СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДИСФУНКЦИЙ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ Российский патент 1998 года по МПК A61K31/445 

Изобретение относится к иммунологии и медицине и может быть использовано для коррекции функций гранулоцитарного ряда.

Проблема целенаправленного воздействия на иммунный процесс неслучайно привлекает внимание. Стимуляция иммунного ответа нужна не только в клинике, но и в иммунопрофилактике, в промышленной иммунологии (биотехнологии).

В последнее десятилетие появилась новая медицинская специальность - иммунофармакология. Ее основной задачей является фармакологическая коррекция нарушений иммунной системы с применением иммуноактивных средств, направленных на стимуляцию или угнетение функций клеток, участвующих в иммунном ответе. Сегодняшний этап изучения новых эффективных препаратов характеризуется поиском соединений с относительно селективным действием на популяции и субпопуляции иммунокомпетентных клеток (Ширинский В.С. Тезисы 1-го Всесоюзного съезда иммунологов. - Дагомыс, 1989, т.I, с. 459).

Основные направления исследования центральных механизмов регуляции резистентности организма отражают три главных аспекта: изучение нервных, эндокринных, нейромедиаторных механизмов регуляции защитных реакций в норме и патологии, а также способов их нейрогуморальной и фармакологической коррекции в эксперименте и клинической практике (Корнеева Е.А. Тезисы докладов к IV Всесоюзному симпозиуму "Регуляция иммунного гомеостаза". - Суздаль, 1986, с. 10.).

Недостаточность функционирования нейтрофильных гранулоцитов (НГ) рассматривается как фактор риска для развития многих патологических процессов. Дисфункции НГ могут сочетаться и с количественными изменениями, когда имеет место либо нейтропения, либо нейтрофилия. Очевидная роль НГ в поддержании иммунного гомеостаза в норме и при различных заболеваниях является основанием для поиска средств, коррегирующих уровень их функционирования.

Известны различные иммуноактивные препараты, влияющие на функционирование неповрежденных и поврежденных НГ. Исследованы миелопептид, даларгин и другие синтетические аналоги лей-энкефалинов (линейный и циклический пептиды), декарисс, рекомбинантный интерлейкин-1β (ИЛ-1).

Влияние даларгина и синтетических аналогов лей-энкефалина на интактные и поврежденные НГ является разнонаправленным и дозозависимым. Модулирующие эффекты этих препаратов распространяются на рецепторный аппарат НГ, не затрагивая их другие функции.

Широко изучены эффекты миелопида (МП). В экспериментах in vivo на моделях дисфункций НГ обнаружены модулирующие и коррегирующие эффекты МП на экспрессию рецепторов к эритроцитам барана (ЭБ) поврежденными и интактными НГ. Кроме того, МП активирует поглотительную способность НГ, вызывая увеличение объема захвата БАГ, восстанавливает нарушенные процессы переваривания БАГ и блокированный ответ в функциональных нагрузочных тестах. Клинико-экспериментальное исследование МП продемонстрировало высокую клиническую, протективную и лечебную эффективность препарата. Однако МП не вызывает количественного прироста циркулирующих НГ и не может быть использован для коррекции ИДС по системе НГ, сопровождающихся нейтропенией. Кроме того, МП стимулирует гуморальный ответ, что ограничивает его использование при аутоиммунных заболеваниях.

Декарисс проявляет коррегирующее действие за счет восстановления фагоцитарной функции (киллинг и переваривание БАГ) и метаболической активности НГ, но не вызывает количественного прироста циркулирующих НГ, количественного увеличения розеткообразующих субпопуляций НГ. Кроме того, применение препарата ограничено общим количеством лейкоцитов (не используется при α < 5000).

В 1990 г. были проведены исследования, посвященные детекции и первичной характеристике сигма-рецепторов на НГ периферической крови человека (Нестерова И.В., Ярыгин К.Н., Чудилова Г.А. Тезисы докладов I съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992, с. 232). Среди различных типов сигма-рецепторов выявлены чувствительные к галоперидолу сигма-рецепторы (σ_h). Открытие факта существования σ-рецепторов на поверхности цитоплазматической мембраны НГ позволило с совершенно новых позиций подойти к вопросам регуляции функций НГ - направленно используя антагонист сигма-рецепторов галоперидол. Также известны литературные данные об иммунологической активности нейротропных средств. Известно, например, что галоперидол является наиболее активным в иммунологическом отношении (Девойно Л.В., Ильченко Р.Ю., 1985; Ратников В. И. , Шайдаров М.З. Тезисы к докладам IV Всесоюзного симпозиума "Регуляция иммунного гомеостаза". - Суздаль, 1986). Однако сведения о его эффекте достаточно противоречивы. Некоторые авторы сообщают об иммуносупрессивной активности препарата, есть и противоположные данные (Тоомло О.Х. и др. ). Показано, что действие галоперидола зависит от дозы и вызванной нейролептиком гипотермии (Шигаев Н.И. Тез.доклада I Съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992, с.556). Для изучения эффектов галоперидола широко используется оценка гуморального иммунитета по числу АОК в селезенке. Данные о влиянии галоперидола на интактные и тем более на поврежденные нейтрофильные гранулоциты отсутствуют в литературе.

За прототип средства для иммунокоррекции дисфункций НГ было избрано ранее предложенное средство - рекомбинантный интерлейкин-1β (Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А., Слынько Л.И. - Иммунология, 1993, N 4).

Эффекты рекомбинантного ИЛ-1β были изучены на модели гепарининдуцированного ИДС по системе НГ. Рекомбинантный ИЛ-1β стимулирует экспрессию рецепторов к комплементу и ЭБ в реакциях розеткообразования и отменяет эффекты гепарининдуцированной депрессии: нейтропению, дефекты фагоцитарной функции рецепторного аппарата - эффекты, аналогичные влиянию галоперидола.

Однако рекомбинантный ИЛ-1β оказывает влияние не только на НГ, но и на лимфоциты, обладает побочным действием - способен вызывать лихорадку. Кроме того, препарат труднодоступен, так как производится в ограниченных количествах, промышленный выпуск интерлейкина-1β в нашей стране не налажен.

Исходя из этого целью изобретения явилось расширение спектра коррекции дисфункций НГ с помощью галоперидола.

Для осуществления намеченной цели была поставлена задача изучить влияние галоперидола в дозах, описанных в литературе, как иммунокоррегирующие на количество циркулирующих НГ и их основные функции (рецепторную, фагоцитарную и др.).

Сущностью изобретения является использование галоперидола, в результате чего отмечается значительная стимуляция количества циркулирующих нейтрофилов в периферической крови, усиливается спонтанное и комплементарное розеткообразование, повышается фагоцитарная активность НГ, полностью отменяются эффекты депрессии нейтрофильного звена.

Для технического решения поставленной задачи были использованы линейные мыши F₁(CBA•C₅₇BI), галоперидол в концентрации 1,2-3,0 мкг/кг, шприцы и иглы инъекционные, а также все необходимое оборудование для тестирования состояния системы НГ по методам, описанным ранее (Нестерова И.В. и соавт. Методические рекомендации. - Краснодар, 1989).

Новизна изобретения заключается в использовании галоперидола с целью коррекции поврежденных функций нейтрофильных гранулоцитов.

Средство коррекции дисфункций НГ опробировано в эксперименте следующим образом: галоперидол в дозе 1,2-3,0 мкг/кг вводят однократно в/в в объеме 0,2 мл/мышь. Мыши были разделены на следующие группы: I - фоновая группа мышей; II - введение галоперидола в/в интактным животным (оценка системы НГ через 1 ч); III - введение гепарина в дозе 100 мкг/кг для создания модели депрессии функций НГ (оценка системы НГ через 1 ч); IV - введение галоперидола за 1 ч до введения гепарина (оценка системы НГ через 1 ч после введения гепарина); V - введение галоперидола через 1 ч после введения гепарина (оценка системы НГ через 1 ч).

НГ выделяли из периферической крови мышей, забитых декапитацией, лизисом эритроцитов и лимфоцитов гипертоническим раствором хлорида аммония с последующим дифференциальным центрифугированием (по Eggleton et al, J. of Immunobogical Methods, N 121, 1989) спустя 1 ч после последней инъекции.

Влияние галоперидола проверяли по уровню содержания НГ спонтанных розеткообразующих клеток с ЭБ (ранние и поздние E-POH и комплементарных с C₃-компонентом комплемента (EAC-POH). Оценивали поглотительную и переваривающие функции фагоцитов по отношению к бактериям St. aureuss (музейный штамм N 209).

Результаты исследования свидетельствуют о том, что галоперидол в дозе 1,2-3,0 мкг/кг оказывает стимулирующее влияние на спонтанное и комплементарное розеткообразование интактных НГ. Показано, что уровень ранних E-POH в абсолютном содержании в 1,6 раза выше, чем у интактных животных, и в 3 раза - чем у мышей с гепарининдуцированной депрессией (p₁<0,001; p₂<0,001). Аналогичное действие препарата отмечено по отношению к EAC-POH. Введение галоперидола оказывало стимулирующее влияние на содержание поздних E-POH у интактных мышей, однако отменяло эффект депрессии уровня E-POH, индуцированное гепарином. Введение галоперидола интактным мышам вызывает повышение фагоцитарной активности клеток на 53% по сравнению с группой опытных мышей с гепарининдуцированной депрессией и на 23% по сравнению с фоновыми значениями.

Введение галоперидола за 1 ч до введения гепарина позволило проверить протективные возможности изучаемого препарата. При этом выявлено, что галоперидол не только отменяет эффект депрессии, индуцированной гепарином, но и вызывает значительную стимуляцию абсолютного содержания НГ, уровня спонтанных и комплементарных розеткообразующих НГ, показателей фагоцитоза в сравнении с исходными фоновыми данными и показателями II опытной группы (табл. 1 и 2).

Установлено, что галоперидол, вводимый на пике гепарининдуцированной депрессии системы НГ, отменяет эффект количественной депрессии системы НГ и угнетения их розеткообразующей и фагоцитарной функций (табл. 1 и 2).

В исследованиях получены данные о том, что галоперидол индуцирует мощный выброс из костного мозга в кровь НГ у интактных животных. Данный феномен отмечен при введении галоперидола в различных временных сочетаниях с гепарином.

Таким образом, анализ полученных результатов свидетельствует о том, что галоперидол в системе in vivo в дозе 1,2-3,0 мкг/кг является перспективным иммуномодулятором с выраженными протективными свойствами по отношению к интактным и поврежденным НГ, позволяющим использовать его для иммунокоррекции различных патологических состояний, обусловленных дисфункциями системы НГ, а также для профилактики их возникновения.

Галоперидол в клинике может применяться в малых дозах. Суточная доза составляет 0,18-0,75 мг, при глубоких поражениях НГ до 1,5 мг. Суточную дозу назначают в таблетках или каплях в 2-3 приема. Выпускается 0,2%-ный раствор галоперидола во флаконах по 10 мл (10 капель содержат 1 мг препарата). Препарат назначают с обязательным контрольным исследованием системы НГ в динамике. Необходимо также учитывать индивидуальную переносимость препарата.

Пример (табл. 3). Медико-социальный эффект от применения указанного средства определяется улучшением своевременной и адекватной коррекции вторичных иммунодефицитных состояний, обусловленных нарушениями со стороны системы нейтрофильных гранулоцитов. Правильно выбранная коррекция с помощью предлагаемого препарата позволит повысить уровень лечебной помощи, сократит затраты на проведение лечебных мероприятий, сократит время пребывания больных в стационаре на 10-15%, снизит потери временной нетрудоспособности среди матерей, имеющих детей со вторичными ИДС, а также из группы часто и длительно болеющих, на 65%.

Пример 1. 10 мышам линии F(CBA•C₅₇BI) однократно в/в вводили галоперидол в дозе 1,2 мкг/кг. Через 1 ч мышей забивали декапитацией, из крови методом дифференциального центрифугирования выделяли нейтрофилы и определяли количество циркулирующих нейтрофилов (НГ), а также функциональное состояние НГ в тестах спонтанного (раннего и позднего) розеткообразования и комплементарного розеткообразования (EAC-POH), оценивали фагоцитарную активность НГ (ФАН). В качестве контрольных значений использовали аналогичные показатели у интактных мышей.

Наблюдали увеличение количества циркулирующих НГ с 1744,0 ± 60,4 до 2389,2 ± 135,2 в 1 мм³; количества E-POH ранних с 575,3 ± 39,6 до 943,1 ± 74,5, поздних E-POH с 628,8 ± 31,2 до 634,6 ± 57,4, EAC-POH с 569,7 ± 20,4 до 986,5 ± 94,6 в 1 мм³; увеличение % ФАН с 64,5 ± 1,1 до 79,5 ± 1,6.

Пример 2. 20 мышам линии F(CBA•C₅₇BI) однократным в/в введением гепарина в дозе 100 мкг/кг создавали ИДС по системе нейтрофильных гранулоцитов. Через 1 ч 10 мышей забивали декапитацией, выделяли кровь и оценивали количественное и функциональное состояние НГ в тестах спонтанного и комплементарного розеткообразования, оценки фагоцитарной активности. Другой группе животных через 1 ч после инъекции гепарина вводили однократно в/в галоперидол в дозе 1,2 мкг/кг. Через 1 ч тестировали систему НГ.

Под действием гепарина уровень циркулирующих НГ составил 1660,5 ± 107,4, количество ранних E-POH - 341,1 ± 37,1, поздних E-POH - 355,4 ± 24,42, EAC-POH-282,1 ± 37,1; %ФАН - 46,0 ± 1,07. Введение на этом фоне галоперидола приводит к повышению количества циркулирующих НГ до 2969,5 ± 179,5, количества ранних E-POH - до 1140,7 ± 63,9, поздних E-POH - до 1189,9 ± 96,6, EAC-POH - до 951,6 ± 29,0 в 1 мм³; % ФАН - до 76,85 ± 3,58.

Изобретение относится к медицине и иммунологии и может быть использовано при поиске и подборе оптимальных иммунокорректоров имуннодефицитных состояний, обусловленных нарушениями в системе нейтрофильных гранулоцитов. Сущность изобретения является использование галоперидола, в результате отмечается значительная стимуляция количества циркулирующих нейтрофилов в периферической крови, усиливается спонтанное и комплементарное розеткообразование, повышается фагоцитарная активность нейтрофилов, полностью отменяются эффекты депрессии нейтрофильного звена. Средство позволяет использовать галоперидол для иммунокоррекции различных патологических состояний, обусловленных дисфункциями системы нейтрофильных гранулоцитов, а также профилактики их возникновения. 3 табл.

Иммунокорригирующее средство для коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов, отличающееся тем, что оно представляет собой галоперидол.