Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение касается соединений и включающих указанные соединения композиций, полезных в качестве ингибиторов каспаз.
Настоящее изобретение также касается способов получения указанных соединений.
Кроме того, настоящее изобретение касается фармацевтических композиций, содержащих указанные соединения, и применения соединений и соответствующих композиций для лечения болезней и нарушений, связанных с опосредованными каспазами состояниями.
Предпосылки создания изобретения
Каспазы представляют семейство ферментов цистеин-протеазы, являющихся основными медиаторами воспаления. Каспаза-1 (ICE) процессирует pre-IL-1β, продуцируя активную форму IL-1β [WO 99/47545]. ICE также связана с конверсией pro-IGIF до IGIF и/или продуцированием IFN-γ [Id.]. Как IL-1β, так и IFN-γ участвуют в патологии, связанной с воспалительными, инфекционными и аутоиммунными заболеваниями [см., например, WO 99/47545; J. Invest. Dermatology, 120(1), pp. 164-167 (2003); Br. J. Dermatology, 141, pp. 739-746 (1999); Science, 282, pp. 490-493 (1998); Schweiz. Med. Wochenschr., 130, pp. 1656-1661 (2000)].
Каспазы являются также основными медиаторами в сигнальных путях при апоптозе и деагрегации клеток [N. A. Thornberry, Chem. Biol., 5, pp. R97-R103 (1998)]. Эти сигнальные пути изменяются в зависимости от типа клеток и стимулов, но доказано, что все пути апоптоза сводятся к общему эффекторному пути, ведущему к протеолизу ключевых белков. Каспазы вовлечены как в эффекторную фазу сигнального пути, так и во все другие положения выше (апстрим) инициации. Каспазы в положении апстрим, вовлеченные в события инициации, становятся активированными и, в свою очередь, активируют другие каспазы, которые вовлекаются на более поздних фазах апоптоза.
Полезность ингибиторов каспаз в лечении разнообразных заболеваний млекопитающих, связанных с ростом клеточного апоптоза, продемонстрирована с использованием пептидных ингибиторов каспаз. Например, в моделях на грызунах показано, что ингибиторы каспаз снижают размер инфаркта и препятствуют апоптозу кардиомиоцитов после инфаркта миокарда, снижают объем повреждения и неврологические расстройства, возникающие в результате удара, снижают посттравматический апоптоз и неврологические расстройства при травматическом повреждении мозга, являются эффективными в лечении скоротечного разрушения печени и повышают выживаемость после эндотоксического шока [H. Yaoita et al., Circulation, 97, pp. 276-281 (1998); M. Endres et al., J. Cerebral Blood Flow and Metabolism, 18, pp. 238-247, (1998); Y. Cheng et al., J. Clin. Invest., 101, pp. 1992-1999 (1998); A. G. Yakovlev et al., J. Neurosci., 17, pp. 7415-7424 (1997); I. Rodriquez et al., J. Exp. Med., 184, pp. 2067-2072 (1996); Grobmyer et al., Mol. Med., 5, p. 585 (1999)].
Однако по причине пептидной природы такие ингибиторы обычно характеризуются нежелательными фармакологическими свойствами, такими как низкие проникновение в клетки и клеточная активность, низкое всасывание при пероральном введении, низкая стабильность и быстрый метаболизм [J. J. Plattner and D. W. Norbeck, in Drug Discovery Technologies, C. R. Clark and W. H. Moos, Eds. (Ellis Horwood, Chichester, England, 1990), pp. 92-126]. Это препятствовало их разработке в эффективные лекарственные средства. Приведенными и другими исследованиями с пептидными ингибиторами каспаз показано, что остаток аспарагиновой кислоты вовлечен в основное взаимодействие с ферментом, каспазой [K. P. Wilson et al., Nature, 370, pp. 270-275 (1994); Lazebnik et al., Nature, 371, p. 346 (1994)].
Следовательно, пептидиловые и не пептидиловые соединения аспарагиновой кислоты полезны в качестве ингибиторов каспаз.
Тем не менее, существует потребность в соединениях, обладающих способностью действовать как ингибиторы каспаз, в частности обладающих селективностью против некоторых каспаз.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение касается соединения формулы I:
где переменные принимают указанные здесь значения.
Настоящее изобретение также касается способов получения указанных соединений, композиций, фармацевтических композиций и способов применения таких соединений и композиций для ингибирования каспаз. Эти соединения в особенности полезны в качестве селективных ингибиторов каспазы-1/каспазы-8.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение касается соединения формулы I:
где:
Y означает 
или 
;
R означает R3C(O)-, HC(O), R3SO2-, R3OC(O), (R3)2NC(O), (R3)(H)NC(O), R3C(O)C(O)-, R3-, (R3)2NC(O)C(O), (R3)(H)NC(O)C(O) или R3OC(O)C(O)-;
R1 означает заместители: H, алифатический, циклоалифатический, арил, гетероциклил, гетероарил, циклоалкил-алифатический-, циклоалкенил-алифатический-, арил-алифатический-, гетероциклил-алифатический- или гетероарил-алифатический-, где любой атом водорода необязательно и независимо замещен R8 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом;
кольцо A означает:
или 
где в каждом кольце любой атом водорода необязательно и независимо замещен R4 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом;
R3 означает заместители: алифатический, циклоалифатический, арил, гетероциклил, гетероарил, циклоалифатический-алифатический-, арил-алифатический-, гетероциклил-алифатический- или гетероарил-алифатический- ; либо две R3 группы, связанные с одним и тем же атомом, образуют вместе с этим атомом 3-10-членный ароматический или неароматический цикл; где любой цикл необязательно является конденсированным с арилом, гетероарилом, циклоалкилом или гетероциклилом; где до 3 алифатических атомов углерода может быть замещено группой, выбранной из группы, включающей О, N, NR9, S, SO и SO2, где R3 имеет до 6 заместителей, независимо выбранных из R8;
R4 означает галоген, -OR9, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R9, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -SR9, -SOR9, -SO2R9, -SO2N(R9)2, -SO3R9, -C(O)R9, -C(O)C(O)R9, -C(O)C(O)OR9, -C(O)C(O)N(R9)2, -C(O)CH2C(O)R9, -C(S)R9, -C(S)OR9, -C(O)OR9, -OC(O)R9, -C(O)N(R9)2, -OC(O)N(R9)2, -C(S)N(R9)2, -(CH2)0-2NHC(O)R9, -N(R9)N(R9)COR9, -N(R9)N(R9)C(O)OR9, -N(R9)N(R9)CON(R9)2, -N(R9)SO2R9, -N(R9)SO2N(R9)2, -N(R9)C(О)OR9, -N(R9)C(O)R9, -N(R9)C(S)R9, -N(R9)C(О)N(R9)2, -N(R9)C(S)N(R)2, -N(COR9)COR9, -N(OR9)R9, -C(=NH)N(R9)2, -C(O)N(OR9)R9, -C(=NOR9)R9, -OP(O)(OR9)2, -P(O)(R9)2, -P(O)(OR9)2 или -P(O)(H)(OR9);
R2 означает -C(R5)(R6)(R7), арил, гетероарил или C3-7-циклоалкил;
R5 означает H или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R6 означает H или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R7 означает -CF3, -C3-7-циклоалкил, арил, гетероарил, гетероцикл или C1-6- линейный или разветвленный алкил, где каждый атом углерода алкила необязательно и независимо замещен R10;
или R5 и R7 вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют 3-10-членную циклоалифатическую группу;
каждый из R8 и R8' независимо означает галоген, -OR9, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R9, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -SR9, -SOR9, -SO2R9, -SO2N(R9)2, -SO3R9, -C(O)R9, -C(O)C(O)R9, -C(O)C(O)OR9, -C(O)C(O)N(R9)2, -C(О)CH2C(О)R9, -C(S)R9, -C(S)OR9, -C(O)OR9, -OC(O)R9, -C(O)N(R9)2, -OC(O)N(R9)2, -C(S)N(R9)2, -(CH2)0-2NHC(O)R9, -N(R9)N(R9)COR9, -N(R9)N(R9)C(O)OR9, -N(R9)N(R9)CON(R9)2, -N(R9)SO2R9, -N(R9)SO2N(R9)2, -N(R9)C(O)OR9, -N(R9)C(О)R9, -N(R9)C(S)R9, -N(R9)C(O)N(R9)2, -N(R9)C(S)N(R9)2, -N(COR9)COR9, -N(OR9)R9, -C(=NH)N(R9)2, -C(O)N(OR9)R9, -C(=NOR9)R9, -OP(O)(OR9)2, -P(O)(R9)2, -P(O)(OR9)2 и -P(O)(H)(OR9);
R9 означает заместители: водород, алифатический, циклоалифатический, арил, гетероциклил, гетероарил, циклоалифатический-алифатический-, арил-алифатический-, гетероциклил-алифатический- или гетероарил-алифатический-; где любой атом водорода необязательно и независимо замещен R8 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом;
R10 означает галоген, -OR11, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R11 или -SR11; где R11 означает C1-4-алифатический-.
Настоящее изобретение также касается соединения формулы II:
где:
Y означает 
или 
;
R1 означает заместители: H, алифатический, циклоалкил (например, циклопентил), циклоалкенил, арил, гетероциклил, гетероарил, циклоалкил-алифатический-, циклоалкенил-алифатический-, арил-алифатический-, гетероциклил-алифатический или гетероарил-алифатический-, где любой атом водорода необязательно и независимо замещен R8 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом;
кольцо A означает:
где в каждом кольце любой атом водорода необязательно и независимо замещен R4 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом (или, в альтернативном варианте осуществления, карбонилом или (C3-C6)-спироциклом);
R4 означает галоген, -OR9, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R9, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -SR9, -SOR9, -SO2R9, -SO2N(R9)2, -SO3R9, -C(O)R9, -C(O)C(O)R9, -C(O)C(O)OR9, -C(O)C(O)N(R9)2, -C(O)CH2C(O)R9, -C(S)R9, -C(S)OR9, -C(O)OR9, -OC(O)R9, -C(O)N(R9)2, -OC(O)N(R9)2, -C(S)N(R9)2, -(CH2)0-2NHC(O)R9, -N(R9)N(R9)COR9, -N(R9)N(R9)C(O)OR9, -N(R9)N(R9)CON(R9)2, -N(R9)SO2R9, -N(R9)SO2N(R9)2, -N(R9)C(О)OR9, -N(R9)C(O)R9, -N(R9)C(S)R9, -N(R9)C(О)N(R9)2, -N(R9)C(S)N(R)2, -N(COR9)COR9, -N(OR9)R9, -C(=NH)N(R9)2, -C(O)N(OR9)R9, -C(=NOR9)R9, -OP(O)(OR9)2, -P(O)(R9)2, -P(O)(OR9)2 или -P(O)(H)(OR9);
R2 означает -C(R5)(R6)(R7), арил, гетероарил или C3-7-циклоалкил;
R5 означает H или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R6 означает H или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R7 означает -CF3, -C3-7-циклоалкил, арил, гетероарил, гетероцикл или C1-6- линейный или разветвленный алкил, где каждый атом углерода алкила необязательно и независимо замещен R10;
(или, в альтернативном варианте осуществления, R5 и R7 вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют 3-10-членную циклоалифатическую группу);
R3 означает фенил, тиофен или пиридин, где каждый цикл необязательно имеет до 5 заместителей, независимо выбранных из групп R8', и где, по меньшей мере, одно положение на фениле, тиофене или пиридине, смежное со связью x, замещено R12, где R12 содержит не более 5 атомов в линейной цепи;
каждый из R8 и R8' независимо означает галоген, -OR9, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R9, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -SR9, -SOR9, -SO2R9, -SO2N(R9)2, -SO3R9, -C(O)R9, -C(O)C(O)R9, -C(O)C(O)OR9, -C(O)C(O)N(R9)2, -C(О)CH2C(О)R9, -C(S)R9, -C(S)OR9, -C(O)OR9, -OC(O)R9, -C(O)N(R9)2, -OC(O)N(R9)2, -C(S)N(R9)2, -(CH2)0-2NHC(O)R9, -N(R9)N(R9)COR9, -N(R9)N(R9)C(O)OR9, -N(R9)N(R9)CON(R9)2, -N(R9)SO2R9, -N(R9)SO2N(R9)2, -N(R9)C(O)OR9, -N(R9)C(О)R9, -N(R9)C(S)R9, -N(R9)C(O)N(R9)2, -N(R9)C(S)N(R9)2, -N(COR9)COR9, -N(OR9)R9, -C(=NH)N(R9)2, -C(O)N(OR9)R9, -C(=NOR9)R9, -OP(O)(OR9)2, -P(O)(R9)2, -P(O)(OR9)2 и -P(O)(H)(OR9);
R9 означает заместители: водород, алифатический, циклоалкил, циклоалкенил, арил, гетероциклил, гетероарил, циклоалифатический-алифатический-, арил-алифатический-, гетероциклил-алифатический- или гетероарил-алифатический-; (в некоторых вариантах осуществления любой атом водорода R9 необязательно и независимо замещен R8 и любая система из двух атомов водорода, связанных с одним и тем же атомом, необязательно и независимо замещена карбонилом; при условии, что если R9 замещен R8, там, где R8 включает в себя заместитель R9, такой заместитель R9 является незамещенным R8);
R10 означает галоген, -OR11, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R11 или -SR11;
R11 означает C1-4-алифатическую группу и
R12 означает галоген, -OR11, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R11, -SR9.
Как использовано в определении R12, понятие "атомы линейной цепи" означает атомы, которые связаны линейно, независимо от того, что эти атомы могут также образовывать разветвления. Согласно данному определению этильная группа и трифторметокси группа содержат по три атома в линейной цепи, а метильная группа содержит два атома в линейной цепи. В вышеуказанном варианте осуществления R12 содержит не более 5 атомов в линейной цепи. В двух других вариантах осуществления R12 содержит не более 4 атомов в линейной цепи и не более 3 атомов в линейной цепи. В иных вариантах осуществления R12 содержит 2 атома в линейной цепи или 1 атом.
Как использовано здесь, положение, смежное с x связью, означает положение, следующее за положением, отвечающим связи x. В арильном цикле это положение часто называют "ортоположением", или, в случае фенильного цикла, указанное положение может быть названо "2-положение". Например, в структурах, приведенных непосредственно ниже, R12 связан с циклами фенила, тиофена и пиридина "в положении, смежном со связью x".
В одном из вариантов осуществления данного изобретения R означает R3C(О)-.
В некоторых вариантах изобретения R3 означает необязательно замещенный C6-10-арил или гетероарил. В других вариантах изобретения R3 означает необязательно замещенный фенил. В еще одних вариантах изобретения R3 означает 8-10-членный, необязательно замещенный гетероарил (например, хинолин, изохинолин или хиназолин). В других вариантах изобретения R3 означает необязательно замещенный 5-6-членный гетероарил (например, пиридил, пиримидил, пиразинил, тиофенил, фуранил, тиазолил).
В некоторых вариантах изобретения R3 является необязательно и независимо замещенным 0-5 группами R8'.
В одном из вариантов изобретения соединение по данному изобретению представлено формулой II:
где:
a) R3 означает фенил, тиофен или пиридин;
b) каждый цикл необязательно имеет до 5 замещающих групп, независимо выбранных из R8, и
c) по меньшей мере, одно положение на фениле, тиофене или пиридине, смежное со связью x, замещено R12, где R12 содержит не более 5 атомов в линейной цепи.
Другой вариант осуществления данного изобретения касается соединения, где Y означает:
В одном из вариантов осуществления данного изобретения R1 имеет до 3 замещающих групп, независимо выбираемых из карбонила и R8.
В другом варианте осуществления R1 означает заместители: C1-12-алифатический или C3-10-циклоалкил, где каждый R1 необязательно замещен 1-3 группами, независимо выбранными из R8. В еще одном варианте осуществления R1 означает линейный или разветвленный C1-4-алкил, необязательно замещенный 1-3 группами, независимо выбранными из R8.
В одном из вариантов осуществления R1 означает незамещенный, линейный или разветвленный C1-4-алкил (например, этил, изопропил, н-пропил или н-бутил). В другом варианте осуществления R1 означает этил.
В любом из этих вариантов R8 означает галоген, -OR9, -CN, -CF3, -OCF3 или -R9. В другом варианте осуществления, когда R8 означает -R9, указанный R9 означает бензил.
В другом варианте осуществления Y означает
В другом варианте осуществления кольцо A имеет до 3 замещающих групп (предпочтительно, 1 группу), выбранных независимо из карбонила и R4.
В одном из вариантов осуществления кольцо А означает:
необязательно замещенные R4.
В еще одном варианте осуществления кольцо А означает:
необязательно замещенное R4.
В другом варианте этого осуществления кольцо А означает незамещенный пролин (т.е. R4 означает водород).
В еще одном варианте осуществления кольцо А означает:
или 
, необязательно замещенное R4.
В одном из вариантов осуществления кольцо А означает 
необязательно замещенное R4.
В любом из этих вариантов R4 означает галоген, -OR9, -CF3, -OCF3, -R9 или -SR9. В некоторых вариантах осуществления R4 означает H.
В одном из вариантов осуществления R2 означает С3-4-разветвленную алкильную группу.
В другом варианте осуществления R5 означает H или -CH3, R6 означает -CH3 и R7 означает -CH3.
В другом варианте осуществления R12 означает -OCF3, -OCH3, -CF3, -CH3, -CH2CH3, -Cl или -F.
В еще одном варианте осуществления R12 означает -CF3, -CH3, -Cl или -F.
В еще одном варианте осуществления R12 означает -CH3, -Cl или -F.
В другом варианте осуществления каждый из R8', если присутствует, независимо означает галоген, -OR9, -NO2, -CN, -CF3, -OCF3, -R9, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -SR9, -SOR9, -SO2R9, -SO2N(R9)2, -C(O)R9, -C(O)C(O)N(R9)2, -C(O)N(R9)2, -OC(O)N(R9)2, -(CH2)0-2NHC(O)R9, -N(R9)SO2R9, -N(R9)SO2N(R9)2, -N(R9)C(О)OR9, -N(R9)C(О)R9 или -N(R9)C(O)N(R9)2.
В другом варианте осуществления R8' означает -NH2, -N(R9)2, -N(R9)C(O)R9, -OCF3, -OR9, -CF3, -R9, -SR9 или галоген. В этом варианте осуществления галоген означает, предпочтительно, Cl или F и R9 означает, предпочтительно, линейный или разветвленный C1-4-алкил.
Согласно одному из вариантов осуществления настоящее изобретение касается соединения формулы III:
где переменные имеют значения, указанные в любых приведенных здесь вариантах осуществления.
В одном из вариантов этого осуществления соединение имеет приведенную ниже стереохимию:
где переменные имеют значения, указанные в любых приведенных здесь вариантах осуществления.
В других вариантах этого осуществления соединение имеет приведенную ниже стереохимию:
или 
;
где переменные имеют значения, указанные в любых приведенных здесь вариантах осуществления.
Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение касается соединения формулы IV:
где переменные имеют значения, указанные в любых приведенных здесь вариантах осуществления.
В одном из вариантов этого осуществления соединение имеет приведенную ниже стереохимию:
где переменные имеют значения, указанные в любых приведенных здесь вариантах осуществления.
Для получения соединения по настоящему изобретению приведенные здесь варианты осуществления можно комбинировать.
Согласно одному из вариантов осуществления настоящее изобретение касается соединения, выбранного из приведенной ниже таблицы 1:
Таблица 1
Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение касается соединения формулы II, выбранного из приведенной ниже таблицы 2:
Таблица 2
В некоторых вариантах осуществления данного изобретения значения переменных выбирают из значений, представленных в соединениях таблицы 1 и/или таблицы 2.
Как использовано здесь, конкретно указанное число атомов включает любые целые числа из приведенного интервала. Например, группа, состоящая из 1-4 атомов, может содержать 1, 2, 3 или 4 атома.
Как использовано здесь, алифатическая группа включает линейные и разветвленные группы с указанным числом атомов. Если число атомов не указано, алифатическая группа может содержать от 1 до 12 атомов углерода. Подразумевается, что алкенильная и/или алкинильная алифатические группы содержат, по меньшей мере, 2 атома углерода. Предпочтительными алифатическими группами являются алкильные группы (предпочтительно, содержащие от 1 до 6 атомов).
Циклоалкильная и циклоалкенильная группы содержат от 3 до 10 атомов углерода и являются моноциклическими или бициклическими, включая линейно конденсированные, мостиковые или спироциклические.
Как использовано здесь, "ароматическая группа" или "арил" означает 6-10-членную циклическую систему, содержащую, по меньшей мере, один ароматический цикл. Примеры ароматических циклов включают фенил и нафтил.
Как использовано здесь, "гетероарил" означает циклическую систему, содержащую 5-10 членов и 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N, N(R9), O, S, SO и SO2, где, по меньшей мере, один цикл является гетероароматическим (например, пиридил, тиофен или тиазол).
Как использовано здесь, "гетероцикл" означает циклическую систему, содержащую 3-10 членов и 1, 2 или 3 гетероатома, независимо выбранных из N, N(R9), O, S, SO и SO2, где ни один цикл не является ароматическим (например, пиперидин и морфолин).
Дополнительные примеры гетероарильных циклов включают 2-фуранил, 3-фуранил, N-имидазолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, 5-имидазолил, бензимидазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 5-оксазолил, N-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, пиридазинил (например, 3-пиридазинил), 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, тетразолил (например, 5-тетразолил), триазолил (например, 2-триазолил и 5-триазолил), 2-тиенил, 3-тиенил, бензофурил, бензотиофенил, индолил (например, 2-индолил), пиразолил (например, 2-пиразолил), изотиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, пуринил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, хинолинил (например, 2-хинолинил, 3-хинолинил, 4-хинолинил) и изохинолинил (например, 1-изохинолинил, 3-изохинолинил или 4-изохинолинил).
Другие примеры гетероциклических циклов включают 3-1H-бензимидазол-2-он, 3-(1-алкил)бензимидазол-2-он, 2-тетрагидрофуранил, 3-тетрагидрофуранил, 2-тетрагидротиофенил, 3-тетрагидротиофенил, 2-морфолино, 3-морфолино, 4-морфолино, 2-тиоморфолино, 3-тиоморфолино, 4-тиоморфолино, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил, 3-пирролидинил, 1-тетрагидропиперазинил, 2-тетрагидропиперазинил, 3-тетрагидропиперазинил, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 1-пиразолинил, 3-пиразолинил, 4-пиразолинил, 5-пиразолинил, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-пиперидинил, 2-тиазолидинил, 3-тиазолидинил, 4-тиазолидинил, 1-имидазолидинил, 2-имидазолидинил, 4-имидазолидинил, 5-имидазолидинил, индолинил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, бензотиолан, бензодитиан и 1,3-дигидроимидазол-2-он.
Каждый из вышеуказанных заместителей, алифатический, арил, циклоалифатический, гетероарил и гетероциклил, может содержать соответствующие заместители (предпочтительно, до 5), независимо выбранные, например, из карбонила и R8. Предпочтительными заместителями являются галоген, -OR9, -NO2, -CF3, -OCF3, -R9, оксо, -OR9, -O-бензил, -O-фенил, 1,2-метилендиокси, 1,2-этилендиокси, -N(R9)2, -C(O)R9, -COOR9 или -CON(R9)2, где R9 принимает указанные здесь значения (и, предпочтительно, означает H, (C1-C6)-алкил или (C2-C6)-алкенил и алкинил), при этом (C1-C6)-алкил является наиболее предпочтительным). Следует иметь в виду, что данное определение включает перфторированную алкильную группу.
Для специалиста в данной области очевидно, что некоторые соединения по данному изобретению могут существовать в таутомерных формах или гидратированных формах, все такие формы соединений входят в объем изобретения. Если не оговорено особо, подразумевается также, что все изображенные здесь структуры включают все стереохимические формы структуры; т.е. R- и S- конфигурации для каждого асимметрического центра. Следовательно, отдельные стереохимические изомеры, а также энантиомерные и диастереомерные смеси рассматриваемых соединений входят в объем изобретения.
Если не оговорено особо, подразумевается также, что все изображенные здесь структуры включают соединения, отличающиеся только наличием одного или более изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие рассматриваемые структуры, за исключением замены водорода на дейтерий или тритий или замены углерода на 13C- или 14C- обогащенный углерод, входят в объем изобретения.
Соединения по данному изобретению могут быть получены любым способом, включая общие синтетические способы, известные специалистам в данной области, предназначенные для аналогичных соединений (см., например, WO 99/47545). Следующие схемы синтеза соединений по настоящему изобретению представлены в целях иллюстрации.
Приняты следующие обозначения:
EDC означает 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид
HOBt означает 1-гидроксибензотриазол
THF означает тетрагидрофуран (ТГФ)
TFA означает трифторуксусную кислоту
DCM означает дихлорметан
DMAP означает 4-диметиламинопиридин
DIPEA означает диизопропилэтиламин
DMF означает диметилформамид (ДМФА)
Z означает бензилоксикарбонил
1H NMR означает ядерный магнитный резонанс (1H-ЯМР)
TLC означает тонкослойную хроматографию (ТСХ)
Схема I. Общая схема получения E и F
Схема I представляет общий способ получения соединений E и F, раскрытых настоящим изобретением. Осуществляют связывание аминогруппы соединений типа А, легко получаемой восстановлением α-карбоксильной группы аспарагиновой кислоты (защищенной с помощью PG1 в форме сложного эфира), с группой карбоновой кислоты соединений типа B (N-защищенных посредством PG2), что дает соединения типа C. PG1 и PG2 являются ортогональными защитными группами (т.е. защитными группами, где защитная группа может быть селективно удалена в присутствии другой защитной группы. В идеале, PG1 может быть удалена без удаления PG2 и наоборот). Затем осуществляют последовательность превращений окисление/кетализация/снятие защиты/циклизация по аспартат-участку молекулы, получая соединения типа D. Участок цикла A на D затем дополнительно функционализируют, получая соединения типа E, входящие в состав раскрытого изобретения. Снятие защиты кеталя дает соединения типа F, составляющие другой аспект раскрытого изобретения.
В различных вариантах осуществления данного изобретения PG2 представляет собой аминозащитную группу, включая, но не в порядке ограничения, аминозащитные группы, описанные в T. W. Greene & P. G. M Wutz. "Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. (1999 и другие издания) ("Greene"). "Z"-защитная группа (бензилоксикарбонил) представляет собой в особенности полезную N-защитную группу для применения по настоящему изобретению. В соединениях, где PG2 используется для защиты азота пролина, PG2 предпочтительно означает Z. Следует учесть, что модифицированные Z группы (защитные группы "Z-типа"), используемые применительно к соединениям и способам по данному изобретению, также входят в объем настоящего изобретения. Например, Z может быть замещена по CH2 группе или фенильной группе с помощью R8 (предпочтительно галогеном или C1-6- линейным или разветвленным алкилом), образуя защитную группу Z-типа.
В различных вариантах осуществления по данному изобретению PG1 означает подходящую защитную группу карбоновой кислоты, включая, но не в порядке ограничения, кислотные защитные группы, описанные в Greene. В некоторых вариантах осуществления PG1 означает C1-6- линейную или разветвленную алкильную группу. Трет-бутильная группа является в особенности полезной кислотной защитной группой для применения согласно настоящему изобретению.
На схеме I соединение A представляет собой модифицированный остаток аспарагиновой кислоты. В дополнение к соединению A могут быть упомянуты другие модифицированные остатки аспарагиновой кислоты, включающие следующие:
где PG3 и PG4 означают соответствующие защитные группы. Эти модифицированные аспарагиновые кислоты могут также быть получены известными квалифицированным специалистам способами. См., например, патентную публикацию заявки US 2002/0042376 (в частности, страницу 9, параграф и страницы 21-22, параграф [0250] и документы, цитируемые в параграфе [0123]) и патент US 6235899. См., также C. Gros et al. "Stereochemical control in the preparation of a-amino N-methylthiazolidine Masked Aldehydes used for Peptide Aldehyde Synthesis" Tetrahedron, 58, pp. 2673-2680 (2002); K. T. Chapman. "Synthesis of a Potent Reversible Inhibitor of Interleukin-β Converting Enzyme" Bioorg. Med. Chem. Letts., 2, pp. 613-618 (1982); M. D. Mullican et al. "The Synthesis and Evaluation of Peptidyl Aspartyl Aldehydes as Inhibitors of ICE'" 4, pp. 2359-2364 (1994); M. H. Chen et al. "An Efficient Stereoselective Synthesis of [3S(1S,9S)]-3-[[[9-(Benzoylamino)octahydro-6,10-Dioxo-6H-pyridazino-(1,2-a)(1,2)-Diazepin-1-yl]-carbonyl]amino]-4-oxobutanoic acid, an interleukin converting enzyme (ICE) Inhibitor" 9, pp. 1587-1592 (1999). Соответственно, схема I (и также схема III, ниже) может быть изменена с учетом применения этих других остатков аспарагиновой кислоты.
Схема II. Получение соединений формул I и II
Реагент и условия: (a) R3COOH, HOBt, DMAP, EDC, ТГФ; (b) R3CONHCH(R2)COOH, HOBt, DMAP, EDC, ТГФ; (c) 2M HCl, MeCN.
Схема II описывает получение соединения формул I и II, где кольцо А означает незамещенный пролин. Здесь форма циклического ацеталя соединения по данному изобретению представлена формулой I и альдегидная форма представлена формулой II. Соединения, содержащие кольцо A, отличное от незамещенного пролина, могут быть замещены по способам, описанным схемой I.
Схема II описывает способы, используемые для получения соединений формул I и II. Соединения I могут быть получены из соединений 1 путем конденсации аминогруппы в 1 с соответственно функционализированной карбоновой кислотой (или производным). Для этой стадии приведены стандартные связующие реагенты, способствующие образованию амидных связей; также могут быть использованы другие, известные из уровня техники, условия получения амидных связей.
Как известно квалифицированным специалистам, карбоновая кислота (-C(O)OH) может быть связана с амином в условиях, подходящих для сочетания аминов и карбоновых кислот. Альтернативно, для таких сочетаний может быть использовано производное карбоновой кислоты (-C(O)X) вместо карбоновой кислоты. Очевидно, что в случае сочетания амина и производного карбоновой кислоты производное должно активировать кислоту, способствуя сочетанию с амином. Подходящие X группы являются, по существу, уходящими группами и известны квалифицированным специалистам. "March's Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., Ed.: Smith M. B. and March J., John Wiley & Sons, New York, 2001.
Типичные условия сочетания амина и кислоты включают комбинацию подходящего растворителя, карбоновой кислоты, основания и пептидсвязующего реагента. Примеры подходящих условий описаны в US 2002/0042376 и WO 01/81330, которые полностью включены здесь посредством ссылок. В некоторых вариантах осуществления использованы такие условия, как описаны в приведенных здесь схемах и примерах.
Примеры соответствующих производных включают, но не в порядке ограничения, соединения формулы RX, где X означает Cl, F, OC(=O)R" (R" означает алифатический или арил), SH, SR, Sar или SeAr. В некоторых вариантах осуществления R означает C(=O). Подходящие условия для применения этих соответствующих производных известны из уровня техники.
Схема III. Получение соединения 1
Реагент и условия: (a) Cbz-Pro-OH, EDC, HOBt, DMAP, DIPEA, ТГФ; (b) Swern; (c) R1OH, 3Å сита, DCM, TsOH; (d) TFA, DCM; (e) H2, Pd(OH)2, EtOAc, ДМФА, Et3N; (f) EDC, HOBt, Et3N, EtOAc, ДМФА; (g) H2, Pd/C, лимонная кислота.
Схема III описывает возможный способ получения соединений 7 и соединений 1, приведенных на схеме I. Осуществляют связывание соединения 2, легко получаемого восстановлением α-карбоксильной группы аспарагиновой кислоты, с N-защищенным пролином (или другим кольцом, где кольцо A отлично от незамещенного пролина), что приводит к образованию 3. Здесь пролин является N-защищенным с помощью Z (бензилоксикарбонил-) группы. Соединения 3 затем окисляют до альдегидов 4, которые ацеталируют in situ, получая ацетали 5. Ацетали могут быть получены в присутствии R1-OH (или подходящего ацеталь-образующего реагента), протонной кислоты (например, TsOH) или кислоты Льюиса и подходящего растворителя. Примерами подходящих ацеталь-образующих реагентов, приводящих к соединениям, где R1 превращается в этил, могут считаться этанольные эквиваленты, включающие, но не в порядке ограничения, триэтилортоформиат или диэтилацеталь, такой как (CH3)2C(OCH2CH3)2. Предпочтительно, растворителем является CH2Cl2, толуол или хлорбензол. Подходящие протонные кислоты включают, но не в порядке ограничения, TFA, п-TsOH. Подходящие кислоты Льюиса включают, но не в порядке ограничения, TiCl4, MgBr2 и ZnCl2.
На схеме III представлено окисление соединений 3 до соединений 4, осуществляемое в условиях Swern'a. Другие условия окисления также могут быть использованы для получения соединений по данному изобретению. Предпочтительными условиями окисления являются те, которые позволяют мягко или сравнительно быстро свести к минимуму эпимеризацию по кислотной боковой цепи модифицированного остатка аспарагиновой кислоты. В одном из вариантов осуществления стадия окисления представляет собой TEMPO-окисление (см., пример I-1, способ C, ниже). Другие условия окисления включают окисление Dess-Martin'a и окисление с помощью тетрапропиламмонийперрутената (TPAP).
Альдегиды 4 могут быть выделены, но, предпочтительно, указанные альдегиды переводят непосредственно в 5 без выделения. Снятие защитной группы сложного третбутилового эфира (в 5) сопровождается самопроизвольным замыканием кольца с образованием цикла, что дает смесь диастереомеров, которые разделяют колоночной хроматографией, получая энантиомерно чистые син-кетали 6 и анти-кетали (не представленные на этой схеме). Снятие защиты может быть выполнено в условиях действия протонной кислоты или кислоты Льюиса в апротонном растворителе. Подходящие растворители включают, но не в порядке ограничения, толуол, хлорбензол и DCM. Подходящие протонные кислоты включают, но не в порядке ограничения, TFA, п-TsOH. Подходящие кислоты Льюиса включают, но не в порядке ограничения, TiCl4, MgBr2 и ZnCl2. Для ясности схемы на следующих стадиях приведены только син-кетали, образующие соединения 7 и 1, но та же самая последовательность может быть использована для получения анти-кеталей. Соединения 6 подвергают гидрогенолизу и осуществляют взаимодействие полученных соединений 7 с Z-защищенными аминокислотами, используя известные из уровня техники условия получения амидных связей, что приводит к образованию соединений 9. Соединения 7 могут быть синтезированы и использованы in situ. В случае выделения предпочтительно использовать соединения 7 достаточно быстро после получения. Наконец, соединения 9 подвергают гидрогенолизу, получая соединения 1, которые могут быть использованы непосредственно для получения соединений I, как приведено на схеме II.
Альтернативно, соединения 7 могут быть использованы для получения соединений I, как представлено на схеме II. При таком получении аминокислотный остаток и требуемую N-концевую группу получают на одной стадии (см., схему II, взаимодействие (b)).
Как упомянуто применительно к схеме I, производные аспарагиновой кислоты, отличные от соединений 2, могут быть использованы для получения соединений по данному изобретению.
Схема IV. Получение соединений формул III и IV
Реагент и условия: (a) ROH/HOBt/DMAP/EDC/ТГФ или RCl/Et3N/DCM; (b) RNHCH(R2)COOH, HOBt, DMAP, EDC, ТГФ; (c) 2M HCl, MeCN.
Схема IV представляет получение соединений формул III и IV, где кольцо А означает 2-азабицикло[2.2.1]гептан-3-карбоновую кислоту. Здесь циклическая форма ацеталя соединения по данному изобретению представлена формулой III и альдегидная форма представлена формулой IV. Схема IV показывает способы, применяемые для получения соединений формул III и IV. Соединения III могут быть получены из соединений 11 путем конденсации аминогруппы в 11, в условиях, обеспечивающих требуемую R группу, таких как соответственно функционализированная карбоновая кислота (или производное), сульфоновая кислота (или производное), хлорформиат или карбамоилхлорид (или изоцианат), например, при соответствующем условии взаимодействия. Для этой стадии указаны стандартные связующие реагенты, используемые для получения CO-NH связей; другие известные из уровня техники условия образования CO-NH (или алкил-N, или SO2-N) связей также могут быть использованы для получения требуемого соединения, содержащего R-N. Альтернативно, соединения I могут быть получены из соединений 17 путем конденсации аминогруппы в 17 с соответственно функционализированной карбоновой кислотой (или производным), сульфоновой кислотой (или производным), хлорформиатом или карбамоилхлоридом (или изоцианатом). Для этой стадии указаны стандартные связующие реагенты, используемые для получения CO-NH связей; другие известные из уровня техники условия образования CO-NH связей также могут быть использованы.
Схема V. Получение соединения 11
Реагент и условия: (a) EDC, HOBt, DMAP, DIPEA, ТГФ; (b) Swern; (c) R1OH, 3Å сита, DCM, TsOH; (d) TFA, DCM; (e) H2, Pd(OH)2, EtOAC, ДМФА, Et3N; (f) EDC, HOBt, Et3N, EtOAc, ДМФА; (g) H2, Pd/C, citrate Acid.
Схема V представляет возможный способ получения соединений 17 и соединений 11, приведенных на схеме III. Осуществляют связывание соединения 2, легко получаемого восстановлением α-карбоксильной группы аспарагиновой кислоты, с N-защищенной 2-азабицикло[2.2.1]гептан-3-карбоновой кислотой 10 (полученной согласно Tetrahedron: Asymmetry, 13, 2002, 25-28), что приводит к образованию 13. Соединение 13 затем окисляют до альдегида 14, который ацеталируют in situ, получая ацетали 15. Снятие защитной группы сложного третбутилового эфира сопровождается самопроизвольным замыканием кольца с образованием цикла, что дает смесь диастереомеров, которые разделяют колоночной хроматографией, получая энантиомерночистые син-кетали 16 и анти-кетали (не представленные на этой схеме). Альтернативные группы A колец либо являются коммерчески доступными, описанными в литературе, либо могут быть получены известными из литературы способами.
Для ясности схемы на следующих стадиях приведены только син-кетали, образующие соединения 17 и 11, но та же самая последовательность может быть использована для получения анти-кеталей. Соединения 16 подвергают гидрогенолизу и осуществляют взаимодействие полученных соединений 17 с Z-защищенными аминокислотами, используя известные из уровня техники условия получения амидных связей, что приводит к образованию соединений 19.
Альтернативно, соединения 17 могут быть использованы для получения соединений III, как представлено на схеме IV. Наконец, соединения 19 подвергают гидрогенолизу, получая соединения 11, которые могут быть использованы непосредственно для получения соединений III, как приведено на схеме IV.
R3COOH, используемые согласно схеме II, либо являются коммерчески доступными, описанными в литературе, либо могут быть получены известными из литературы способами. Для соединения II-30, 2-хлор-3-метоксибензойную кислоту получают, как описано в J. Org. Chem, 59, 1994, 2939-2944.
Для соединения II-32, 2-хлор-3-трифторметоксибензойную кислоту получают из 2-амино-3-трифторметоксибензойной кислоты (полученной, как описано в J. Org. Chem, 68, 2003, 4693-4699), используя замещение аминогруппы хлором по Sandmeyer, следуя методике, по существу, подобной методике, описанной в J. Org. Chem, 59, 1994, 2939-2944.
Таким образом, настоящее изобретение также касается способа получения соединения по данному изобретению.
В одном из вариантов осуществления представлен способ получения соединения формулы I:
где Y означает:
а другие переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов осуществления;
включающий взаимодействие соединения формулы 1:
где переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов осуществления; и соединения формулы RX, где X означает OH или соответствующее производное (т.е. уходящую группу), в условиях сочетания амина и кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного кислоты (когда X отличен от OH (т.е. означает уходящую группу; например, Cl), приводящее к получению соединения формулы I.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы I:
где Y означает:
а другие переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов осуществления;
включающий взаимодействие соединения формулы 7:
где переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов осуществления; и соединения формулы RNHCH(R2)C(O)X, где X означает OH или соответствующее производное, в условиях сочетания амина и кислоты (когда X означает OH) или соответствующего производного кислоты (когда X отличен от OH; например, X означает Cl), приводящее к получению соединения формулы I.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения представляет способ получения соединения формулы IV:
где переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов осуществления; включающий взаимодействие соединения формулы I:
где Y означает:
где каждый из R и R1 независимо принимает любые значения из указанных здесь вариантов осуществления, в условиях гидролиза, приводящее к образованию соединения формулы II. В некоторых вариантах осуществления R означает R3C(=O). В других вариантах осуществления, когда A означает пролин, R означает R3C(=О). Условия гидролиза для превращения I в II хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, Greene). Такие условия включают подходящий растворитель (например, ацетонитрил) и водную кислоту (например, 2M HCl).
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 6-A:
где PG2 означает подходящую азот-защитную группу и R1 принимает любые значения из указанных здесь вариантов осуществления, включающий взаимодействие соединения формулы 5-A:
в условиях, подходящих для замыканием кольца с образованием цикла, приводящее к образованию соединения формулы 6-A. Условия, подходящие для замыкания кольца с образованием цикла, включают кислоту и соответствующий растворитель; например, TFA в DCM.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 5-A:
включающий взаимодействие соединения формулы 4-A:
в присутствии R1-OH (или подходящего ацеталь-образующего реагента), протонной кислоты или кислоты Льюиса (например, TsOH) и подходящего растворителя, приводящее к образованию соединения формулы 5-A.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 4-A:
включающий взаимодействие соединения формулы 3-A:
в подходящих условиях окисления (например, окисление Swern'a: Mancuso A. J., Swern D. Synthesis, 1981, 165-185), приводящих к образованию соединения формулы 4-A. Предпочтительные условия окисления включают TEMPO-окисление (см. пример I-1, способ C, ниже).
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 3-A:
включающий:
взаимодействие соединения формулы 2:
с соединением формулы 20-A:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X отличен от OH), приводящее к образованию соединения формулы 3-A.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 6:
где PG2 означает подходящую азот-защитную группу и R1 принимает любые значения из указанных здесь вариантов осуществления, включающий взаимодействие соединения формулы 5:
в подходящих условиях циклизации, приводящее к образованию соединения формулы 6.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 5:
включающий взаимодействие соединения формулы 4:
в присутствии R1-OH (или подходящего ацеталь-образующего реагента), протонной кислоты или кислоты Льюиса (например, TsOH) и подходящего растворителя, приводящее к образованию соединения формулы 5. Предпочтительно, растворителем является CH2Cl2, толуол или хлорбензол.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 4:
включающий взаимодействие соединения формулы 3:
в подходящих условиях окисления (например, окисление Swern'a), приводящее к образованию соединения формулы 4. Предпочтительные условия окисления включают TEMPO-окисление (см. пример I-1, способ C, ниже).
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 3:
включающий:
взаимодействие соединения формулы 2:
с соединением формулы 20:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X отличен от OH), приводящее к образованию соединения формулы 3.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 16:
где PG2 означает подходящую азот-защитную группу и R1 принимает любые значения из указанных здесь вариантов осуществления, включающий взаимодействие соединения формулы 15:
в подходящих условиях циклизации, приводящее к образованию соединения формулы 16.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 15:
включающий взаимодействие соединения формулы 14:
в присутствии R1-OH (или подходящего ацеталь-образующего реагента), протонной кислоты или кислоты Льюиса (например, TsOH) и подходящего растворителя, приводящее к образованию соединения формулы 15.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 14:
включающий взаимодействие соединения формулы 13:
в подходящих условиях окисления (например, окисление Swern'a), приводящее к образованию соединения формулы 14.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 13:
Включающий взаимодействие соединения формулы 2 с соединением формулы 21:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X отличен от OH), приводящее к образованию соединения формулы 13.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 22:
включающий взаимодействие соединения формулы 23:
в присутствии R1-OH (или подходящего ацеталь-образующего реагента), протонной кислоты или кислоты Льюиса (например, TsOH) и подходящего растворителя, приводящее к образованию соединения формулы 22. Ацеталь-образующие эквиваленты включают, но не в порядке ограничения, триэтилортоформиат, диэтилацеталь, такой как (CH3)2C(OCH2CH3)2. Предпочтительно, растворителем является CH2Cl2, толуол или хлорбензол.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 2:
в подходящих условиях окисления (например, Swern'a), приводящих к образованию соединения формулы 23.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 5-A:
где PG1 означает подходящую карбокислотную защитную группу, PG2 означает подходящую азот-защитную группу и R1 принимает любое из вышеуказанных значений, включающий:
взаимодействие соединения формулы 20-A:
с соединением формулы 22:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X означает соответствующую уходящую группу), приводящее к образованию соединения формулы 5-A.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 5:
включающий взаимодействие соединения формулы 20:
с соединением формулы 22:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X отличен от OH), приводящее к образованию соединения формулы 5.
Другой вариант осуществления представляет способ получения соединения формулы 5-A:
включающий взаимодействие соединения формулы 21:
с соединением формулы 22:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда X означает OH) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда X отличен от OH), приводящее к образованию соединения формулы 5-A.
Согласно настоящему изобретению способы могут быть использованы по отдельности или в комбинации, что приводит к получению соединения по данному изобретению.
Некоторые специфические варианты осуществления настоящего изобретения касаются способов получения соединений 4 из 3 (в случаях когда соединения 4 выделяют); 5 из 3 (в случаях когда соединения 4 не выделяют, а продолжают использовать непосредственно, например получают in situ), 5 из 4 и 6 из 5 описанными здесь способами. В предпочтительном варианте осуществления соединения 6 получают из соединений 5; соединения 5 получают из соединений 4 (не зависимо от того, выделяют или нет) и соединения 4 получают из 3. Предпочтительно, соединения 6 используют для получения пролинсодержащих ингибиторов каспаз. Такие пролинсодержащие ингибиторы каспаз включают, но не в порядке ограничения, соответствующие ингибиторы, описанные в WO 95/35308, WO 99/47545, WO 01/81330 и WO 01/90063 (полностью включенных здесь посредством ссылок). Например, соединение IA (и соответствующие стереоизомеры) по WO 01/90063 (полностью включенному здесь посредством ссылки) может быть получено, как описано здесь (см., например, страницу 13). Во избежание недоразумений следует отметить, что такие соединения могут быть представлены формулой I за тем исключением, что кольцо А представляет собой пирролидин 
(т.е. является производным пролина).
Описанные здесь способы являются предпочтительными для превращения соединений 6 в пролинсодержащие ингибиторы каспаз. Предпочтительным является также описанный здесь способ получения соединений 3. Однако и другие способы, известные квалифицированным специалистам, также могут быть использованы для превращения соединений 6 в пролин-содержащие ингибиторы каспаз и/или для получения соединений 3.
Другие варианты осуществления данного изобретения касаются соединений формул 3-6, 3-A - 6-A и 13-16.
Один из вариантов осуществления данного изобретения касается соединений формулы 4A:
Другой вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 4:
Еще один вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 14:
Один из вариантов осуществления данного изобретения касается соединений формулы 5-A:
Еще один вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 5:
Другой вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 15:
Один из вариантов осуществления данного изобретения касается соединений формулы 3-A:
Еще один вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 3:
Другой вариант осуществления данного изобретения касается соединений формулы 13:
Во всех вышеуказанных вариантах осуществления переменные принимают любые значения из указанных здесь вариантов. В предпочтительной форме 3 PG2 означает Z и PG1 означает C1-6- линейную или разветвленную алкильную группу (предпочтительно, третбутильную группу) либо отдельную, либо комбинацию.
Для квалифицированных специалистов очевидно, что некоторые стадии способа могут быть выполнены либо в виде отдельных стадий, либо in situ. Например, снятие защиты и последующее взаимодействие амина могут быть осуществлены постадийно (с выделением амина) или одностадийным способом (без выделения амина).
В некоторых вариантах осуществления вышеуказанные способы реализуют, как указано здесь (например, в схемах, примерах и прилагаемом описании).
Соединения, такие как 3, могут быть использованы в способах получения пролинсодержащих соединений, таких как ингибиторы каспаз. Пролинсодержащие ингибиторы каспаз включают, но не в порядке ограничения, ингибиторы, описанные в WO 95/35308, WO 99/47545, WO 01/81330 и WO 01/90063 (которые все включены здесь посредством ссылок). Например, соединение IA (и соответствующие стереоизомеры), указанные в WO 01/90063 (полностью включенном здесь посредством ссылки), могут быть получены, как описано здесь (см., например, страницу 13 публикации PCT).
Соединения, используемые в композициях и способах по настоящему изобретению, могут также быть модифицированы путем добавления соответствующих функциональных групп для усиления селективных биологических свойств. Такие модификаторы известны из уровня техники и включают модификаторы, повышающие биологическую способность проникновения в заданную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышающие биодоступность при пероральном ведении препарата, повышающие растворимость, что обеспечивает возможность введения посредством инъекции, изменяющие метаболизм и скорость экскреции.
Например, карбокислотная группа в соединении по изобретению может быть преобразована, например, в сложноэфирную группу. Предпочтительными сложными эфирами являются эфиры, в состав которых входит:
C1-6- линейный или разветвленный алкил, алкенил или алкинил, где алкил, алкенил или алкинил необязательно замещен C6-10-арилом, CF3, Cl, F, OMe, OEt, OCF3, CN или NMe2;
C1-6-циклоалкил, где 1-2 атома углерода в циклоалкиле необязательно замещены -О- или -NR9-.
Соединения по изобретению, содержащие карбонильную группу, могут быть подобным образом представлены в виде производных, таких как, например, ацеталь, кеталь, оксим (=NOR9), гидразин (=NN(R9)2), тиоацеталь или тиокеталь.
Соответствующие производные аминов известны из уровня техники и также входят в объем настоящего изобретения.
Некоторые из вышеуказанных производных могут включать защитные группы, известные квалифицированным специалистам (см., например, Greene). Как очевидно для специалиста в данной области, эти защитные группы могут также быть использованы в способах по настоящему изобретению.
Соединения по данному изобретению могут быть исследованы на способность подавлять апоптоз, высвобождение IL-1β или непосредственно активность каспаз. Испытания на каждый вариант активности известны из уровня техники. Однако, как очевидно для специалиста в данной области, соединение-пролекарство по настоящему изобретению должно быть активным только в испытаниях, где образующая пролекарство группа должна отщепляться, как правило, в испытаниях in vivo.
Испытания на активность в отношении каспаз описаны в WO 99/47545.
Согласно другому варианту осуществления рассматриваемое изобретение касается фармацевтической композиции, содержащей:
a) соединение по изобретению, как указано здесь, или фармацевтически приемлемую соль такого соединения и
b) фармацевтически приемлемые носитель, вспомогательное вещество или растворитель.
Подразумевается, что соединения и фармацевтически приемлемые соли указанных соединений входят в объем настоящего изобретения. Если в этих композициях используют фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению, такие соли, предпочтительно, являются производными неорганических или органических кислот и оснований. К числу таких кислотных солей относятся следующие: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфоросульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Основные соли включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли с органическими основаниями, такие как соли дициклогексиламина, соли N-метил-D-глюкамина, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и так далее.
Также основные азотсодержащие группы могут быть кватернизированы такими агентами, как низшие алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, бромиды и иодиды; диалкил сульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты, длинноцепочечные галогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, бромиды и иодиды, аралкилгалогениды, такие как бензил- и фенетилбромиды и другие. Таким образом, получают водо- или маслорастворимые или диспергируемы продукты.
Фармацевтически приемлемые носители, которые могут быть использованы в этих композициях, включают, но не в порядке ограничения, ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, динатрийгидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, блочные полимеры полиэтилен-полиоксипропилен, полиэтиленгликоль и шерстяной жир.
Согласно предпочтительному варианту осуществления композиции по настоящему изобретению формулируют для фармацевтического введения млекопитающему, которым, предпочтительно, является человек.
Такие фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены перорально, парентерально, посредством аэрозоля для ингаляции, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или через посредство имплантированного резервуара. Термин "парентеральный", как использовано здесь, включает подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрисуставный, интрасиновиальный, интрастернальный, подоболочечный, внутрипеченочный, внутрь пораженных тканей и внутричерепной способы инъекции или вливания. Предпочтительно, композиции вводят перорально или внутривенно.
Стерильные формы для инъекций композиций по настоящему изобретению могут представлять собой водную или масляную суспензию. Эти суспензии могут быть формулированы согласно известным из уровня техники способам с применением подходящих диспергирующих или увлажняющих средств и суспендирующих средств. Стерильный препарат для инъекции может также быть в виде предназначенного для инъекции стерильного раствора или суспензии в нетоксическом парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например в виде раствора в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых сред для лекарств и растворителей, пригодных для употребления, относятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, нелетучие масла обычно используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью может быть использовано любое безвкусное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, и соответствующие глицеридные производные полезны для получения препаратов для инъекций, как, например, фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в особенности в полиоксиэтилированных формах. Такие масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергирующее вещество, такое как карбоксиметилцеллюлоза или подобные диспергирующие вещества, обычно используемые в формулировании фармацевтически приемлемых лекарственных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие общеупотребимые поверхностно-активные вещества, такие как твины, спаны и другие эмульгирующие вещества или усилители биодоступности, обычно применяемы при промышленном получении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или иных дозированных форм, также могут быть использованы в целях формулирования.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены перорально в любой приемлемой для перорального применения дозированной форме, включая, но не в порядке ограничения, капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток для перорального применения обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют лубриканты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсул полезные разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. Когда для перорального применения требуются водные суспензии, активный ингредиент комбинируют с эмульгирующими и суспендирующими веществами. По желанию, могут также быть добавлены некоторые подсластители, корригенты или красители.
Альтернативно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены в форме суппозиториев для ректального введения. Указанные суппозитории могут быть получены смешиванием агента с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и поэтому плавится в прямой кишке, высвобождая лекарственное средство. Такие вещества включают масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также быть введены местно, в особенности, когда объект обработки включает поверхности или органы, легко доступные для местного применения, включая болезни глаз, кожи или нижней области кишечника. Подходящие композиции для местного применения легко могут быть получены для каждого из этих участков или органов.
Местное применение для нижней области кишечника может быть осуществлено путем формулирования ректальных суппозиториев (см. выше) или разработкой композиций для клизм. Могут быть также использованы трансдермальные пластыри местного применения.
Для местного применения фармацевтические композиции могут быть формулированы в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или более носителях. Носители для местного применения соединений по настоящему изобретению включают, но не в порядке ограничения, минеральное масло, вазелиновое масло, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции могут быть формулированы в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают, но не в порядке ограничения, минеральное масло, сорбитанмоностеарат, полисорбат 60, воск на основе сложного цетилового эфира, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.
Для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть формулированы в виде микронизированных суспензий в изотоническом, стерильном растворе соли с отрегулированным показателем pH или, предпочтительно, в виде растворов в изотоническом, стерильном растворе соли с отрегулированным показателем pH, содержащих либо не содержащих консервант, такой как бензилальконийхлорид. Альтернативно, для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть формулированы в виде мази, такой как петролатум. По одному из вариантов осуществления композиции формулируют согласно, например, патенту US 6645994 и/или патенту US 6630473.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть также введены посредством аэрозоля для носа или ингаляцией. Такие композиции получают хорошо известными из уровня техники способами фармацевтического формулирования, и указанные композиции могут быть получены в виде растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, усилителей всасывания для повышения биодоступности, фторуглеродов и/или иных общепринятых солюбилизирующих или диспергирующих агентов.
Вышеуказанные соединения и композиции в особенности полезны для терапевтического применения в случае такого заболевания, как опосредованное IL-1 заболевание, опосредованное апоптозом заболевание, воспалительное заболевание, аутоиммунная болезнь, деструктивное нарушение кости, пролиферативное нарушение, инфекционное заболевание (например, бактериальные инфекции, преимущественно, глазные инфекции), дегенеративное заболевание, болезнь, вызванная некрозом клеток, болезнь, вызванная избыточным потреблением алкоголя, опосредованное вирусом заболевание, нарушения сетчатки глаз, увеит, воспалительный перитонит, остеоартрит, панкреатит, астма, синдром расстройства дыхания у взрослых, гломерулонефрит, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия, хронический тиреоидит, диффузный токсический зоб, аутоиммунный гастрит, диабет, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунная нейтропения, тромбоцитопения, хронический активный гепатит, злокачественная миастения, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, псориаз, атопический дерматит, рубцевание, реакция трансплантат против хозяина, отторжение трансплантата органа, апоптоз органа после ожогового поражения, остеопороз, лейкоз и родственные заболевания, миелодиспластический синдром, вызванное множественной миеломой повреждение кости, острый миелобластный лейкоз, хронический миелолейкоз, метастатическая меланома, саркома Капоши, множественная миелома, геморрагический шок, сепсис, септический шок, ожог, шигеллез, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона, болезнь Кеннеди, заболевания, вызываемые прионами, ишемия головного мозга, эпилепсия, ишемия миокарда, острое и хроническое заболевание сердца, инфаркт миокарда, застойная сердечная недостаточность, атеросклероз, аортокоронарное шунтирование, спинальная мышечная атрофия, боковой амиотрофический склероз, множественный склероз, вызванный ВИЧ энцефалит, старение, алопеция, неврологическое повреждение, вызванное ударом, неспецифический язвенный колит, травматическое повреждение мозга, повреждение спинного мозга, гепатит-B, гепатит-C, гепатит-G, желтая лихорадка, лихорадка денге, японский энцефалит, разнообразные формы болезни печени, болезнь почек, поликистозная почечная болезнь, связанная с H. pylori язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, ВИЧ-инфекция, туберкулез, менингит, токсический эпидермальный некролиз, пузырчатка и аутовоспалительные заболевания (иногда называемые аутовоспалительные лихорадочные синдромы) и родственные синдромы, такие как синдром Muckle-Wells'a (MWS), семейная холодовая крапивница (FCU), семейная средиземноморская лихорадка (FMF), хронический младенческий неврологический кожный и суставной синдром (CINCAS), иначе называемый мультиситемным воспалительным заболеванием новорожденных (NOMID), TNFR1-ассоциированный периодический синдром (TRAPS) и синдром гипер-IgD перемежающейся лихорадки (HIDS). Соединения и композиции также полезны для лечения осложнений, связанных с аортокоронарным шунтированием. Кроме того, соединения и композиции полезны для снижения продуцирования IGIF (известного также как IL-18) или IFN-γ. Соединения и композиции полезны также в иммунотерапии для лечения раковых опухолей.
Соединения и композиции могут также быть использованы в способах консервирования клеток. Эти способы полезны для сохранения органов, в особенности предназначенных для трансплантации, или продуктов крови.
Соединения по настоящему изобретению полезны в качестве двойных ингибиторов, каспазы-1 и каспазы-8. Не вдаваясь в теорию, по-видимому, R2 и R3 группы соединений по настоящему изобретению имеют отношение к этой неожиданной активности. Мостиковые группы A соединений по настоящему изобретению, такие как 
или 
, также, по-видимому, имеют отношение к этой неожиданной активности. Как таковые соединения и композиции по настоящему изобретению в особенности полезны для лечения или профилактики воспаления.
Согласно другому варианту осуществления композиции по настоящему изобретению могут дополнительно включать другое терапевтическое средство (а именно, одно или более дополнительных средств). Такие средства включают, но не в порядке ограничения, тромболитические средства, такие как тканевой активатор плазминогена и стрептокиназа. Когда используют дополнительный агент, дополнительный агент может быть введен как в виде отдельной дозированной формы, так и в виде составной части одной дозированной формы, содержащей соединения или композиции по настоящему изобретению.
Количество соединения, присутствующего в композициях по настоящему изобретению, должно быть достаточным, чтобы вызывать поддающееся обнаружению ослабление тяжести заболевания или снижение активности каспаз и/или апоптоза клеток, оцениваемых любым известным из уровня техники методом анализа.
В монотерапии полезны уровни доз соединения активного ингредиента в пределах приблизительно от 0,01 до 50 или приблизительно 100 мг/кг массы тела в день, предпочтительно, от 0,5 до приблизительно 75 мг/кг массы тела в день и, наиболее предпочтительно, приблизительно от 1 до 25 или 50 мг/кг массы тела в день.
Как правило, соединение или композицию по данному изобретению вводят приблизительно от 1 до 5 раз в день или, альтернативно, в виде непрерывного вливания. Такое введение можно применять в качестве постоянной или острой терапии. Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с материалами носителя для получения единичной дозированной формы, изменяется в зависимости от подвергаемого лечению хозяина и конкретного способа введения. Типичный препарат содержит приблизительно от 5% до 95% активного соединения (м/м). Предпочтительно, такие препараты содержат приблизительно от 20% до 80% активного соединения.
Когда композиции по данному изобретению включают комбинацию соединения по данному изобретению и одного или более дополнительных терапевтических или профилактических средств, как соединение, так и дополнительное средство должны присутствовать на уровне доз в пределах приблизительно от 10% до 100% и, более предпочтительно, от 10% до 80% от дозы, обычно вводимой в режиме монотерапии.
При улучшении состояния пациента может быть введена, по необходимости, поддерживающая доза соединения, композиции или комбинации по данному изобретению. Впоследствии дозировка или частота введения, либо то и другое, могут быть снижены в зависимости от симптомов до уровня, при котором поддерживается улучшенное состояние, когда симптомы ослабляются до требуемого уровня, лечение следует прекратить. Пациентам, однако, может потребоваться длительное периодическое лечение в случае возврата симптомов болезни.
Квалифицированному специалисту понятно, что могут потребоваться более низкие или более высокие дозы, чем указаны выше. Следует понимать, что конкретная доза и схемы лечения для конкретного пациента зависят от ряда факторов, включающих активность конкретного используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, скорость экскреции, лекарственную комбинацию, тяжесть и протекание конкретного заболевания, предрасположенность пациента к излечиваемому заболеванию и оценку лечащего врача. Количество активных ингредиентов зависит от конкретного соединения и другого терапевтического средства, если присутствует, в композиции.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение касается способа лечения пациента, преимущественно, человека, имеющего одно из вышеперечисленных заболеваний, включающего стадию введения указанному пациенту соединения или фармацевтически приемлемой композиции, указанных выше. В этом варианте осуществления, если пациенту также вводят другое терапевтическое средство или ингибитор каспаз, доставка такого средства возможна вместе с соединением по данному изобретению в одной дозированной форме или в виде отдельной дозированной формы. При введении в виде отдельной дозированной формы другой ингибитор каспаз или агент может быть введен заранее, в то же самое время или после введения фармацевтически приемлемой композиции, содержащей соединение по данному изобретению.
Соединения по данному изобретению могут также быть введены в композиции для покрытия имплантируемых медицинских устройств, таких как протезы, искусственные клапаны, сосудистые трансплантаты, стенты и катетеры. Таким образом, настоящее изобретение в другом аспекте включает композицию для покрытия имплантируемого устройства, содержащую соединение по настоящему изобретению и носитель, подходящий для покрытия указанного имплантируемого устройства. Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение включает имплантируемое медицинское устройство, покрытое композицией, содержащей соединение по настоящему изобретению и носитель, подходящий для покрытия указанного имплантируемого устройства.
Другой аспект изобретения касается подавления активности каспаз в биологическом образце, где указанный способ включает контактирование указанного биологического образца с соединением по данному изобретению или композицией, содержащей указанное соединение. Термин "биологический образец", как использован здесь, в том числе включает культуры клеток или соответствующие экстракты; материал для биопсии, взятый у млекопитающего, или экстракты соответствующего материала и кровь, слюну, мочу, кал, сперму, слезы или другие жидкости организма или соответствующие экстракты.
Ингибирование активности каспаз в биологическом образце полезно в разнообразных целях, известных специалисту в данной области. Примеры таких целей включают, но не в порядке ограничения, переливание крови, трансплантацию органов, депонирование биологических образцов и биологические анализы.
Соединения по данному изобретению полезны в способах консервирования клеток, которые могут быть необходимы для трансплантации органов или консервирования продуктов крови. Подобные применения ингибиторов каспаз описаны в [Schierle et al. Nature Medicine, 5, 97 (1999)]. Способ включает обработку клеток или ткани, предназначенных для консервирования, раствором, содержащим ингибитор каспаз. Необходимое количество ингибитора каспаз зависит от эффективности ингибитора в отношении данного типа клеток и промежутка времени, на который необходимо предохранить клетки от апоптического некроза клеток.
Не вдаваясь в теорию, соединения на основе циклического ацеталя по изобретению рассматриваются как пролекарства. То есть ацетальная группа отщепляется in vivo, давая соответствующее кислотно-альдегидное соединение. Как очевидно для квалифицированного специалиста, химические соединения могут подвергаться превращениям в процессе обмена in vivo, например, по участку, отличному от участка расщепления пролекарства. Любые такие метаболиты входят в объем настоящего изобретения.
Следующие препаративные примеры и примеры испытаний приведены в целях более полного понимания данного изобретения. Эти примеры представлены исключительно с целью иллюстрации и никоим образом не могут рассматриваться в качестве ограничивающих объем настоящего изобретения.
Пример I-1
[(2R)-этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Способ A
Третбутиловый эфир (S)-3-амино-4-гидроксимасляной кислоты
Раствор третбутилового эфира (S)-бензилоксикарбониламино-4-гидроксимасляной кислоты (полученного, как описано в Michel et al. Helvetica Chimica Acta, 1999, 1960) (0,94 г) в этилацетате (15 мл) гидрируют над гидроксид палладия/уголь (20% м/м, 160 мг). Катализатор удаляют фильтрованием через целит. Концентрация фильтрата в вакууме дает указанное в подзаголовке соединение в виде бесцветного масла (486 мг, 91%); 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,48 (9H, с), 1,95 (3H, ушир.с), 2,28 (1H, дд), 2,46 (1H, дд), 3,29 (1H, ушир.м), 3,42 (1H, м), 3,60 (1H, м).
Способ B
Бензиловый эфир (1S)-2-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-гидроксиметилэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты
К перемешиваемому раствору третбутилового эфира (S)-3-амино-4-гидроксимасляной кислоты (800 мг, 4,57 ммоль) и Z-Pro-OH (1,14 г, 4,57 ммоль) в ТГФ (30 мл) добавляют 2-гидроксибензотриазолгидрат (741 мг, 1,2 экв.), DMAP (698 мг, 1,25 экв.), диизопропилэтиламин (1,03 мл, 1,3 экв.) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 1,05 г, 1,2 экв.). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды 18 часов, после чего разбавляют этилацетатом. Затем смесь промывают водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают флэш-хроматографией (смесь 60% этилацетат/петролейный эфир), получая указанное в подзаголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (1,483 г, 90%); МС ES (+) 407,3.
Способ C
Бензиловый эфир (1S)-2-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-формилэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты
Раствор бензилового эфира (1S)-2-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-гидроксиметилэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (10 г) в DCM (100 мл) охлаждают до 0°C в атмосфере азота. Затем добавляют 2,2,6,6-тетраметилпиперидинилокси (TEMPO, 38 мг) добавлением трихлоризоциануровой кислоты (6 г), порциями, за 30 минут. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды 2 часа, затем фильтруют через целит. Фильтрат промывают водой, 1 M раствором тиосульфата натрия и водой. Сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении, получая указанное в подзаголовке соединение в виде светло-желтого масла (9,92 г, 99%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,38 (9H, д), 1,79-1,86 (3H, м), 2,08-2,23 (1H, м), 2,36-2,51 (1H, 2 × дд), 2,61-2,86 (1H, 2 × дд), 3,88-3,46 (2H, м), 4,24-4,30 (2H, м), 5,05 (2H, квин.), 7,28-7,37 (5H, м), 8,59-8,64 (1H, 2 × д), 9,21 (0,57H, с), 9,37 (0,43H, с).
Способ D
Бензиловый эфир (1S)-2-((S)-1-третбутоксикарбонилметил-2,2-диэтоксиэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты
К раствору бензилового эфира (1S)-2-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-формилэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (4,98 г) в дихлорметане (70 мл) добавляют триэтилортоформиат (6,2 мл) и моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (47 мг). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды до отсутствия остаточного альдегида по ТСХ. Смесь концентрируют в вакууме, вновь растворяют в дихлорметане (35 мл). Затем добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (35 мл) и удаляют органическую фазу. Промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Получают указанное в подзаголовке соединение в виде светло-желтого масла (4,85 г, 82%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,04-1,11 (6H, м), 1,35-1,37 (9H, м), 1,73-1,89 (3H, м), 2,01-2,49 (3H, м), 3,43-3,52 (6H, м), 4,05-4,29 (3H, м), 4,96-5,06 (2H, м), 7,27-7,38 (5H, м), 7,80 (0,5H, д), 7,88 (0,5H, д).
Способ E
Бензиловый эфир (1S)-2-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.1
Бензиловый эфир (1S)-2-((2S,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.2
Раствор бензилового эфира (1S)-2-((S)-1-третбутоксикарбонилметил-2,2-диэтоксиэтилкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты (4,85 г) в дихлорметане (25 мл) охлаждают до 0°C в атмосфере азота. Затем добавляют трифторуксусную кислоту (6 мл) и смесь перемешивают при 0°C 15 минут, после чего нагревают до температуры окружающей среды и перемешивание продолжают до завершения взаимодействия по ТСХ. Затем смесь разбавляют дихлорметаном (90 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (130 мл) и перемешивают 15 минут. После чего органическую фазу удаляют и промывают смесью 1:1 насыщенный водный бикарбонат натрия/насыщенный раствор соли (100 мл), объединенные промывные воды повторно экстрагируют DCM (100 мл) и объединенные органические слои сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Это дает указанное в подзаголовке соединение в виде смеси эпимеров по кеталевому центру (C2). Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью 30% ацетон/петролейный эфир. Син-изомер 6.1 (белое твердое вещество); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,08-1,17 (3H, м), 1,78-2,01 (3H, м), 2,08-2,12 (1H, м), 2,37-2,57 (1H, 2 × дд), 2,61-2,79 (1H, 2 × дд), 3,35-3,51 (2H, м), 3,55-3,68 (1H, м), 3,71-3,82 (1H, д), 4,20-4,32 (1H, м), 4,52-4,61 (1H, м), 4,98-5,11 (2H, м), 5,53-5,58 (1H, м), 7,24-7,42 (5H, м), 8,25-8,31 (1H, м); МС ES + 377,3 (100%), ES - 375,3 (10%); Анти-изомер 6.2 (бесцветное масло); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,08-1,19 (3H, м), 1,78-1,89 (3H, м), 2,10-2,34 (1H, м), 2,92-3,07 (1H, 2 × дд), 3,36-3,51 (3H, м), 3,62-3,78 (2H, м), 4,12-4,21 (2H, м), 4,97-5,12 (3H, м), 7,28-7,40 (5H, м), 8,51-8,58 (1H, м); МС ES + 377,4 (100%), ES - 375,3 (10%).
Бензиловый эфир (1S)-2-((2R,3S)-2-Метокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.3
Бензиловый эфир (1S)-2-((2S,3S)-2-метокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.4
Получают способом, аналогичным описанному в способах A-E, используя триметилортоформиат на стадии D, что дает указанные в подзаголовке соединения в виде смеси эпимеров 6.3 и 6.4. Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью от 30%-40% 2-бутанон/петролейный эфир до 70% ацетон/петролейный эфир. Син-изомер 6.3 (вязкое бесцветное масло); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,77-1,89 (3H, м), 2,07-2,12 (1H, м), 2,32-2,43 (1H, 2 × д), 2,55-2,61 (1H, 2 × д), 2,71-2,81 (1H, 2 × д), 3,39-3,62 (4H, м), 4,21-4,30 (1H, м), 4,57-4,64 (1H, м), 5,01-5,09 (2H, м), 5,42-5,47 (1H, м), 7,27-7,42 (5H, м), 8,24-8,31 (1H, м); Анти-изомер 6.4 (белое твердое вещество); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,79-1,90 (3H, м), 2,09-2,21 (1H, м), 2,23-41 (1H, 2 × д), 2,91-3,05 (1H, 2 × дд), 3,35-3,71 (5H, м), 4,09-4,21 (2H, м), 4,98-5,19 (3H, м), 7,28-7,41 (5H, м), 8,51-8,58 (1H, м).
Бензиловый эфир (1S)-2-((2R,3S)-2-изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.5
Бензиловый эфир (1S)-2-((2S,3S)-2-изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.6
Получают способом, аналогичным описанному в способах A-E, используя триизопропилортоформиат на стадии D, что дает указанное в подзаголовке соединение в виде смеси эпимеров 6.5 и 6.6. Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью 30%-40% 2-бутанон/петролейный эфир. Син-изомер 6.5 (бесцветная смола); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,07-1,16 (6H, м), 1,81-1,86 (2H, м), 2,37-2,71 (2H, м), 3,35-3,53 (2H, м), 3,86-3,90 (1H, м), 4,18-4,24 (1H, м), 4,46-4,55 (1H, м), 4,95-5,10 (2H, м), 5,63 (1H, д), 7,27-7,38 (5H, м), 8,22-8,30 (1H, м); МС ES + 391,3 (100%); Анти-изомер 6.6 (белое твердое вещество); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,07-1,15 (6H, м), 1,78-1,82 (3H, м), 2,07-2,41 (2H, м), 2,87-3,01 (1H, м), 3,35-3,50 (2H, м), 3,74-3,96 (1H, м), 4,07-4,18 (2H, м), 4,95-5,11 (2H, м), 5,22 (1H, 2 × с), 7,24-7,39 (5H, м), 8,48-8,53 (1H, м); МС ES + 391,4 (100%).
Бензиловый эфир (1S)-2-((2R,3S)-2-пропокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.7
Бензиловый эфир (1S)-2-((2S,3S)-2-пропокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.8
Получают способом, аналогичным описанному в способах A-E, используя трипропилортоформиат на стадии D, что дает указанное в подзаголовке соединение в виде смеси эпимеров 6.7 и 6.8. Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью 30%-40% 2-бутанон/петролейный эфир. Син-изомер 6.7 (бесцветная смола); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,84-0,93 (3H, м), 1,55 (2H, м), 1,81-1,89 (3H, м), 2,08-2,22 (1H, м), 2,37-2,61 (1H, 2 × дд), 2,71-2,80 (1H, 2 × дд), 3,31-3,53 (2H, м), 3,60-3,69 (1H, м), 4,20-4,29 (1H, м), 4,52-4,61 (1H, м), 4,95-5,11 (2H, м), 5,50 (1H, м), 7,27-7,36 (5Н, м), 8,27 (1Н, м); Анти-изомер 6.8 (бесцветное масло); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,82-0,90 (3H, м), 1,46-1,57 (2H, м), 1,77-1,89 (3H, м), 2,06-2,41 (1H, м), 2,90-3,05 (1H, 2 × дд), 3,33-3,66 (5H, м), 4,11-4,20 (2H, м), 4,94-5,10 (3H, м), 7,28-7,37 (5H, м), 8,51 (1H, м).
Бензиловый эфир (1S)-2-((2R,3S)-2-бутокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.9
Бензиловый эфир (1S)-2-((2S,3S)-2-бутокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.10
Получают способом, аналогичным описанному в способах A-E, используя трибутилортоформиат на стадии D, что дает указанное в подзаголовке соединение в виде смеси эпимеров 6.9 и 6.10. Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью 30%-40% 2-бутанон/петролейный эфир. Син-изомер 6.9 (бесцветная смола); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,86-0,92 (3H, м), 1,28-1,37 (2H, м), 1,45-1,54 (2H, м), 1,79-1,88 (3H, м), 2,07-2,21 (1H, м), 2,35-2,78 (2H, м), 3,31-3,54 (2H, м), 3,63-3,70 (1H, м), 4,21-4,29 (1H, м), 4,51-4,61 (1H, м), 4,95-5,09 (2H, м), 5,50 (1H, м), 7,27-7,37 (5H, м), 8,25 (1H, м); Анти-изомер 6.10 (бесцветное масло); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,85-0,93 (3H, м), 1,26-1,36 (2H, м), 1,44-1,56 (2H, м), 1,77-1,90 (3H, м), 2,08-2,40 (1H, м), 2,89-3,05 (1H, 2 × дд), 3,34-3,70 (5H, м), 4,08-4,19 (2H, м), 4,95-5,10 (3H, м), 7,28-7,39 (5H, м), 8,53 (1H, м).
Способ F
Бензиловый эфир {(S)-1-[(1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-пирролидин-2-карбонил]-2,2-диметилпропил}-карбаминовой кислоты
К раствору бензилового эфира (1S)-2-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-пирролидин-1-карбоновой кислоты 6.1 (4,68 г) в этилацетате (160 мл) и ДМФА (25 мл) добавляют триэтиламин (2,5 г) с последующим добавлением гидроксид палладия/уголь (20% м/м, 1 г). Смесь перемешивают в атмосфере водорода до отсутствия исходного вещества по ТСХ. Катализатор удаляют фильтрованием через целит. К фильтрату добавляют (S)-2-бензилоксикарбониламино-3,3-диметилмасляную кислоту (4,93 г), гидроксибензотриазолгидрат (2,01 г) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 2,85 г). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Затем добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (180 мл) и органическую фазу удаляют. Промывают насыщенным водным хлоридом аммония (180 мл), затем насыщенным раствором соли (180 мл), сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Сырой продукт очищают на силикагеле, элюируя смесью 40-75% этил ацетат/петролейный эфир. Указанное в подзаголовке соединение получают в виде белого пенистого вещества (4,02 г, 66%); 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,97 (9H, с), 1,14 (3H, т), 1,79-1,94 (3H, м), 2,02-2,10 (1H, м), 2,44 (1H, дд), 2,75 (1H, дд), 3,52-3,66 (2H, м), 3,70-3,79 (2H, м), 4,22 (1H, д), 4,38-4,41 (1H, м), 4,48-4,58 (1H, м), 5,03 (2H, кв.), 5,56 (1Н, д), 7,26 (1H, д), 7,29-7,40 (5H, м), 8,24 (1H, д); МС ES + 490,6 (100%), ES - 488,8 (10%).
Способ G
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
К раствору бензилового эфира {(S)-1-[(1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-пирролидин-2-карбонил]-2,2-диметилпропил}карбаминовой кислоты (344 мг) в этилацетате (20 мл) добавляют гидроксид палладия/уголь (20% м/м, 74 мг). Смесь перемешивают в атмосфере водорода до отсутствия исходного вещества по ТСХ. Катализатор удаляют фильтрованием через целит и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, получая амин в виде коричневого пенистого вещества (260 мг). Часть указанного вещества (153 мг) растворяют в ТГФ и добавляют 3-метокси-2-метилбензойную кислоту (146 мг), диизопропиламин (191 мкл), гидроксибензотриазолгидрат (77 мг) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 109 мг). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды 24 часа, затем разбавляют насыщенным водным бикарбонатом натрия. Органическую фазу удаляют и промывают насыщенным водным хлоридом аммония, затем насыщенным раствором соли, сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Сырой продукт очищают на силикагеле, элюируя этилацетатом. Это дает указанное в подзаголовке соединение в виде белого твердого вещества (138 мг, 62%); аналитические данные сведены в таблицу 3.
Соединения формул I-2 - I-58 получены способами, по существу, аналогичными способам, описанным в примере I-1.
Пример I-2
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-3
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[3-метил-(2S)-(2-трифторметоксибензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-4
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-гидрокси-2-метилбензоиламино)-3-метил-бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-5
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1- [(2S)-(3-амино-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-6
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2,6-дихлорбензоиламино)-3-метил-бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-7
(S,S,S,R)-N-{(1S)-[(2S)-((2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил]-2-метилпропил}-2-метилникотинамид
Пример I-8
(S,S,S,R)-N-{(1S)-[(2S)-((2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил]-2-метилпропил}-4-метилникотинамид
Пример I-9
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-{3-метил-(2S)-[(3-метилтиофен-2-карбонил)амино]бутирил}пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-10
(S,S,S,R)-2,3-Дихлор-N-{(1S)-[(2S)-((2R)-этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил]-2-метилпропил}изоникотинамид
Пример I-11
(S,S,S,R)-3,5-Дихлор-N-{(1S)-[(2S)-((2R)-этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил]-2-метилпропил}изоникотинамид
Пример I-12
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-13
[(2R)-Метокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-14
[(2R)-Изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-15
[5-Оксо-(2R)-пропокси-5-тетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-16
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-17
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[3,3-диметил-(2S)-(2-метилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-18
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[3-метил-(2S)-(2-трифторметилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-19
[(2R)-Метокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[2(S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-20
[(2R)-Изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[3,3-диметил-(2S)-(2-трифторметилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-21
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-22
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[3,3-диметил-(2S)-(2-трифторметилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-23
[5-Оксо-(2R)-пропокситетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-24
[(2R)-Бутокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-25
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-трифторметоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-26
[5-Оксо-(2R)-пропокситетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-27
[5-Оксо-(2S)-пропокситетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,S)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-28
[(2S)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,S)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-29
[(2R)-Бутокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,S)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-30
[(2S)-Бутокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,S)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-31
[(2R)-Изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-32
[(2S)-Изопропокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,S)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-33
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-циклопропилоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-34
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-35
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид {S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-36
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-этилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-37
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-38
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-циклопропилметилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-39
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-гидроксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-40
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-41
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-42
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-метил-3-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-43
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-44
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-фтор-4-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-45
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-фтор-4-ацетамидобензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-46
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-изопропилоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-47
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-гидроксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-48
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-метоксиметилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-49
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-изобутириламидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-50
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3-циклогексил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-51
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-метоксикарбониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-52
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-феноксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-53
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-4-тиазолиламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-54
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-амино-2-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-55
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3-тиазол-4-илпропионил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-56
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-тиазол-4-илпропионил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-57
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлор-3-метоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-58
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пиперидин-(2S)-карбоновой кислоты
Пример I-59
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
СПОСОБ H
Бензиловый эфир (1R,3S,4S)-3-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-гидроксиметилэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты
К перемешиваемому раствору третбутилового эфира (S)-3-амино-4-гидроксимасляной кислоты (486 мг) и 2-бензилового эфира (1R,3S,4S)-2-азабицикло[2.2.l]гептан-2,3-дикарбоновой кислоты (полученного, как описано в Tararov et al. Tett. Asymm. 2002, 13, 25-28) (767 мг) в ТГФ (18 мл) добавляют 2-гидроксибензотриазолгидрат (452 мг), DMAP (426 мг), диизопропилэтиламин (631 мкл) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 641 мг). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды 18 часов, затем разбавляют этилацетатом. После чего смесь промывают водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают флэш-хроматографией (смесь 60% этилацетат/петролейный эфир), получая указанное в подзаголовке соединение в виде бесцветного масла (1,1 г, 91%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,13-1,25 (1H, м), 1,30-1,48 (9H, м), 1,49-1,88, (6H, м), 2,20-2,52 (2H, м), 3,09-3,34 (2H, м), 3,64 (1H, д), 4,00-4,16 (2H, ушир.м), 4,80 (1H, м), 4,90-5,15 (2H, м), 7,21-7,41 (5H, м), 7,50-7,75 (1H, м); МС ES (+) 433,37.
Способ I
Бензиловый эфир (1R,3S,4S)-3-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-формилэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты
Раствор бензилового эфира (1R,3S,4S)-3((S)-2-третбутоксикарбонил-1-гидроксиметилэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (1,1 г) в DCM (10 мл) охлаждают до 0°C в атмосфере азота. Затем добавляют 2,2,6,6-тетраметилпиперидинилокси (TEMPO, 4 мг) с последующим добавлением трихлоризоциануровой кислоты (621 мг), порциями, за 30 минут. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды 1 час, затем фильтруют через целит. Фильтрат промывают водой, 1 M раствором тиосульфата натрия и насыщенным раствором соли. Сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении, получая указанное в подзаголовке соединение в виде бесцветного масла (698 мг, 64%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 1,16-1,89 (16H, м), 2,30-2,80 (2H, м), 3,68-3,81 (1H, м), 4,19 (1H, ушир.м), 4,39, (1H, м), 4,91-5,16 (2H, м), 7,21-7,43 (5H, м), 8,45 (0,4H, д), 8,60 (0,6, д), 9,19 (0,6H, с), 9,37 (0,4H, с).
Способ J
Бензиловый эфир (1R,3S,4S)-3-((S)-1-третбутоксикарбонилметил-2,2-диэтоксиэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты
К раствору бензилового эфира (1R,3S,4S)-3-((S)-2-третбутоксикарбонил-1-формилэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (698 мг) в дихлорметане (10 мл) добавляют триэтилортоформиат (720 мг) и моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (6 мг). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды до отсутствия остаточного альдегида по ТСХ. Затем добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и удаляют органическую фазу. Промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Получают указанное в подзаголовке соединение в виде светло-желтого масла (635 мг, 78%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,96-1,15 (6H, м), 1,26-1,84 (16H, м), 2,20-2,50 (2H, м), 3,40-3,81 (5H, м), 4,10-4,28 (2H, м), 4,37 (1H, м), 4,88-5,14 (2H, м), 7,20-7,40 (5H, м), 7,65 (0,5H, д), 7,80 (0,5H, д).
Способ K
Бензиловый эфир (1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты
Раствор бензилового эфира (1R,3S,4S)-3-((S)-1-третбутоксикарбонилметил-2,2-диэтоксиэтилкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (635 мг) в дихлорметане (3 мл) охлаждают до 0°C в атмосфере азота. Затем добавляют трифторуксусную кислоту (0,7 мл) и смесь перемешивают при 0°C 15 минут, после чего нагревают до температуры окружающей среды и перемешивание продолжают до завершения взаимодействия по ТСХ. Затем смесь разбавляют дихлорметаном (10 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (14 мл). После чего органическую фазу удаляют и промывают смесью 1:1 насыщенный водный бикарбонат натрия/насыщенный раствор соли (8 мл), сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Это дает указанное в подзаголовке соединение в виде смеси эпимеров по кеталевому центру. Эпимеры разделяют на силикагеле, элюируя смесью 30% 2-бутанон/петролейный эфир. Син-изомер (масло) (115 мг, 23%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,80-1,91 (10H, м), 2,35-2,79 (2H, м), 3,56 (1H, м), 3,66-3,80 (2H, м), 4,18 (1H, м), 4,59 (1H, м), 4,94-5,11 (2H, м), 5,53 (1H, д), 7,20-7,40 (5H, м), 8,18 (0,5H, д), 8,27 (0,5H, д); МС ES + 403,31 (100%), ES -401,37 (15%); Анти-изомер (масло) (103 мг, 20%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,80-1,85 (10H, м), 2,25-2,60 (1H, м), 2,95 (1H, м), 3,42 (1H, м), 3,5-3,75 (2H, м), 4,88-5,15 (3H, м), 7,21-7,40 (5H, м), 8,50 (0,4H, д), 8,59 (0,6H, д).
Способ L
Бензиловый эфир {(S)-1-[(1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбонил]-2,2-диметилпропил}карбаминовой кислоты
К раствору бензилового эфира (1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновой кислоты (5 г) в этилацетате (160 мл) и ДМФА (25 мл) добавляют триэтиламин (2,5 г) с последующим добавлением гидроксид палладия/уголь (20% м/м, 1 г). Смесь перемешивают в атмосфере водорода до отсутствия исходного вещества по ТСХ. Катализатор удаляют фильтрованием через целит. К фильтрату добавляют (S)-2-бензилоксикарбониламино-3,3-диметилмасляную кислоту (4,93 г), гидроксибензотриазолгидрат (2,01 г) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 2,85 г). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Затем добавляют насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (180 мл) и органическую фазу удаляют. Промывают насыщенным водным хлоридом аммония (180 мл), затем насыщенным раствором соли (180 мл), сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Сырой продукт очищают на силикагеле, элюируя смесью 40-75% этил ацетат/петролейный эфир. Указанное в подзаголовке соединение получают в виде белого пенистого вещества (5,25 г, 81%); 1H ЯМР (400 МГц, d-6 ДМСО) δ 0,85-1,03 (10H, м), 1,07-1,20 (3H, т), 1,30 (1H, м), 1,40 (1H, м), 1,50-1,80 (3H, м), 1,93 (1H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 2,78 (1H, м), 3,60 (1H, м), 3,78 (1H, м), 3,89 (1H, с), 4,26 (1H, д), 4,52 (2H, м), 4,96-5,12 (2H, м), 5,56 (1H, д), 7,10 (1H, д), 7,24-7,40 (5H, м), 8,27 (1H, д); МС ES + 516,93 (100%), ES - 515,05 (100%).
Способ M
((2R,3S)-2-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-ил)амид (1R,3S,4S)-2-[(S)-2-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-азабицикло[2.2.1]гептан-3-карбоновой кислоты
К раствору бензилового эфира {(S)-1-[(1R,3S,4S)-3-((2R,3S)-2-этокси-5-оксотетрагидрофуран-3-илкарбамоил)-2-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбонил]-2,2-диметилпропил}карбаминовой кислоты (370 мг) в этилацетате (20 мл) добавляют гидроксид палладия/уголь (20% м/м, 74 мг). Смесь перемешивают в атмосфере водорода до отсутствия исходного вещества по ТСХ. Катализатор удаляют фильтрованием через целит и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, получая амин в виде коричневого пенистого вещества (272 мг). Часть указанного вещества (167 мг) растворяют в ТГФ и добавляют 3-метокси-2-метилбензойную кислоту (146 мг), диизопропиламин (191 мкл), гидроксибензотриазолгидрат (77 мг) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (EDC, 109 мг). Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды 24 часа, затем разбавляют насыщенным водным бикарбонатом натрия. Органическую фазу удаляют и промывают насыщенным водным хлоридом аммония, затем насыщенным раствором соли, сушат (сульфат магния), фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Сырой продукт очищают на силикагеле, элюируя этилацетатом. Это дает указанное в подзаголовке соединение в виде белого твердого вещества (121 мг, 52%); 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,10 (9H, с), 1,28 (3H, т), 1,43-1,56 (1H, м), 1,79-1,86 (3H, м), 1,99 (1H, ушир.д), 2,29 (3H, с), 2,30-2,37 (1H, м), 2,83 (1H, дд), 3,02 (1H, ушир.с), 3,66-3,74 (1H, м), 3,87 (3H, с), 3,88-3,94 (1H, м), 4,16 (1H, ушир.с), 4,54 (1H, ушир.с), 4,66-4,74 (1H, м), 4,97 (1H, д), 5,46 (1H, д), 6,44 (1H, ушир.д), 6,93 (1H, д), 7,00 (1H, д), 7,22 (1H, т), 7,78 (1H, ушир.д); IR (твердый) см-1 2960, 1791, 1624, 1505, 1438, 1261, 1115, 975;; МС ES + 530; ES - 528.
Соединения формул I-60 - I-73 получены способами, по существу, аналогичными способам, описанным в примере I-59.
Пример I-60
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-61
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(4-ацетиламино-2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-62
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-хлор-4-пропиониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-63
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-хлор-3-изобутириламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-64
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-фтор-3-метоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-65
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-фтор-3-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-66
[(2S)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-67
[(2S)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-68
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(4-ацетиламино-3-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-69
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(3-хлор-4-пропиониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-70
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(изохинолин-1-илкарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-71
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(4-амино-3-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-72
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]-амид 2-[(2S)-(4-амино-3-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Пример I-73
[(2S)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид 2-[(2S)-(изохинолин-1-илкарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбоновой кислоты
Данные идентификации выбранных соединений формулы I
(по номеру соединения)
(экспер.)
Пример II-1
(S,S,S)-(3S)-[{1-[(2S)-(3-Метокси-2-метилбензоиламино)-3-метил-бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Способ I
[(2R)-Этокси-5-оксотетрагидрофуран-(3S)-ил]амид (S,S,S,R)-1-[(2S)-(3-метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбоновой кислоты (97,6 мг, 0,20 ммоль) растворяют в смеси 2M HCl (2 мл) и MeCN (2 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 2,5 часа. Полученную сырую смесь разбавляют EtOAc и промывают водой. Водный слой дважды экстрагируют EtOAc. Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток выпаривают совместно с DCM/петролейный эфир, получая указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (81,3 мг, 88% выход).
Соединения формул II-2 - II-61 получены способами, по существу, аналогичными способам, описанным в примере II-1.
Пример II-2
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-3
(S,S,S)-(3S)-({1-[3-Метил-(2S)-(2-метилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-4
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-5
(S,S,S)-(3S)-({1-[3-Метил-(2S)-(2-трифторметоксибензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-6
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(3-Гидрокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-7
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(3-Амино-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-8
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2,3-Дихлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-9
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-трифторметилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-10
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(3-Хлор-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-11
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2,4-Дихлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-12
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-({1-[(2S)-(2,5-Дихлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-13
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2,6-Дихлорбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-14
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2,6-Метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-15
(S,S,S)-(3S)-[(1-{3-Метил-(2S)-[(2-метилпиридин-3-карбонил)амино]бутирил}пирролидин-(2S)-карбонил)амино]-4-оксомасляная кислота
Пример II-16
(S,S,S)-(3S)-[(1-{3-Метил-(2S)-[(4-метилпиридин-3-карбонил)амино]бутирил}пирролидин-(2S)-карбонил)амино]-4-оксомасляная кислота
Пример II-17
(S,S,S)-(3S)-[(1-{3-Метил-(2S)-[(3-метилтиофен-2-карбонил)амино]бутирил}пирролидин-(2S)-карбонил)амино]-4-оксомасляная кислота
Пример II-18
(S,S,S)-(3S)-[(1-{(2S)-[(2,3-Дихлорпиридин-4-карбонил)амино]-3-метилбутирил}пирролидин-(2S)-карбонил)амино]-4-оксомасляная кислота
Пример II-19
(S,S,S)-(3S)-[(1-{(2S)-[(3,5-Дихлорпиридин-4-карбонил)амино]-3-метилбутирил}пирролидин-(2S)-карбонил)амино]-4-оксомасляная кислота
Пример II-20
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(3-Метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-21
(S,S,S)-4-Оксо-(3S)-({1-[4,4,4-трифтор-(2S)-(2-метил-3-метоксибензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил)амино)-масляная кислота
Пример II-22
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(5-Метокси-2-метилбензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил)амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-23
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(3-Метокси-2-метилбензоиламино)-3-тиазол-4-илпропионил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-24
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-4,4,4-трифторбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-25
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-3-тиазол-4-илпропионил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-26
(S,S,S)-(3S)-({1-[3,3-Диметил-(2S)-(2-метилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-27
(S,S,S)-(3S)-({1-[3-Метил-(2S)-(2-трифторметилбензоиламино)-бутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-28
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-29
(S,S,S)-(3S)-({1-[3,3-Диметил-(2S)-(2-трифторметилбензоиламино)бутирил]пирролидин-(2S)-
карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-30
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-метоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-31
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Фтор-3-метоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-32
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-трифторметоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-33
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-циклопропилоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-34
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-35
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-36
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-этилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-37
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-38
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-циклопропилметоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-39
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-гидроксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-40
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-41
(S,S,S)-(3S)-(1-[(2S)-(2-Хлор-3-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-42
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Метил-3-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-43
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-44
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Фтор-4-ацетамидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-45
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Фтор-4-ацетамидобензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-46
(S,S,S)-(3S)-((1-[(S)-(2-Хлор-4-изопропилоксибензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-47
(S,S,S)-(3S)-({1-[(S)-(2-Хлор-4-гидроксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-48
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-метоксиметилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-49
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-изобутириламидобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-50
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-ацетамидобензоиламино)-3-циклогексил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-51
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-4-метоксикарбониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-52
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлор-3-феноксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-53
(S,S,S)-(3S)-((1-[(2S)-(2-Хлор-6-аминобензоиламино)-3-метилбутирил]пирролидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-54
(S,S,S)-(3S)-({1-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]пиперидин-(2S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-55
(3S)-({2-[(2S)-(3-Метокси-2-метилбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-56
(3S)-({2-[(2S)-(2-Хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-57
(3S)-({2-[(2S)-(4-Ацетиламино-2-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-58
(3S)-({2-[(2S)-(2-Хлор-4-пропиониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-59
(3S)-({2-[(2S)-(2-Хлор-3-изобутириламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-60
(3S)-({2-[(2S)-(2-Фтор-3-метоксибензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-61
(3S)-({2-[(2S)-(2-Фтор-3-метоксибензоиламино)-3-метилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-62
(3S)-({2-[(2S)-(4-Ацетиламино-3-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-63
(3S)-({2-[(2S)-(3-Хлор-4-пропиониламинобензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-64
(3S)-({2-[(2S)-(Изохинолин-1-илкарбониламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-65
(3S)-({2-[(2S)-(4-Амино-3-хлорбензоиламино)-3,3-диметилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Пример II-66
(3S)-({2-[(2S)-(4-Амино-3-хлорбензоиламино)-3-метилбутирил]-2-(1S,4R)-азабицикло[2.2.1]гептан-(3S)-карбонил}амино)-4-оксомасляная кислота
Данные идентификации соединений II-1 - II-66 сведены в приведенной ниже таблице 4 и включают данные по ВЭЖХ, ЖХ/МС (экспериментальные) и 1H-ЯМР данные. 1H-ЯМР данные получены при 400 МГц и соответствуют структуре.
Данные идентификации выбранных соединений формулы II
(по номеру соединения)
(экспер.)
ПРИМЕР III
БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДИКИ
Соединения по данному изобретению могут быть исследованы с применением методик, описанных ниже. В таблице 5 перечислены данные по ингибированию ферментов каспаза-1 и каспаза-8 для соединений II-1-II-25. В таблице соединения с Ki <10 отнесены к категории A, соединения с Ki 10-20 отнесены к категории B и соединения с Ki 21-30 отнесены к категории C.
Испытания на ингибирование фермента in vitro
Значения Ki для испытуемых соединений с каспазой-1 и каспазой-8 получены по методу Margolin et al. (J. Biol. Chem., 272 pp. 7223-7228 (1997)). Другие каспазы могут быть исследованы подобным образом (см., например, WO 99/47545). Испытания проводят в 10 мМ Tris (Sigma Corp., St. Louis MO), pH 7,5, 1 мМ дитиотреитоле (DTT, Research Organic INC, Cleveland, OH) и 0,1% CHAPS (Pierce, Rockford IL) при 37°C. Для каспазы-3 к аналитическому буферу добавляют раствор 8% глицерина для повышения устойчивости фермента. 65 мкл аликвоту аналитического буфера и 5 мкл аликвоту соответствующих разведений ингибитора в ДМСО наносят пипеткой на 96-луночный планшет, обрабатывают 10 мкл каспазы, затем разбавляют аналитическим буфером (0,5-40 нМ активного белка по титрованию активных центров). Для каждого определения включают контроль, содержащий ДМСО, но без соединения. Затем планшеты инкубируют в течение 15 минут при 37°C перед добавлением соответствующего субстрата (20 мкл, конечная концентрация 1-4 X KM, конечный аналитический объем 100 мкл) для инициации взаимодействия. Скорости реакций измеряют при 37°C или по последующему зависимому от времени увеличению поглощения при 405 нМ (для pNA-субстратов) или соответствующему возрастанию флуоресценции (Ex 390, Em 460) (для AMC-субстратов). Строят график зависимости полученных скоростей от концентрации ингибитора и производят подгонку данных к уравнению сильных связей Моррисона для конкурентных ингибиторов (Morrison J. F. Biochem. Biophys. Acta, 185 pp. 269-286 (1969)). Субстраты, используемые для конкретных испытаний, следующие:
Каспаза-1 Suc-YVAD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (конечная концентрация при анализе 80 мкМ);
Каспаза-8 Ac-DEVD-pNA (Bachem, King of Prussia, PA) (конечная концентрация при анализе 80 мкМ).
Данные по ингибированию каспазы-1 (C1) и каспазы-8 (C8)
(нМ)
(нМ)
Анализ PBMC клеток
Анализ на IL-1β с помощью смешанной популяции мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) человека или обогащенных адгезивных мононуклеарных клеток
Процессинг pre-IL-1β под влиянием ICE может быть оценен в культуре клеток с применением различных источников клеток. PBMC человека, взятые от здоровых доноров, дают смешанную популяцию субтипов лимфоцитов и мононуклеарных клеток, которые продуцируют спектр интерлейкинов и цитокинов в ответ на многие классы физиологических стимуляторов. Адгезивные мононуклеарные клетки из PBMC обеспечивают обогащенный источник нормальных моноцитов для селективных изучений продуцирования цитокинов активированными клетками.
Экспериментальная методика:
Получают серии исходных разведений испытуемого соединения в ДМСО или этаноле с последующим разбавлением средой RPMI-10% FBS (содержащей 2 мМ L-глутамин, 10 мМ HEPES, 50 Ед и 50 мкг/мл пенициллин/стрептомицин) соответственно, что дает лекарства при 4-конечной испытуемой концентрации, содержащие 0,4% ДМСО или 0,4% этанола. Конечная концентрация ДМСО равна 0,1% для всех лекарственных разведений. Концентрационный титр, позволяющий установить кажущуюся Ki для испытуемого соединения, определенный испытанием на ингибирование ICE, обычно используют для первичного скрининга соединений.
Обычно исследуют 5-6 разведений соединения и клеточный компонент анализа дублируют, используя дублирующие ELISA-определения для каждого супернатанта клеточной культуры.
Выделение PBMC и испытание на IL-1:
Клетки лейкоцитарной пленки, выделенные из одной пинты крови человека (дающие конечный объем смеси плазма плюс клетки 40-45 мл), разбавляют средой до 80 мл и в каждую сепарационную пробирку LeukoPREP (Becton Dickinson) загружают 10 мл клеточной суспензии. После 15 мин центрифугирования при 1500-1800 × g слой плазма/среда отсасывают с помощью аспиратора и затем слой мононуклеарных клеток собирают с помощью пастеровской пипетки и переносят в 15 мл коническую центрифужную пробирку (Corning). Добавляют среду до объема 15 мл, осторожно перемешивают клетки путем перевертывания пробирки и центрифугируют при 300 × g в течение 15 мин. Осадок PBMC в пробирке ресуспендируют в небольшом объеме среды, производят подсчет клеток и концентрацию указанных клеток доводят до 6·106 клетки/мл.
Для анализа на клетки 1,0 мл клеточной суспензии добавляют к каждой лунке 24-луночного плоскодонного планшета для тканевых культур (Corning), 0,5 мл разведения испытуемого соединения и 0,5 мл раствора LPS (Sigma #L-3012; 20 нг/мл раствор, полученный в полной RPMI-среде; конечная концентрация LPS равна 5 нг/мл). 0,5 мл добавок испытуемого соединения и LPS обычно достаточно для смешивания содержимого лунок. Выполняют три контрольные смеси на эксперимент, контроль только с LPS, с растворяющей средой и/или дополнительной средой для доведения конечного объема культуры до 2,0 мл. Культуры клеток инкубируют 16-18 час при 37°C в присутствии 5% CO2.
По истечении инкубационного периода клетки собирают и переносят в конические центрифужные пробирки на 15 мл. После центрифугирования в течение 10 мин при 200 × g супернатанты собирают и переносят в пробирки Eppendorf'a на 1,5 мл. Следует отметить, что дебрис может быть использован для биохимической оценки содержания pre-IL-1β и/или зрелых IL-1β в экстрактах цитозоля по методу вестерн-блоттинга или ELISA со специфической антисывороткой pre-IL-1β.
Выделение адгезивных мононуклеарных клеток:
PBMC выделяют и подготавливают, как описано выше. К лункам первоначально добавляют среду (1,0 мл), после чего 0,5 мл суспензии PBMC. После инкубации в течение одного часа планшеты осторожно встряхивают и неадгезивные клетки отсасывают из каждой лунки с помощью аспиратора. Затем лунки осторожно промывают трижды 1,0 мл среды и под конец ресуспендируют в 1,0 мл среды. Обогащение адгезивными клетками обычно дает выход 2,5-3,0×105 клетки на лунку. Добавление испытуемых соединений, LPS, условия инкубации клеток и обработка супернатантов соответствуют описанным выше.
ELISA:
Наборы Quantikine (R&D Systems) могут быть использованы для определения зрелых IL-1β. Анализы выполняют согласно инструкциям производителя. Установлено, что уровни зрелых IL-1β составляют порядка 1-3 нг/мл как в PBMC, так и в адгезивных мононуклеарных положительных контролях. ELISA-анализы выполняют на 1:5, 1:10 и 1:20 разведениях супернатантов из LPS-положительных контролей для выбора оптимального разведения для супернатантов в скрининг-тесте.
Ингибирующая эффективность соединений может быть выражена через значение IC50, отвечающее концентрации ингибитора, при которой в супернатанте определяется 50% зрелых IL-1β по сравнению с положительными контролями.
Квалифицированному специалисту понятно, что значения, полученные в анализах на клетках, зависят от множества факторов. Значения не обязательно могут представлять точные количественные результаты.
Отобранные соединения по данному изобретению, исследованные на ингибирование высвобождения IL-1β из РВМСов, имеют значения IC50 в пределах от 300 нМ до 4 мкМ.
Анализ цельной крови на продуцирование IL-1β
Значения IC50 в анализе цельной крови для соединений по данному изобретению могут быть получены с применением описанной ниже методики.
Цель:
Анализ цельной крови является простым способом оценки продуцирования IL-1β (или других цитокинов) и активности потенциальных ингибиторов. Множественность этой анализируемой системы, с полным набором лимфоидных и воспалительных типов клеток, спектром белков плазмы и красных кровяных телец, является идеальным отображением in vitro физиологических условий в живом организме человека (in vivo).
Материалы:
Апирогенные шприцы (~30 куб. см)
Апирогенные стерильные вакуумные пробирки, содержащие лиофилизованный Na2EDTA (4,5 мг/10 мл пробирка)
Проба цельной крови человека (~30-50 куб. см)
Пробирки Eppendorf'a на 1,5 мл
Исходные растворы испытуемых соединений (~ 25 мМ в ДМСО или другом растворителе)
Не содержащий эндотоксин раствор хлорида натрия (0,9%) и HBSS
Исходный раствор липополисахарида (Sigma; каталог. № L-3012) при 1 мг/мл в HBSS
ELISA-набор для IL-1β (R & D Systems; каталог. № DLB50)
ELISA-набор для TNF-α (R & D Systems; каталог. № DTA50)
Водяная баня или инкубатор
Экспериментальная методика анализа цельной крови:
Устанавливают инкубатор или водяную баню на 30°C. Аликвота крови 0,25 мл в пробирках Eppendorf'a на 1,5 мл. Примечание: обязательно переворачивать пробирки с пробами цельной крови после каждых двух аликвот. Различия в репликах могут возникать, если клетки осаждаются и суспедированы неоднородно. Использование пипетки с регулированием объема также сводит к минимуму различия между аликвотами реплик.
Получают лекарственные разведения в стерильном апирогенном физиологическом растворе путем последовательного разведения. Ряд разведений, позволяющих установить кажущуюся Ki для испытуемого соединения, определенных испытанием на ингибирование ICE, обычно используют для первичного скрининга соединений. Для сильно гидрофобных соединений осуществляют разведения соединений свежей плазмой, отобранной у того же донора крови, или PBS-содержащим 5% ДМСО для повышения растворимости.
Добавляют 25 мкл разведения испытуемого соединения или контроля с растворителем и осторожно перемешивают пробу. Затем добавляют 5,0 мкл раствора LPS (250 нг/мл исходного, свежеполученного: 5,0 нг/мл конечная концентрация LPS) и вновь перемешивают. Инкубируют пробирки при 30°C на водяной бане в течение 16-18 час, временами перемешивая. Альтернативно, пробирки могут быть помещены в ротационную машину, установленную на 4 об/мин, на тот же инкубационный период. Это испытание следует проводить, используя дубликат или трипликат при следующих контролях: отрицательный контроль - без LPS; положительный контроль - без испытуемого ингибитора; контроль с растворителем - наибольшая концентрация ДМСО или смешанного растворителя, используемого в эксперименте. Дополнительное количество физиологического раствора добавляют во все контрольные пробирки для нормализации объемов, как в случае обоих контролей, так и испытуемых проб, для анализа цельной крови.
По истечении инкубационного периода пробы цельной крови центрифугируют 10 минут при ~2000 об/мин в микроцентрифуге, плазму переносят в чистую микроцентрифужную пробирку и центрифугируют при 1000 × g для осаждения остаточных тромбоцитов, по необходимости. Пробы плазмы можно хранить замороженными при -70°C до исследования на уровни цитокинов методом ELISA.
ELISA:
Наборы R & D Systems (614 McKinley Place N. E. Minneapolis, MN 55413) Quantikine kits могут быть использованы для определения IL-1β и TNF-α. Анализы проводят согласно инструкциям производителя. В ряду отдельных результатов измерений могут наблюдаться уровни IL-1β, равные ~1-5 нг/мл. Разведение 1:200 плазмы для всех проб является обычно достаточным в экспериментах для того, чтобы результаты ELISA попадали на линейный участок стандартных кривых ELISA. Это может потребоваться для оптимизации стандартных разведений в случае, если наблюдаются расхождения в анализах цельной крови. Nerad J. L. et al., J. Leukocyte Biol., 52, pp. 687-692 (1992).
Отобранные соединения по данному изобретению, исследованные на ингибирование высвобождения IL-1β из цельной крови, имеют значения IC50 в пределах от 1 мкм до 40 мкм.
Испытания in vivo
Соединения по данному изобретению могут быть исследованы испытаниями in vivo, такими как описаны в WO 99/47545.
WO 99/47545 и все прочие цитированные документы включены здесь посредством ссылки.
Хотя заявителями описан ряд вариантов осуществления настоящего изобретения, совершенно очевидно, что эти основные примеры могут быть изменены, что приведет к другим вариантам осуществления с применением соединений и способов по данному изобретению. Кроме того, следует учесть, что объем настоящего изобретения определяются приложенными пунктами, а не конкретными вариантами осуществления, представленными выше в качестве примера.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| НЕСТЕРОИДНЫЕ МОДУЛЯТОРЫ ГЛЮКОКОРТИОДИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ДЛЯ МЕСТНОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВ | 2016 |
|
RU2731618C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ БЕНЗОАЗЕПИНЫ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ TOLL-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА | 2010 |
|
RU2580320C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ 3-КАРБОКСИПРОПИЛ-АМИНОТЕТРАЛИНА И РОДСТВЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТОВ MU-ОПИОИДНОГО РЕЦЕПТОРА | 2008 |
|
RU2482107C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗЫ ATR | 2009 |
|
RU2604066C2 |
| ПИРИДО[3,4-D]ПИРИМИДИНОВОЕ ПРОИЗВОДНОЕ И ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ СОЛЬ | 2017 |
|
RU2796400C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРРОЛА КАК ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ВЕЩЕСТВА | 2005 |
|
RU2470916C2 |
| НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КАТЕПСИНА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 2002 |
|
RU2316546C2 |
| ДИАМИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ | 2003 |
|
RU2333203C2 |
| ПРОТИВОВИРУСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ | 2010 |
|
RU2541571C2 |
| ПРОЛЕКАРСТВО ФТОРСОДЕРЖАЩЕЙ АМИНОКИСЛОТЫ | 2013 |
|
RU2639868C1 |
Изобретение относится к новым соединениям формулы I:
где A, Y, R и R2 имеют значения, указанные в описании. Изобретение также относится к способам получения соединений формулы I и их промежуточных соединений, фармацевтическим композициям и способам применения соединений и их фармацевтических композиций для ингибирования каспаз. 23 н. и 21 з.п. ф-лы, 5 табл.
1. Соединение формулы I
где
или 
;
Y означает
R1 означает заместители: Н, C1-12-алкил или фенил, где любой атом водорода необязательно и независимо замещен R8;
кольцо А означает
, 
, 
когда кольцо А означает: 
то R означает R3C(O)-, и R3 означает заместители: фенил или изохинолил;
когда кольцо А означает:
или 
то R означает R3C(O)-, как показано в формуле II
и R3 означает фенил, тиофен или пиридин, где каждый цикл необязательно имеет до 5 заместителей, независимо выбираемых из групп R8', и где, по меньшей мере, одно положение на фениле, тиофене или пиридине, смежное со связью х, замещено R12, где
R12 содержит не более 5 атомов в линейной цепи;
R2 означает -C(R5) (R6) (R7);
R5 означает Н или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R6 означает Н или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R7 означает -CF3, -С3-7-циклоалкил, тиазолил или C1-6-линейный или разветвленный алкил, где каждый атом углерода алкила необязательно и независимо замещен R10;
или R5 и R7, вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют 3-10-членную циклоалифатическую группу;
каждый из R8 и R8' независимо означает галоген, -OR9, -CF3, -OCF3, -R9, -N(R9)2,
-N(R9)C(O)OR9, -N(R9)C(O)R9;
R9 означает заместители: водород, С1-12-алкил, С3-10-циклоалкил, фенил, тиазолил, (С3-10-циклоалкил) - (С1-12-алкил)-;
где любой атом водорода необязательно и независимо замещен OR9, где R9 означает C1-12-алкил;
R10 означает галоген;
R11 означает С1-4-алкил-; и
R12 означает галоген, -OR11, -CF3, -OCF3, -R11.
2. Соединение по п.1, где R означает R3C(O) - и R3 означает фенил или изохинолил.
3. Соединение формулы II:
где
Y означает или ;
R1 означает заместители: Н, С1-12-алкил, или фенил, где любой атом водорода необязательно и независимо замещен R8;
кольцо А означает:
или 
R3 означает фенил, тиофен или пиридин, где каждый цикл необязательно имеет до 5 заместителей, независимо выбираемых из групп R8', и где, по меньшей мере, одно положение на фениле, тиофене или пиридине, смежное со связью х, замещено R12, где R12 содержит не более 5 атомов в линейной цепи;
R2 означает -C(R5) (R6) (R7);
R5 означает Н или С1-6- линейный или разветвленный алкил;
R6 означает Н или C1-6- линейный или разветвленный алкил;
R7 означает -CF3, -С3-7-циклоалкил, тиазолил или C1-6-линейный или разветвленный алкил, где каждый атом углерода алкила необязательно и независимо замещен R10;
или R5 и R7, вместе с атомом углерода, к которому присоединены, образуют 3-10-членную циклоалифатическую группу;
каждый из R8 и R8' независимо означает галоген, -OR9, -CF3, -OCF3, -R9, -N(R9)2,
-N(R9)C(O)OR9, -N(R9)C(O)R9;
R9 означает заместители: водород, C1-12-алкил, С3-10-циклоалкил, фенил, тиазолил, (С3-10-циклоалкил) - (С1-12-алкил)-;
где любой атом водорода необязательно и независимо замещен OR9, где R9 означает C1-12-алкил;
R10 означает галоген;
R11 означает С1-4-алкил-; и
R12 означает галоген, -OR11, -CF3, -OCF3, -R11.
4. Соединение по любому одному из пп.1-3, где Y означает
5. Соединение по п.4, где R1 означает С1-12-алкил, необязательно замещенный 1-3 группами, независимо выбираемыми из R8.
6. Соединение по п.5, где R1 означает линейный или разветвленный C1-4-алкил, необязательно замещенный 1-3 группами, независимо выбираемыми из R8.
7. Соединение по п.6, где R1 означает незамещенный линейный или разветвленный
C1-4-алкил.
8. Соединение по п.7, где R1 означает этил, изопропил, н-пропил или н-бутил.
9. Соединение по п.8, где R1 означает этил.
10. Соединение по п.4, где R8 означает галоген, -OR9, -CF3, -OCF3 или -R9.
11. Соединение по любому из пп.1-3, где Y означает
12. Соединение по п.1, где кольцо А означает
13. Соединение по п.3, где кольцо А означает:
14. Соединение по п.12 или п.13, где R2 означает С3-4-разветвленную алкильную группу.
15. Соединение по п.14, где R5 означает Н или -СН3, R6 означает -СН3 и R7 означает -СН3.
16. Соединение по п.13, где R12 содержит не более 4 атомов в линейной цепи.
17. Соединение по п.16, где R12 содержит не более 3 атомов в линейной цепи.
18. Соединение по п.17, где R12 означает -OCF3, -ОСН3, -CF3, -СН3, -СН3СН3, -Cl или -F.
19. Соединение по п.18, где R12 означает -CF3, -СН3, -Cl или -F.
20. Соединение по п.19, где R12 означает -СН3, -Cl или -F.
21. Соединение по п.12 или 13, где каждый из R8′ независимо означает галоген,
-OR9, -CF3, -OCF3, -R9, -N(R9)2 или N(R9)C(O)R9.
22. Соединение по п.21, где каждый из R8' независимо означает -NH2, -N(R9)2, -N(R9)C(O)R9, -OCF3, -OR9, -R9 или галоген.
23. Соединение, выбираемое из группы, включающей
24. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием в отношении каспаз, содержащая:
a) соединение по п.1 и
b) фармацевтически приемлемый носитель или растворитель.
25. Способ лечения заболевания пациента, где указанное заболевание представляет собой панкреатит, остеоартрит, ревматоидный артрит, синдром расстройства дыхания у взрослых, системную красную волчанку, склеродермию, диабет, хронический активный гепатит, гепатит-В, гепатит-С, гепатит-G, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, реакцию трансплантат против хозяина, отторжение трансплантата органа, остеопороз, сепсис, септический шок, болезнь Альцгеймера, болезнь Гентингтона, ишемию головного мозга, эпилепсию, ишемию миокарда, инфаркт миокарда, атеросклероз, аорто-коронарное шунтирование, боковой амиотрофический склероз, множественный склероз, неврологическое повреждение, вызванное ударом, травматическое повреждение мозга, болезнь почек, синдром Muckle-Wells'a, семейную холодовую крапивницу, семейную средиземноморскую лихорадку, хронический младенческий неврологический кожный и суставной синдром, мультисистемное воспалительное заболевание новорожденных, TNFR1 -ассоциированный периодический синдром или синдром гипер-IgD перемежающейся лихорадки, включающий стадию введения указанному пациенту соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.24.
26. Способ ингибирования опосредованной каспазами функции у пациента, включающий стадию введения указанному пациенту соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.24.
27. Способ снижения продуцирования IGIF или IFN-γ в организме пациента, включающий введение указанному пациенту соединения по п.1 или фармацевтической композиции по п.24.
28. Способ консервирования клеток, включающий стадию контактирования клеток в жидкой среде с композицией из соединения по п.1 или соответствующего фармацевтически приемлемого производного.
29. Способ по п.28, где указанные клетки находятся в:
a) органе, предназначенном для трансплантации, или
b) продукте крови.
30. Способ получения соединения формулы I:
;
где Y означает:
,
а другие переменные принимают значения, указанные в п.1;
включающий взаимодействие соединения формулы 1:
где переменные принимают значения, указанные в п.1, и соединения формулы RX, где Х означает ОН, или соответствующее производное, или уходящую группу, в условиях сочетания амина и кислоты (когда Х означает ОН) или соответствующего производного кислоты (когда Х означает соответствующую уходящую группу), приводящее к получению соединения формулы I.
31. Способ получения соединения формулы I:
;
где Y означает:
;
а другие переменные принимают значения, указанные в п.1;
включающий взаимодействие соединения формулы 7-А:
где переменные принимают значения, указанные в п.1; и соединения формулы RNHCH (R2) С (О) X, где Х означает ОН, или соответствующее производное, или уходящую группу, в условиях сочетания амина и кислоты (когда Х означает ОН) или соответствующего производного кислоты (когда Х отличен от ОН), приводящее к получению соединения формулы I.
32. Способ получения соединения формулы IV:
где переменные принимают значения, указанные в п.1, включающий взаимодействие соединения формулы I:
,
где Y означает:
;
где R1 принимает значения, указанные в п.1, в условиях
гидролиза, приводящее к получению соединения формулы IV.
33. Способ получения соединения формулы 3-А:
,
где PG1 означает трет-бутил; PG2 означает бензилоксикарбонил; и кольцо А принимает значения по п.1; включающий:
взаимодействие соединения формулы 2-А:
и соединения формулы 20-А:
где Х означает ОН или соответствующую уходящую группу, в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда Х означает ОН) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда Х означает соответствующую уходящую группу), приводящее к получению соединения формулы 3-А.
34. Способ получения соединения формулы 3:
где PG1 означает трет-бутил и PG2 означает бензилоксикарбонил, включающий: взаимодействие соединения формулы 2-А:
с соединением формулы 20:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда Х означает ОН) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда Х означает соответствующую уходящую группу), приводящее к получению соединения формулы 3.
35. Способ получения соединения формулы 13:
где PG1 означает трет-бутил; и PG2 означает бензилоксикарбонил; включающий: взаимодействие соединения формулы 2:
с соединением формулы 21:
в условиях сочетания амина и карбоновой кислоты (когда Х означает ОН) или амина и соответствующего производного карбоновой кислоты (когда Х означает соответствующую уходящую группу), приводящее к получению соединения формулы 13.
36. Соединение формулы 5-А:
где PG1 означает трет-бутил, PG2 означает
бензилоксикарбонил; и R1 означает С1-12-алкил.
37. Соединение формулы 5:
,
где Z означает бензилоксикарбонил, PG1 означает трет-бутил и R1 означает C1-12-алкил.
38. Соединение формулы 15:
где PG1 означает трет-бутил, PG2 означает бензилоксикарбонил и R1 означает C1-12-алкил.
39. Соединение формулы 3-А:
,
где PG1 означает трет-бутил, PG2 означает бензилоксикарбонил и R1 означает С1-12-алкил.
40. Соединение формулы 3:
,
где Z означает бензилоксикарбонил и PG1 означает трет-бутил.
41. Соединение формулы 13:
,
где PG1 означает трет-бутил и PG2 означает бензилоксикарбонил.
42. Соединение формулы 4А:
,
где PG1 означает трет-бутил и PG2 означает бензилоксикарбонил.
43. Соединение формулы 4:
,
где Z означает бензилоксикарбонил и PG1 означает трет-бутил.
44. Соединение формулы 14:
,
где PG1 означает трет-бутил и PG2 означает бензилоксикарбонил.
| WO 9947545 А2 23.09.1999 | |||
| 0 |
|
SU181330A1 | |
| Donald S.Karanewsky et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry Litters, 1998, v.8, p.2757-2762. | |||
| ПРЕОБРАЗОВАТЕЛЬ НАПРЯЖЕНИЯ В КОД С АВТОКОРРЕКЦИЕЙ | 0 |
|
SU190063A1 |
| Устройство для испытания каменных материалов на сжатие | 1981 |
|
SU953508A1 |
| ДИГИДРОБЕНЗОФУРАНЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ | 1995 |
|
RU2138498C1 |
| RU 2070884 C1 27.12.1996 | |||
| ЗАМЕЩЕННЫЕ N-(ИНДОЛ-2-КАРБОНИЛ)-β-АЛАНИНАМИДЫ И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЛИКОГЕНФОСФОРИЛАЗОЗАВИСИМЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СПОСОБ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ МИОКАРДА, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ | 1996 |
|
RU2159613C2 |
