СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения бронхиальной астмы у детей.

Известен способ выявления гиперреактивности дыхательных путей у пациентов с симптомами, характерными для бронхиальной астмы, но с нормальными показателями функции легких, заключающийся в воздействии метахолина, гистамина или физической нагрузки [1 - Quanjer Р.Н. et al. Peak expiratory flow: conclusions and recommendations of a Working Party of the European Expiratory Society. Eur. Expir. J. 1977; 24 (Supplement): 2S-8S].

Одним из самых эффективных способов лечения атопии является метод введения малых, постепенно возрастающих концентраций специфического антигена в организм больного. Количество хороших и отличных результатов при данном способе лечения достигает 70-80%. Однако оценить эффективность этого метода лечения можно только после повторного контакта с аллергеном, например, после введения малых возрастающих доз аллергена в октябре-ноябре оценить эффективность лечения можно только в мае, когда начнется очередной сезон цветения. Оценка уровня специфических иммуноглобулинов Е и G в крови пациента не позволяет достоверно оценить эффективность лечения этим методом.

Прототипом предлагаемого изобретения является способ оценки эффективности лечения бронхиальной астмы у детей [2 - пат. документ РФ №2002130474, 2002, М. кл. G01N 33/84]. Согласно способу оценку проводят, определяя эндобронхиальный уровень цинка у детей, получавших витаминно-минеральный комплекс, и при значении, равном или выше параметров контрольной группы 19,86±1,31 мкмоль/л оценивают лечение как эффективное.

Однако эффективность способа-прототипа ограничена.

Целью изобретения является повышение точности оценки эффективности лечения бронхиальной астмы.

Технический результат достигается тем, что в способе оценки эффективности специфического лечения бронхиальной астмы по контролируемым параметрам в качестве показателя используют количество лимфоцитов периферической крови с экспрессией Fas-L и при увеличении количества лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L в 3 и более раза, оценивают лечение как эффективное.

Способ реализуется следующим образом.

У детей с выявленным диагнозом: атопическое заболевание, атопическая бронхиальная астма, поллиноз, атопический дерматит определяют значимый антиген с помощью кожных проб или иммуноферментного теста. Перед началом антигенспецифической иммунотерапии проводят изучение количества лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L. Определяют форсированную жизненную емкость легких и объем форсированного выдоха за 1 сек, а также их соотношение. Спирометрия позволяет оценить степень обструкции, ее обратимость и тяжесть течения заболевания. В норме соотношение объема форсированного выдоха к форсированной жизненной емкости легких составляет более 80%; значение данного показателя 80% и ниже свидетельствует о наличии бронхиальной обструкции. Проводят кожные тесты или определение специфического IgE в сыворотке крови, что позволяет выявить факторы риска и триггеры, на основании чего может быть рекомендован контроль факторов окружающей среды.

У больных с интермитирующей формой бронхиальной астмы симптоматика возникает при контакте с аллергеном или триггером, однако, в отсутствии контакта симптомы болезни у них полностью отсутствуют. При среднетяжелой персистирующей бронхиальной астме симптомы затрудненного дыхания возникают ежедневно, чаще ночью, в течение длительного времени, чаще одного раза в неделю. Диагноз персистирующей бронхиальной астмы средней тяжести ставят пациенту с исходным значением пиковой скорости выдоха до приема лекарственных средств более 60%, но менее 80% от должного. Больные со среднетяжелой персистирующей бронхиальной астмой должны ежедневно принимать ингаляционные бета-адреномиметики, теофиллин медленного высвобождения и антилейкотриеновые препараты. Однако контроль бронхиальной астмы с применением данных групп препаратов зачастую не удается, что предопределяет необходимость проведения антигенспецифической иммунотерапии.

Перед началом курса антигенспецифической иммунотерапии сравнивали поверхностные маркеры лимфоцитов здоровых детей и детей, больных атопической бронхиальной астмой средней тяжести; у детей, больных атопической бронхиальной астмой, выявлено повышение количества натуральных киллеров, экспрессирующих молекулу адгезии (CD56); увеличение общего числа В-лимфоцитов и количества IgM⁺ и IgG⁺ позитивных клеток; увеличение числа клеток, несущих низкоафинный рецептор к IgE (CD23); снижение количества клеток, несущих маркер активационного апоптоза (CD95); увеличение соотношения HLA-DR/CD95, что характерно для нарушения процессов элиминации клеток.

У детей, больных атопической бронхиальной астмой, по сравнению со здоровыми детьми отмечается увеличение экспрессии активационных маркеров, активация В-клеточного звена на фоне ослабления активационного апоптоза. Диагноз атопической бронхиальной астмы был подтвержден данными анамнеза, клиническими проявлениями, кожными пробами и повышенным уровнем IgE в сыворотке крови. Степень тяжести заболевания (среднетяжелую) определяли на основании критериев классификации бронхиальной астмы у детей (Национальная программа «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика», 1997).

Исследуют содержание лимфоцитов периферической крови 18 детей в возрасте 7-12 лет, больных атопической бронхиальной астмой. Дети, больные атопической бронхиальной астмой, получали антигенспецифическую иммунотерапию. В качестве группы контроля исследовали показатели здоровых детей (6 человек) в возрасте 7-12 лет, которые не страдали иммунопатологическими и инфекционными заболеваниями.

Если по окончании антигенспецифической иммунотерапии содержание Fas-L положительных лимфоцитов увеличилось в 3 и более раза, оценивали лечение как эффективное.

В стационаре исследование содержания лимфоцитов периферической крови проводили в следующие сроки: до иммунотерапии, сразу после иммунотерапии на 22-е сутки от начала курса, через 1, 3, 6 и 9 месяцев после проведения первого курса иммунотерапии. Иммунотерапию проводили в период с декабря по март по ускоренной схеме: последовательное введение лечебных доз аллергенов в разведении 1:1000000, 1:100000, 1:10000, 1:1000, 1:100 и 1:10. У детей отмечались местные допустимые реакции (в виде покраснения, папулы). В катамнезе у детей этой группы отмечались удовлетворительные результаты (уменьшение количества и тяжести приступов в период цветения этиологически значимых растений, снижение потребности в медикаментозной терапии).

Определение содержания в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих FAS-L и другие поверхностные маркеры (CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD20, CD72, CD23, IgM, IgG, CD25, CD71, HLA-DR, CD95), проводили с помощью моноклональных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции.

При искусственном введении антигена, то есть при проведении антигенспецифической иммунотерапии, восстанавливается способность лимфоцитов к выходу в апоптоз (изменение соотношения HLA-DR/CD95). Одним из механизмов удаления активированных клонов лимфоцитов является система CD95-Fas L. При антигенспецифической иммунотерапии происходит снижение числа CD95 позитивных лимфоцитов на фоне значительного увеличения количества клеток, экспрессирующих Fas L. Подобные изменения содержания лимфоцитов периферической крови клинически сопровождались снижением потребности в медикаментозной терапии, тяжести и продолжительности приступов, длительности приступного периода при естественном контакте с антигеном.

Изменение количества клеток с экспрессией ранних активационных маркеров больных атопической бронхиальной астмой: у здоровых детей HLA-DR 13,8±1,73%, Fas L - 5,3±0,96%; у больных атопической бронхиальной астмой HLA-DR 10,74±1,33%, Fas L - 4,82±2,34%. Через 1 месяц после антигенспецифической терапии HLA-DR 21,32±1,53%, Fas L - 19,0±4,0%, через 6 месяцев эти показатели, соответственно, составляли HLA-DR 25,52±2,02%, Fas L - 40,16±5,72%. На основании динамики исследованных показателей считают, что имеет место функциональная перестройка иммунной системы, которая приводит к изменению выраженности и характера реакции на естественный контакт с аллергеном. Предложенный способ позволяет ускорить прогнозирование эффективного лечения бронхиальной астмы, что особенно важно в случае аллергии на цветение растений. Использование способа-прототипа требует выдерживать интервал времени до следующего цветения антигензначимых растений.

Пример 1.

Ребенок К. 7 лет поступил с жалобами на затрудненное дыхание, возникающее, преимущественно, в ночные часы, отмечаемое 6-7 раз в неделю.

Определяют форсированную жизненную емкость легких и объем форсированного выдоха за 1 сек, а также их соотношение. Соотношение объема форсированного выдоха к форсированной жизненной емкости легких составляет 60%, что свидетельствует о наличии бронхиальной обструкции. Проводят кожные тесты и определение специфического IgE в сыворотке крови, которые свидетельствуют о наличии аллергии на тополиный пух.

При среднетяжелой персистирующей бронхиальной астме у данного больного симптомы затрудненного дыхания возникают ежедневно в течение длительного времени.

Перед началом курса антигенспецифической иммунотерапии у ребенка с атопической бронхиальной астмой средней тяжести выявлено: повышение количества натуральных киллеров, экспрессирующих молекулу адгезии (CD56); увеличение общего числа В-лимфоцитов и количества IgM⁺ и IgG⁺ позитивных клеток; увеличение числа клеток, несущих низкоафинный рецептор к IgE (CD23); снижение количества клеток, несущих маркер активационного апоптоза (CD95); увеличение соотношения HLA-DR/CD95, что характерно для нарушения процессов элиминации клеток. HLA-DR/CD95 определяли с помощью моноклинальных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции.

Больному назначают кромогликаты, антигистаминные препараты, ингаляционные β-адреномиметики и М-холиноблокаторы. Однако контролировать течение бронхиальной астмы с применением данных групп препаратов полностью не удается. В связи с этим проводят аллергенспецифическую терапию.

В стационаре ребенку проводят аллергенспецифическую иммунотерапию. Иммунотерапию проводили в период с июня по сентябрь по ускоренной схеме: последовательное введение лечебных доз аллергена в разведении 1:1000000, 1:100000, 1:10000, 1:1000, 1:100 и 1:10. У ребенка отмечалась местная допустимая реакция в виде папулы.

Изменение количества клеток, экспрессирующих ранние активационные маркеры у больного атопической бронхиальной астмой, HLA-DR 13,67%, Fas L - 5,3%.

После иммунотерапии проводили контрольное исследование содержания лимфоцитов периферической крови, экспрессирующих FAS-L, через 1,3 и 6 месяцев после проведения первого курса иммунотерапии. Через 1 месяц после антиген специфической терапии HLA-DR 22,85%, лимфоцитов, экспрессирующих Fas L - 21,5%, через 6 месяцев эти показатели, соответственно, составляли HLA-DR 27,54%, Fas L - 45,9%.

В катамнезе у этого больного отмечались удовлетворительные результаты (уменьшение количества и тяжести приступов, исключение потребности в медикаментозной терапии).

Предложенный способ по сравнению с известным позволяет ускорить прогнозирование эффективного лечения бронхиальной астмы, что особенно важно в случае аллергии на цветение растений.

Пример 2.

Больной З. 13 лет поступил с жалобами на затрудненное дыхание, возникающее, преимущественно, в ночные часы, отмечаемое ежедневно. Поставлен диагноз: атопическая бронхиальная астма. Определяют значимый антиген с помощью кожных проб или иммуноферментного теста - на цветение одуванчика. Перед началом антигенспецифической иммунотерапии определяют содержание лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L, в периферической крови. Определяют форсированную жизненную емкость легких и объем форсированного выдоха за 1 сек, а также их соотношение, которое составило 80%; значение данного показателя 80%, что свидетельствует о наличии бронхиальной обструкции. Проводят определение специфического IgE в сыворотке крови, что позволяет выявить факторы риска и триггеры, на основании чего может быть рекомендован контроль факторов окружающей среды.

Перед началом курса антигенспецифической иммунотерапии у ребенка с атопической бронхиальной астмой выявлено повышение количества натуральных киллеров, экспрессирующих молекулу адгезии (CD56); увеличение общего числа В-лимфоцитов и количества IgM⁺ и IgG⁺ позитивных клеток; увеличение числа клеток, несущих низкоафинный рецептор к IgE (CD23); снижение количества клеток, несущих маркер активационного апоптоза (CD95); увеличение соотношения HLA-DR/CD95, что характерно для нарушения процессов элиминации клеток. HLA-DR/CD95 определяли с помощью моноклональных антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции.

Больному назначают антигистаминные препараты, ингаляционные β-адреномиметики, которые у данного ребенка ограниченно эффективны, в связи с чем ребенку проводят аллергенспецифическую иммунотерапию. Иммунотерапию проводили в период с мая по июль по ускоренной схеме: последовательное введение лечебных доз аллергена в разведении 1:1000000, 1:100000, 1:10000, 1:1000, 1:100 и 1:10. У ребенка отмечалась местная допустимая реакция в виде папулы.

Изменение количества клеток с экспрессией ранних активационных маркеров у больного атопической бронхиальной астмой HLA-DR 15,53%, лимфоцитов, экспрессирующих Fas L, - 6,26%. После иммунотерапии проводили контрольное исследование содержания в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих FAS-L через 1,3 и 6 месяцев после проведения первого курса иммунотерапии. Через 1 месяц после антиген специфической терапии HLA-DR 23,65%, Fas L - 25,5%.

В катамнезе у больного отмечалось уменьшение количества и тяжести приступов до одного в две недели; исключение потребности в медикаментозной терапии.

Сделан вывод, что предложенный способ по сравнению с известным позволяет ускорить прогнозирование эффективного лечения бронхиальной астмы, что особенно важно в случае аллергии на цветение растений.

Предложенная аллергенспецифическая иммунотерапия проведена у 28 детей с атопической бронхиальной астмой, дерматитом, поллинозом. Полученный положительный результат позволяет провести корректную иммунотерапию с хорошим прогностическим эффектом на протяжении времени, затраченного на иммунотерапию.

На основании положительной динамики исследованных показателей оценивают лечение бронхиальной астмы как эффективное.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам оценки эффективности лечения бронхиальной астмы. Для осуществления способа в качестве показателя используют количество лимфоцитов периферической крови с экспрессией Fas-L. При увеличении количества лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L по окончании антигенспецифической иммунотерапии в 3 и более раза по сравнению с уровнем до иммунотерапии, оценивают лечение как эффективное. Использование изобретения повышает эффективность прогнозирования лечения бронхиальной астмы.

Способ оценки эффективности лечения бронхиальной астмы по контролируемым показателям, отличающийся тем, что в качестве показателя используют количество лимфоцитов периферической крови с экспрессией Fas-L, и при увеличении количества лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L по окончании антигенспецифической иммунотерапии в 3 и более раза по сравнению с уровнем до иммунотерапии, оценивают лечение как эффективное.