АНТИТЕЛА И РОДСТВЕННЫЕ МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С БЕЛКАМИ PSCA Российский патент 2010 года по МПК C07K16/18 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие антигенсвязывающий сайт, который специфически связывается с белком антигена простатических стволовых клеток (PSCA). При этом моноклональное антитело продуцируется гибридомной клеточной линией, выбранной из группы гибридомных клеточных линий, депонированных в Американской коллекции типовых культур (А.Т.С.С.) под инвентарным № РТА-6698, РТА-6699, РТА-6700, РТА-6701, РТА-6702 и РТА-6703. Также изобретение относится к экспрессионному вектору, содержащему полинуклеотид, который кодирует данное антитело, а также к способу анализа для детекции присутствия белка PSCA в биологическом образце с использованием этого антитела. Кроме того, изобретение относится к способу доставки цитотоксического средства или диагностического средства к клетке, экспрессирующей белок PSCA, с использованием данного антитела, а также к способу детекции белка PSCA в биологическом образце с использованием вышеуказанного антитела. Изобретение можно эффективно использовать при активной и пассивной иммунизации против онкологических заболеваний. 8 н.и 13 з.п. ф-лы, 27 ил., 11 табл.

1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие антигенсвязывающий сайт, который специфически связываются с белком антигена простатических стволовых клеток (PSCA) (SEQ ID NO: 2), где моноклональное антитело продуцируется гибридомной клеточной линией, выбранной из группы гибридомных клеточных линий, депонированных в Американской коллекции типовых культур (А.Т.С.С.) под инвентарным № РТА-6698, РТА-6703, РТА-6699, РТА-6700, РТА-6701 и РТА-6702.

2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где моноклональное антитело продуцируется гибридомной клеточной линией под инвентарным № А.Т.С.С. РТА-6701.

3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, включающие антигенсвязывающий сайт, который связывается с белком (PSCA) (SEQ ID NO: 2), где антигенсвязывающий сайт включает аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи антитела, секретируемого гибридомной клеточной линией, выбранной из группы клеточных линий, депонированных в А.Т.С.С. под инвентарным № РТА-6698, РТА-6703, РТА-6699, РТА-6700, РТА-6701 и РТА-6702.

4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.3, где гибридомная клеточная линия является линией под инвентарным № А.Т.С.С. РТА-6701.

5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие антигенсвязывающий сайт, который специфически связывается с белком PSCA (SEQ ID NO:2), где моноклональное антитело включает аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 22 и вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 23; последовательность VH SEQ ID NO: 17 и последовательность VL SEQ ID NO: 18; последовательность VH SEQ ID NO: 13 и последовательность VL SEQ ID NO: 14; последовательность VH SEQ ID NO: 15 и последовательность VL SEQ ID NO: 16; последовательность VH SEQ ID NO: 19 и последовательность VL SEQ ID NO: 21; или последовательность VH SEQ ID NO: 28 и последовательность VL SEQ ID NO: 29.

6. Антитело или его фрагмент по любому из пп.1-5, где фрагмент представляет собой фрагмент Fab, F(ab′)₂, Fv или Sfv.

7. Антитело или его фрагмент по любому из пп.1-6, где антитело или его фрагмент конъюгированы с детектируемым маркером, токсином, лечебным средством или химиотерапевтическим средством.

8. Антитело или его фрагмент по п.7, где детектируемый маркер представляет собой радиоизотоп, хелатор металла, фермент, флуоресцентное соединение, биолюминесцентное соединение или хемилюминесцентное соединение.

9. Антитело или его фрагмент по п.8, где радиоизотоп включает ²¹²Bi, ¹³¹I, ¹³¹In, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ²¹¹At, ¹²⁵I, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹³Bi, ³²P или Lu.

10. Антитело или фрагмент по п.7, где токсин включает рицин, домен А рицина, доксорубицин, даунорубицин, мэйтансиноид, таксол, этидия бромид, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, дигидроксиантрациндион, актиномицин, дифтерийный токсин, экзотоксин A Pseudomonas (РЕ), РЕ40, абрин, домен А абрина, домен А модекцина, альфа-сарцин, гелонин, митогеллин, ретстриктоцин, феномицин, эномицин, курицин, кротин, калихеамицин, ингибитор Saponaria officinalis, глюкокортикоид, ауристатин, ауромицин, иттрий, висмут, комбрестатин, дуокармицины, долостатин, сс1065 или цисплатин.

11. Гибридома продуцирующая моноклональное антитело по п.1 или 2, где гибридомы выбраны из группы, состоящей из линий под инвентарным № РТА-6698, РТА-6703, РТА-6699, РТА-6700, РТА-6701 и РТА-6702.

12. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид, кодирующий антитело, включающее аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 22 и вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 23; последовательность VH SEQ ID NO: 17 и последовательность VL SEQ ID NO: 18; последовательность VH SEQ ID NO: 13 и последовательность VL SEQ ID NO: 14; последовательность VH SEQ ID NO: 15 и последовательность VL SEQ ID NO: 16; последовательность VH SEQ ID NO: 19 и последовательность VL SEQ ID NO: 21; или последовательность VH SEQ ID NO: 28 и последовательность VL SEQ ID NO: 29.

13. Вектор по п.12, в котором полинуклеотид кодирует одноцепочечное антитело.

14. Способ анализа для детекции присутствия белка PSCA в биологическом образце, включающий приведение образца в контакт с антителом по любому из пп.1-6 и детекцию связывания белка PSCA (SEQ ID NO: 2) в образце.

15. Способ доставки цитотоксического средства или диагностического средства к клетке, экспрессирующей белок PSCA (SEQ ID NO: 2), включающий:
обеспечение цитотоксического средства или диагностического средства, конъюгированного с антителом или его фрагментом по любому из п.п.1-6, с образованием конъюгата антитело-средство или фрагмент антитела-средства; и
воздействие на клетку конъюгатом антитело-средство или фрагмент антитела-средства.

16. Способ по п.15, где цитотоксическое средство или диагностическое средство выбирают из группы, состоящей из детектируемого маркера, токсина и лечебного средства.

17. Способ по п.16, где детектируемый маркер представляет собой радиоизотоп, хелатор металла, фермент, флуоресцентное соединение, биолюминесцентное соединение или хемилюминесцентное соединение.

18. Способ по п.17, где радиоизотоп включает ²¹²Bi, ¹³¹I, ¹³¹In, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ²¹¹At, ¹²⁵I, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹³Bi, ³²P или Lu.

19. Способ по п.16, где токсин включает рицин, домен А рицина, доксорубицин, даунорубицин, мэйтансиноид, таксол, этидия бромид, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, дигидроксиантрациндион, актиномицин, дифтерийный токсин, экзотоксин A Pseudomonas (РЕ), РЕ40, абрин, домен А абрина, домен А модекцина, альфа-сарцин, гелонин, митогеллин, ретстриктоцин, феномицин, эномицин, курицин, кротин, калихеамицин, ингибитор Saponaria officinalis, глюкокортикоид, ауристатины, ауромицин, иттрий, висмут, комбрестатин, дуокармицины, долостатин, сс1065 или цисплатин.

20. Способ детекции белка PSCA (SEQ ID NO: 2) в биологическом образце, включающий стадии:
обеспечения биологического образца и контрольного образца;
приведения в контакт биологического образца и контрольного образца с антителом по любому из пп.1-6, которое специфически связывается с белком PSCA; и
определения количества комплекса вещества с белком PSCA и антителом, присутствующими в биологическом образце и контрольном образце.

21. Способ по п.20, дополнительно включающий:
отбор биологического образца и контрольного образца у пациента, у которого имеется рак, подозрение на рак предстательной железы, поджелудочной железы, мочевого пузыря, почек, толстой кишки, легких, яичников или молочной железы.