СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНАЛЬГЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2009 года по МПК A61K36/23 A61P29/00 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и может быть использовано в терапии заболеваний с болевым синдромом.

Известны синтетические препараты, оказывающие анальгетический эффект [1]. Вместе с тем данные средства токсичны в силу синтетического происхождения, и использование их для фармакологической коррекции в качестве анальгетиков ограничено из-за плохой переносимости, возникновения различных осложнений.

Наиболее близким по положительному эффекту (базовым) является метамизол натрия. Этот препарат обладает обезболивающим действием, но он является синтетическим препаратом и обладает рядом побочных эффектов [1].

Наиболее близким анальгетическим средством по природе происхождения является 10%-ная настойка корней девясила высокого [2].

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала растительных средств, обладающих анальгетическим действием, лишенных побочных эффектов.

Поставленная задача достигается тем, что анальгетическое средство содержит спиртовые вытяжки из надземной части с цветками болиголова пятнистого (Conium maculatum L.) при следующем соотношении компонентов, в %: сухая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 10, спирт этиловый 40%-ный - 90; свежая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 2, спирт этиловый 40%-ный - 98; этилацетатная фракция, выделенная из надземной части с цветками болиголова пятнистого.

Впервые показано, что спиртовые вытяжки из надземной части с цветками болиголова пятнистого в предлагаемом соотношении и этилацетатная фракция, выделенная из надземной части с цветками болиголова пятнистого, проявляют анальгетические свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста.

Экспериментально установлены новые свойства и возможность использования спиртовых вытяжек из сухой и свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого и этилацетатная фракция, выделенная из надземной части с цветками болиголова пятнистого в качестве анальгетического средства в медицине. Идентичной совокупности анальгетических свойств спиртовых вытяжек из сухой и свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого и этилацетатной фракции, выделенной из надземной части с цветками болиголова пятнистого, не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Таким образом, предлагаемое изобретение соответствует критериям патентоспособности "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".

Предлагаемое анальгетическое средство получают следующим образом: надземную часть болиголова пятнистого, собранную во время цветения в июле-августе, высушивают, измельчают до 3 мм. Взвешенное количество измельченного сырья помещают в стеклянный, фарфоровый или эмалированный сосуд и заливают 40%-ным этиловым спиртом при следующем соотношении компонентов: надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 10%, спирт этиловый 40%-ный - 90%, настаивают в темном прохладном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку из измельченной сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема, отстаивают в прохладном месте 3 суток и затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку из измельченной сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) в темном прохладном месте.

Предлагаемое анальгетическое средство из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого получают следующим образом: надземную часть с цветками болиголова пятнистого, собранную в июле-августе, рыхло, не трамбуя, набирают полный стеклянный, фарфоровый или эмалированный сосуд и заливают 40%-ным этиловым спиртом при следующем соотношении компонентов: надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 2%, спирт этиловый 40%-ный - 98%, настаивают в темном прохладном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема, отстаивают в прохладном месте 3 суток и затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) в темном прохладном месте.

Предлагаемое анальгетическое средство из этилацетатной фракции, выделенной из надземной части с цветками болиголова пятнистого, получают следующим образом: 30,0 г высушенной надземной части с цветками болиголова пятнистого пятикратно экстрагируют 70%-ным этанолом при нагревании на водяной бане при температуре 40°С в течение 30 минут. Этанольные экстракты объединяют и растворитель удаляют под вакуумом на роторном испарителе. Далее экстракты экстрагируют этилацетатом. Растворитель отгоняют и получают активную этилацетатную фракцию.

Конкретные примеры выполнения способа.

Пример 1: Собранную в июле надземную часть с цветками болиголова пятнистого высушивают, измельчают до 3 мм, 10 г измельченной надземной части с цветками болиголова пятнистого заливают 100 миллилитрами 40%-го этилового спирта и настаивают в темном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку из измельченной сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема (100 мл), отстаивают в прохладном месте в течение 3 суток, затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку из измельченной сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) в темном прохладном месте.

Пример 2: Собранную в июле надземную часть с цветками болиголова пятнистого с цветками рыхло, не трамбуя, набирают полный стеклянный, фарфоровый или эмалированный сосуд и заливают 100 миллилитрами 40%-го этилового спирта и настаивают в темном прохладном месте в течение 10 дней. Затем спиртовую вытяжку из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) процеживают, растительный остаток хорошо отжимают, 40%-ным этиловым спиртом доводят извлечение до первоначального объема (100 мл), отстаивают в прохладном месте 3 суток и затем фильтруют через обеззоленный фильтр. Хранят спиртовую вытяжку из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого (настойку) в темном прохладном месте.

Пример 3: 30,0 г высушенных и измельченных до 2 мм соцветий болиголова пятнистого помещают в круглодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл, заливают 150 мл 70%-ного этанола и нагревают с обратным холодильником 30 минут на водяной бане при температуре 40°С. После этого содержимое колбы охлаждают и настаивают в закрытой колбе при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор процеживают через вату, сырье хорошо отжимают, заливают 100 мл 70%-ного этанола, нагревают 30 минут на водяной бане при температуре 40°С с обратным холодильником. После нагревания полученное извлечение процеживают в колбу, содержащую первое извлечение. К отжатому сырью прибавляют еще раз 100 мл 70%-ного этанола и повторяют процедуру нагревания и процеживания, как описано выше. Этанольные извлечения объединяют и упаривают досуха на роторном испарителе под вакуумом при температуре 40°С. Полученный экстракт представляет масляную массу светло-коричневого цвета в количестве 5,6 г (выход - 18,7% в пересчете на воздушно-сухое сырье). Далее 5,6 г маслянистой жидкости последовательно обрабатывают 20, 15, 10 мл хлороформа и фильтруют растворы через стеклянный фильтр, хлороформные фильтры отбрасывают, остаток растворяют в 10 мл воды очищенной, прибавляют 30 мл этилацетата и в делительной воронке проводят экстракцию в течение 30 минут. Раствор этилацетата сливают в отдельную колбочку, а в делительную воронку к водному раствору вновь прибавляют 20 мл этилацетата и повторяют экстракцию 30 минут, как описано выше, еще два раза. Объединенные этилацетатные растворы упаривают досуха под вакуумом на роторном испарителе при температуре не более 40°С. Этилацетатная фракция представляет собой порошок светло-желтого цвета в количестве 0,86 г (выход - 2,9% в перерасчете на воздушно-сухое сырье).

Хроматографический и спектральный анализ этилацетатной фракции показали, что она в основном представлена соединениями полифенольного состава: флавоноидами (кверцетин, рутин, кемпферол, лютеолина-7 β-глюкозид) - 3,7%; кумаринами (скополетин, скополетин-7 β-глюкозид) - 0,59%; фенолокислотами (кофейная кислота, галловая кислота) - 2,4%.

Анальгетическое действие спиртовых вытяжек из сухой и свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого и этилацетатной фракции, выделенной из надземной части с цветками болиголова пятнистого, было найдено благодаря экспериментальным исследованиям. Для подтверждения данного свойства была использована модель «уксусные корчи», которая широко используется при исследовании данной активности и позволяет объективно оценить анальгетическое действие препаратов и предсказать их клиническую эффективность [3]. Химическое болевое раздражение индуцировали уксусной кислотой. В опытах на мышах специфическую болевую реакцию - «корчи» (характерные движения животных, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины) - вызывали внутрибрюшинным введением 1% уксусной кислоты (0,1 мл/10 г массы тела) через 1 час после последнего введения исследуемого препарата. В течение последующих 15 мин после инъекции подсчитывали количество «корчей» для каждого животного. Об эффективности препаратов судили по подсчету среднего количества «корчей» в контрольной и опытных группах. [3]. Исследование анальгетической активности проводили в эксперименте на 134 беспородных мышах массой 18-20 г. Животные были распределены на три группы: контрольная, сравнения, опытная. В качестве препарата сравнения использовали метамизол натрия (250,0 мг/кг), базовый препарат, обладающий высоким анальгетическим эффектом [1]. В контрольной группе животные получали эквивалентный объем растворителя. В опытных группах животные получали предлагаемое средство из сухой и свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого в разных концентрациях; этилацетатную фракцию, выделенную из надземной части с цветками болиголова пятнистого в дозе 25,0 мг/кг. Животных содержали на обычном пищевом рационе в условиях вивария. Эвтаназию производили, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденные Министерством Здравоохранения России.

Полученные результаты обрабатывали статистически, методами параметрической и непараметрической статистики. Различия считались достоверно значимыми при Р_u<0,05 и P_t<0,05 для количественных характеристик (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни и критерий Стьюдента соответственно); при Рφ<0,05 - для качественных (метод углового преобразования Фишера) [4].

Пример конкретного выполнения эксперимента №1. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее вытяжку из сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: сухая надземная часть с цветками - 10, спирт этиловый 40%-ный - 90, в дозах 0,5; 1,0; 2,0 мл/кг; метамизол натрия в дозе 250,0 мг/кг, вводили опытным животным и растворитель (в эквивалентном объеме) животным контрольной группы через зонд в желудок в течение 5 дней и за 1 час до внутрибрюшинного введения 1% уксусной кислоты.

Экспериментальные данные показали, что предлагаемое средство, содержащее спиртовую вытяжку из сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: сухая надземная часть с цветками - 10, спирт этиловый 40%-ный - 90 - оказывает выраженное анальгетическое действие, проявляющееся в достоверном уменьшении количества «уксусных корчей» на 51, 63 и 71% соответственно по сравнению с контрольной группой. Метамизол натрия снижал «уксусные корчи» на 57% по сравнению с контролем. Спиртовая вытяжка листьев девясила высокого (прототип) в дозе 5,0 мл/кг на 54% снижала количество уксусных корчей. Латентное время болевой реакции увеличивалось в 1,9-2,5 раза при сопоставлении с контролем. У животных, получавших метамизол натрия, этот показатель повышался в 2,7 раз. Девясил высокий увеличивал время в 1,3 раза (таблица).

Таким образом, предлагаемое средство (спиртовая вытяжка из сухой и надземной части с цветками болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: сухая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 10, спирт этиловый 40%-ный - 90) обладает выраженной анальгетической активностью, сопоставимой с действием препарата сравнения метамизолом натрия (базового) и препаратом-прототипом спиртовой вытяжкой девясила высокого.

Пример конкретного выполнения эксперимента №2. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее вытяжку из свежей надземной части с цветкам болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: свежая надземная часть с цветками - 2, спирт этиловый 40%-ный - 98, в дозах 1,0; 2,0; 4,0 мл/кг, метамизол натрия в дозе 250,0 мг/кг, вводили опытным животным и растворитель (в эквивалентном объеме) животным контрольной группы через зонд в желудок в течение 5 дней и за 1 час до внутрибрюшинного введения 1% уксусной кислоты.

В результате проведенного исследования было показано, что спиртовая вытяжка из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: свежая надземная часть с цветками - 2, спирт этиловый 40%-ный - 98 - оказывает выраженное анальгетическое действие, уменьшая количество «уксусных корчей» на 71, 72 и 65% соответственно по сравнению с контролем. Препарат сравнения - метамизол натрия - снижал этот показатель на 57% по сравнению с контролем. Под влиянием спиртовой вытяжки из листьев девясила высокого (прототип) в дозе 5,0 мл/кг на 54% снижалось количество уксусных корчей. Время наступления первых корчей увеличивалось при введении животным настойки в 2,1-2,4 раза при сопоставлении с контролем. Метамизол натрия увеличивал время в 2,7 раза. Девясил высокий увеличивал время первых корчей в 1,3 раза (таблица).

Таким образом, предлагаемое средство (спиртовая вытяжка из свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого при соотношении компонентов, в %: свежая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 2, спирт этиловый 40%-ный - 98) обладает выраженной анальгетической активностью, сопоставимой с действием препарата сравнения метамизолом натрия (базового) и препаратом-прототипом спиртовой вытяжкой девясила высокого.

Пример конкретного выполнения эксперимента №3. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее этилацетатную фракцию из надземной части болиголова пятнистого в дозе 25,0 мг/кг, метамизол натрия в дозе 250,0 мг/кг, вводили опытным животным и растворитель (в эквивалентном объеме) животным контрольной группы через зонд в желудок в течение 5 дней и за 1 час до внутрибрюшинного введения 1% уксусной кислоты.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что предлагаемое средство, содержащее этилацетатную фракцию, выделенную из надземной части с цветками болиголова в дозе 25,0 мг/кг, оказывало выраженное обезболивающее действие, проявляющееся в достоверном уменьшении количества «уксусных корчей» на 40% по сравнению с контрольной группой. Метамизол натрия снижал «уксусные корчи» на 57% по сравнению с контролем. Спиртовая вытяжка листьев девясила высокого (прототип) в дозе 5,0 мл/кг на 54% снижала количество уксусных корчей. Латентное время болевой реакции при введении этилацетатной фракции, выделенной из надземной части с цветками болиголова пятнистого, увеличивалось в 2,4 раза при сопоставлении с контролем. У животных, получавших метамизол натрия, этот показатель повышался в 2,7 раз. Девясил высокий увеличивал время в 1,3 раза (таблица).

Таким образом, предлагаемое средство, содержащее этилацетатную фракцию, выделенную из надземной части с цветками болиголова пятнистого, обладает выраженной анальгетической активностью, не уступающей по эффективности известному анальгетическому препарату - метамизол натрия - и прототипу - спиртовая вытяжка девясила высокого.

Таблица Анальгетическая активность спиртовых вытяжек из надземной части с цветками болиголова пятнистого на модели «уксусных корчей» у беспородных мышей-самок (X±m) Группа животных Доза мг/кг, мл/кг Число животных Количество корчей Латентный период болевой реакции (мин) Контроль - 10 46,4+2,8 2,42+0,4 Метамизол натрия 250,0 5 20,0+4,0* 6,57+2,2 Спиртовая вытяжка из сухой надземной части 0,5 5 22,6+3,0* 4,57+0,9 1,0 5 17,2±1,3* 5,97+0,8* 2,0 5 13,6+1,9* 5,79+0,8* Спиртовая вытяжка из свежей надземной части 1,0 5 13,4+2,1* 5,63+0,6* 2,0 5 12,8+2,2* 5,98+0,5* 4,0 5 16,2+3,2* 5,13+0,4* Контроль - 10 39,6±1,5 1,96+0,3 Этилацетатная фракция из надземной части болиголова пятнистого 25,0 5 23,8+3,5* 4,83+0,2* Контроль - 7 32,4±6,8 4,30±0,3 Спиртовая вытяжка из листьев девясила высокого 5,0 7 14,8±4,2* 5,60±0,8* Примечание: * - различия достоверны в сравнении с контролем при P_t<0,05, P_u<0,05.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Т.1. - М., 2001. - 159 с.

2. Патент №2180582 от 20 марта 2002 г. "Обезболивающее средство". - Бюл. №8 от 20.03.2002.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - 238 с.

4. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Л., 1978 - 72-75 с.

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано в терапии заболеваний с болевым синдромом. Анальгетическое средство содержит спиртовые вытяжки из надземной части с цветками болиголова пятнистого (Conium maculatum L.) при следующем соотношении компонентов, в %: сухая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 10, спирт этиловый 40%-ный - 90; свежая надземная часть с цветками болиголова пятнистого - 2, спирт этиловый 40%-ный - 98; этилацетатную фракцию, выделенную из надземной части с цветками болиголова пятнистого. Средство не обладает побочным действием. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Средство, обладающее анальгетическим действием, содержащее 40%-ную спиртовую вытяжку из растительного сырья, отличающееся тем, что в качестве растительного сырья оно содержит измельченную сухую или свежую надземную часть с цветками болиголова пятнистого (Conium maculatum L.)

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит спиртовую вытяжку измельченной сухой надземной части с цветками болиголова пятнистого (Соnium maculatum L.) при соотношении компонентов, %: сухая надземная часть с цветками болиголова пятнистого 10, спирт этиловый 40%-ный 90.

3. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит спиртовую вытяжку свежей надземной части с цветками болиголова пятнистого (Conium maculatum L.) при соотношении компонентов, %: свежая надземная часть с цветками болиголова пятнистого 2, спирт этиловый 40%-ный 98.

4. Средство, обладающее анальгетическим действием на основе растительного сырья, отличающееся тем, что содержит этилацетатную фракцию, выделенную из надземной части с цветками болиголова пятнистого (Conium macutatum L.), при этом в качестве растительного сырья используют измельченную сухую часть болиголова пятнистого (Conium macutatum L.).