МОНОВАЛЕНТНЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ CD40L И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2009 года по МПК A61K39/395 C07K16/28 A61P37/06 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается полипептидов антител, которые моновалентно связывают CD40L. Сущность изобретения включает полипептиды антител, которые моновалентно связывают CD40L и могут ингибировать активность CD40L, позволяя в то же время избежать потенциальных нежелательных эффектов, которые могут возникать при применении антител, способных бивалентно либо мультивалентно связывать CD40L. В одном аспекте полипептид моновалентного анти-CD40L антитела состоит из, либо содержит одиночный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически связывает и подавляет активность CD40L, предпочтительно в значительной степени не стимулируя активность CD40 и/либо CD40L. В другом аспекте полипептид моновалентного анти-CD40L антитела представляет собой полипептид антитела человека. Настоящее изобретение также включает способы подавления взаимодействий CD40/CD40L в организме индивидуума и способы лечения заболеваний либо расстройств, вовлекающих взаимодействия CD40/CD40L, включающие введение индивидууму полипептида моновалентного анти-CD40L антитела. Преимущество изобретения заключается в повышении специфичности. 6 н. и 67 з.п. ф-лы, 13 ил.

1. Применение полипептида антитела, включающего полипептид одиночного вариабельного домена антитела, в приготовлении медикаментов для лечения, либо предотвращения симптома аутоиммунного заболевания, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена является моновалентным в отношении связывания с CD40L (gp39) и подавляет активность CD40, либо CD40L, либо обоих.

2. Применение по п.1, где указанное аутоиммунное заболевание представляет собой заболевание, выбранное из группы, состоящей из системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, диабета, отторжения аллотрансплантата, отторжения ксенотрансплантата, а также реакции "трансплантат против хозяина".

3. Применение по п.1 или 2, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание CD40L с CD40.

4. Применение по п.1, где полипептид антитела состоит из полипептида одиночного вариабельного домена.

5. Применение по п.1, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена представляет собой полипептид одиночного вариабельного домена антитела человека.

6. Применение по п.1, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена представляет собой V_H либо V_L домен.

7. Применение по п.1, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание CD40L с CD40 с IC50 в диапазоне от 20 пМ до 1,5 мкМ.

8. Применение по п.1, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание одиночного вариабельного домена антитела, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, с CD40L.

9. Применение по п.1, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена связывается с тем же эпитопом CD40, который связывается одиночным вариабельным доменом антитела, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.

10. Применение по п.1, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена включает аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 SEQ ID NO: 26.

11. Применение по п.1, где указанный полипептид антитела содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и SEQ ID NO: 246-360.

12. Применение по п.1, где указанный полипептид антитела имеет аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% гомологична SEQ ID NO: 26.

13. Применение по п.1, где указанный полипептид антитела имеет аминокислотную последовательность, которая идентична SEQ ID NO: 26.

14. Применение по п.1, где связывание указанного полипептида антитела с CD40L в значительной степени не стимулирует активность CD40 и/или CD40L.

15. Применение по п.1, где присутствие указанного полипептида антитела в стандартной системе для измерения агрегации тромбоцитов не приводит к агрегации более чем на 25% большей по сравнению с агрегацией, наблюдающейся в отрицательном контроле.

16. Полипептид антитела, который является моновалентным в отношении связывания с CD40L (gp39), где связывание указанного полипептида антитела с CD40L, в значительной степени, не стимулирует активность CD40 и/или CD40L, и где указанный полипептид включает одиночный вариабельный домен антитела, который специфично и моновалентно связывает CD40L, причем указанный полипептид в значительной степени ингибирует связывание CD40L с CD40.

17. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание CD40L с CD40 с IC50 в диапазоне от 20 пМ до 1,5 мкМ.

18. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание одиночного вариабельного домена антитела, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, с CD40L.

19. Полипептид антитела по любому из пп.16-18, который имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 85% идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и SEQ ID NO: 246-360.

20. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид антитела ингибирует связывание CD40 с CD40L и в значительной степени не стимулирует передачу сигналов, опосредованную CD40.

21. Полипептид антитела по п.16, где связывание указанного полипептида антитела с CD40L в значительной степени не индуцирует фосфорилирование JNK в Т-клетках Jurkat.

22. Полипептид антитела по п.16, где связывание указанного полипептида антитела с CD40L в значительной степени не индуцирует секрецию EFN-γ Т-клетками Jurkat, ко-стимулированными анти-CD3 антителом.

23. Полипептид антитела по п.16, где присутствие указанного полипептида антитела в стандартной системе для измерения агрегации тромбоцитов не приводит к агрегации более чем на 25% большей по сравнению с агрегацией, наблюдающейся в отрицательном контроле.

24. Полипептид антитела по п.16, который является моновалентным в отношении связывания с CD40L (gp39), где присутствие указанного полипептида антитела в стандартной системе для измерения агрегации тромбоцитов не приводит к агрегации более чем на 25% большей по сравнению с агрегацией, наблюдающейся в отрицательном контроле.

25. Полипептид антитела по п.16, где полипептид является ПЭГ-связанным.

26. Полипептид антитела по п.25, который имеет гидродинамический размер, составляющий, по меньшей мере, 24 кДа.

27. Полипептид антитела по п.25, где указанный ПЭГ связан с указанным антителом через остаток цистеина либо лизина.

28. Полипептид антитела по п.25, где общий размер ПЭГ составляет от 20 до 60 кДа, включительно.

29. Полипептид антитела по п.25, который имеет гидродинамический размер, составляющий, по меньшей мере, 200 кДа.

30. Полипептид антитела по п.25, который обладает повышенным временем полужизни in vivo по сравнению с такой же полипептидной композицией, не содержащей связанного полиэтиленгликоля.

31. Полипептид антитела по п.30, где время полужизни tα полипептидной композиции повышено на10% либо более.

32. Полипептид антитела по п.30, где время tα полужизни полипептидной композиции лежит в диапазоне от 0,25 мин до 12 ч.

33. Полипептид антитела по п.30, где the время полужизни tβ полипептидной композиции повышено на 10% либо более.

34. Полипептид антитела по п.30, где время полужизни tβ лежит в диапазоне от 12 до 48 ч.

35. Полипептид антитела по п.16, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и 246-360.

36. Полипептид антитела по п.16, который не содержит Fc домен.

37. Полипептид антитела по п.36, где присутствие указанного полипептида антитела в стандартной системе для измерения агрегации тромбоцитов не приводит к агрегации более чем на 25% большей по сравнению с агрегацией, наблюдающейся в отрицательном контроле.

38. Полипептид по п.16, где полипептид антитела содержит в себе один либо более каркасных участков, включающих аминокислотную последовательность, которая является такой же, как аминокислотная последовательность соответствующего каркасного участка, кодируемая сегментом гена зародышевой линии антител человека, либо аминокислотная последовательность одного либо более из указанных каркасных участков совместно содержит в себе до 5 аминокислотных различий по сравнению с аминокислотной последовательностью указанного соответствующего каркасного участка, кодируемой сегментом гена зародышевой линии антител человека.

39. Полипептид по п.16, где аминокислотные последовательности FW1, FW2, FW3 и FW4 полипептида антитела являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных участков, кодируемых сегментом гена зародышевой линии антител человека, либо аминокислотные последовательности FW1, FW2, FW3 и FW4 совместно содержат до 10 аминокислотных различий по сравнению с аминокислотными последовательностями соответствующих каркасных участков, кодируемыми указанным сегментом гена зародышевой линии антител человека.

40. Полипептид по п.39, где аминокислотные последовательности указанных FW1, FW2 и FW3 полипептида антитела являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных участков, кодируемые сегментами гена зародышевой линии антител человека.

41. Полипептид по п.39, где указанный сегмент гена зародышевой линии антител человека выбран из группы, состоящей из DP47, DP45, DP48 и DPK9.

42. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид включает одиночный вариабельный домен иммуноглобулина, который специфически и моновалентно связывает CD40L, и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и SEQ ID NO: 246-360.

43. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с тем же эпитопом CD40L, который связывается одиночным вариабельным доменом антитела, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.

44. Полипептид антитела по п.16, где указанный полипептид одиночного вариабельного домена включает аминокислотную последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 SEQ ID NO:26.

45. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, содержит последовательность SEQ ID NO: 26.

46. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям, и имеет последовательность, которая, по меньшей мере, на 80% гомологична последовательности SEQ ID NO: 26.

47. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26.

48. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26.

49. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

50. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26, и имеет последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26.

51. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям, и имеет последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26, и имеет последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

52. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26, и имеет последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

53. Полипептид антитела по п.16, где полипептид одиночного вариабельного домена, который связывается с CD40L, имеет аминокислотную последовательность, которая является идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, либо отличается от аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 не более чем по 25 аминокислотным позициям и имеет последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26, и имеет последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26, и имеет последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

54. Полипептид по п.16, включающий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 SEQ ID NO: 26.

55. Полипептид по п.16, включающий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 полипептида одиночного вариабельного домена антитела, включающего последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и 246-360.

56. Антагонист CD40L, имеющий последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 из SEQ ID NO: 26, и/или последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 из SEQ ID NO: 26, и/или последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 из SEQ ID NO: 26, где указанный антагонист выбран из группы, состоящей из полипептида одиночного вариабельного домена антитела, dAb, FAb, scFv, Fv, либо дисульфид-связанного Fv.

57. Антагонист CD40L по п.56, имеющий последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 из SEQ ID NO: 26, и последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26.

58. Антагонист CD40L по п.56, имеющий последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26, и последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

59. Антагонист CD40L по п.56, имеющий последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26, и последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

60. Антагонист CD40L по п.56, имеющий последовательность CDR1, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR1 SEQ ID NO: 26, и последовательность CDR2, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR2 SEQ ID NO: 26, и последовательность CDR3, которая, по меньшей мере, на 50% гомологична последовательности CDR3 SEQ ID NO: 26.

61. Полипептид по п.18, который связывается с тем же эпитопом CD40L, который связывается одиночным вариабельным доменом антитела, включающим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.

62. Полипептид по п.18, который связывается с тем же эпитопом CD40L, который связывается полипептидом одиночного вариабельного домена антитела, включающим последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7-82 и 246-360, где полипептид антитела содержит либо состоит из полипептида одиночного вариабельного домена антитела.

63. Композиция, включающая полипептид антитела по любому из пп.16-19, и второй полипептид антитела, который связывает лиганд, отличный от CD40L, где указанный полипептид антитела, который связывает лиганд, отличный от CD40L, связывает лиганд, выбранный из группы, состоящей из HSA, TNFa, IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-12, IL-18, IFN-γ, CD2, CD4, CD8, LFA1, LFA3, VLA4, CD80, B7-1, CD28, CD86, B7-2, CTLA-4 CD28, индуцируемой костимуляторной молекулы (ICOS), CD27, CD30, OХ40, CD45, CD69, CD3, CD70, лиганда индуцируемой костимуляторной молекулы (ICOSL), OX40L, медиатора проникновения герпес вируса HVEM, LIGHT.

64. Фармацевтическая композиция длительного высвобождения, включающая полипептид моновалентного анти-CD40L антитела по любому из пп.16-19.

65. Лиганд с двойной специфичностью, включающий первый одиночный вариабельный домен антитела, имеющий специфичность связывания с первым антигеном и второй одиночный вариабельный домен, имеющий связывающую активность в отношении второго антигена, где первым антигеном является CD40L, и второй одиночный вариабельный домен представляет собой поверхностный антиген антиген-презентирующих клеток, либо поверхностный антиген Т-клеток.

66. Лиганд по п.65, где поверхностный антиген антиген-презентирующих клеток выбран из группы, состоящей из поверхностных антигенов активированных макрофагов, поверхностных антигенов активированных В-клеток, поверхностных антигенов костимуляторного сигнального пути, и МНС.

67. Лиганд по п.66, где МНС относится к классу II.

68. Лиганд по п.67, где МНС класса II представляет собой альфа.

69. Лиганд по п.67, где МНС класса II представляет собой бета.

70. Лиганд по п.66, где поверхностный антиген антиген-презентирующих клеток выбран из группы, состоящей из CD28, индуцируемой костимуляторной молекулы (ICOS), CD27, CD30, OХ40, CD45, CD69, CD3, CD70, лиганда индуцируемой костимуляторной молекулы (ICOSL), OX40L, CD80, CD86, медиатора проникновения герпес вируса HVEM и LIGHT.

71. Лиганд по п.66, где поверхностный антиген антиген-презентирующих клеток выбран из группы, состоящей из CD28, индуцируемой костимуляторной молекулы (ICOS), CD27, CD30, OХ40, CD45, CD69 и CD3.

72. Лиганд по п.66, где поверхностный антиген представляет собой поверхностный антиген гена В7.

73. Лиганд по п.72, где поверхностный антиген гена В7 представляет собой В7-2, либо В7-1.
Приоритет по пунктам:

17.09.2004 пп.1-7, 13-17, 20-34, 36-41, 45 и 64;

08.04.2005 пп.8-12, 18-19, 35, 42-44, 46-63, 65-73.