СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРИТОНИТА Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине и может быть применено при моделировании перитонита.

Известен способ моделирования желчного перитонита, принятый за аналог, заключающийся в том, что животным предварительно создают очаг асептического воспаления путем введения внутримышечно стерильного 10%-ного раствора хлорида кальция с последующим внутрибрюшинным введением желчи в дозе 0,33 мл/100 г массы (пат. РФ №2175784, 1999).

Известен способ моделирования гнойно-воспалительного процесса в брюшной полости у лабораторных животных (пат. РФ №2151427, 1998), принятый за прототип. Согласно способу проводят катетеры через пункционные отверстия в передней брюшной стенке. Катетеры устанавливают в правом и левом поддиафрагмальных пространствах, правом и левом боковых каналах живота, малом тазу и центральной части брюшной полости и вводят в брюшную полость аутокровь в объеме 7-10 мл/кг массы тела; через 24 ч осуществляют введение микробной взвеси из стафилококка, кишечной палочки, палочки сине-зеленого гноя и стрептококка в равных соотношениях. На первом этапе вводят взвесь микробных тел в объеме 50-55 млрд микробных тел/кг массы тела животного, на втором и третьем - по 20-25 млрд микробных тел/кг. Введение взвеси осуществляют через шестичасовые промежутки. Способ позволяет получить модель перитонита со значительным приближением динамики патологического процесса к реальным клиническим условиям. Однако способ достаточно трудоемок и его точность ограничена.

Целью изобретения является повышение точности моделирования при снижении трудоемкости.

Технический результат достигается тем, что моделируют язву желудка по Окабе, в периульцерозную зону на 5-й день моделирования язвы вводят 5% водный раствор фрагментов молекулы альфа-фетопротеина человека - АФП _14-20 в дозе 0,02-0,06 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка и при частоте медленноволновой активности 13,3-14,1 в минуту и амплитуде 0,45-0,5 мВ в фундальном отделе желудка и при частоте медленноволновой активности 14,3-14,8 в минуту и амплитуде 0,37-0,44 мВ в антральном отделе желудка судят о формировании модели.

Моделирование перитонита осуществляли следующим образом.

Формировали язву нанесением 100% ледяной уксусной кислоты на границу фундального и антрального отделов желудка (модель язвы по Окабе). Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) фундального и антрального отделов желудка с помощью погружных и поверхностных электродов площадью контактной поверхности 0,1-0,3 мм² и 0,5-1 мм² соответственно. На 5-й день модели язвы проводили контрольную регистрацию ЭМА отделов желудка с последующим введением в периульцерозную зону 5% водного раствора альфа-фетопротеина (АФП_14-20) человека в дозе 0,02-0,06 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка.

Фоновая частота медленноволновой активности фундального отдела желудка на 5-й день язвы по Окабе составляла 7,6±1,1 в мин, амплитуда 0,14±0,02 мВ. Фоновая активность гладких мышц антрального отдела желудка представлена медленноволновой и спайковой активностью. Частота медленных волн ЭМА составила 7,5±0,9 в мин, амплитуда - 0,12±0,02 мВ. В 22% случаев отмечается низкоамплитудная спайковая активность частотой 0,2±0,02 на 100 медленных волн и амплитудой 0,1±0,02 мВ.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц фундального отдела желудка: частота увеличивается до 8,5±1,3 в мин (18%), амплитуда - до 0,18±0,03 мВ (28,5%). В 52% наблюдений отмечалась спайковая активность амплитудой 0,10±0,01 мВ, частотой 0,40±0,02 на 100 медленных волн.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц антрального отдела желудка: частота увеличивается до 8,3±1,2 в мин (10,7%), амплитуда - до 0,15±0,04 мВ (25%). В 22% наблюдений наблюдалась спайковая активность амплитудой 0,2±0,02 мВ, частотой 0,60±0,02 на 100 медленных волн (200%, p<0,01). То есть введение АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождается ростом медленноволновой и значительным увеличением спайковой активности отделов желудка, которая характеризует увеличение моторной деятельности желудка в целом.

На 10-й день язвы желудка в условиях введения альфа-фетопротеина АФП_14-20 частота медленноволновой активности составляет 13,3-14,1 в мин и амплитуда 0,45-0,5 мВ в фундальном отделе желудка; в антральном отделе желудка частота медленноволновой активности составляет 14,3-14,8 в мин и амплитуда - 0,37-0,44 мВ. На основании полученных данных сделан вывод о формировании модели перитонита.

Полученные данные об электромоторной активности фундального и антрального отделов желудка дополнительно подтверждаются результатами морфологических исследований.

Макроскопически на 10-й день язва по Окабе, активированная альфа-фетопротеином АФП_14-10, представляет собой глубокий обширный дефект стенки желудка с подрытыми краями, дно которого заполнено гнойными наложениями. Отмечается мощный спаечный процесс в брюшной полости. Соединительнотканные спайки образуются между желудком, селезенкой, правой долей печени, тонкой и толстой кишкой, что свидетельствует о наличии перитонита.

Способ далее поясняют примеры его реализации.

Пример 1.

Крысе линии Вистар, самцу весом 220 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза осуществляли срединную лапаротомию с выведением в операционную рану желудка. Формировали язву желудка нанесением 100% ледяной уксусной кислоты на границу фундального и антрального отделов (модель язвы по Окабе). Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) фундального и антрального отделов желудка с помощью погружных и поверхностных электродов площадью контактной поверхности 0,1 мм² и 0,5 мм² соответственно. На 5-й день модели язвы проводили контрольную регистрацию ЭМА отделов желудка с последующим введением в периульцерозную зону 5% водного раствора альфа-фетопротеина (АФП_14-20) человека в дозе 0,02 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка.

Фоновая частота медленноволновой активности фундального отдела желудка на 5-й день язвы по Окабе составляла 6,5 в мин, амплитуда 0,12 мВ. Фоновая активность гладких мышц антрального отдела желудка представлена медленноволновой и спайковой активностью. Частота медленных волн ЭМА составила 6,6 в мин, амплитуда - 0,10 мВ. Отмечается низкоамплитудная спайковая активность частотой 0,18 на 100 медленных волн и амплитудой 0,08 мВ.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц фундального отдела желудка: частота увеличивается до 7,2 в мин, амплитуда - до 0,15 мВ. Отмечалась спайковая активность амплитудой 0,09 мВ, частотой 0,38 на 100 медленных волн.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц антрального отдела желудка: частота увеличивается до 7,1 в мин, амплитуда - до 0,11 мВ. Наблюдалась спайковая активность амплитудой 0,18 мВ, частотой 0,58 на 100 медленных волн. То есть введение АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождается ростом медленноволновой и значительным увеличением спайковой активности отделов желудка, которая характеризует увеличение моторной деятельности желудка в целом.

На 10-й день язвы желудка в условиях введения альфа-фетопротеина АФП_14-20 частота медленноволновой активности составляет 13,3 в мин и амплитуда 0,45 мВ в фундальном отделе желудка; в антральном отделе желудка частота медленноволновой активности составляет 14,3 в мин и амплитуда - 0,37 мВ. На основании полученных данных сделан вывод о формировании модели перитонита.

Полученные данные об электромоторной активности фундального и антрального отделов желудка дополнительно подтверждаются результатами морфологических исследований.

Макроскопически на 10-й день язва по Окабе, активированная альфа-фетопротеином АФП_14-20, представляет собой глубокий обширный дефект стенки желудка с перфорацией, дно дефекта заполнено гнойными наложениями. Отмечается выраженный спаечный процесс в брюшной полости с образованием спаек между желудком, правой долей печени, тонкой кишкой, что свидетельствует о наличии перитонита.

Пример 2.

Крысе линии Вистар, самке весом 250 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза осуществляли срединную лапаротомию с выведением в операционную рану желудка и моделированием язвы по Окабе. Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) фундального и антрального отделов желудка с помощью погружных и поверхностных электродов площадью контактной поверхности 0,2 мм² и 0,7 мм² соответственно. На 5-й день модели язвы проводили контрольную регистрацию ЭМА отделов желудка с последующим введением в периульцерозную зону 5% водного раствора альфа-фетопротеина (АФП_14-20) человека в дозе 0,04 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка.

Фоновая частота медленноволновой активности фундального отдела желудка на 5-й день язвы по Окабе составляла 7,8 в мин, амплитуда 0,15 мВ. Фоновая активность гладких мышц антрального отдела желудка представлена медленноволновой и спайковой активностью. Частота медленных волн ЭМА составила 7,4 в мин, амплитуда - 0,12 мВ. Отмечается низкоамплитудная спайковая активность частотой 0,2 на 100 медленных волн и амплитудой 0,1 мВ.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц фундального отдела желудка: частота увеличивается до 8,7 в мин, амплитуда - до 0,19 мВ. Отмечалась спайковая активность амплитудой 0,1 мВ, частотой 0,41 на 100 медленных волн.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц антрального отдела желудка: частота увеличивается до 8,5 в мин, амплитуда - до 0,17 мВ. Наблюдалась спайковая активность амплитудой 0,21 мВ, частотой 0,59 на 100 медленных волн. Введение

АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождается ростом медленноволновой и значительным увеличением спайковой активности отделов желудка, которая характеризует увеличение моторной деятельности желудка в целом.

На 10-й день язвы желудка в условиях введения альфа-фетопротеина АФП_14-20 частота медленноволновой активности составляет 13,8 в мин и амплитуда 0,47 мВ в фундальном отделе желудка; в антральном отделе желудка частота медленноволновой активности составляет 14,6 в мин и амплитуда - 0,39 мВ. На основании полученных количественных данных, характеризующих электромоторную активность, сделан вывод о формировании модели перитонита.

Полученные данные об электромоторной активности фундального и антрального отделов желудка дополнительно подтверждаются результатами морфологических исследований.

Макроскопически на 10-й день язва по Окабе, активированная альфа-фетопротеином АФП_14-20, представляет собой дефект стенки желудка размером 0,5-1,0 см, дно которого заполнено детритом. Отмечается спаечный процесс в брюшной полости: спайки образуются между желудком, селезенкой, правой долей печени и толстой кишкой, что свидетельствует о наличии перитонита.

Пример 3.

Крысе линии Вистар, самке весом 280 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза осуществляли срединную лапаротомию с выведением в операционную рану желудка и моделированием язвы по Окабе. Регистрировали электромоторную активность (ЭМА) фундального и антрального отделов желудка с помощью погружных и поверхностных электродов площадью контактной поверхности 0,3 мм² и 1 мм² соответственно. На 5-й день модели язвы проводили контрольную регистрацию ЭМА отделов желудка с последующим введением в периульцерозную зону 5% водного раствора альфа-фетопротеина (АФП_14-20) человека в дозе 0,06 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка.

Фоновая частота медленноволновой активности фундального отдела желудка на 5-й день язвы по Окабе составляла 8,7 в мин, амплитуда 0,16 мВ. Частота медленных волн ЭМА составила 8,4 в мин, амплитуда - 0,14 мВ. Отмечается низкоамплитудная спайковая активность частотой 0,22 на 100 медленных волн и амплитудой 0,12 мВ.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц фундального отдела желудка: частота увеличивается до 9,8 в мин, амплитуда - до 0,21 мВ. Отмечалась спайковая активность амплитудой 0,11 мВ, частотой 0,42 на 100 медленных волн.

Введение альфа-фетопротеина АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождалось активацией медленных волн ЭМА гладких мышц антрального отдела желудка: частота увеличивается до 9,5 в мин, амплитуда - до 0,19 мВ. Наблюдалась спайковая активность амплитудой 0,22 мВ, частотой 0,62 на 100 медленных волн. То есть введение АФП_14-20 в периульцерозную зону сопровождается ростом медленноволновой и значительным увеличением спайковой активности отделов желудка, которая характеризует увеличение моторной деятельности желудка в целом.

На 10-й день язвы желудка в условиях введения альфа-фетопротеина АФП_14-20 частота медленноволновой активности составляет 14,1 в мин и амплитуда 0,5 мВ в фундальном отделе желудка; в антральном отделе желудка частота медленноволновой активности составляет 14,8 в мин и амплитуда - 0,44 мВ. На основании полученных данных сделан вывод о формировании модели перитонита.

Полученные данные об электромоторной активности фундального и антрального отделов желудка дополнительно подтверждаются результатами морфологических исследований.

На 10-й день язва по Окабе, активированная альфа-фетопротеином АФП_14-20, представляет собой перфорированную язву с подрытыми краями, дно которой покрыто серо-желтым налетом. Отмечается образование спаек между желудком, селезенкой, правой долей печени, тонкой и толстой кишкой, что свидетельствует о наличии перитонита.

То есть АФП_14-20 влияет на активационный процесс в лимфоцитах путем увеличения экспрессии рецептора запуска активационного апоптоза CD95, что повышает апоптоз среди CD95⁺-лимфоцитов, приводя к дополнительному ульцерогенному эффекту.

Проведенные на 18 крысах испытания подтвердили достижение цели изобретения - повышение точности моделирования перитонита при снижении трудоемкости.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при моделировании перитонита. Для этого моделируют язву желудка по Окабе. В периульцерозную зону на 5-й день моделирования язвы вводят 5% водный раствор фрагментов молекулы альфа-фетопротеина человека - АФП_14-20 в дозе 0,02-0,06 мл/кг. На 10-й день регистрируют электромоторную активность желудка. При частоте медленноволновой активности 13,3-14,1 в минуту и амплитуде 0,45-0,5 мВ в фундальном отделе желудка и при частоте медленноволновой активности 14,3-14,8 в минуту и амплитуде 0,37-0,44 мВ в антральном отделе желудка судят о формировании модели. Способ обеспечивает повышение точности моделирования при снижении его трудоемкости.

Способ моделирования перитонита, отличающийся тем, что моделируют язву желудка по Окабе, в периульцерозную зону на 5-й день моделирования язвы вводят 5%-ный водный раствор фрагментов молекулы альфа-фетопротеина человека - АФП_14-20 в дозе 0,02-0,06 мл/кг с последующей регистрацией на 10-й день электромоторной активности желудка и при частоте медленноволновой активности 13,3-14,1 в мин и амплитуде 0,45-0,5 мВ в фундальном отделе желудка и при частоте медленноволновой активности 14,3-14,8 в мин и амплитуде 0,37-0,44 мВ в антральном отделе желудка судят о формировании модели.