СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2017 года по МПК A61K31/00 A61K31/03 A61K31/04 A61K31/95 A61P35/02 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности для профилактики развития клинико-гематологической формы лимфоидного лейкоза у спонтанно инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) и лечения больных животных, а также может быть использовано в микробиологии, вирусологии и иммунологии.

Лейкоз крупного рогатого скота - широко распространенное вирусное заболевание с хроническим течением, наносящее значительный экономический ущерб молочному скотоводству. Лечение и профилактика не разработаны до настоящего времени, поэтому после выявления инфицированных вирусом лейкоза животных их изолируют и содержат отдельной группой. Заболевших лейкозом коров с повышенным количеством в единице объема крови лейкоцитов/лимфоцитов, выявленным согласно "лейкозного ключа", выбраковывают из стада в короткие сроки, а полученное от них молоко запрещено к использованию, так как в организме, а также в молоке, накапливаются измененные, под действием вируса, лимфоидные клетки и продукты метаболизма, обладающие канцерогенными свойствами (Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота, утвержденные приказом Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации, 11 мая 1999 г. № 359).

Известны соединения, способные оказывать противовирусное и иммуномодулирующее действие, одно из них "Водорастворимое средство, обладающее противовирусной активностью, на основе соединения серебра с цистином и способ его получения (Патент РФ №2277908 от 20.06.2006, МПК A61K 31/197). Недостатком является то, что препарат не был отработан для лечения и профилактики вирусных заболеваний животных.

Известен другой аналог заявляемому способу "Водорастворимое средство, обладающее противовирусной и иммуномодулирующей активностью, на основе соединения ионного серебра с метиленовым синим и способ его получения", отвечающее составу C16H18C12N3SAg с рабочим названием Арготиазин (Патент РФ №2390343 от 27.05.2010, МПК A61K 33/38, A61K 31/5415, A61K 31/28, A61P 37/02, A61P 31/12), который можно принять как наиболее близким к решению заявляемого способа. Соединение обладает противовирусной и иммуномодулирующей активностью, фотостойкостью в водных растворах и сохраняет свои свойства в течение 2 лет хранения. Ранее было показано, что сочетанное использование Арготиазина и нового химического соединения πQ346 из класса физиологически совместимых антиоксидантов, обладающего иммуностимулирующей активностью, эффективно профилактирует появление гематологических признаков заболевания лейкозом у спонтанно инфицированных ВЛКРС коров (В.Л. Тихонов, С.Г. Никифорова. Методические рекомендации «Разработка новых противовирусных средств на основе ионов серебра и их влияние на патогенетический процесс при лейкозе крупного рогатого скота». - Иркутск, 2010. - 34 с.).

Недостатком данного средства является отсутствие способа его индивидуального применения, в том числе для больных лейкозом животных с гематологическими признаками заболевания, и других его доз, позволяющего осуществлять лечение больных ВЛКРС-инфекцией животных, приводящего к ремиссии клинических признаков лейкоза и сохраняющего высоко продуктивных животных от неминуемой выбраковки.

Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала способов профилактики и лечения животных при лейкозе крупного рогатого скота, повышение эффективности оздоровительных противолейкозных мероприятий.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота, включающем использование комплексного препарата с противовирусной и иммуностимулирующей активностью, согласно изобретению, в качестве препарата используют Арготиазин, причем коровам препарат вводят с лечебной целью внутримышечно в дозе 3 мг/кг веса животных, 4-кратно, с интервалом 4 дня, а телятам 6-8-месячного возраста препарат вводят с профилактической целью ректально в дозе 20 мг/гол в 300 мл кипяченой воды, один раз в сутки в течение 10 дней подряд.

При разработке способа профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота учитывали значения противовирусной и иммуномодулирующей активности Арготиазина, полученные в исследованиях in vitro и in vivo (В.Н. Сильников, В.В. Третьяков, В.Л. Тихонов и др. Разработка Арготиазина и изучение его противовирусной активности // Ж. Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2009. - №9. - С. 60-63; Т.И. Глотова, В.Л. Тихонов, А.С. Донченко и др. Изучение иммуностимулирующих свойств Арготиазина // Ж. Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2009. - №11. - С. 73-77).

Кроме того, при исследовании фармакокинетики Арготиазина у спонтанно инфицированных ВЛКРС животных после однократного внутримышечного введения препарата в дозе 1 мг/кг веса животных нами установлено, что максимальное значение подвижного серебра в крови и фекалиях животных приходилось на 6 часов. В процессе элиминации и метаболизма соединения концентрация серебра постепенно снижалась, достигая минимально определяемого значения серебра в организме через 72-96 часов.

С целью предварительного установления оптимальных лечебно-профилактических доз Арготиазина и рациональной схемы его применения при лейкозе крупного рогатого скота были проведены следующие клинические исследования.

Профилактика лейкоза у инфицированных ВЛКРС телят 6-8-месячного возраста (латентная стадия лейкоза) путем ректального введение Арготиазина:

1) 10 мг/гол, один раз в сутки 5 дней подряд,

2) 10 мг/гол, один раз в сутки 10 дней подряд,

3) 20 мг/гол, один раз в сутки 5 дней подряд,

4) 20 мг/гол, один раз в сутки 10 дней подряд,

5) 30 мг/гол, один раз в сутки 5 дней подряд,

6) 30 мг/гол, один раз в сутки 10 дней подряд.

Лечение коров, больных вирусным лейкозом, путем внутримышечного введения Арготиазина:

1) 1 мг/кг, двукратно с интервалом 4 дня,

2) 1 мг/кг, четырехкратно с интервалом 4 дня,

3) 3 мг/кг, двукратно с интервалом 4 дня,

4) 3 мг/кг, четырехкратно с интервалом 4 дня,

5) 5 мг/кг, двукратно с интервалом 4 дня,

6) 5 мг/кг, четырехкратно с интервалом 4 дня.

Контроль и оценку состояния лейкозного процесса у обработанных Арготиазином животных проводили по данным стандартных при лейкозе диагностических исследований в сравнении с аналогичными показателями, полученными при фоновых исследованиях. Сдерживающее влияние Арготиазина на инфекционный процесс при лейкозе оценивали по снижению уровня титров специфических к ВЛКРС антител при серологическом тестировании сыворотки крови и ее разведений (1:2-1:32) в реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД) в промежутке между 1 и 6 месяцами после окончания курсовой обработки животных лекарственным соединением (Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота. М., 2000. - 34 с.). За минимальный титр антител принимали РИД(+) результат нативной сыворотки. Дополнительно проводили гематологические исследования крови с подсчетом относительного количества лейкоцитов и абсолютного количества лимфоцитов в 1 мкл крови, руководствуясь "лейкозным ключом" (Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота. М., 2000. - 34 с.).

Противолейкозная эффективность Арготиазина оценивалась в течение 6 месяцев наблюдения после обработки животных. Исследования показали, что средняя доза препарата для телят с латентной формой лейкоза, при которой достигался стойкий профилактический эффект после однократного ежедневного, в течение 10 дней подряд, ректального использования Арготиазина, составила 20 мг/гол. Пятидневное использование этой дозы и ее меньшее значение при 10-кратном применении не приводили к 100% профилактике заболеваемости инфицированных ВЛКРС животных лейкозом.

У больных коров с гематологической формой лейкоза наиболее выраженный лечебный эффект, характеризующийся длительной ремиссией клинических признаков заболевания (в течение 6 месяцев), проявлялся после четырехкратного с интервалом 4 дня внутримышечного введения Арготиазина в дозе не менее 3 мг/кг.

Производственная оценка заявляемого способа профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота, полученного в рамках изобретения, демонстрируется примерами и таблицами.

Пример 1. Для профилактики прогрессивного развития лейкоза среди инфицированных ВЛКРС телят 6-8-месячного возраста, родившихся от инфицированных ВЛКРС коров с подтвержденным положительным серологическим диагнозом на лейкоз (без клинико-гематологических признаков), было проведено ректальное введение Арготиазина в дозе 20 мг/гол в 300 мл кипяченой воды с использованием катетера, 10-кратно, с интервалом 24 часа (табл. 1).

Перед началом эксперимента по профилактики лейкоза у телят 6-8-месячного возраста все опытные и контрольные животные были серопозитивными в отношении вируса лейкоза, причем у отдельных особей титры специфических к ВЛКРС антител достигали уровня 1:8 (№89). При этом известно - чем выше уровень преципитирующих антител в сыворотке крови инфицированных вирусом лейкоза животных, тем более напряженный характер имеет инфекционный процесс (Т.Р. Якупов. Новые подходы в диагностике лейкоза крупного рогатого скота // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2010. - №1. - том. 204. - С. 342-347).

В начале опыта у некоторых телят наблюдали признаки начинающегося гематологического напряжения (табл. 1), из чего можно сделать вывод, что для эксперимента были подобраны животные с развивающейся ВЛКРС-инфекцией.

Как следует из табл. 1, ежедневное, в течение 10 дней подряд, ректальное использование Арготиазина телятам опытной группы, инфицированных вирусом лейкоза, в дозе 20 мг/гол. приводит к сдерживанию процесса дальнейшего развития заболевания. Результат купирования инфекции, в сравнении с контрольной группой, прослеживался на протяжении 6 и более месяцев после обработки животных и характеризовался снижением титров специфических к ВЛКРС антител в 2-4 раза и стабилизацией количества лейкоцитов/лимфоцитов в единице объема крови в физиологических пределах.

Поскольку персистенция колостральных антител у новорожденных телят, родившихся от серопозитивных в отношении лейкоза матерей, длится до 6 месяцев, проведение систематической серологической оценки молодняка, начиная с 6-месячного возраста, позволяет своевременно оценить эпизоотическую обстановку и разработать план превентивной обработки скомпрометированных в отношении вируса лейкоза животных способом по примеру 1, снижая, таким образом, риск распространения лейкоза.

Пример 2. Лечение животных с клинико-гематологическими признаками вирусного лимфолейкоза проводили путем четырехкратного, с интервалом 4 дня, внутримышечного введения Арготиазина в дозе 3 мг/кг живого веса, в 10 мл стерильной дистиллированной воды (в 10 мл стерильного 0,9% раствора хлорида натрия).

Лечебную дозу препарата инъецировали в ягодичную группу мышц по очереди, с правой и с левой стороны. Клинические результаты влияния Арготиазина на инфекционный процесс при лейкозе отражены в табл. 2 и 3.

Из таблицы 2 следует, что внутримышечное введение Арготиазина в дозе 3 мг/кг больным лейкозом коровам в опытной группе через 1 месяц после проведенного курса лечения приводило к снижению в 2-4 раза титров специфических к ВЛКРС антител в сравнении с фоновыми значениями. У части животных наблюдалось "выпадение" серологической реакции и преципитирующие антитела не обнаруживались (№ 3892/7 и 841/3). Дальнейшие серологические исследования сыворотки крови и ее разведений (3 и 6 месяцев) подтверждали низкое содержание преципитирующих антител среди опытных животных. В то же время, среди контрольных больных лейкозом коров, не подвергавшихся противолейкозной терапии, наблюдали повышение в 2 раза титров специфических к ВЛКРС антител (№703/2), что характерно для дальнейшего прогрессивного развития лейкозного процесса.

При рассмотрении результатов гематологических исследований на лейкоз среди больных лейкозом коров в опытной группе и обработанных Арготиазином с лечебной целью (табл. 3) отмечали следующее. Применение препарата больным лейкозом коровам приводит к ремиссии клинико-гематологических признаков лейкоза в 4-недельный период после окончания курсовой обработки. Под влиянием Арготиазина у гематологически больных лейкозом коров наступало не только снижение уровня преципитирующих антител в сыворотке крови, но и отмечалось значительное уменьшение количества лейкоцитов/лимфоцитов до границ физиологической "нормы". Продолжительность положительного результата от терапевтической процедуры составляла не менее 6 месяцев. В группе контрольных коров, больных лейкозом, за период опыта выбыли все животные в связи с развитием у них выраженной формы клинического лейкоза.

Таким образом, имея в виду, что в Российской Федерации отмечается постоянное увеличение неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота пунктов и продолжается рост числа инфицированных и заболевших лейкозом животных, при отсутствии на вооружении ветеринарной службы высокоактивных противолейкозных вакцин и лекарственных препаратов, использование заявляемого способа, в качестве превентивной и лечебной терапии, позволяет эффективно сдерживать заболеваемость животных ВЛКРС-инфекцией и направленно управлять эпизоотическим процессом, тем самым снижая риск дальнейшего распространения лейкоза.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики развития клинико-гематологической формы лимфоидного лейкоза у спонтанно инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Способ включает использование комплексного препарата с противовирусной и иммуностимулирующей активностью. В качестве препарата используют Арготиазин. Коровам препарат вводят с лечебной целью внутримышечно в дозе 3 мг/кг веса животных, 4-кратно, с интервалом 4 дня. Телятам 6-8-месячного возраста препарат вводят с профилактической целью ректально в дозе 20 мг/гол. в 300 мл кипяченой воды, один раз в сутки в течение 10 дней подряд. Заявленный способ высокоэффективен для профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота. 3 табл., 2 пр.

Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота, включающий использование комплексного препарата с противовирусной и иммуностимулирующей активностью, отличающийся тем, что в качестве препарата используют Арготиазин, причем коровам препарат вводят с лечебной целью внутримышечно в дозе 3 мг/кг веса животных, 4-кратно, с интервалом 4 дня, а телятам 6-8-месячного возраста препарат вводят с профилактической целью ректально в дозе 20 мг/гол. в 300 мл кипяченой воды, один раз в сутки в течение 10 дней подряд.