СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ЛЕЙКОЗНОГО ПРОЦЕССА Российский патент 2011 года по МПК A61K36/00 

Изобретение относится к ветеринарной лейкозологии, касается способа стабилизации лейкозного процесса у животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), и может быть использовано в комплексе мероприятий по борьбе с лейкозом для повышения длительности эксплуатации высокопродуктивных животных при отсутствии прогрессирования болезни.

Лейкоз крупного рогатого скота является хронической болезнью вирусной природы и экологически опасной для человека. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров в возрасте 4-7 лет с ослабленными защитно-приспособительными реакциями. Лейкоз причиняет животноводству значительный экономический ущерб, который выражается в недополучении молока и приплода, преждевременной выбраковке коров и быков-производителей, утилизации туш больных животных, нарушении воспроизводительной функции больных коров, ограничении хозяйственной деятельности в связи с неблагополучием. Подсчитано, что животные, инфицированные вирусом лейкоза, имеют молочную продуктивность на 12,7% и содержание жира в молоке на 0,09% ниже, чем у серонегативных. Кроме этого омоложение оздоравливаемого стада за счет выведения из товарного производства полновозрастных коров и замены их нетелями снижает валовое производство молока на 6%. Лейкозная патология сильно подрывает племенную работу, наносится невосполнимый ущерб селекции и выращиванию чистопородных высокопродуктивных животных. Из-за ограничений по лейкозу племенные хозяйства не могут реализовать ценных в генетическом отношении бычков и телочек, по существу, они превращаются в товарных производителей молока. Удельная величина ущерба от лейкоза на одно животное достигает 1,48 тыс. руб. /1/

Развитию болезни способствуют не только генетическая предрасположенность и дефекты иммунитета, но и сниженная естественная резистентность и иммунологическая реактивность, особенно параметры клеточной системы. Нарушение неспецифических защитных механизмов может привести к расстройству клеточного взаимодействия, необходимого для индукции иммунного ответа. Восстановление активности иммунной системы и естественной резистентности до физиологической нормы повышает иммунобиологические и защитные свойства организма животных в отношении лейкозного процесса.

Коррекцию клеточных и гуморальных факторов активности иммунной системы и естественной резистентности обеспечивает использование (i) комбинации иммуномодуляторов Т- и В-активина /2/, (ii) коррегирующего препарата, содержащего Т- и В-активины /3/, (iii) комбинации иммуномодулятора цитоден и пробиотика интестевит /4/, (iiii) лигфола /5/. При введении известных препаратов телятам раннего возраста в большей или меньшей степени повышается устойчивость к инфекции ВЛКРС.

Задачей изобретения является разработка способа стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных.

Технический результат заключается в сохранении продуктивного здоровья инфицированных ВЛКРС высокопродуктивных животных, продлении сроков их эксплуатации и повышении качества животноводческой продукции.

Возможность хронизации лейкозного процесса обусловлена патогенетическими особенностями ВЛКРС, в частности его способностью персистировать в организме животного без клинического проявления. Из-за отсутствия цитопатогенного действия ВЛКРС, находясь в цитоплазме лимфоцита, не причиняет клетке видимого вреда. При ослаблении иммунологического контроля ВЛКРС проникает в ядерный аппарат клетки, внедряя в него свою РНК-информацию, запуская механизм превращения нормальной клетки в лейкозную /6/.

Поставленная задача решается тем, что инфицированным ВЛКРС животным 12-15-месячного возраста внутримышечно вводят лигфол по оригинальной схеме.

Способ осуществляется следующим образом.

Инфицированным ВЛКРС телкам 12-15-месячного возраста препарат лигфол вводят внутримышечно двумя последовательными 3-месячными курсами 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол (первый курс) и 15,0 мл/гол (второй курс).

Препарат лигфол - самопролонгированный препарат, действующим началом которого являются гуминовые вещества. В основе фармакологической активности лигфола лежат противоопухолевые и иммунооксидантные механизмы /7/. Эффективность лигфола в качестве средства неспецифической иммунотерапии опухолевых заболеваний у собак составила 47,6% /8/. Противоопухолевое действие лигфола обусловлено нарушением обменных процессов в тканях опухоли, снижением активности патологических ферментов, стимулирующих рост и неконтролируемое размножение клеток и активизацией образования нормальных ферментов /9, 10/.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. По принципу аналогов (возраст, живая масса, клиническое состояние, иммунологический статус) формировали две группы телок 12-15-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза (положительный результат в РИД с гликопротеидным антигеном ВЛКРС) по 10 голов в каждой. Животным первой группы (опыт) внутримышечно вводили лигфол в дозе 10,0 мл/гол трехкратно с интервалом в 30 дней и в дозе 15,0 мл/гол по той же схеме. Животным второй группы (контроль) внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме опытной группы. Обе группы животных находились на одном скотном дворе с одинаковыми условиями кормления и ухода. Для оценки состояния животных учитывали серологические, гематологические, иммунобиохимические и весовые показатели до начала и через 6 месяцев после начала опыта. Результаты представлены в таблицах 1 и 2 (в таблицу 1 не включены иммунобиологические показатели, по которым не выявлено математически достоверной разницы, в частности, уровни γ-, β-глобулинов, содержание общего белка, альбуминов, общего холестерина, уровни триглицеридов общих, β-липопротеидов, иммуноглобулинов G, А, М). Эндогенную интоксикацию оценивали по уровню высокомолекулярных веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ), представляющих собой небелковые производные различной природы, в частности мочевины, креатинина, мочевой кислоты, глюкозы, молочной и других органических кислот, аминокислот, жирных кислот, холестерина, фосфолипидов, продуктов свободнорадикального окисления, промежуточного метаболизма, нуклепротеидного обмена и т.д., накопление которых в концентрациях, превышающих нормальные, является фактором нарушения гомеостаза.

Таблица 1 Серологические, гематологические, иммунобиохимические показатели животных опытной и контрольной групп Показатели Опытная группа (n=10) Контрольная группа (n=10) до начала опыта через 6 месяцев до начала опыта через 6 месяцев РИД Положит. Положит. Положит. Положит. Титр антител к антигенам ВЛКРС (min-max) 1:4-1:96 1:2-1:4 1:8-1:30 1:16-1:32 Ср. геом. титров антител log₂ 24,0±1,23 3,0±0,97* 16,0±1,11 25,0±1,58* Лейкоциты, 10⁹/л 10,59±1,34 8,75±0,71 10,14±1,29 12,0±2,2 Лимфоцитов, % 75,6±3,2 67,5±7,9 70,4±3,5 74,7±3,0 Лимфоциты, 10⁹/л 7,83±1,27 6,05±1,1 7,3±1,3 8,9±1,97 ВНСММ, у.е. 17,3±0,44 14,58±0,37* 14,75±0,98 18,68±1,26* Нейтрофилы сегментоядерные, % 17,1±2,49 25,75±5,36* 18,2±2,97 13,4±3,5* Примечание: * - разница между опытной и контрольной группами достоверна (Р<0,95; 0,99).

Таблица 2 Весовые показатели животных опытной (10 голов) и контрольной (10 голов) групп № животного Живая масса животных, кг Привес живой массы, % Опытная группа Контрольная группа Опытная группа Контрольная группа До опыта После опыта До опыта После опыта 1 210,0 260,0 215,0 250,0 23,8 16,3 2 230,0 275,0 240,0 270,0 17,4 12,5 3 245,0 290,0 250,0 280,0 18,4 14,3 4 240,0 280,0 230,0 265,0 16,7 15,2 5 250,0 290,0 250,0 285,0 16,0 14,0 6 255,0 295,0 260,0 285,0 15,7 9,6 7 250,0 290,0 240,0 275,0 16,0 14,6 8 240,0 305,0 260,0 295,0 27,1 13,5 9 235,0 270,0 225,0 255,0 14,9 13,3 10 250,0 300,0 235,0 270,0 20,0 14,9

Как видно из таблицы 1, у животных опытной группы средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС уменьшилась с 24,0±1,23 до 3,0±0,97 log₂, показатели крови по абсолютному числу лейкоцитов и лимфоцитов крови снизились с 10,59±1,34 до 8,75±0,71 10⁹/л и с 7,83±1,27 до 6,05±1,1 10⁹/л соответственно, что свидетельствовало о стабилизации лейкозного процесса, т.е. отсутствии перехода бессимптомной стадии лейкозного процесса в гематологическую со снижением эндогенной интоксикации (концентрация ВНСММ - с 17,3 до 14,58 у.е.) и повышением процента сегментоядерных нейтрофилов с 17,1±2,49 до 25,75±5,36. У животных контрольной группы через 6 месяцев после начала опыта отмечалась положительная динамика развития лейкозного процесса: средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС повысилась с 16,0±1,11 до 25,0±1,58 log₂, абсолютное число лейкоцитов и лимфоцитов - с 10,14±1,29 до 12,0±2,2 10⁹/л и с 7,3±1,3 до 8,9±1,97 10⁹/л соответственно, содержание ВНСММ - с 14,75±0,98 до 18,68±1,26 у.е., при этом процент сегментоядерных нейтрофилов снижался с 18,2±2,97 до 13,4±3,5. Прирост живой массы в опытной группе был ниже, чем в опытной группе (таблица 2). Отмеченные изменения указывали на развитие лейкозного процесса и переход ряда животных в категорию подозрительных на лейкоз животных, характеризующуюся повышением абсолютного количества лимфоцитов в данной возрастной группе до 9,0-11,0 10⁹/л.

Изменения по ряду показателей позволило сделать вывод о нарушении метаболических и биохимических процессов на клеточном уровне, что свидетельствовало о развитии инфекционного процесса в контрольной группе.

Пример 2. По принципу аналогов формировали 3 группы телок 12-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза по 10 голов в каждой. Животным первой группы внутримышечно вводили лигфол в соответствии с изобретением, животным второй группы внутримышечно вводили лигфол в дозе 5,0 мл/гол. пятикратно с интервалом в 7 дней и в дозе 10,0 мл/гол, трехкратно с интервалом в 30 дней. Животным третьей группы внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме, как в первой группе. Животные всех трех групп проверялись по серологическому тесту, гематологическому обследованию периферической крови и биохимическим исследованиям сыворотки крови. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 Серологические, гематологические и биохимические показатели животных трех групп. Показатели 1-я группа 2-я группа 3-я группа РИД Ср. геом. титров антител log₂ Лейкоциты, 10⁹/л Лимфоциты, % Лимфоциты, 10⁹/л ВНСММ, у.е. Нейтрофилы сегментоядерные, % Примечание: в числителе показатели до начала опыта, в знаменателе - после окончания опыта.

Проведенные исследования показали, что применение лигфола в группах 1 и 2 обеспечивало положительную динамику основного гематологического показателя, однако эта динамика наиболее выражена в первой группе. Динамика анализируемых показателей в первой группе свидетельствовала о стабилизации лейкозного процесса, во второй группе - сдерживание лейкозного процесса с сохранением риска перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую, а в третьей группе - о развитии лейкозного процесса (таблица 3).

Результатами исследований подтверждена возможность стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных заявляемым способом. С одной стороны, предотвращение перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую позволяет рассматривать животных как инфицированных, а не больных, а с другой - стабилизация онкологической болезни может быть единственно ожидаемым эффектом в исследовании новых типов противоопухолевых препаратов и рассматривается как показатель эффективности лечения /11/.

Источники информации

1. Гаврилова Г.А. Диагностика скрытых форм лейкоза крупного рогатого скота: метод, рекомендации. Благовещенск, 2009. - 13 с.

2. Александров И.Д., Потатуркин И.К., Сидоренко Н.М. и др. Иммуномодулирующая роль Т- и В-активинов и естественная резистентность у телят раннего возраста// Новые фармакологические средства в ветеринарии: матер. 8-й межвуз. науч.-практич. конф., СПб - СПб: Гос. акад. вет. мед., 1996. - С.61-62.

3. Патент РФ №2188655, 2002.

4. Ермолаев С.В. Эколого-эпизоотологический анализ крупного рогатого скота в разных условиях Среднего Урала: автореф. дис… канд. вет. наук: 16.00.03. - Барнаул. 2000. - С.20-21.

5. Патент РФ №2320357, 2008.

6. Смирнов П.Н. Болезнь века - лейкоз крупного рогатого скота. - Новосибирск, 2007. - 300 с.

7. Наставление по применению лигфола в качестве адаптогена и стресс-корректора в ветеринарии: утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 03.05.2001, №13-4-03-0063.

8. Беркович A.M., Бузлама B.C., Мещеряков Н.П. Лигфол - адаптоген и стресс-корректор нового поколения. Повышение продуктивного здоровья животных. - Воронеж: Кварта, 2003. - 148 с.

9. Григоренко В.Б. Лигфол - механизм действия, клиническое применение, некоторые выводы // Ветеринарная жизнь. - 2006. - №4.

10. WO 95/08335, 1995.

11. Markman M. Challenges associated with evaluating the clinical utility of noncitotoxic pharmacological agents in oncology // J. Cancer Res. Clinic. Oncol., 1997. - Vol.123. - P.581-582.

Изобретение относится к области ветеринарии. Телкам 12-15-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза без клинических признаков препарат лигфол внутримышечно двумя последовательными 3-месячными курсами. В течение первого курса лигфол вводят 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол. В течение второго курса лигфол вводят 1 раз в месяц в дозах 15,0 мл/гол. Способ позволяет обеспечить отсутствие перехода бессимптомной стадии лейкозного процесса в гематологическую, снизить эндогенную интоксикацию и повысить процент сегментоядерных нейтрофилов. 3 табл.

Способ стабилизации лейкозного процесса, включающий внутримышечное введение лигфола, отличающийся тем, что лигфол применяют телкам 12-15-месячного возраста, инфицированным вирусом лейкоза крупного рогатого скота, двумя последовательными трехмесячными курсами 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол. (первый курс) и 15,0 мл/гол. (второй курс).