МОДИФИЦИРОВАННЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭСТРИОЛА В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН Российский патент 2009 года по МПК G01N33/52 G01N33/487 G01N33/493 

Предлагаемое изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к модифицированному способу определения эстриола (Э) в биологической жидкости беременных женщин. Эстриол (Э) - стероидный гормон, определение которого является важным для правильной и своевременной диагностики функционального состояния системы «мать-плацента-плод». В количественном отношении Э начинает доминировать над другими эстрогенами во II и III триместре беременности. Значительное снижение уровня этого гормона является наиболее ранним симптомом, указывающим на угрозу жизни плода. Недостаток синтеза Э вызывает угрозу прерывания во второй половине беременности и угрозу преждевременных родов. Беременность, проходящая с тяжелым токсикозом, сопровождается низким уровнем Э и, как правило, завершается внутриутробной гибелью плода. Низкий уровень Э является наиболее достоверным показателем анэнцефалии плода. При резус несовместимости также отмечается низкое содержание этого гормона. Наблюдение детей в возрасте 8-14 лет, родившихся у матерей с низким содержанием Э при беременности, показало наличие у них большого количества физических недостатков. Если беременность протекает с клиническими формами артериальной гипотонии наряду с имеющимися осложнениями со стороны плода, а также функционально-морфологическими изменениями ткани плаценты, то снижение экскреции Э указывает на нарушение метаболизма в фето-плацентарном комплексе.

В абсолютном большинстве случаев об уровне Э в организме судят по результатам анализа крови, проводимого с помощью иммунных методов, которые обладают существенными недостатками. Главный их них - значительная вариация нормативных показателей, лежащих в широких пределах и перекрывающихся с патологическими значениями. Кроме того, данный гормон подвержен существенным моментальным колебаниям. Поскольку период полураспада Э в крови матери составляет всего 20-30 минут, значимость единичного определения мала и для установления истиной картины требуются частые периодические исследования, что, естественно, нежелательно. К тому же проба нестабильна и, следовательно, должна тестироваться практически мгновенно, что практически трудновыполнимо.

Известен способ определения эстриола, описанный в работе «Флюориметрический метод определения суммарного содержания эстрогенов у женщин» и опубликованный в книге А.Г.Резникова «Методы определении гормонов», гл.7.4, стр.320-328.

Недостатком этого метода является неспецифичность окраски, что приводит к снижению качества и точности определения эстриола, и введение поправки Алена для учета неспецифической окраски, что приводит к усложнению и увеличению длительности процесса.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является колориметрический метод определения эстриола в моче беременных женщин, описанный в работе G.Pincus, G.Wheeler, G.Young, P.A.Zahl «The colorimetric determination of urinary estrin», The journal of Biological Chemistry, Vol.116, №1, received for publication, July 14, 1936. В данной работе рассмотрены известные к тому времени методы проведения реакций, способных привести к образованию хромогенов, которые пригодны для последующего колоритетрического определения. Среди прочих методов, в качестве реагента упоминается концентрированная серная кислота.

Недостатком метода, как и в предыдущем случае, является неспецифичность окраски, что приводит к снижению качества и точности определения эстриола.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа модификации определения гормона эстриола (Э) в моче беременных женщин.

Технический результат, который может быть получен от использования предлагаемого изобретения, заключается в усилении окраски и повышении ее специфичности, что, в конечном итоге, приводит к усилению чувствительности метода определения эстриола (Э).

Кроме того, предлагаемый способ позволяет учесть всю сумму данного гормона, синтезированного в течение суток, и тем самым исключить влияние на результаты моментальных колебаний.

Поставленная задача решается тем, что в способе определения эстриола в биологической жидкости беременных женщин проводят кислотный гидролиз суточный мочи в водяной бане при температуре 100°С, экстрагируют 10 мл серного эфира, который выпаривают до сухого осадка, проводят модифицированную цветную реакцию кобера, разбавляют реакционную смесь в 0,9М трифторуксусной кислоты в хлороформе и через 15 минут проводят фотометрирование на микроколориметре и определяют количество эстриола.

Добавление смеси трифторуксусной кислоты, растворенной в хлороформе, приводит к экстракции в смесь и одновременной очистке хромогенов, при этом значительно усиливается окраска.

Определение эстриола осуществляют следующим образом.

Берут 2 мл мочи суточного количества. Проводят кислотный гидролиз в водяной бане при температуре 100°С. Затем экстрагируют 10 мл серного эфира, в делительной воронке эфир выпаривают до образования сухого осадка. В специальной кювете проводят модифицированную цветную реакцию Кобера. После окончания реакции проводят разбавление реакционной смеси 1.7 мл 0,9М трифторуксусной кислоты в хлороформе. В результате хромогены Кобера эстрагируют в хлороформ, в который введена трифторуксусная кислота. Интенсивность окраски развивается в течение 15 минут.

Затем проводят определение эстриола фотометрированием на микроколориметре согласно известной модифицированной методике Кобера.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к модифицированному способу определения эстриола в биологической жидкости беременных женщин. Предложен способ определения эстриола в биологической жидкости беременных женщин, при котором проводят кислотный гидролиз суточной мочи в водяной бане при температуре 100°С, экстрагируют 10 мл сернокислого эфира, который выпаривают до сухого осадка, проводят модифицированную цветную реакцию кобера, разбавляют реакционную смесь в 0,9М трихлоруксусной кислоты в хлороформе и через 15 минут проводят фотометрирование на микроколориметре и определяют количество эстриола. Предложенный способ позволяет учесть всю сумму данного гормона, синтезированного в течение суток, и исключить влияние на результаты моментальных колебаний. Способ приводит к усилению чувствительности метода определения эстриола.

Способ определения эстриола в биологической жидкости беременных женщин, отличающийся тем, что проводят кислотный гидролиз суточной мочи в водяной бане при температуре 100°С, экстрагируют 10 мл серного эфира, который выпаривают до сухого осадка, проводят модифицированную цветную реакцию кобера, разбавляют реакционную смесь в 0,9М трифторуксусной кислоты в хлороформе и через 15 мин проводят фотометрирование на микроколориметре, и определяют количество эстриола.