев и наличие серопозитивных контрольных телок-аналогов в течение этого срока. В условиях отсутствия средств специфической профилактики лейкоза крупного рогатого скота сочетанное применение лигфола и янтарной кислоты обеспечивает высокий уровень иммунобмологической защиты организма и профилактирует появление РИД-положительных реакций, т.е. развитие лейкозного процесса у крупного рогатого скота.

Источники информации

1. Ивановский А.А. Использование препаратов иммуномодуляторов для профилактики лейкоза крупного рогатого скота // Сельскохозяйственная наука Северо-Востока Европейской части России. - 1995. - Т.3. - С.26-29.

2. RU 2188655 C2, 2002.

3. Наставление по применению лигфола в качестве адаптагена и стресс-корректора в ветеринарии: утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 03.05.2001, №13-4-03-0063.

4. www.humiphami.ru.

5. Итоги и перспективы применения гуминовых препаратов в продуктивном животноводстве, коневодстве и птицеводстве: Сб. докл. конф. М., 2006. - 62 с.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ заключается в том, что телятам 6-месяного возраста внутримышечно вводят лигфол двумя однократными циклами 1 раз в месяц в течение 3 месяцев - первый цикл в дозе 5,0 мл и второй цикл в дозе 10,0 мл. Дополнительно вводят янтарную кислоту в дозе 100,0 мг 1 раз в сутки в течение 10 суток с интервалом в 10 суток в течение 6 месяцев. Способ обеспечивает высокий уровень иммунобиологической защиты организма и профилактирует появление РИД-положительных реакций. 3 табл.

Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота, включающий внутримышечное введение телятам лигфола, отличающийся тем, что телятам 6-месячного возраста применяют лигфол двумя однократными циклами 1 раз в месяц в течение 3 месяцев - первый цикл в дозе 5,0 мл и второй цикл в дозе 10,0 мл и янтарную кислоту в дозе 100,0 мг 1 раз в сутки в течение 10 суток с интервалом в 10 суток в течение 6 месяцев.