СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ОБЩЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА МЛЕКОПИТАЮЩИХ Российский патент 2010 года по МПК A01K67/02 A61K35/14 

Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицины и может быть использовано для повышения общей неспецифической резистентности организма млекопитающих при различных патологических состояниях, связанных с развитием перекисно-антиоксидантного дисбаланса и выраженными нарушениями иммунного статуса.

Известен способ повышения компенсаторных возможностей млекопитающих, состоящий во вдыхании гипоксической газовой смеси, чередующемся с вдыханием атмосферного воздуха. При этом используют часть выдыхаемого воздуха для повторного вдыхания, уменьшают расход гипоксической газовой смеси до появления у млекопитающего затрудненного дыхания. После чего увеличивают расход гипоксической газовой смеси до уменьшения затрудненного дыхания и поддерживают расход гипоксической газовой смеси на уровне, обеспечивающем умеренно-затрудненное дыхание млекопитающего (патент РФ №2108814, кл. А61М 16/00. Опубл. 20.04.1998 г.).

Однако известный способ технически сложен и трудоемок в исполнении.

Известен также способ повышения резистентности организма в эксперименте, заключающийся в том, что проводят забор 0,7-1,0 мл крови из вены, филграстим в дозе 10 мг/кг веса инкубируют с этой кровью 45 минут при 37°С. После чего осуществляют реинфузию (патент РФ №2278690, кл. А61K 38/17, А61Р 37/02. Опубл. 27.06.2006 г.).

Недостатком данного способа является трудоемкость и сложность выполнения (необходимость забора крови, ее последующее инкубирование с препаратом филграстим и выдерживание полученной смеси при конкретной температуре в течение определенного времени) и внутривенная реинфузия полученной смеси.

Наиболее близким к предлагаемому по своей технической сущности является способ повышения общей неспецифической резистентности, включающий внутримышечное введение неспецифического иммуноглобулина с дополнительным назначением для применения внутрь биологически активного стимулятора в виде водного раствора 7-8%-ной концентрации в дозе 2,0-2,5 мл/кг массы животного в течение 10-15 суток с интервалом в 24 часа (патент РФ №2305551, кл. А61K 36/28, А61K 36/53, А61K 36/484, А61Р 37/00. Опубл. 10.09.2007 г.).

Недостатком прототипа является то, что для его осуществления помимо внутримышечного (парентерального) введения белкового препарата требуется дополнительное применение биологически активного многокомпонентного стимулятора, состоящего из экстрактов трав и корней. Кроме того, данный способ длителен по проведению (10-15 суток).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является упрощение способа и сокращение срока достижения положительного результата по повышению общей неспецифической резистентности организма.

Поставленная задача решается тем, что в способе повышения общей неспецифической резистентности организма млекопитающих путем парентерального введения белкового препарата, в качестве белкового препарата используют «Церулоплазмин», вводимый внутривенно в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции через день.

«Церулоплазмин» («Ceruloplasminum») - полифункциональный лекарственный препарат, представляющий собой гликопротеид альфа-2-глобулиновой фракции крови. Препарат разрешен к медицинскому применению РФ (Справочник Видаль. «Лекарственные препараты в России»: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2006 г., с.Б-1180).

Опытным путем авторами заявленного изобретения установлено, что доза церулоплазмина, составляющая 7,5 мг/кг массы тела животного, является оптимальной для достижения ожидаемого эффекта по повышению резистентности организма за счет улучшения состояния перекисно-антиоксидантного дисбаланса.

Доза менее 7,5 мг/кг (5,0 мг/кг) не обеспечивает полноценного эффекта по повышению общей неспецифической резистентности организма, а доза более 7,5 мг/кг (10 мг/кг) не дает дополнительного положительного эффекта к полученному.

Общий курс лечения, состоящий из 3 внутривенных инъекций, проводимых через день, оптимален для достижения терапевтического эффекта и улучшения состояния перекисно-антиоксидантного дисбаланса в условиях экспериментального артрита у кроликов, что подтверждается данными инструментальных и лабораторных методов исследований.

Технический результат заключается в нормализации перекисно-антиоксидантного баланса посредством коррекции несостоятельности ферментного звена антиоксидантной системы.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Кролик с экспериментальным ревматоидным артритом фиксируется на станке для лабораторных животных. Перед введением препарата место инъекции обрабатывается 5%-ным раствором йода. Введение церулоплазмина осуществляется в краевую вену уха медленно стерильным шприцом в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции, проводимых через день. После манипуляции место инъекции заклеивается бактерицидным пластырем.

Заявляемый способ был апробирован на 38 кроликах породы «Шиншилла русская», находившихся в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище. Все эксперименты на животных проводились в соответствии со стандартами Этического комитета и Хельсинской декларации 1983 г.

Экспериментальные животные были разделены на 5 групп:

1-я группа (контрольная) - 7 интактных (здоровых) кроликов;

2-я группа (сравнения) - 9 кроликов с экспериментальным ревматоидным артритом, без лечения;

3-я группа (опытная) - 7 кроликов с экспериментальным ревматоидным артритом, которым проведен курс внутривенных инъекций церулоплазмина в дозе 5,0 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции, проводимых через день;

4-я группа (опытная) - 8 кроликов с экспериментальным ревматоидным артритом, которым проведен курс внутривенных инъекций церулоплазмина в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции, проводимых через день;

5-я группа (опытная) - 7 кроликов с экспериментальным ревматоидным артритом, которым проведен курс внутривенных инъекций церулоплазмина в дозе 10,0 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции, проводимые через день.

Пример. У кролика №17 массой 3,4 кг был сформирован экспериментальный ревматоидный артрит по методике Pettipher E.R. et al., (1987). Формирование модели подтверждалось клиническими, инструментальными и лабораторными методами исследования.

При визуальном осмотре животное малоподвижное по сравнению с интактными кроликами. У него был снижен аппетит, вес составил 3,220 кг.

Объем опытного сустава увеличен почти в 1,5 раза по сравнению с симметричным суставом. Из-за отека и выраженной болевой реакции кролик не опирался на эту конечность.

Тепловизионное обследование подтвердило артрит правого коленного сустава. Обнаруженная температурная реакция в области правого коленного сустава проявлялась разницей температур между опытным и симметричным суставом и составляла 0,9°С.

Наряду с описанными клинической и тепловизионной картинами заболевания обнаружены изменения и в лабораторных показателях. У кролика имелись метаболические нарушения как общего, так и местного характера.

Отмечена выраженная общая активность воспалительного процесса, проявлявшаяся снижением уровня гемоглобина - 118,20 г/л при норме 124,30±0,80 г/л; количества эритроцитов - 3,33·10¹²/л при норме 4,04±0,10·10¹²/л; повышением СОЭ - 7,40 мм/ч при норме 2,8±0,20 мм/ч и общего количества лейкоцитов - 10,14·10⁹/л при норме 7,60±0,11·10⁹/л, а также их палочкоядерных - 5,82% при норме 3,96±0,18% и сегментоядерных - 51,37% при норме 42,60±0,81% форм. Лимфоциты составили 33,26% при норме 47,80±0,84%; эозинофилы - 2,57% при норме 1,49±0,10%; моноциты - 4,62% при норме 3,44±0,12%.

Повышенная активность ферментов (аланинаминотрансфераза - 29,4 Е при норме - 24,8 Е; аспартатаминотрансфераза - 53,6 Е при норме - 48,5 Е;

гамма-глутамилтранспептидаза - 5,7 Е при норме - 4,2 Е) свидетельствовала о развитии поражения печени, а повышение содержания общего белка до 61,8 г/л при норме - 56,35 г/л и мочевины до 7,02 ммоль/л при норме - 5,95 ммоль/л говорило о нарушении белкового обмена и функции почек соответственно.

Также был обнаружен перекисно-антиоксидантный дисбаланс, заключавшийся в активации процессов перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид - 5,2 мкмоль/л при норме 3,59±0,15 мкмоль/л) и несостоятельности ферментного звена антиоксидантной системы крови (церулоплазмин - 22,14 у.е. при норме 27,77±1,03 у.е.).

У кролика имелось существенное повышение содержания лактата в крови - 17,12 ммоль/л при норме 10,86±0,15 ммоль/л и снижение уровня рН крови - 7,32 при норме - 7,42±0,01, что свидетельствовало о нарушении кислотно-основного равновесия.

Имелась статистически достоверная напряженность иммунопатологических реакций, определяемая по повышенному содержанию циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови - 21,10 у.е. по сравнению с нормальными величинами у интактных животных - 13,00±1,56 у.е.

Общая или совокупная выраженность метаболических нарушений оценивалась по уровню молекул средней массы - 0,312 ед.о.п. при норме 0,236±0,002 ед.о.п.

Описанные выраженные метаболические нарушения, выявленные у животных с экспериментальным ревматоидным артритом, были схожи с аналогичными изменениями у больных ревматоидным артритом, которые приводили к снижению общей неспецифической резистентности организма при данной патологии.

Данному кролику проведена терапия с помощью лекарственного препарата «церулоплазмин», вводимого в вену медленно в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекций через день.

После проведенного курса лечения наблюдалось улучшение общего состояния животного. При этом отмечалось уменьшение отечности и температуры опытного сустава по сравнению с исходным состоянием. Пальпация сустава безболезненна. Улучшение клинической картины заболевания подтверждали и данные лабораторного обследования.

Была выявлена положительная динамика в результатах лабораторных показателей: повышение уровня гемоглобина до 122,5 г/л и количества эритроцитов до 3,58·10¹²/л, снижение СОЭ до 3,7 мм/ч, общего количества лейкоцитов до 8,3·10⁹/л, палочкоядерных нейтрофилов до 4,4% и сегментоядерных нейтрофилов до 46,1%, а также снижение эозинофилов до 2,19%, моноцитов до 3,81% и повышение лимфоцитов до 39,14%.

Имелось также снижение активности ферментов (аланинаминотрансфераза до 26,8 Е, аспартатаминотрансфераза до 50,4 Е, гамма-глутамилтранспептидаза до 4,8 Е), содержания общего белка до 59,0 г/л и мочевины до 6,84 ммоль/л в сыворотке крови животного.

Показатели перекисно-антиоксидантного баланса также имели положительную динамику: снижение малонового диальдегида до 4,7 мкмоль/л и повышение активности церулоплазмина до 24,8 у.е.

У данного кролика отмечалось повышение уровня рН крови до 7,35, снижение содержания циркулирующих иммунных комплексов до 16,00 у.е., уровня лактата до 15,80 ммоль/л и содержания молекул средней массы до 0,278 ед.о.п.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить общую неспецифическую резистентность организма в условиях экспериментального ревматоидного артрита, сопровождающегося развитием перекисно-антиоксидантного дисбаланса и нарушениями иммунного статуса, что возможно за счет внутривенного введения церулоплазмина. Данный препарат, проявляя антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства, запускает молекулярные механизмы, которые обеспечивают активацию защитно-приспособительных реакций. Последнее достигается устранением несостоятельности антиоксидантной системы защиты организма, стимуляцией гемопоэтических и иммунологических процессов, а также снижением степени выраженности интоксикации организма в целом.

Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицины. Способ включает парентеральное введение белкового препарата. При этом в качестве белкового препарата используют «Церулоплазмин». Церулоплазмин вводят внутривенно в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции через день. Способ позволяет усилить антиоксидантную защиту организма животных, стимулировать гемопоэтические и иммунологические процессы, и тем самым обеспечить активацию защитно-приспособительных реакций.

Способ повышения общей неспецифической резистентности организма млекопитающих путем парентерального введения белкового препарата, отличающийся тем, что в качестве белкового препарата используют «Церулоплазмин», вводимый внутривенно в дозе 7,5 мг/кг массы тела животного, общим курсом 3 инъекции через день.