АНТИГЕЛЬМИНТНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ N-(3-ХЛОР-4-МЕТИЛФЕНИЛ)-3,5-ДИБРОМСАЛИЦИЛАМИДА Российский патент 2009 года по МПК C07C233/66 A61K31/609 A61P33/10 

Изобретение относится к органической химии и касается нового биологически активного вещества, а конкретно производного салициланилида формулы 1:

,

обладающего широким спектром антигельминтного действия.

Известен способ получения данного вещества в хлорбензоле с треххлористым фосфором, изучены некоторые физико-химические свойства. В ряду большого количества схожих структур установлена бактерицидная активность, более достоверная при щелочных значениях рН [Lemaire H. Et al. Synthesis and germicidal activity of halogenated salicylanilides and related compounds // J. Pharm. Sci. 1961. V. 50. P. 831-837].

Токсичность соединения не исследована, и это не позволяет прогнозировать возможность использования его в качестве ветеринарного или лекарственного средства.

Известны салициланилиды, обладающие противогрибковой и бактерицидной активностью [См., например: Pat. 2703332 US. Poly Halo-salicylanilides; Pat. 2802029 US. Bromsalicyloyl-chloranilide; Pat. 4310682 US. Halo-salicylanilide].

Заявлены салициланилиды для лечения заболеваний, при которых полезно увеличение респирации митохондрий [Заявка 2006116421 РФ, 8 МПК С07С 235/64. Анилиды салициловой кислоты].

Описан класс ароматических производных салициланилидов с различными заместителями, их солей, в том числе с аминами, эффективных в отношении паразита печеночной двуустки [Pat. 3914418 US. Method of controlling liver fluke infection].

Предложены композиции с салициланилидами для борьбы с трематодами и нематодами [Pat. 3989826 US. Method of kiling internal Parasites using salicylanilides].

Известно антигельминтное средство, представляющее собой 3,5-дибромсалициловую кислоту, применявшуюся ранее как полупродукт при производстве антигельминтных средств [Пат. 2242976 РФ, МПК А61К 31/60, А61Р 33/10. Антигельминтное средство].

Известны замещенные салициланилиды, обладающие антигельминтной активностью [Pat. 4025647 US. Salicylanilide derivatives having anthel-mintic activity].

Анализ источников не позволяет выявить корреляцию между бактерицидными и антигельминтными свойствами в зависимости от положения заместителей или их природы, а также широту спектра действия.

В настоящее время в медицине и ветеринарии широко используют антигельминтный препарат НИКЛОЗАМИД (Германия) [См., например: Pat. 3074848 US; claims priority, application Germany 1960.02.02. 2-Hydroxy-5,2'-dichloro-4'-nitrobenzanilide for combating tapeworms; Pat. 2557615 DE, Int. Cl.² A61K 31/165, 47/00. Neue Niclosamide Suspensionsfor-mulierungen]. В России препарат того же действующего вещества известен под торговым названием ФЕНАСАЛ (СССР) [Лебедева М.Н., Михайлицын Ф.С., Сергиев В.П. Создание отечественных противопаразитарных препаратов / М.Н.Лебедева и [др.] // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 2001. №4. С.13-16; Пат 1166370 РФ. Антигельминтное средство; Пат.2276983 РФ. Цестодоцидная композиция для животных].

ФЕНАСАЛ (Phenasalum), 5,2'-Дихлор-4'-нитросалициланилид или N-(2-хлор-4-нитрофенил)-3-хлорсалициламид. Синонимы: Йомезан, Йомесан, Jometan, Kontal, Lintex, Niclosamidum, Radeverm, Teniarene, Vermitin и др.

ФЕНАСАЛ - нетоксическое вещество (класс IV), его препараты не обладают эмбриотропным, канцерогенным свойствами. ФЕНАСАЛ обладает противоцестодозной активностью, он является протоплазматическим ядом, полностью денатурирующим структуру клеток гельминтов.

К недостаткам препарата следует отнести трудоемкий синтез промежуточного продукта ФЕНАСАЛА 5-хлор-салициловой кислоты, для получения которой используют газообразный хлор, а полноту реакции контролируют по привесу реакционной массы.

Ранее авторами был синтезирован близкий по принципиальной структуре ФЕНАСАЛУ N-(4-метилфенил)-3,5-дибромсалициламид.

Это соединение под условным названием ВИВАЛИН было испытано на сельскохозяйственных животных - овцы, крупный рогатый скот (КРС) во ВНИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина (ВИГИС, Москва) [Михайлицын Ф.С., Трусов С.Н., Севбо Д.П., Кошеваров Н.И., Архипов И.А. Оценка широты противогельминтного действия препарата ВИВАЛИН (ВИГ-08) // Мед. паразитология и паразитар. болезни. 2006. №1. С.57-59].

В результате было установлено, что ВИВАЛИН обладает не только противоцестодозной активностью (при монизиозе овец), сравнимой с препаратом ФЕНАСАЛ, но и противотрематодозной активностью при фасциолезе КРС (эффективность 83,5%), при котором ФЕНАСАЛ не используют. ВИВАЛИН (прототип) является наиболее близким по структуре и активности соединению 1 (С-1), его получают в одну стадию взаимодействием n-толуидина с 3,5-дибромсалициловой кислотой в среде толуола в присутствии треххлористого фосфора.

К его недостаткам относится то, что ВИВАЛИН, также как и ФЕНАСАЛ, не обладает нематодоцидным действием в отношении нематододирусов овец.

Задачей изобретения является расширение спектра антигельминтного действия, повышение активности и расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Задача реализуется созданием средства с широким спектром антигельминтной активности, включающим в качестве активного вещества N-(3-Хлор-4-метилфенил)-3,5-дибромсалициламид.

Термин «эффективная доза» относится к количеству средства для лечения или профилактики состояния, которое может лечиться введением композиции на основе данного вещества. Указанное количество является количеством, достаточным для проявления заметного терапевтического, профилактического или облегчающего эффекта. Конкретное эффективное количество для субъекта будет зависеть от массы тела, природы и тяжести состояния, подлежащего лечению. Для корректного сравнения с базовым препаратом предлагаемое средство задавали в дозе по 100 мг/кг.

Соединение 1 получают в одну стадию взаимодействием 3-хлор-4-метиланилина с 3,5-дибромсалициловой кислотой в среде толуола при нагревании в присутствии треххлористого фосфора. Выделенный из толуольного раствора амид для очистки и диспергирования растворяют в диоксане и осаждают 50% водным пропанолом-2.

Пример 1. Смесь 88,8 г (0,3 моль) мелко растертой 3,5-дибромсалициловой кислоты, 46,7 г (0,33 моль) 3-хлор-4-метиланилина, 500 мл толуола и 9 мл треххлористого фосфора кипятят 1 час 20 минут (образуется раствор). Реакционную массу упаривают на 1/2 объема и остаток переливают в колбу для кристаллизации и выдерживают 12 часов при 5-10°С. Выделившийся белый с кремоватым оттенком осадок отфильтровывают и промывают 50 мл холодного пропанола-2. Твердый продукт очищают (с одновременным диспергированием) путем растворения при нагревании в 300 мл диоксана и полученный раствор медленно приливают при перемешивании в 1 л 50% водного пропанола-2, охлажденного до 10-15°С. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат при 105-110°С. Выход целевого продукта с температурой плавления 188-190°С и дисперсностью 10-15 мкм составляет 97,6 г (71,2%).

Полученный таким образом салициланилид (С-1), представляющий собой белый с кремоватым оттенком порошок, легко растворимый в диоксине, умеренно в спирте, толуоле, нерастворимый в воде, непосредственно использовался для дегельминтизации (см. примеры 2, 3,4).

После кристаллизации указанного образца С-1 из спирта получают аналитический образец - белые с кремоватым оттенком мелкие пластинчатые кристаллы с Т. пл. 193-194°С. ТСХ на пластинках «Сорбфил» ПТСХ-П-А-УФ в системе толуол-гексан-этилацетат-кислота уксусная ледяная (4:1:0,5:0,2) хроматографически однороден (Rf - 0,6), ИК-спектр в диске КВr соответствует формуле 1, N-H амидная 3300 см^-1; ν_CO амидная 1635 см^-1 («амид I»); 1543 см^-1 («амид II»).

УФ-спектр 0,0016%-ного раствора вещества 1 в спирте представлен кривой с тремя максимумами в точках 231±2, 282±2 и 355±2 нм и двумя минимумами 264±2, 320±2 нм.

Молекулярная масса 419,5. Элементный анализ соответствует брутто-формуле

C₁₄H₁₀Br₂ClNO₂. Найдено, %: С 37,8, 41,0; Н 2,04, 2,24; N 3,31, 3,76. Вычислено, %: С 40,08; Н 2,40; N 3,34.

Пример 2. Фармакологические исследования.

Токсичность средства испытывали на нелинейных белых мышах с массой тела 13-15 г. Вещество вводили вовнутрь однократно в виде взвеси с крахмальным клейстером. Для каждого опыта использовали не менее 30 мышей, наблюдение за состоянием животных проводили в течение 2 недель с момента введения вещества.

Токсичность заявляемого соединения сравнима с токсичностью ВИВАЛИНА, но ниже, чем у ФЕНАСАЛА.

Пример 3. Оценка противоцестодозной активности заявляемого соединения С-1 была проведена на 30 овцах, спонтанно инвазированных мониезиями (Moniezia expansa и М. benedini).

По результатам копроовоскопических исследований по методу флотации в опыт подобрали по принципу аналогов 3 равноценных, спонтанно инвазированных мониезиями, группы овец по 10 голов в каждой.

Животным первой группы задавали С-1, второй - базовый препарат ФЕНАСАЛ, используемый согласно Инструкции [Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваемости животных гельминтозами. М., 1999. С.15] для сравнения. Оба препарата задавали в дозе по 100 мг/кг однократно перорально с водой из бутылки строго с учетом массы животных. Овцы третьей группы препарат не получали и служили контролем.

Пример 4. Оценка нематодоцидной активности С-1 была проведена на 16 овцах (2 группы по 8 голов), спонтанно инвазированных нематодирусами. Животным первой группы задавали заявляемое средство в дозе 100 мг/кг с водой. Овцы второй группы препарат не получали и служили контролем.

Пример 5. Оценка фасциолоцидной активности С-1 была проведена на 14 телках (2 группы по 7 голов), спонтанно инвазированных фасциолами. Животные первой группы получали однократно перорально заявляемое средство в дозе 100 мг/кг с водой. Животные второй группы препарат не получали и служили контролем.

Эффективность заявляемого средства учитывали по результатам количественных исследований проб фекалий животных всех групп до и через 10 дней после введения препарата овцам и до и через 20 дней после лечения телок, а также на основании гельминтологических вскрытий животных (по три головы) и учета числа обнаруженных гельминтов.

Расчет эффективности заявляемого средства проводили по типу «контрольный тест», который показывает процент снижения зараженности леченых животных по сравнению с животными контрольной группы (нелеченых). В соответствии с Руководством, одобренным Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии [Wood J.B., Amaral N.K., Bairden К., et al. // Vet. Parasitol. 1995. V.58. №1/2. P.181-213], в период опыта учитывали также и клиническое состояние животных, которое свидетельствовало об их излечении и отсутствии токсического воздействия. Полученные результаты обработали статистически с использованием компьютерной программы Excel. Ранее аналогичным образом испытывался препарат ВИВАЛИН - прототип (сравнение с ФЕНАСАЛОМ). Результаты испытаний представлены в таблице.

Результаты исследований

Результаты испытаний заявляемого средства С-1 при мониезиозе овец свидетельствуют о том, что препарат высокоэффективен в испытанной дозе против мониезий (см. таблицу). Через 10 дней после введения вещества 1 все животные полностью освободились от мониезий, о чем свидетельствует отсутствие яиц мониезий в фекалиях овец.

При гельминтологическом вскрытии тонкого отдела кишечника трех выборочно убитых овец контрольной группы обнаружили, в среднем, по 2,3 экз. Moniezia expansa и 1,5 экз. М.benedini. Зараженность овец контрольной группы в течение опыта существенно не изменялась. Количество яиц мониезий в 1 г фекалий овец в начале опыта составило 274,2±14,5 экз. и в конце опыта - 268,7±13,4 экз. (Р>0,05).

Базовый препарат - ФЕНАСАЛ в такой же дозе показал также 100%-ную эффективность. ФЕНАСАЛ применяется согласно Инструкции в дозе 100 мг/кг при индивидуальной даче.

Результаты испытаний заявляемого средства при нематодирозе овец показали более высокую, чем у прототипа, эффективность. Количество нематодирусов в фекалиях овец снизилось после дачи препарата на 32,4% (см. таблицу).

Результаты испытаний заявляемого средства при фасциолезе крупного рогатого скота в дозе 100 мг/кг показали 93,4%-ную эффективность в опыте «контрольный тест» (см. таблицу).

Таким образом, результаты оценки антигельминтного действия заявляемого средства показывают, что препарат не уступает по цестодоцидному (М.Expansa, М.benedini) действию препарату ФЕНАСАЛ. Кроме того, заявляемое средство в отличие от ФЕНАСАЛА, который не используется при фасциолезе, показало 93,4%-ный эффект при фасциолезе крупного рогатого скота (прототип - 83,5%). Нематодоцидное действие соединения 1 выражено слабее (32,4% против нематодирусов, однако у прототипа - 4,9%). ФЕНАСАЛ же нематодоцидным действием не обладает.

Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения заявляемого соединения в медицине и ветеринарии.

Таблица Результаты изучения антигельминтного действия заявляемого соединения Группа животных Препарат Доза, мг/кг Кол-во животных Освободились от инвазии Среднее кол-во яиц гельминтов в 1 г фекалий Эффективность, % до лечения после лечения Мониезиоз овец Подопытная С-1 100 10 10 271,6±12,7 0 100 Подопытная Вивалин 100 10 10 242,7±14,0 0 100 Подопытная Фенасал 100 10 10 269,6±13,6 0 100 Контрольная - - 10 0 274,6±14,5 268,6±13,4 - Нематодоз овец Подопытная С-1 100 8 8 173,6±14,4 120,8±10,3 32,4 Подопытная Вивалин 100 8 8 198,8±13,4 195,3±13,8 4,9 Контрольная - - 8 0 175,6±13,8 178,7±14,0 - Фасциолез крупного рогатого скота Подопытная С-1 100 7 5 119,6±9,2 8,0±2,7 93,4 Подопытная Вивалин 100 7 5 88,6±8,7 15,6±3,2 83,5 Контрольная - - 7 0 117,3±8,7 120,8±8,5 - Примечание. * «контрольный тест» показывает % снижения зараженности пролеченных животных по сравнению с животными контрольной группы (нелеченых).

Изобретение относится к органической химии и касается производного салициланилида брутто-формулы С₁₄Н₁₀Вr₂СlNO₂, а именно N-(3-Хлор-4-метилфенил)-3,5-дибромсалициламида в качестве активного вещества, входящего в антигельминтное средство. Препарат обладает цестодоцидным, нематодоцидным действием, эффективен при фасциолезе. Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения заявляемого соединения в медицине и ветеринарии. 1 табл.

Антигельминтное средство, включающее N-(3-хлор-4-метилфенил)-3,5-дибромсалициламид в качестве активного вещества.