Средство, обладающее противовоспалительным и анальгетическим действием Российский патент 2017 года по МПК A61K31/352 A61K36/36 A61P29/00 B01D11/00 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и может быть использовано в качестве противовоспалительного и анальгезирующего средства в терапии воспалительных заболеваний.

Известны синтетические препараты, оказывающие противовоспалительный и анальгетический эффект [1]. Вместе с тем, данные средства токсичны, поскольку имеют синтетическое происхождение, поэтому использование их для фармакологической терапии воспалительного процесса и в качестве анальгетиков ограничено из-за плохой переносимости, возникновения различных осложнений [1].

Наиболее близким по техническому результату (базовым) является диклофенак натрия, обладающий противовоспалительной и анальгетической активностью, но данный препарат является синтетическим и оказывает ряд побочных эффектов [1].

Для получения предлагаемого средства, комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L., ключевым этапом было использование многократной экстракции концентрированного этанольного экстракта н-бутанолом, поэтому наиболее близким средством, обладающим противовоспалительным и анальгетическим действием по природе происхождения, является бутанольная фракция травы болиголова пятнистого, содержащая фракцию флавоноидов [2].

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противовоспалительным и анальгетическим действием, из природного сырья.

Поставленная задача решается созданием противовоспалительного и анальгетического средства, содержащего комплекс флавоноидов из надземной части растения Lychnis chalcedonica L.

Впервые показано, что средство, содержащее комплекс флавоноидов из надземной части растения Lychnis chalcedonica L, оказывает противовоспалительное и анальгетическое действие. Авторы не нашли в проанализированной литературе сведений о противовоспалительном и анальгетическом действии флавоноидов Lychnis chalcedonica L. Противовоспалительное и анальгетическое действие комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и не является очевидным для специалиста. Экспериментально установлено новое свойство и возможность использования комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. в качестве средства, обладающего противовоспалительной и анальгетической активностью, в практическом здравоохранении.

Таким образом, предлагаемое изобретение соответствует критериям патентоспособности ʺновизнаʺ, ʺизобретательский уровеньʺ, ʺпромышленная применимостьʺ.

Средство, обладающее противовоспалительным и анальгетическим действием, представляет собой комплекс флавоноидов, выделенных из надземной части растений Lychnis chalcedonica L.

Изобретение будет понятно из следующего описаниячертежей:

на фиг. 1 - ВЭЖХ комплекса флавоноидов, выделенного из Lychnis chalcedonica L;

на фиг .2 - УФ-спектры выделенных флавоноидов:

1. УФ-спектр флавоноида с tr=10.40 мин;

2. УФ-спектр флавоноида с tr=12.45 мин;

3. УФ-спектр флавоноида с tr=13.29 мин;

4. УФ-спектр флавоноида с tr=15.47 мин;

Предлагаемое нами средство получают следующим образом.

Экстракцию воздушно-сухого сырья (200 г) надземной части в фазе цветения растений Lychnis chalcedonica L. проводили 5 раз 70% этиловым спиртом (4500 мл). Затем для удаления экстрагента объединенный экстракт концентрировали при температуре 50°С с помощью вакуумного ротационного испарителя IKA НВ 10 digital (Германия). Концентрированный экстракт разбавляли водой до соотношения 1:3 (v:v) и фильтровали. Затем фильтрат очищали от липофильных веществ при помощи н-гексана. Извлечение суммы биологически активных веществ из очищенного фильтрата осуществляли многократной экстракцией н-бутанолом. При этом из водной фракции выпадает осадок желто-коричневого цвета, который отделяли. Контроль содержания БАВ во фракциях осуществляли методом ТСХ. Выход бутанольной фракции составил 5.8%, флавоноидной фракции - 0.7% (в расчете на сырье). В последующем комплекс флавоноидов подвергали очистке селективной экстракцией системами растворителей этилацетат:этанол в соотношении 5:1 и 3:1. Полученный порошок имел желтоватую окраску.

Мажорным компонентом флавоноидного комплекса является пик с tr=13.29 мин, площадь которого составила 87.4%.

Идентификация комплекса флавоноидов, выделенного из надземной части Lychnis chalcedonica L., проведена методами ВЭЖХ и УФ-спектроскопии. ВЭЖХ анализ (фиг. 1) свидетельствует о том, что очищенный порошок представляет собой комплекс флавоноидов. В УФ-спектрах 4-х соединений, разделенных ВЭЖХ, с временем удерживания 10.40, 12.45; 13.29 и 15.47 мин присутствуют по два максимума поглощения - 270 и 347; 268 и 331, 271 и 336; 272 и 334 нм, обусловленные присутствием двух ароматических колец А и В (фиг. 2). Такие спектральные характеристики свойственны флавоноидам.

Противовоспалительное и анальгетическое действие комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. было найдено в результате экспериментальных исследований. Для подтверждения противовоспалительного действия комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. было проведено исследование на модели острого асептического воспаления [3, 4], для подтверждения анальгетического действия комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. было проведено исследование на модели химического болевого раздражения, индуцированного раствором уксусной кислоты [4].

Эксперименты выполнены на аутбредных мышах линии CD1 (самцы, самки) (1 категории согласно сертификату), массой 23-25 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга. Работу с экспериментальными животными осуществляли в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986).

Животные в экспериментах были распределены на следующие группы: контрольная, сравнения, опытные. В группах сравнения в качестве препаратов сравнения использовали диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг (базовый препарат) и бутанольную фракцию травы болиголова пятнистого в дозе 25 мг/кг, содержащую фракцию флавоноидов (прототип). В опытных группах животные получали предлагаемое средство комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica в дозе 16 мкг/кг. Новое вещество и препараты сравнения вводили ежедневно однократно внутрижелудочно в течение 5 дней, последний раз - за 1 час до введения воспалительного агента каррагенина или за 1 час до болевого раздражителя - раствора уксусной кислоты. Критерием противовоспалительной активности предлагаемого средства являлось снижение величины воспалительного отека лапы, критерием анальгетической активности предлагаемого средства служило подавление выраженности специфической болевой реакции (уменьшение количества «корчей») и латентное время начала болевой реакции у мышей.

Статистическую обработку полученных результатов выполняли с использованием параметрического t критерия Стьюдента. Различия считались достоверно значимыми при Pt≤0,05 [4].

Пример 1. Определяли противовоспалительное действие предлагаемого средства комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. после однократного субплантарного введения в заднюю лапу мыши 0,05 мл 1% раствора каррагенина на изотоническом 0,9% растворе. В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. в дозе 16 мкг/кг, вводили опытным животным через зонд в желудок ежедневно однократно в течение 5 дней, пятый раз - за 1 час до введения воспалительного агента каррагенина. В группах сравнения применяли диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг (базовый препарат) и бутанольную фракцию травы болиголова пятнистого в дозе 25 мг/кг, содержащую фракцию флавоноидов (прототип), в аналогичном режиме. Животные в контрольной группе получали растворитель в эквивалентном объеме. Острое экссудативное воспаление моделировали субплантарным (под плантарный или подошвенный апоневроз) введением в левую заднюю лапу мыши 0,05 мл 1% раствора каррагенина (сульфатированного полисахарида из ирландского морского мха) на изотоническом 0,9% растворе. Противовоспалительное действие препаратов оценивали по уменьшению величины отека конечности у мышей [3, 4].

В результате проведенного исследования было показано, что комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. проявляет выраженное противовоспалительное действие, статистически достоверно подавляя развитие воспалительного отека в 1,4 раза. При этом величина угнетения отека составила 29,6% (табл. 2). Размер угнетения отека после применения диклофенака натрия (базовый препарат) составил 33,7%, после применения бутанольной фракции травы болиголова пятнистого, содержащей фракцию флавоноидов (прототип), угнетение развития отека конечности составило 30,2% (табл. 2).

Таким образом, комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. в дозе 16 мкг/кг проявляет выраженное противовоспалительное действие, достоверно не отличающееся по своей активности от препаратов сравнения диклофенака натрия в дозе 10 мг/кг (базовый препарат) и бутанольной фракции травы болиголова пятнистого, содержащего фракцию флавоноидов болиголова пятнистого, в дозе 25 мг/кг (прототип).

Пример 2. Определяли анальгетическую активность комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. на модели химического болевого раздражения брюшины, вызванного внутрибрюшинным введением раствора уксусной кислоты мышам (тест уксусные «корчи»). В ходе выполнения эксперимента предлагаемое средство, содержащее комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. в дозе 16 мкг/кг, вводили опытным животным через зонд в желудок ежедневно однократно в течение 5 дней, пятый раз - за 1 час до моделирования специфической болевой реакции. В группах сравнения применяли диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг (базовый препарат) и бутанольную фракцию травы болиголова пятнистого в дозе 25 мг/кг, содержащую фракцию флавоноидов (прототип), в аналогичном режиме. Животные в контрольной группе получали растворитель в эквивалентном объеме. Специфическую болевую реакцию, «корчи», вызывали внутрибрюшинным введением 0,75% раствора уксусной кислоты мышам в дозе 0,1 мл/10 г массы тела. После инъекции раствора уксусной кислоты у животных фиксировали латентное время наступления специфической болевой реакции («корчи»), затем в течение 15 мин регистрировали выраженность специфической болевой реакции - количество «корчей» [4]. Анальгетический эффект предлагаемого средства, содержащего комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L., оценивали по его способности уменьшать количество «корчей» по сравнению с контрольной группой животных и увеличивать латентное время наступления болевой реакции.

В результате проведенного исследования было показано, что предлагаемое средство комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. оказывает выраженное анальгетическое действие. После применения комплекса флавоноидов Lychnis chalcedonica L. проявление специфической болевой реакции, количество «корчей», уменьшалось в 1,9 раза, а угнетение болевой реакции составило 46,1% по сравнению с контрольной группой (табл. 3). Кроме того, предлагаемое средство комплекс флавоноидов Lychnis chalcedonica L. увеличивало время наступления специфической болевой реакции, «корчей», в 1,6 раза по сравнению с контролем (табл. 3). Применение препарата сравнения диклофенака натрия уменьшало количество «корчей» в 1,6 раза, время наступления специфической болевой реакции увеличивалось в 1,7 раза. Использование препарата сравнения бутанольной фракции травы болиголова пятнистого, содержащей фракцию флавоноидов, уменьшало число «корчей» в 1,4 раза и увеличивало время наступления болевой реакции в 1,6 раза (табл. 3).

Таким образом, анальгетическая активность предлагаемого средства, содержащего комплекс флавоноидов из надземной части Lychnis chalcedonica L. в дозе 16 мкг/кг, достоверно не отличалась от обезболивающего действия препаратов сравнения диклофенака натрия в дозе 10 мг/кг (базовый препарат) и бутанольной фракции травы болиголова пятнистого, содержащей фракцию флавоноидов в дозе 25 мг/кг (прототип).

Обобщая полученные результаты исследований можно считать, что предлагаемое средство, содержащее комплекс флавоноидов из надземной части Lychnis chalcedonica L., оказывает выраженное противовоспалительное и анальгетическое действие.

Источники информации

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: - Т. 2. - М., 2000.

2. Попова Е.В. Фармакологические свойства извлечений из болиголова пятнистого. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. - Томск, 2008. - 23 с.

3. Winter С.А., Risley D.S., Nuss G.W. Carragenin-induced edema in hind paw of rat as an assay for anti-inflammatory drugs // Proc. Soc. Expr. Biol, and Med. - 1962. - Vol. 111, N 3. - P. 544-547.

4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. - М., 2012. - Часть первая. - 944 с.

Изобретение относится к средству, обладающему противовоспалительным и анальгезирующим действием. Средство представляет собой комплекс флавоноидов, выделенный из надземной части растения Lychnis chalcedonica L. 5-кратной экстракцией 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:22,5, с последующей экстракцией н-бутанолом, очисткой выпавшего осадка из водной фракции системами растворителей этилацетат-этанол в соотношениях 5:1 и 3:1. Изобретение обеспечивает выраженное противовоспалительное и анальгетическое действие. 2 ил., 3 табл., 2 пр.

Средство, обладающее противовоспалительным и анальгезирующим действием, представляющее собой комплекс флавоноидов, выделенный из надземной части растения Lychnis chalcedonica L. 5-кратной экстракцией 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:22,5, с последующей экстракцией н-бутанолом, очисткой выпавшего осадка из водной фракции системами растворителей этилацетат-этанол в соотношениях 5:1 и 3:1.