СПОСОБ ОЦЕНКИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ОПОРНО-ДВИГАТЕЛЬНОГО АППАРАТА Российский патент 2009 года по МПК G01N33/68 G01N33/50 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для объективной оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, в частности, у больных с хронической суставной патологией.

Известен способ определения адаптационных возможностей организма, включающий приготовление мазка крови, поиск эозинофилов с частичной дегрануляцией и клеток со смешанной базофильно-эозинофильной зернистостью, после чего при наличии этих клеток проводят подсчет нейтрофилов с оксифильной реакцией части гранул и определяют индекс гетерофилов по формуле (патент РФ №2043631, кл. G01N 33/48. Опубл. 10.09.1995 г., бюл.№25).

Указанный способ требует микроскопии клеточных элементов крови, приготовление мазка, а также для его выполнения необходимы специальное оборудование (микроскоп с достаточной разрешающей способностью) и специалист в области микроскопии.

Известен также способ оценки компенсаторных возможностей организма у больных с асептическим некрозом головки бедренной кости и кистевидной перестройкой суставных концов II-III степеней с помощью определения в сыворотке крови, взятой из периферической вены, содержания аутоантител к коллагену II типа (патент РФ №2233450, кл. G01N 33/577. Опубл. 27.07.2004 г., бюл. №20).

Способ включает множество операций: забор крови из периферической вены, выдерживание в термостате в течение 30 минут, потом в течение 30 минут - в холодильнике, центрифугирование в течение 15 минут, внесение образцов в сорбированные коллагеном человека лунки планшета, разведение фосфатно-солевым буферным раствором с твином-80, инкубацию исследуемых образцов при комнатной температуре в течение 1 часа с последующей отмывкой несвязавшихся белков, внесение в лунки планшета раствора очищенных кроличьих моноклональных антител против иммуноглобулина человека, отмывание несвязавшегося конъюгата, проявление реакции раствором 0,1%-ного ортофенилендиамина в цитратном буферном растворе, остановка реакции 10%-ным раствором серной кислоты, учет результатов путем определения оптической плотности с помощью фотометра при длине волны 492 нм и количественное определение аутоантител к коллагену с помощью калибровочной кривой.

Недостатком данного способа является его сложность, многоэтапность и длительность выполнения.

Существенным недостатком способа является также необходимость для его осуществления дорогостоящих коммерческих иммунодиагностических наборов.

Наиболее близким к предлагаемому по своей технической сущности является способ определения уровня (оценки) неспецифической резистентности организма, включающий определение содержания компонентов антиоксидантной системы крови: тиоловых (-SH), дисульфидных (-SS) групп и их тиолдисульфидное соотношение в цельной крови и в клеточном концентрате крови (патент РФ №2243559, кл. G01N 33/48. Опубл. 27.12.2004 г., бюл. №36).

Однако данный способ определения уровня (оценки) неспецифической резистентности организма длителен, сложен и трудоемок. Для определения тиол-дисульфидного соотношения необходима многократная культивация в течение не менее 24 часов с интервалом 30-180 минут, после чего требуется проводить математические расчеты, строить графики зависимостей показателей тиолдисульфидного соотношения от времени культивации и определять уровень неспецифической резистентности организма по отношению площади под графиком зависимости «тиолдисульфидное соотношение - время культивации» в цельной крови к площади под графиком зависимости «тиолдисульфидное соотношение - время культивации» в клеточном концентрате крови.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является сокращение времени проведения и упрощение оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата.

Поставленная задача решается тем, что в способе оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, включающем определение содержания компонентов антиоксидантной системы крови, в качестве исследуемого субстрата используют сыворотку крови, дополнительно определяют в ней содержание молекул средней массы, а в качестве компонента антиоксидантной системы выбирают церулоплазмин, и если содержание молекул средней массы выше 0,40 единиц оптической плотности, а активность церулоплазмина при этом ниже 25,00 условных единиц, то констатируют пониженную неспецифическую резистентность организма.

Использование в качестве исследуемого субстрата сыворотки крови позволяет оценить циркулирующие в ней биологически активные соединения, имеющие важное значение в регуляции неспецифической резистентности организма, что повышает информативность способа.

А дополнительное определение содержания молекул средней массы, являющихся показателем наличия и степени выраженности эндогенной интоксикации различного генеза, дает интегральную оценку состояния метаболического гомеостаза организма.

Выбор же в качестве компонента антиоксидантной системы церулоплазмина (медьсодержащего белка альфа 2-глобулиновой фракции крови, ключевого антиоксидантного фермента сыворотки крови) позволяет охарактеризовать состояние ферментного звена антиоксидантной системы защиты в целом.

Технический результат заключается в оперативной и объективной оценке неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата.

Авторами изобретения установлено, что высокое (более 0,40 единиц оптической плотности) содержание молекул средней массы, сочетающееся с низкой (менее 25,00 условных единиц) активностью церулоплазмина в сыворотке крови, свидетельствует о снижении неспецифической резистентности организма.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Кровь для исследования берут утром натощак при пункции локтевой вены, оставляют ее для свертывания при комнатной температуре, центрифугируют для отделения сыворотки от форменных элементов.

В сыворотке крови определяют содержание молекул средней массы и активность церулоплазмина общепринятыми методами. Время анализа составляет не более 2 часов.

И при содержании молекул средней массы выше 0,40 единиц оптической плотности, сочетающемся с активностью церулоплазмина ниже 25,00 условных единиц, констатируют пониженную неспецифическую резистентность организма.

Было обследовано 112 больных ревматоидным артритом с различными степенями обшей активности заболевания, стадиями и распространенностью процесса, находившихся на стационарном лечении в СарНИИТО. Контрольную группу составили 54 практически здоровых людей (доноры).

Всем больным проведено клинико-инструментальное и лабораторное обследование, принятое в ревматологии.

Среди обследованных больных ревматоидным артритом выделялась группа пациентов с более выраженной клинической симптоматикой: высокая общая активность воспалительного процесса (III, реже II степень активности); множественное поражение суставов, в том числе крупных (коленные, локтевые, реже тазобедренные), серопозитивная форма заболевания, системные проявления (лимфаденопатия, ревматоидные узлы), быстро прогрессирующее течение заболевания, высокая степень функциональной недостаточности суставов. Пониженная неспецифическая резистентность у этих больных проявлялась синдромом эндогенной интоксикации: сильная слабость, вялость, чувство "разбитости", быстрая утомляемость и снижение работоспособности, плохой сон и аппетит. У пациентов этой группы отмечено похудание, общая температурная реакция, эмоциональная лабильнось (раздражительность, плаксивость) как проявление нейротоксикоза, а также регистрировались и выраженные изменения всех изученных лабораторных показателей.

Таким образом, в выделенной группе больных ревматоидным артритом пониженная неспецифическая резистентность организма в условиях воспалительной деструкции в суставах объективно подтверждалась высоким содержанием молекул средней массы, сочетающимся с низкой активностью церулоплазмина в сыворотке крови.

Предлагаемый способ значительно сокращает время (не более 2-х часов в заявляемом по сравнению с 24 часами в прототипе) и упрощает (используют один биологический субстрат вместо двух) объективную оценку неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, что достигается за счет определения содержания молекул средней массы и активности церулоплазмина в сыворотке крови. Кроме того, способ не требует дорогостоящих реактивов и специальной подготовки персонала.

ПРИМЕР. Больная Е-ва Н.Ф., 1952 г.р., история болезни №1680 находилась на стационарном лечении в СарНИИТО с диагнозом: ревматоидный артрит, полиартрит, серопозитивная форма, быстро прогрессирующее течение, степень активности III, стадия III, функциональная недостаточность II степени.

Больная предъявляла жалобы на боли в межфаланговых и пястнофаланговых суставах обеих кистей и стоп, в обоих локтевых и коленных суставах (больше в левом коленном суставе); припухлость этих суставов; общую слабость, "разбитость"; утреннюю скованность до обеда; резкое нарушение аппетита, выраженное похудание; плохой сон, раздражительность, плаксивость.

Три года назад больную начали беспокоить боли в виде артралгий в пястнофаланговых суставах, правом плечевом суставе. Около года назад появились боли и припухлость сначала в проксимальных межфаланговых суставах кистей и стоп, затем в пястно-фаланговых, лучезапястных, локтевых и коленных суставах. Лечилась в сельской участковой больнице, затем - в областной больнице, в основном нестероидными противовоспалительными препаратами. За последнее время похудела на десять килограммов. Поступила на лечение в СарНИИТО в связи с безрезультативностью лечения по месту жительства.

При осмотре - больная бледная, вялая, пониженного питания, пальпируются группы лимфоузлов (подчелюстные, на шее, подмышечные). Ходит без дополнительной опоры, с малой амплитудой шага. Отмечается выраженная атрофия мышц верхних и нижних конечностей, выраженная деформация мелких суставов кистей и стоп, анкилозы лучезапястных суставов, контрактуры локтевых суставов; имеются также сгибательные контрактуры коленных суставов; пролиферация суставных тканей. Кожа над коленными суставами теплее окружающих тканей; в полости суставов определяется небольшое количество свободного выпота. Температура тела составляет 37,3°.

На рентгенограммах - околосуставной остеопороз, особенно в области пястно-фаланговых и проксимальных межфаланговых суставов, а также мыщелков бедренной и большеберцовой костей (больше в левом суставе); краевые узуры; суставные щели в коленных суставах сужены, особенно в левом коленном; при артропневмографии левого коленного сустава в заворотах выявляются выраженные признаки спаечного процесса и дегенерация обоих менисков.

ЭКГ-синусовый ритм, число сокращений 83 в минуту.

Анализ крови: эритроциты - 4,2·10¹²/л; гемоглобин - 93 г/л; цветной показатель - 0,75; лейкоциты - 6,3 10⁹л; эозинофилы - 0; палочкоядерные нейтрофилы - 8%; сегментоядерные нейтрофилы - 72%; лимфоциты - 16%; моноциты - 4%; скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - 50 мм/час; серомукоид - 0,35 единиц оптической плотности; проба Гесса - 365 условных единиц; С-реактивный белок - ++++; α-глобулины - 22%; ревматоидный фактор (РФ) - 1:160; содержание молекул средней массы - 0,46 единиц оптической плотности; активность церулоплазмина - 23,9 условных единиц.

Анализ синовиальной жидкости: бурая, мутная, вязкость - низкая, цитоз - 10,8·10⁹/л; лимфоциты - 17%, нейтрофилы - 81%, макрофаги - 2%, рагоцитов - нет.

У описанной больной пониженная неспецифическая резистентность организма, сопровождающаяся наличием выраженных клинических симптомов эндогенной интоксикации, высокой (III) активностью воспалительного процесса, множественным поражением суставов с выраженной деструкцией, подтверждалась значительным повышением содержания молекул средней массы, сочетающимся с низкой активностью церулоплазмина в сыворотке крови. Лечение данной больной должно быть дополнено специальными мероприятиями, направленными на повышение неспецифической резистентности организма.

Таким образом, заявляемый способ оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата позволяет быстро, просто и объективно оценить неспецифическую резистентность организма и выделить группу пациентов, нуждающихся в повышении компенсаторных возможностей организма.

Изобретение отностится к области медицины и может быть использовано для оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата. Способ оценки неспецифической резистентности организма заключается в изучении показателей содержания молекул средней массы и активности церулоплазмина в сыворотке крови. В случае превышения содержания молекул средней массы 0,40 единиц оптической плотности и активности церулоплазмина ниже 25,00 условных единиц константируют пониженную неспецифическую резиситентность организма. Использование способа позволяет за короткое время объективно оценить неспецифичекую резистентность организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата.

Способ оценки неспецифической резистентности организма при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, включающий определение содержания компонентов антиоксидантной системы крови, отличающийся тем, что в качестве исследуемого субстрата используют сыворотку крови, дополнительно определяют в ней содержание молекул средней массы, а в качестве компонента антиоксидантной системы выбирают церулоплазмин, и если содержание молекул средней массы выше 0,40 единиц оптической плотности, а активность церуллоплазмина при этом ниже 25,00 условных единиц, то констатируют пониженную неспецифическую резистентность организма.