Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц подтипа H5N1, используемый в научных и производственных лабораториях и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин, против гриппа А птиц этого подтипа и контроля их иммуногенности, а также антигенов для диагностических наборов.
Возбудитель гриппа А птиц - РНК-содержащий вирус семейства Ortomixoviridae рода Influenzavirus размером 60-180 нм.
Вирус гриппа А птиц включает 15 подтипов по гемагглютинину и 9 подтипов по нейраминидазе. По классификации МЭБ грипп птиц (ГП) отнесен к группе А особо опасных болезней и широко распространен на всех континентах. Наиболее опасны вспышки гриппа, обусловленные пятым и седьмым подтипами вируса, которые вызывают заболеваемость - 70-100% и смертность - 50-70%.
В России в 2005 г. возбудитель гриппа А птиц был выявлен в 62 пунктах 8 регионов, пало 26844 голов, уничтожено 609250 голов птицы. В этот период были выделены и типированы изоляты вируса ГП подтипа H5N1.
Для профилактики ГП путем вакцинации применяют препараты, изготовленные из эпизоотических или референс штаммов.
Известен штамм вируса ГП подтипа H5N1 - А/БАК/Россия/05, предназначенный для разработки средств и методов биологической защиты. Этот штамм был выделен из биопроб, взятых от погибшей домашней птицы [1].
Типы гемагглютинина и нейраминидазы в различных сочетаниях определяют антигенную формулу вируса гриппа. Ведущая роль в проявлении инфекционности принадлежит гемагглютинину (Н). Большинство эпизоотических и референс штаммов вирусов ГП имеют низкие титры гемагглютинина, поэтому при производстве вакцин против гриппа птиц предусматривается очистка и концентрирование вируса с целью повышения титра гемагглютинина.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является эпизоотический штамм вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 - А/курица/Курган/01/05 (прототип), используемый для изготовления эмбриональной вакцины против гриппа А птиц, которую применяют в целях профилактики однократно внутримышечно. Вирус гриппа А птиц для изготовления указанной вакцины получают на куриных эмбрионах. Недостатком данного штамма является то, что он имеет низкий титр гемагглютинина - 1/32-1/64, вследствие чего необходимо проведение трудоемких операций концентрирования и очистки вируса при изготовлении вакцинных и диагностичесчких препаратов [2].
Целью настоящего изобретения является получение нового штамма вируса гриппа А птиц подтипа H5N1, обладающего высокой гемагглютинирующей активностью и обеспечивающего изготовление инактивированной вакцины без проведения концентрирования вируса, контроля иммуногенности вакцины и изготовление антигена для диагностических наборов.
Поставленная цель достигается тем, что использован штамм вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 - А/курица/Курган/01/05, обладающий высокой биологической, антигенной активностью.
Штамм выделен на птицефабрике «Утятская» Курганской обл. Инфекционный титр вируса - 9,5±0,25 lg ЭЛД 50/см3, 8,5±0,25 lg ЛД 50/см3, гемагглютинирующий титр - 1:16-1:32.
Для получения штамма с повышенной гемагглютинирующей активностью вируса используют пассирование его на куриных эмбрионах (КЭ). КЭ заражают вирусом с инфекционной активностью 6,0-8,0 lg ЭЛД 50/см3 по 0,1 см3 на эмбрион. Инкубируют КЭ при 37,0±0,5°С и влажности 60-70% в течение 36-48 часов, затем охлаждают при температуре 2,0-4,0°С. Отбирают аллантоисную жидкость и определяют инфекционную активность и гемаггютинирующий титр вируса. Аллантоисную жидкость с максимальным титром используют для очередного пассажа. Титр гемагглютинина повышается с 8-го пассажа, в 19-21 пассаже он составляет 1:1024-1:2048, инфекционная активность - 9,75±0,25 lg ЭЛД 50/см3.
Полученному штамму присвоено наименование - штамм А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц подтипа H5N1.
Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ РАСХН под №2633 27.03.2007 г.
Штамм А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 используется для производства инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа А птиц подтипа H5N1. Средний титр антигемагглютининов у вакцинированной птицы уже на 10 день составляет 1:130, что на 11-18 суток сокращает срок наступления иммунитета.
Инактивированный антиген этого вируса с активностью 1:512-1:1024 используется в реакции задержки гемагглютинации для выявления специфических антител к вирусу ГП в сыворотках крови птиц.
Штамм А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 (производственный) характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки.
При электронно-микроскопическом исследовании вирионы штамма А/курица/Россия/22/07 имеют типичные для ортомиксовирусов сферические и филаментозные формы размером от 80 до 120 нм.
Культуральные признаки.
Вирус хорошо размножается в 10-11-дневных КЭ при заражении в аллантоисную или амниотическую полость. Инкубирование КЭ проводится при 37°С и 70% влажности. Вирус вызывает гибель куриных эмбрионов через 26-40 часов. Инфекционная активность штамма А/курица/Россия/22/07 составляет 9,75±0,25 lg ЭЛД 50/см3, гемагглютинирующий титр - 1/1024-1/2048.
Штамм А/курица/Россия/22/07 вируса ГП хорошо размножается в культуре клеток куриных фибробластов (КФ), инфекционная активность через 48-72 часа инкубирования при 37°С - 5,5-6,5 lg ТЦД 50/см3, а гемагглютинирующий титр - 1:16-1:32.
Подтиповая принадлежность штамма А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц определена с помощью реакции задержки гемагглютинации со специфическими сыворотками к вирусу гриппа птиц, ньюкаслской болезни и ССЯ-76 по общепринятой методике, а так же твердофазным иммуноферментным анализом (ТФ ИФА) с использованием моноклональных антител (МАт) к рибонуклеопротеиду (РНП) вирусов НБ и ГП. В ТФ ИФА реакция положительная с МАт к РНП вируса ГП. В результате типирования штамм А/курица/Россия/22/07 отнесен к гриппу птиц А.
Определение подтипа вируса по гемагглютинину проводили с использованием «Набора антигенов и сывороток для лабораторной диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)» (ТУ 9388-004-70952707-04) производства ОАО «Покровский завод биопрепаратов». Установлена принадлежность штамма А/курица/Россия/22/07 к вирусу гриппа А птиц подтипа Н5.
Инфекционную активность штамма А/курица/Россия/22/07 для 10-11-дневных КЭ определяли путем заражения в аллантоисную полость по 0,1 см3 ЭЭЖ в разведениях с 10-4 по 10-9 по 4 КЭ на каждое разведение в двух повторностях. Инкубирование КЭ проводили при 37°С, овоскопировали через каждые 24 часа. Инфекционная активность штамма А/курица/Россия/22/07 составила 9,75±0,25 lg ЭЛД 50/см3, гемагглютинирующий титр - 1/1024-1/2048 (табл.).
Сохраняемость и условия хранения.
Штамм А/курица/Россия/22/07 хранят в лиофилизированном состоянии при температуре не выше минус 40°С.
Инактивированная эмульгированная вакцина, изготовленная из штамма А/курица/Россия/22/07 вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 обладает высокой антигенностью и иммуногенностью. Средний титр антител в сыворотках крови иммунизированных цыплят на 10 сутки составляют 1:128, а на 21 сутки - 1:1024. Контрольное заражение вакцинированных цыплят вирулентным штаммом вируса гриппа А птиц подтипа H5N1 не вызывает клинических признаков заболевания, а выживаемость составляет более 90%.
Контроль стерильности штамма А/курица/Россия/22/07 проверен на бактериальных средах: МПА, МПБ, Сабуро и тиогликолевом бульоне. Рост бактериальной и грибковой микрофлоры при наблюдении в течение 10 дней - отсутствовал.
Источники информации
1. Заявка №2005129200, опубл. 27.03.2007, C12N 7/00, Марков В.И., Меркулов В.А., Лыков М.В. и др.
2. «Инструкция по изготовлению и контролю инактивированной жидкой и сухой вакцины против гриппа птиц», утвержденная ГУВ МСХ СССР 14 июля 1978 г.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Штамм "Ямал" вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H5N1 для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5 | 2022 |
|
RU2796987C1 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ГРИППА ПТИЦ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬГИРОВАННАЯ ФЛУ ПРОТЕКТ Н5 И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИППА ПТИЦ | 2007 |
|
RU2350350C1 |
Штамм A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 вируса гриппа птиц подтипа H5N2 Infuenza A virus рода Alphainfluenzavirus для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления антигенсодержащих диагностикумов | 2020 |
|
RU2736788C1 |
ШТАММ "ЛП" PARAMYXOVIRUS ПЕРВОГО СЕРОТИПА ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИН ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ | 2000 |
|
RU2192278C2 |
Штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц Influenza virus avicum типа А подтипа H5 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5 | 2017 |
|
RU2647566C1 |
ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/Гонконг/1/68/162/35 (H3N2)-УНИВЕРСАЛЬНЫЙ ДОНОР ВНУТРЕННИХ ГЕНОВ ДЛЯ РЕАССОРТАНТОВ И РЕАССОРТАНТНЫЕ ШТАММЫ А/СПБ/ГК/09 (H1N1) И А/НК/Astana/6:2/2010 (H5N1), ПОЛУЧЕННЫЕ НА ЕГО ОСНОВЕ | 2011 |
|
RU2511431C2 |
ВАКЦИНА ПРОТИВ ГРИППА ПТИЦ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИОННАЯ | 2006 |
|
RU2323741C2 |
Штамм "A/chicken/Primorsk/419/2018 H9N2" вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H9 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа H9 | 2020 |
|
RU2736786C1 |
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ЭМУЛЬГИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГРИППА ПТИЦ И ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬГИРОВАННАЯ ПРОТИВ ГРИППА ПТИЦ | 2008 |
|
RU2358760C1 |
ШТАММ "НОВОСИБИРСКИЙ" ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ Influenzae virus avicum ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИММУНОГЕННОЙ И АНТИГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИН И ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ГРИППА ПТИЦ | 2006 |
|
RU2323740C1 |
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии. Получен штамм вируса гриппа А птиц подтипа H5N1, депонированный в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ РАСХН под №2633. Изобретение может быть использовано в научных и производственных лабораториях и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин, против гриппа А птиц этого подтипа и контроля их иммуногенности, а также антигенов для диагностических наборов. 1 табл.
Штамм вируса гриппа А птиц, сем. Pestis Galinarum, подтип H5N1, депонированный в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ РАСХН под №2633, для получения вакцины.
ШТАММ А/БАК/РОССИЯ/05 ВИРУСА ПТИЧЬЕГО ГРИППА, ПОДТИП H5N1, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ | 2005 |
|
RU2300564C1 |
МЕТОД ПЕРВИЧНОЙ ИЗОЛЯЦИИ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА A, ШТАММ VIRUS A/DUCK/NOVOSIBIRSK/56/05 H5N1 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ, ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ И ЛЕЧЕБНЫХ ПРЕПАРАТОВ, ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | 2005 |
|
RU2309983C2 |
Авторы
Даты
2009-02-20—Публикация
2007-06-07—Подача