АНТИАГРЕГАЦИОННОЕ И СТРЕСС-ЛИМИТИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО Российский патент 2009 года по МПК A61K36/28 A61K135/00 A61K127/00 A61P43/00 

Изобретение относится к пищевым добавкам и лечебным препаратам антиагрегационного и стресс-лимитирующего действия, может быть использовано для профилактики заболеваний, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови, агрегацией эритроцитов и снижением деформируемости: заболеваний сердечнососудистой системы: атеросклероз, ИБС, инфаркт миокарда и др., заболеваний обмена веществ: сахарном диабете, ожирении и некоторых заболеваний аутоиммунной природы.

Средство показано в комплексной терапии для коррекции неврозов и состояний дизадаптации, для снижения невротического реагирования, а также для повышения адаптивных возможностей человека и сохранения его работоспособности в трудных климатических и профессиональных условиях.

Известно средство Патримин, обладающее антиагрегационным действием (RU 2189241, МКИ 7 А61К 35/78, 20.09.2002). Средство характеризуется тем, что представляет собой сухой экстракт тритерпеновых гликозидов-патринозидов Д, В и С, полученный из корней патринии средней (Patrinia intermedia (Horn.) Roem et Schult), при этом содержание олеаноловой кислоты 10-19% на абсолютно сухой экстракт.

Недостатком известного средства является токсичность действия тритерпеновых гликозидов-патринозидов, кроме того для получения средства используют корни и корневища растений, что снижает воспроизводимость лекарственных растений и увеличивает себестоимость готового продукта.

Задачей настоящего изобретения является расширение спектра фармакологической активности, получение препарата без отрицательного воздействия на организм человека.

Технический результат заключается в расширении арсенала средств антиагрегационного и стресс-лимитирующего воздействия, без проявления побочного действия на организм человека.

Новый препарат обладает дополнительным стресс-лимитирующим действием, не оказывает собственного гормонального воздействия, оптимизирует состояние систем неспецифической адаптации организма.

Технический результат достигается тем, что антиагрегационное и стресс-лимитирующее средство включает действующее вещество из надземной части растений рода Serratula семейства Asteraceae, предпочтительно листьев, собранных в фазу вегетации, массовой бутонизации или начала цветения, в качестве действующего вещества используют экдистероидсодержащую субстанцию в виде смеси 20-гидроксиэкдизона в количестве не менее 75% и 258-инокостерона в количестве не менее 10% и, кроме того, оно обладает дополнительным стресс-лимитирующим действием.

Субстанцию смеси фитоэкдистероидов выделяют по способу, описанному в патенте РФ 2153346. Способ позволяет получить 20-гидроксиэкдизона - не менее 75% и 25S-инокостерона - не менее 10%.

Заготовку сырья, предпочтительно листьев, осуществляют в фазу вегетации, массовой бутонизации или начала цветения. Экспериментально установлено, что в эти фазы развития содержание экдистероидов максимально. Исследование распределения экдистероидов в растениях серпухи венценосной проводили у средневозрастных генеративных особей. По содержанию экдистероидов серпуха венценосная намного превосходит другие растения. Использование надземной части растения (в отличие от корневищ) значительно облегчает заготовку и переработку экдистероидсодержащего растительного сырья.

Измельченное растительное сырье (надземная часть растения рода Serratula семейства Asteraceae) неоднократно экстрагируют водой при температуре не выше 100°С не более 1 ч при постоянном перемешивании и соотношении сырье: экстрагент - 1:10 соответственно. Густой водный экстракт упаривают при пониженном давлении, обрабатывают смесью этилацетат-метанол, взятой при соотношении 4:1 или хлороформ-метанол при соотношении 6:1. Процедуру повторяют до полного извлечения экдистероидов из густого экстракта. Органические извлечения упаривают досуха, затем экдистероиды очищают путем хроматографии на оксиде алюминия в системе хлороформ-метанол или этилацетат-метанол возрастающей полярности и перекристаллизацией в системе этилацетат-метанол или этилацетат- этанол при соотношении 9:1.

Выделенная субстанция проявляет высокую физиологическую активность по сравнению с препаратами - аналогами. Субстанция получила коммерческое наименование Серпистен, которое образовано от названия лекарственного растении.

Средство Серпистен представляет собой белый кристаллический порошок, не имеющий запаха, малорастворимый в воде, хорошо растворимый в метаноле и 70%-ном этаноле.

Проверка антиагрегационного и стресс-лимитирующего действия субстанции Серпистен осуществлялась на базе кафедры физиологии человека и животных Сыктывкарского государственного университета. Эксперименты выполнены на 3-4 месячных белых беспородных крысах обоего пола (количество - 190, масса 166±10), самцах линии Wistar (количество - 18, масса 156±9).

Готовили 0,3% раствор Серпистена в 0,9% растворе NaCl. В качестве контроля использовали 0,9% NaCl (плацебо). Серпистен и изотонический раствор вводили внутримышечно. Кровь брали методом тотального обескровливания путем декапитации животных после легкого хлороформного наркоза.

Кровь стабилизировали гепарином. Иммобилизационный стресс производили жесткой фиксацией крысы в положении лежа на спине на 30 минут, что соответствовало начальной фазе стресс-реакции (Анищенко Т.Г. Половые аспекты проблемы стресса и адаптации // Журн. Успехи современной биол., 1991., Т.3. выпуск 3, с.460-475). Проведено несколько серий экспериментов: однократное введение Серпистена в дозе 20 мг/кг с забором крови через 2, 12 часов; многократное введение Серпистена в дозе 5 мг/кг ежедневно в течение 5 дней, суммарная доза - 25 мг/кг, однократное введение Серпистена за 24 часа до иммобилизационного стресса. Крыс делили на группы: интактную, опытные (вводили Серпистен на 2, 12 часов; на 5 дней; за 24 часа до стресса), контрольные (вводили соответствующий объем 0,9% раствора NaCl в те же сроки). Исследования антиагрегационного действия препарата в опытах in vitro проводили на донорской крови (количество - 12), взятой методом венопункции из локтевой вены. Кровь доноров получена медицинским персоналом Республиканской станции переливания крови (г. Сыктывкар).

Агрегационную способность эритроцитов оценивали с помощью метода фитогемагглютинации с использованием пектинов - фитогемагглютининов (ФГА) из гороха посевного Pisnm saticnm. Количественное измерение реакции агглютинации (РАЗ) производили в камере Горяева на 10, 20, 30, 40 минутах наблюдения (Мойсеенко Н.А., Иржак Л.И. Агглютинация эритроцитов кролика при напряженном эритропоэзе // Журн. общей биол., 1972. Т.33. №6, с.779-786.4). Проверка стресс-лимитирующего действия субстанции Серпистен проводилась имитацией эффекта активации симпатоадреналовой системы (САС) in vitro. CAC является ведущей неспецифической системой адаптации, включающейся в начальный период стресс-реакции и в значительной степени определяющей уровень эмоциональной составляющей стресс-реакции и невротизации поведения. Оценка состояния САС и адренореактивности организма осуществлялась с помощью метода фитогемагглютинации в сочетании с пропранололовым тестом (Патент РФ 2310196), а также осмотического гемолиза с добавлением β-адреноблокатора и использованием набора реактивов «β-АРМ» (Р.И. Стрюк, Длусская и.г. Новый метод прогнозирования и оценки эффективности β-адреноблокаторов у больных гипертонической болезнью // Кардиология,- 1997. - №8. с.110-130).

Статистическую обработку проводили с использованием параметрических и непараметрических методов с вычислением средней арифметической, среднеквадратичного отклонения, ошибки средней достоверности различий оценивали по t-критерию Стьюдента.

Пример 1

Иммобилизационный стресс в течение 30 минут увеличивал ФГА-вызванную агрегацию эритроцитов у крыс (n=30) в среднем на 39% на 10 минуте наблюдения (р<0,01), на 23% - на 20 минуте наблюдения (р<0,05). Серпистен, в дозе 20 мг/кг массы животного, введенный за 24 часа до забоя, не изменял агрегационных свойств эритроцитов. Серпистен, в дозе 20 мг/кг, введенный за 24 часа до иммобилизационного стресса, снижал фитогемагглютинацию эритроцитов, увеличенную стрессом, в среднем на 19% на 10 минуте наблюдения; на 14% - на 20 минуте наблюдения (р<0,05).

Пример 2

Введение внутримышечно 0,9% раствора NaCl (растворитель Серпистена) за 2 часа до забоя крысы увеличивало реакцию агглютинации эритроцитов на 10 минуте на 29% (р<0,05), на 20 минуте - на 14% (р<0,05) по сравнению с интактными крысами. Введение 0,9% раствора NaCl многократно в течение 5 дней увеличивало реакцию агглютинации эритроцитов на 26% на 10 минуте наблюдения (р<0,05), на 14% на 20 минуте наблюдения (р<0,1) по сравнению с интактными крысами. Серпистен, введенный за 2 часа до забоя, не изменял агрегационных свойств эритроцитов (снижение на 4%) по сравнению с интактными животными. Многократное введение Серпистена (5 дней) снижало реакцию агглютинации эритроцитов на 16% на 10-20 минутах наблюдения по сравнению с интактными крысами ( стабилизация мембраны, увеличение устойчивости к ФГА). По сравнению с контрольными крысами (введение плацебо - 0,9% NaCl) Серпистен снижал ФГА-вызванную агрегацию эритроцитов на 33% на 10 минуте наблюдения (р<0,01), на 21% на 20 минуте наблюдения (р<0,01). Таким образом, многократное введение Серпистена (5 дней в малой дозе - 5 мг/кг) не только снижало отрицательное действие своего растворителя (0,9% NaCl), но и понижало агрегацию эритроцитов, вызванную ФГА, ниже уровня интактных животных.

Пример 3

Функциональная активность САС (АК), оцениваемая по методу (Патент РФ 2310196), при введении Серпистена в дозе 20 мг/кг за 2 часа до забоя крыс составляла для самцов 61%, для самок - 65%; при многократном введении Серпистена (5 дней) АК составляла для самцов 60%, для самок - 62%. При АК ниже 80% САС считают неактивированной.

АК при введении 0,9% раствора NaCl за 2 часа до забоя крыс оставляла у самцов 93%, у самок - 90%, при многократном введении раствора (5 дней) АК была у самцов - 90%, у самок - 93%, т.е. САС была значительно активирована. При иммобилизационном стрессе АК у самцов крыс составляла 98%.

В опытах in vitro на донорской крови адренореактивность организма, оцениваемая по методу (Р.И.Стрюк, Длусская И.Г. Новый метод прогнозирования и оценки эффективности β-адреноблокаторов у больных гипертонической болезнью // Кардиология, - 1997. - №8. с.110-130.), под действием Серпистена в дозе 20 мг/кг снижалась в среднем с 26 усл.ед. до 2 усл.ед., что свидетельствовало о непосредственном влиянии Серпистена на чувствительность β-адренорецепторов на мембране эритроцитов.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию антиагрегационного и стресс-лимитирующего средства, в качестве действующего вещества содержащего экдистероидсодержащую субстанцию в виде смеси 20-гидроксиэкдизона в количестве не менее 75% и 25S-инокостерона в количестве не менее 10%. Действующее вещество выделено из надземной части растений рода Serratula семейства Asteraceae, предпочтительно листьев, собранных в фазу вегетации, массовой бутонизации или начала цветения. Данное средство расширяет арсенал средств антиагрегационного и стресс-лимитирующего воздействия, без проявления побочного действия на организм человека.

Антиагрегационное и стресс-лимитирующее средство, содержащее действующее вещество, выделенное из надземной части растений рода Serratula семейства Asteraceae, предпочтительно листьев, собранных в фазу вегетации, массовой бутонизации или начала цветения, в качестве действующего вещества оно содержит экдистероидсодержащую субстанцию в виде смеси 20-гидроксиэкдизона в количестве не менее 75% и 25S-инокостерона в количестве не менее 10%.