Комплексное твердодисперсное антигельминтное средство Российский патент 2024 года по МПК A61K31/4184 A61K31/4439 A61P33/00 A61P33/10 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности, ветеринарной гельминтологии и может быть использовано для лечения нематодозов и цестодозов жвачных животных.

Гельминтозы жвачных животных широко распространены в нашей стране и за рубежом и причиняют большой экономический ущерб из-за падежа и значительного снижения роста и развития молодняка, а также недополучения продукции животноводства.

К наиболее распространенным заболеваниям жвачных животных в РФ относят нематодозы пищеварительного тракта и легких, а также мониезиоз. Зараженность овец Moniezia spp.в отдельных районах страны достигает 80-100% [6, 8]. При этом потери при мониезиозе овец составляют от снижения прироста массы тела 4,16 кг, настрига шерсти - 0,42 кг, а летальность составляет 7,1%. Большой ущерб причиняют стронгилятозы пищеварительного тракта. От одной овцы недополучают в год 6 кг прироста массы тела и 0,32 кг шерсти, а летальность достигает 12% [9, 10].

Основным методом борьбы с гельминтозами является дегельминтизация при нематодозах животных фенбендазолом, альбендазолом, ивермектинами, левамизолом, а при мониезиозе альбендазолом, празиквантелом, сульфатом меди и фенасалом [3]. Однако альбендазол не эффективен против неполовозрелых мониезий, препараты с празиквантелом имеют высокую стоимость.

Наиболее близким в качестве прототипа является супрамолекулярной комплекс никлозамида, который высокоэффективен при цестодозах овец и крупного рогатого скота [1]. Недостатком этого препарата является отсутствие эффективности против нематод [3]. Ранее нами был разработан препарат вигисокс на основе фенасала и фенбендазола, который в дозе 50 мг/кг эффективен при цестодозах и нематодозах животных [2]. Недостатком вигисокса является низкая растворимость, плохая биодоступность и высокие дозы против нематод и цестод.

В последующем нами разработан твердодисперсный порошок фенбендазола, который был высоко эффективен при нематодозах [7]. Однако он был слабоэффективен против цестод.

Учитывая тот факт, что нематодозы и мониезиоз у животных протекают в смешанной форме перед нами поставлена задача разработать методом механохимической технологии комплексный водорастворимый препарат -твердую дисперсию на основе фенбендазола и никлозамида, полагая, что он будет более эффективным как против нематод, так и цестод.

Отличительными признаками от прототипов является то, что разработан комплексный препарат - твердая дисперсия на основе субстанций фенбендазола, никлозамида и водорастворимого полимера поливинилпирролидона (ПВП), обладающего высокой эффективностью против нематод и цестод.

Технический результат выражается тем, что создан комплексный водорастворимый антигельминтный препарат на основе субстанций нематоцида фенбендазола и цестодоцида - никлозамида, при котором снижается терапевтическая доза, в следствии чего снижается побочное действие, решается вопрос одномоментной дегельминтизации животных против нематодозов и цестодозов.

В связи с этим, целью нашей работы была разработка комплексной твердой дисперсии на основе фенбендазола и никлозамида по механохимической технологии для лечения жвачных животных при смешанных инвазиях, вызванных нематодозами и цестодозами.

Предлагаемая водорастворимая комплексная твердая дисперсия включает в себя механокомплекс, полученный путем механохимической обработки фенбендазола, никлозамида, низкомолекулярного водорастворимого полимера ПВП в весовом соотношении: вариант №1 -2,0:20,0:78,0; вариант №2- 3,0:30,0:67,0 и вариант №3- 4,0:40,0:56,0 в измельчителях ударно-истирающего типа. Твердая дисперсия никлозамида с фенбендазолом представляет собой порошок бежевого цвета. Способ получения твердой дисперсии характеризуется тем, что смешивают фенбендазол, никлозамид с ПВП в указанных соотношениях, затем смесь подвергают механохимической обработке путем ударно-истирающих воздействий до образования агрегатов - измельченных частиц размером от 0,1 до 10 микрон. Полученный механокомплекс более растворим в воде и более эффективен.

Методом жидкостной хроматографии установлено повышение, соответственно, в 31-45 раз и 37-121 раз растворимости фенбендазола и никлозамида в их твердой дисперсии с ПВП по сравнению с механической смесью субстанций этих препаратов без ПВП и без механохимической обработки, Таблица №1. Приложения.

Способ получения комплексной твердой дисперсии происходит в одну стадию механохимической обработки в ударно-истирающих мельницах сухим способом без участия жидких фаз, исключается процесс сушки, отсутствуют при получении отходы.

Эффективность способа получения демонстрируется примерами.

Пример 1. Получение комплексной твердой дисперсии на основе никлозамида, фенбендазола и полимера ПВП. В металлический барабан валковой шаровой мельницы типа LE-101 объемом 800 мл загружали последовательно 2,0 г фенбендазола, 20,0 г никлозамида и 78,0 г ПВП и после предварительного перемешивания добавили 1600 г металлических шаров диаметром 25 мм (32 шара). Барабан устанавливали на валках и обрабатывали смесь в течение 4 часов при вращении барабана со скоростью 60 об/мин. Полученный продукт - твердая дисперсия фенбендазол:никлозамид:ПВП состава 2,0:20,0:78,0 в виде бежевого сыпучего порошка выгружали из барабана и изучали его эффективность на лабораторной модели при гименолепидозе и трихинеллезе белых мышей.

Пример 2. Аналогично примера 1 из 3,0 г фенбендазола и 30,0 г никлозамида и 67,0 г ПВП получали сыпучий порошок - комплексная твердая дисперсия состава фенбендазол:никлозамид:ПВП (3,0:30,0:67,0), который затем изучали на эффективность при гименолепидозе и трихинеллезе белых мышей.

Пример 3. Аналогично примера 1, 4,0 г фенбендазола, 40,0 г никлозамида и 56,0 г ПВП получали бежевый сыпучий порошок - твердую дисперсию состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (4,0:40,0:56,0), который испытали при гименолепидозе и трихинеллезе белых мышей.

Пример 4. Изучение эффективности, заявляемой комплексной твердой дисперсии с фенбендазолом и никлозамидом на модели Hymenolepis nana.

Изучение цестодоцидной активности заявляемой твердой дисперсии проводили на лабораторной модели гименолепидоза на белых мышах, экспериментально инвазированных Н. папа [4]. Мышей заражали перорально с помощью шприца, снабженного специальной канюлей, из расчета 200 инвазионных яиц на животное. Собранных при вскрытии кишечника мышей цестод Н. папа растирали пестиком в ступке или разрушали в небольшом объеме водопроводной воды посредством неоднократного насасывания в шприц с насаженной на него иглой-канюлей для перорального заражения. На 13-е сутки после заражения в желудок мышей трех первых опытных групп вводили твердую дисперсию в разных соотношениях компонентов однократно в дозе 20 мг/кг по ДВ (никлозамиду) в 1,0%-м крахмальном геле.

Животные четвертой группы получали прототип - никлозамид в дозе 20,0 мг/кг. Животным контрольной группы вводили крахмальный гель в объеме 0,3 мл/гол. На 4-е сутки после введения препаратов мышей убивали декапитацией.

Активность твердой дисперсии разных образцов и прототипа учитывали по результатам гельминтологического вскрытия кишечника.

Извлеченных при вскрытии цестод подсчитывали. Учет эффективности препаратов проводили по типу «контрольный тест» с расчетом среднего количества обнаруженных цестод и интенсэффективности (ИЭ).

Результаты представлены в таблице 2 Приложения.

При гименолепидозе белых мышей заявляемый препарат в виде, твердых дисперсий состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (4,0:40,0:56,0) и состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (3,0:30,0:67,0) проявил 100%-ю эффективность. Препарат был эффективным как против имагинальных, так и неполовозрелых гименолеписов. При вскрытии кишечника мышей, получавших твердую дисперсию, цестод не обнаруживали. После введения твердой дисперсии, полученной по примеру 1, в кишечнике животных находили нежизнеспособных гименолеписов и единичные экземпляры подвижных цестод. Эффективность составила соответственно 96,7%.

Базовый препарат - никлозамид в испытанной дозе проявил активность против Н. папа, равную 23,5%.

В кишечнике животных контрольной группы обнаруживали, в среднем, по 18,3±2,0 экз./гол. Н. папа, из них 38,0% составляли неполовозрелые цестоды.

Пример 5. Изучение эффективности заявляемой комплексной твердой дисперсии при мониезиозе овец. Испытание антигельминтного средства в дозе 20 мг/кг по ДВ никлозамиду или 100 мг/кг по препарату проводили на 42 ягнятах, спонтанно инвазированных мониезиями в ООО «Агроресурс» Пестравского района Самарской области. Ягнятам трех опытных групп по 8-9 голов в каждой задавали однократно перорально новые лекарственные формы - твердые дисперсии фенбендазола, никлозамида с полимером ПВП при разном их соотношении в дозе 20 мг/кг по ДВ (никлозамиду).

Овцы четвертой группы получали прототип - никлозамид в дозе 20 мг/кг. Животные контрольной группы препарат не получали.

Эффективность препаратов (твердых дисперсий и прототипа) учитывали по результатам гельминтологического вскрытия через 10 суток после дегельминтизации. Учет эффективности препаратов проводили по типу «контрольный тест» с расчетом среднего числа обнаруженных мониезий [5]. Результаты представлены в таблице 3 Приложения.

Результаты испытания образцов дисперсии при мониезиозе овец показали наивысшую эффективность против Moniezia expansa заявляемых комплексных твердых дисперсий состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (4,0:40,0:56,0) и состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (3,0:30,0:67,0). Эти комплексы в дозе 50 мг/кг по препарату и 20 мг/кг по ДВ (никлозамиду) показали 100%-ю эффективность. После введения комплексной твердой дисперсии, полученных по примеру 1 (состав фенбендазол:никлозамида:ПВП (2,0:20,0:78,0), в кишечнике ягнят находили единичные экземпляры мониезий в количестве 0,125 экз./гол. Эффективность составила 96,7%. Базовый препарат - никлозамид (прототип) в испытанной дозе 20 мг/кг проявил 21,1%-ю эффективность. В кишечнике ягнят контрольной группы обнаруживали, в среднем, по 3,8±0,5 экз. мониезий на животное.

Пример 5. Изучение эффективности комплексных твердых дисперсий на основе фенбендазола, никлозамида и ПВП при трихинеллезе. Изучение нематодоцидной активности заявляемых твердых дисперсий проводили на лабораторной модели трихинеллезе на белых мышах, экспериментально инвазированных Trichinella spiralis. В дозе 250±10 личинок на животное. Животных заражали путем введения суспензии с личинками в желудок с помощью шприца с канюлей.

На третьи сутки после заражения мышей разделили на 4 опытные и одну контрольную группы по 10 голов в каждой. На 3-й сутки после заражения животным первой опытной группы вводили в желудок комплексную твердую дисперсию состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (2,0:20,0:78,0). Мышам второй группы задавали твердую дисперсию состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (3,0:30,0:67,0). Животным третьей группы вводили в желудок твердую дисперсию состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (4,0:40,0:56,0). Мышам четвертой группы вводили в желудок базовый препарат - субстанцию ФБЗ в дозе 2,0 мг/кг. Животные пятой группы препарат не получали и служили контролем.

Все образцы твердых дисперсий применяли в дозе 2 мг/кг по ДВ (фенбендазолу). Животные контрольной группы получали крахмальный гель (1,5%) соответствующем объеме.

На четвертые сутки после введения препаратов животных убивали декапитацией. Нематодоцидную активность испытуемых препаратов учитывали по результатам гельминтологического вскрытия кишечника. После убоя животных тонкий отдел кишечника вскрывали по всей длине, заливали физиологическим раствором и помещали в аппараты Бермана, в котором выдерживали 2-3 часа в термостате при температуре 38-40°С.Затем над осадочную жидкость сливали, а осадок с жидкостью объемом 1-2 мл исследовали под бинокулярной лупой для обнаружения и подсчета числа трихинелл.

Учет эффективности препаратов проводили по типу «контрольный тест» с расчетом среднего числа обнаруженных нематод и интенсэффективности. Полученные результаты обработали статистически по методу Стьюдента-Фишера с использованием программы Microsoft Excel 2007.

Результаты испытания различных образцов твердых дисперсий ФБЗ в комплексе с ФНС и ПВП приведены в таблице №4 Приложения и свидетельствуют о повышении нематоцидной эффективности комплексных твердых дисперсий препаратов, полученных по механохимической технологии в сравнении с базовым препаратом-фенбендазолом в этой же дозе (прототип).

При трихинеллезе белых мышей заявленный препарат - твердые дисперсии проявили 96,3; 94,0 и 96,2%, эффективность при соотношении фенбендазола, никлозамида и ПВП соответственно 2,0:20,0:78,0; 3,0:30,0:67,0; 4,0:40,0:56,0. Базовый препарат - фебендазол в испытательной дозе 2 мг/кг проявил активность против трихинелл, равную 29,0%. В кишечнике животных контрольной группы обнаруживали в среднем 63,4±5,3 экз./гол. имагинальных Trichinella spiralis.

Пример 6. Изучение эффективности заявляемых комплексных твердых дисперсий при стронгилятозах (нематодозах) пищеварительного тракта овец. Испытания твердых дисперсий в дозе 2,0 мг/кг по ДВ (фенбендазолу) или 100 мг/кг по препарату проводили на 43-х молодых овец, спонтанно инвазированных стронгилятами пищеварительного тракта в ООО «Агроресурс» Пестровского района Самарской области. Овцам 3 опытных групп по 9 голов в каждой задавали однократно перорально твердую дисперсию фенбендазола и никлозамида с ПВП при разном соотношении компонентов в дозе 2,0 мг/кг по ДВ (фенбендазолу). Овцы четвертой группы получали прототип - фенбендазол в дозе 2,0 мг/кг. Животные контрольной группы препарат не получали.

Эффективность образцов твердых дисперсии и прототип учитывали по результатам, копроовоскопических исследований методом флотации до и через 15 суток после дегельминтизации. Учет эффективности образцов проводили по типу «контрольный тест» с расчетом среднего числа яиц нематод в г фекалий овец опытных групп в сравнении с контролем. Результаты представлены в таблице 5 Приложения.

Результаты испытания образцов твердых дисперсий при стронгилятозах овец показали 100%-ю эффективность заявляемый комплексный препарат состава фенбендазол:никлозамида:ПВП (3,0:30,0:67,0). После введения твердых дисперсии, полученных по примеру 1 и 3 получили соответственно 97,5 и 98,5%-ю эффективность против стронгилят пищеварительного тракта овец. Базовый препарат - фенбендазола (прототип) в испытанной дозе 2,0 мг/кг показал 20,5%-ю эффективность.

Анализ полученных результатов показал, что использование механохимической технологии получения твердых дисперсий фенбендазола и никлозамида с ПВП позволяет повысить антигельминтную эффективность в 2,5-3,0 раза по сравнению с прототипом, как против цестод, так и против нематод, обеспечивая высокий эффект при смешанных инвазиях животных.

Пример 7. Изучение острой токсичности комплексных твердых дисперсий фенбендазола и никлозамида. Для определения параметров острой токсичности исследуемые образцы вводили в желудок однократно беспородным белым мышам в дозах 5000; 7500; 10000 и 12500 мг/кг. Исследование каждой дозы проводили на 10 белых мышах. В течение 14 суток проводили наблюдение за общим состоянием и поведением животных, проявлением симптомов интоксикации и возможной гибели. Павших животных подвергали патологоанатомическому вскрытию.

Результаты изучения острой токсичности комплексных твердых дисперсий фенбендазола с никлозамидом и ПВП при введении в желудок белым мышам представлены в таблице 6 Приложения.

Результаты изучения показателей острой токсичности препаратов показали, что все испытанные твердые дисперсии, полученные по примеру 1, 2 и 3, оказались нетоксичными для организма белых мышей при введении в желудок. Ни одна мышь не пала после введения препаратов в дозе 12500 мг/кг. Базовый препарат - никлозамид (прототип) напротив проявил токсичность. От дозы 12500 мг/кг пали две мыши. При вскрытии павших животных отмечали гиперемию стенок желудка и тонкого кишечника, точечные кровоизлияния на печени и почках. Следовательно, комплексы, полученные по примеру 1, 2 и 3, оказались безопасными для организма животных в дозах от 5000 до 12500 мг/кг, в то время как базовый препарат в дозе 12500 мг/кг вызвал падеж двух из 10 животных. Прототип (фенбендазол) оказался также безопасным для мышей в испытанных дозах.

Полученные результаты показывают, что применение комплексного твердодисперсного средства на основе фенбендазола и никлозамида с ПВП в соотношении 3,0:30,0:67,0 является наиболее эффективным из трех вариантов и обеспечивает повышение антигельминтной эффективности против цестод и нематод, снижение терапевтической дозы в 2,5-3 раза.

Список источников:

1. Архипов И.А., Архипова А.И., Архипова Д.Р., Белова Е.Е., Садов К.М. Супрамолекулярный комплекс с никлозамидом и способ его получения// Бюл. ФИПС, 2016, N18 от 27.06.2016.

2. Архипов И.А., Архипова А.И., Архипова Д.Р., Белова Е.Е., Садов К.М. Антигельминтное средство// Бюл. ФИПС, 2012, N16 от 10.06.2012.

3. Архипов И. А. Антигельминтики: фармакология и применение. М., 2009. 415 с.

4. Архипов И.А., Варламова А.И., Одоевская И.М. Методические рекомендации по испытанию и оценке эффективности препаратов при трихинеллезе и гименолепидозе на лабораторной модели // Рос. паразитол. журнал 2019. №2(13). С. 58-63.

5. Архипов И.А., Мусаев М.Б., Абрамов В.Е. К стандартизации методов испытаний и оценки эффективности антигельминтиков // Ветеринария. 2004, №5. С. 31-35.

6. Белова Е.Е. Аноплоцефалятозы крупного рогатого скота в Среднем Поволжье (эпизоотология и усовершенствование терапии) // Автореф. дис.канд. вет.наук. Иваново, 2005. 25 с.

7. Варламова А.И., Архипов И.А., Халиков С.С, Садов К.М., Мусаев М.Б. Антигельминтное средство//Бюл. ФИПС, 2019, N35 от 13.12.2019.

8. Магомедов Р.А. К эпизоотологии мониезиоза овец в Дагестане // Тез. Докл. Респ.Научно-практ.Конф. - Махачкала, 2000. С.31-33.

9. Радионов А.В. Структура популяции основных видов нематод у крупного рогатого скота разного возраста в Центральной зоне России // Рос.паразитол. журнал. 2012. №2. С.61-65.

10. Сафиуллин Р.Т. Распространение и экономический ущерб от основных гельминтозов жвачных животных // Ветеринария. 1997. №8. С. 28-32.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к ветеринарной гельминтологии, и предназначено для лечения нематодозов и цестодозов жвачных животных. Комплексное твердодисперсное антигельминтное средство, включающее фенбендазол, которое дополнительно включает никлозамид и поливинилпирролидон и подвергается 4-часовой совместной механохимической обработке в валковой шаровой мельнице с добавлением 1600 г металлических шаров и вращением барабана со скоростью 60 оборотов в минуту до получения частиц твердой дисперсии размером 1-10 микрон, при следующем соотношении компонентов, масс. %: фенбендазол - 3,0, никлозамид - 30,0, поливинилпирролидон - 67,0. Использование изобретения позволяет создать комплексный водорастворимый антигельминтный препарат на основе субстанций нематоцида фенбендазола и цестодоцида - никлозамида, при котором снижается терапевтическая доза, вследствие чего снижается побочное действие, решается вопрос одномоментной дегельминтизации животных против нематодозов и цестодозов. 6 табл., 7 пр.

Комплексное твердодисперсное антигельминтное средство, включающее фенбендазол, отличающееся тем, что он дополнительно включает никлозамид и поливинилпирролидон и подвергается 4-часовой совместной механохимической обработке в валковой шаровой мельнице с добавлением 1600 г металлических шаров и вращением барабана со скоростью 60 оборотов в минуту до получения частиц твердой дисперсии размером 1-10 микрон, при следующем соотношении компонентов, масс. %:

фенбендазол 3,0 никлозамид 30,0 поливинилпирролидон 67,0