СИНТЕТИЧЕСКИЕ ПЕПТИДЫ, УМЕНЬШАЮЩИЕ ИЛИ УСТРАНЯЮЩИЕ МЕШКИ, ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПОД НИЖНИМ КРАЕМ ГЛАЗ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КОСМЕТИЧЕСКИХ ИЛИ ДЕРМОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЯХ Российский патент 2010 года по МПК C07K5/103 A61K38/07 A61P7/10 A61Q19/08 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к синтетическим пептидам, уменьшающим или устраняющим мешки, образующиеся под глазами, и к косметическим или дермофармацевтическим композициям, содержащим указанные пептиды, полезные в лечении кожи, предпочтительно кожи лица, и особенно кожи, расположенной под глазами, с целью уменьшения или устранения припухлости, а также улучшения плотности, гидратации и эластичности.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Появление мешков у нижнего края глаза представляет собой распространенную косметическую проблему, имеющую место, когда кожа нижнего века является слегка припухшей и отвисает. Кожа, окружающая глаза, является относительно тонкой и имеет состав с меньшим содержанием жиров, чем многие другие участки кожи. По этой причине старение, стресс, различные заболевания и загрязнение окружающей среды могут проявлять свои первые симптомы припухлостью нижних век и появлением мешков вследствие потери плотности и эластичности кожи, которая расположена под глазами. Накопление жидкости под кожей в участке, расположенном под глазами, приводит к отеку, который проявляется в виде припухших глаз, причем данный участок часто является более темным по сравнению с окружающими участками лица («черные круги»), что потребитель воспринимает как неприемлемое или антиэстетичное.

Вплоть до настоящего времени точные причины, по которым образуются антиэстетичные мешки под глазами, являются неизвестными, но в качестве связанных факторов или индукторов данной проблемы идентифицировали различные внешние факторы, такие как стресс, избыточное потребление кофеина или спиртных напитков и недостаток сна. Подобным образом, в литературе описаны внутренние факторы, содействующие образованию мешков под глазами, такие как дисфункция почек и задержка жидкости, высокое кровяное давление, воспаление, аллергические компоненты (аллергический ринит) или изменение оттока лимфы. Истинное старение кожи, расслабление круговой мышцы, а также повреждение, вызванное ультрафиолетовым излучением, также необходимо рассматривать совместно с этими факторами.

Поскольку кожа теряет эластичность и мышцы ослабевают с возрастом, вокруг глаз может появляться дряблая кожа, образующая складки в веках. Кроме того, жир, вмещающий и поддерживающий глаза в глазницах, имеет тенденцию смещаться к наружной поверхности глазной впадины и накапливаться вокруг глаз в форме экзофтальма. Припухшие или выпячивающиеся веки могут быть обусловлены накоплением жира в круговой зоне, а также скоплением дряблой кожи в указанной зоне.

С целью возвращения лицу молодого и неутомленного вида, для удаления мешков под глазами часто используют косметическую операцию (блефаропластика) в способе, состоящем из создания внутренних и внешних надрезов в веках с целью удаления избытка накопившегося жира и/или кожи. Блефаропластика в настоящее время является способом, который чаще всего проводят пластические хирурги в Соединенных Штатах Америки [Castro, E. and Foster, J.A. (1999) Upper lid blepharoplasty Facial Plast Surg. 15(3), 173-181]. Однако, несмотря на тот факт, что указанную хирургическую операцию рассматривают как незначительный хирургический процесс, он представляет собой методику, которая не лишена риска вследствие связанных рисков анестезии, используемой при данном вмешательстве, а также рисков потенциальных послеоперационных инфекций. Следовательно, до сих пор существует необходимость нахождения простого, эффективного и лишенного риска решения для уменьшения или устранения мешков под глазами.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение дает простое, эффективное и лишенное риска решение для уменьшения или устранения мешков под глазами, включающее разработку синтетических пептидов, которые могут уменьшить или устранить мешки под глазами, а также повысить плотность и эластичность кожи в области нижнего века.

Следовательно, первый аспект данного изобретения относится к пептиду, который может уменьшить или устранить мешки, образующиеся под глазами, общей формулы (I):

его стереоизомерам и их рацемическим или нерацемическим смесям и их косметически или дермофармацевтически приемлемым солям, где

Х может быть цистеинилом, серилом, треонилом или аминобутирилом;

R₁ может быть Н или алкильной, арильной, аралкильной или ацильной группой; и

R₂ может быть амино, гидрокси или тиолом, которые все незамещены или замещены алифатическими или циклическими группами.

Предпочтительными структурами пептидов, представленных в общей формуле (I), являются структуры, где

Х может быть серилом или аминобутирилом;

R₁ может быть Н или насыщенным или ненасыщенным, разветвленным или циклическим, линейным С₂-С₂₄ацилом; и

R₂ может быть амино или гидрокси, незамещенными или замещенными насыщенными или ненасыщенными, разветвленными или циклическими, линейными, алифатическими С₁-С₂₄группами.

Пептиды по настоящему изобретению могут существовать в виде стереоизомеров или смесей стереоизомеров; например, аминокислоты, образующие их, могут иметь L-, D-конфигурацию или могут быть рацемическими независимо друг от друга. Следовательно, можно получить смеси изомеров, а также рацематы или диастереомерные смеси, или чистые диастереомеры или энантиомеры, в зависимости от количества асимметрических атомов углерода и присутствующих изомеров или смесей изомеров.

Предпочтительные структуры пептидов общей формулы (I) представляют собой чистые изомеры, то есть энантиомеры или диастереомеры.

В контексте настоящего изобретения термин «алифатическая группа» относится к насыщенной или ненасыщенной, линейной или циклической углеводородной группе.

Термин «углеводородная группа» используется в настоящем изобретении для того, чтобы включить, например, алкильную, алкенильную и алкинильную группы.

Термин «алкильная группа» относится к линейной или разветвленной насыщенной углеводородной группе, включающей, например, метил, этил, изопропил, изобутил, трет-бутил, гептил, додецил, гексадецил, октадецил, амил, 2-этилгексил, 2-метилбутил, 5-метилгексил и тому подобное.

Термин «алкенильная группа» относится к линейной или разветвленной ненасыщенной углеводородной группе с одной или более чем одной двойной связью углерод-углерод, такой как винильная группа.

Термин «алкинильная группа» относится к линейной или разветвленной ненасыщенной углеводородной группе с одной или более чем одной тройной связью углерод-углерод.

Термин «циклическая группа» относится к замкнутому углеводородному кольцу, которое можно классифицировать как алициклическую, ароматическую или гетероциклическую группу.

Термин «алициклическая группа» относится к циклической углеводородной группе со свойствами, аналогичными свойствам алифатических групп.

Термин «ароматическая группа» или «арильная группа» относится к моно- или полициклической ароматической углеводородной группе.

Термин «гетероциклическая группа» относится к замкнутому углеводородному кольцу, в котором один или более чем один атом кольца представляет собой элемент, отличный от углерода (например азот, кислород, сера и так далее).

Как понятно в данной области техники, существование высокой степени замещения является не только допустимым, но и рекомендуемым. Следовательно, в пептидах по настоящему изобретению может быть замещение. С целью упрощения настоящего описания изобретения, термины «группа» и «блок» будут использованы для различения между химическими соединениями, делающими возможным замещение, или которые можно заместить («группа»), и соединениями, которые не делают возможным замещение, или которые не могут быть замещены («блок»). Таким образом, когда для описания химического заместителя используют термин «группа», описанное химическое вещество включает как незамещенную группу, так и группу, содержащую атомы О, N или S.

С другой стороны, когда для описания химического соединения или заместителя используется термин «блок», может быть включено только незамещенное химическое вещество. Например, выражение «алкильная группа» будет включать не только насыщенные алкильные заместители с открытой цепью, такие как метил, этил, пропил, изобутил и тому подобное, но также и алкильные заместители, содержащие другие заместители, известные в данной области, такие как гидрокси, алкокси, амино, карбоксил, карбоксамидо, атомы галогена, циано, нитро, алкилсульфонил и другие. Таким образом, «алкильная группа» включает эфирную, галогеноалкильную, спиртовую, тиольную, карбоксильную, аминную, гидроксиалкильную, сульфоалкильную, гуанидиновую группы и другие группы. С другой стороны, выражение «алкильный блок» ограничивается только включением насыщенных алкильных заместителей с открытой цепью, таких как метил, этил, пропил, изобутил и тому подобное.

Косметически или дермофармацевтически приемлемые соли пептидов формулы (I), предложенные согласно данному изобретению, включены в объем настоящего изобретения. Термин «косметически или дермофармацевтически приемлемые соли» включает соли, обычно используемые для образования солей металлов или солей присоединения кислот, либо органических (таких как, среди прочих, ацетат, цитрат, олеат, оксалат или глюконат), либо неорганических (таких как, например, среди прочих, хлорид, сульфат, борат или карбонат). Природа данной соли не является критической, при условии, что она является косметически или дермофармацевтически приемлемой. Косметически или дермофармацевтически приемлемые соли пептидов формулы (I) можно получить традиционными способами, хорошо известными в уровне техники.

Синтез пептидов общей формулы (I) можно провести согласно традиционным способам, известным в уровне техники, таким как, например, адаптация способов твердофазного синтеза пептидов [Stewart J.M. and Young J.D. (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd edition, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois. Bodanzsky M. and Bodanzsky A. (1984) The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York. Lloyd-Williams, P., Albericio, F. and Giralt, E. (1997) Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC, Boca Raton (FL, USA)], синтез в растворе, комбинация способов твердофазного синтеза и синтеза в растворе или ферментативные способы [Kullmann W. (1980) Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides. J. Biol. Chem. 255, 8234-8238]. Данные пептиды также можно получить путем ферментации бактериального штамма, который является модифицированным или немодифицированным посредством генной инженерии с целью получения желательных последовательностей.

Например, способом получения пептидов общей формулы (I) является способ, при котором фрагмент пептида общей формулы (I), имеющий свободную карбоксильную группу или ее реакционноспособное производное, подвергают взаимодействию с комплементарным фрагментом, имеющим аминогруппу по меньшей мере с одним свободным атомом водорода, с последующим образованием связи амидного типа, и где функциональные группы указанных фрагментов, которые не участвуют в образовании связи амидного типа, если они существуют, являются удобным образом защищенными временными или постоянными защитными группами.

Другим примером способа получения пептидов общей формулы (I) является способ, при котором фрагмент пептида общей формулы (I), имеющий уходящую группу, такую как, например, среди прочих, тозильную группу, мезильную группу или галогеновую группы, подвергают взаимодействию с комплементарным фрагментом, имеющим аминогруппу по меньшей мере с одним свободным атомом водорода, посредством реакции нуклеофильного замещения, и где указанные функциональные группы данных фрагментов, которые не участвуют в образовании связи N-C, если они существуют, являются удобным образом защищенными временными или постоянными защитными группами. Примеры защитных групп, их введение и отщепление описаны в литературе [Greene T.W. (1981) Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York. Atherton B. and Sheppard R.C. (1989) Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach, IRL Oxford University Pres]. Термин «защитные группы» также включает полимерные подложки, используемые в твердофазном синтезе.

Когда синтез полностью или частично проводят в твердой фазе, в качестве твердых подложек, которые следует использовать в способе по изобретению, можно упомянуть следующие: подложки, сделанные из полистирола, полиэтиленгликоль-привитого полистирола и тому подобного, такие как, например, п-метилбензгидриламинные смолы (МВНА) [Matsueda G.R. and Stewart J.M. (1981) A p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phase synthesis of peptide amides. Peptides 2, 45-50], 2-хлортритиловые смолы [(а) Barlos К., Gatos D., Kallitsis J., Papaphotiu G., Sotiriu P., Wenqing Y. and Schäfer W. (1989) Darstellung geschützter peptid-fragmente unter einsatz substituierter triphenylmethyl-harze. Tetrahedron Lett. 30, 3943-3946. (b) Barlos K., Gatos D., Kapolos S., Papaphotiu G., Schäfer W. and Wenqing Y. (1989) Veresterung von partiell geschützten peptid-fragmenten mit harzen. Einsatz von 2-chlortritylchlorid zur synthese von Leu 15 - gastrin I Tetrahedron Lett. 30, 3947-3951], смолы TentaGel® и тому подобное, которые могут включать или могут не включать лабильный спейсер, такой как 5-(4-аминометил-3,5-диметоксифенокси)-валериановая кислота (PAL) [Albehcio F., Kneib-Cordonier N., Biancalana S., Gera L., Masada R.I., Hudson D. and Barany G. (1990) Preparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3,5-dimethoxyphenoxy)-valeric acid (PAL) handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions. J. Org. Chem. 55, 3730-3743], 2-[4-аминометил-(2,4-диметоксифенил)-феноксиуксусная кислота (AM) [Rink H. (1987) Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using trialkoxy-diphenyl-methylester resin. Tetrahedron Lett. 28, 3787-3790], Wang [Wang, S.S. (1973) p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Rezin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments. J. Am. Chem. Soc. 95, 1328-1333] и тому подобное, делающий возможным снятие защиты и одновременное отщепление соединения от полимерной подложки.

Пептиды по данному изобретению могут образовать часть композиций нескольких типов для их наружного нанесения на тело млекопитающего, предпочтительно человека. В этом смысле согласно данному изобретению предложена косметическая или дермофармацевтическая композиция, содержащая пептиды общей формулы (I). Указанные композиции можно получить традиционными способами, известными специалистам в данной области.

Пептиды, которые являются задачей данного изобретения, имеют варьирующую растворимость в воде, согласно природе групп R₁, R₂ и X. Те пептиды, которые не являются водорастворимыми, можно солюбилизировать в традиционных косметически или дермофармацевтически приемлемых растворителях, таких как, например, этанол, пропанол или изопропанол, пропиленгликоль, глицерин, бутиленгликоли или полиэтиленгликоль. Данные пептиды также можно предварительно включить в косметические носители, такие как липосомы, милличастицы, микрочастицы и наночастицы, а также в губки, миллисферы, микросферы и наносферы, милликапсулы, микрокапсулы и нанокапсулы.

Эти препараты можно использовать в различных типах композиций, таких как, например, кремы, лосьоны, гели, масла, жидкие мази, сыворотки, муссы, мази, куски мыла, карандаши или спреи, включая «несмываемые» препараты и «смываемые препараты», и посредством методик, известных специалистам в данной области, их также можно включить в различные типы твердых аксессуаров, таких как салфетки, гидрогели, адгезивные (или неадгезивные) пластыри или маски для лица, или их можно включить в различные продукты серии для макияжа, такие как, среди прочих, маскирующие кремы, тональные кремы, лосьоны, лосьоны для удаления макияжа.

Композиции, упомянутые в настоящем изобретении, могут содержать дополнительные ингредиенты, обычно используемые в композициях для ухода и лечения кожи, такие как, например, и не для ограничения, эмульгирующие агенты, смягчители, органические растворители, кондиционеры для ухода за кожей, такие как, например, влагоудерживающие вещества, альфа-гидроксикислоты, увлажняющие средства, витамины, пигменты или красители, гелеобразующие полимеры, загустители, смягчители, агенты против образования морщин, отбеливатели, соединения, поглощающие свободные радикалы, антиоксидантные соединения, соединения, стимулирующие синтез дермальных или эпидермальных макромолекул и/или способные предотвращать их деградацию, такие как, например, среди прочих, соединения, стимулирующие синтез коллагена, соединения, стимулирующие синтез эластина, соединения, ингибирующие деградацию коллагена, соединения, стимулирующие пролиферацию фибробластов, соединения, стимулирующие пролиферацию кератиноцитов, соединения, стимулирующие дифференциацию кератиноцитов, соединения, расслабляющие кожу, соединения, стимулирующие синтез гликозаминогликанов, соединения, повышающие упругость, соединения, действующие на капиллярное кровообращение, соединения, действующие на метаболизм клеток, соединения, стимулирующие синтез меланина, консерванты, отдушки, хелатирующие агенты, экстракты растений, эфирные масла, экстракты морских водорослей, экстракты клеток и солнцезащитные фильтры (органические или минеральные фотопротективные агенты, которые являются активными против ультрафиолетовых лучей А и В), при условии, что они являются физически и химически совместимыми с остальными компонентами данной композиции и особенно с пептидами по настоящему изобретению.

Композиции по настоящему изобретению могут содержать или могут быть введены совместно с аналгетиками и/или противовоспалительными соединениями с целью уменьшения припухлости и раздражения, связанного с мешками под глазами. Среди этих соединений можно особо отметить соединения стероидного типа, такие как гидрокортизон, или натуральные экстракты, или эфирные масла с присущей им противовоспалительной и аналгетической активностью.

Для достижения желаемого эффекта, пептиды общей формулы (I) используют в косметических или дермофармацевтических композициях по настоящему изобретению в косметически или дермофармацевтически эффективных концентрациях; предпочтительно от 0,00001% (по массе) до 10% (по массе); предпочтительно от 0,0001% (по массе) до 5% (по массе) и, более конкретно, от 0,001% (по массе) до 1% (по массе).

Следовательно, дополнительный аспект данного изобретения относится к применению пептидов общей формулы (I) в изготовлении косметической или дермофармацевтической композиции для лечения кожи, предпочтительно кожи лица, и, более конкретно, для уменьшения или устранения мешков под глазами.

Согласно настоящему изобретению также предложен косметический или дермофармацевтический способ уменьшения или устранения мешков, образующихся под глазами у людей, включающий введение эффективного количества пептидов общей формулы (I), предпочтительно в виде косметической или дермофармацевтической композиции, содержащей его.

ПРИМЕРЫ

Следующие представленные здесь конкретные примеры являются полезными для иллюстрации сущности настоящего изобретения. Эти примеры включены исключительно для иллюстративных целей и не должны быть истолкованы как ограничения заявленного здесь изобретения.

Общая методика

Химический синтез

Все способы синтеза проводят в полипропиленовых шприцах, оснащенных пористыми полиэтиленовыми дисками. Все реагенты и растворители имеют качество, подходящее для синтеза, и используются без какой-либо дополнительной обработки. Отщепление группы Fmoc проводят пиперидином-DMF (2:8, об./об.) (1×1 минуты, 1×5 минут; 5 мл/г смолы) [Lloyd-Williams, Р., Albericio, F. and Giralt, E. (1997) Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC, Boca Raton (FL, USA)]. Промывки между стадиями снятия защиты, сочетания и следующего снятия защиты проводили с DMF (3×1 мин), используя каждый раз 10 мл растворителя/г смолы. Реакции сочетания проводили с 3 мл растворителя/г смолы. Контроль сочетаний проводят посредством нингидринового теста [Kaiser, E., Colescott R.L., Bossinger C.D. and Cook P.I. (1970) Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides. Anal. Biochem. 34, 595-598]. Все синтетические превращения и промывки проводили при 25°С.

Хроматографический анализ путем HPLC проводили на оборудовании Shimadzu (Киото, Япония), используя колонку с обращенной фазой, термостатируемую при 30°С (250×4,0 мм, Kromasil C₈, 5 мкм, Akzo Nobel, Швеция). Элюцию проводили посредством градиента ацетонитрила (+0,07%-ная TFA) в воде (+0,1%-ная TFA) со скоростью потока 1 мл/мин, и обнаружение проводили при 220 нм.

Сокращения.

Сокращения, используемые для аминокислот, подчиняются правилам IUPAC-IUB комиссии по биохимической номенклатуре, изложенным в Eur. J. Biochem. (1984) 138, 9-37 и в J. Biol. Chem. (1989) 264, 633-673.

Abu, 2-аминомасляная кислота; βAla, бета-аланин, 3-аминопропионовая кислота; AM, 2-[4-аминометил-(2,4-диметоксифенил)-феноксиуксусная кислота; Воc, трет-бутилоксикарбонил; DCM, дихлорметан; DIEA, N,N-диизопропилэтиламин; DIPCDI, N,N'-диизопропилкарбодиимид; DMF, N,N-диметилформамид; ES-MS, электрораспылительная масс-спектрометрия; Fmoc, флуоренилметоксикарбонил; HOBt, 1-гидроксибензотриазол; HPLC, высокоэффективная жидкостная хроматография; МВНА, п-метилбензгидриламинная смола; MeCN, ацетонитрил; МеОН, метанол; PAL, 5-(4-аминометил-3,5-диметоксифенокси)-валериановая кислота; Palm, пальмитоил; tBu, трет-бутил; THF, тетрагидрофуран; TFA, трифторуксусная кислота; Trt, тритил.

ПРИМЕР 1

Получение Ac-βAla-His-Cys-His-OH

5,5 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (8,9 ммоль, 1 экв.), растворенного в 55 мл DCM, к которому было добавлено 1,3 мл DIEA (2,9 ммоль, 0,33 экв.), включали в сухую 2-хлортритиловую смолу (5,5 г, 8,8 ммоль). Оставляли эту смесь перемешиваться в течение 5 минут, после чего добавляли 2,5 мл DIEA (5,9 ммоль, 0,67 экв.). Давали ей реагировать в течение 40 мин. Остающиеся хлоридные группы блокировали обработкой 4,4 мл МеОН.

Снимали защиту с аминоконцевой Fmoc группы, как описано в общих способах, и 12,89 г Fmoc-L-Cys(Trt)-OH (22 ммоль, 2,5 экв.) включали в пептидильную смолу в течение 1 часа в присутствии DIPCDI (3,39 мл, 22 ммоль, 2,5 экв.) и HOBt (3,37 г, 22 ммоль, 2,5 экв.), используя DMF в качестве растворителя. Затем промывали данную смолу, как описано в общих способах, и повторяли обработку для снятия защиты с Fmoc группы для включения следующей аминокислоты. Следуя описанным протоколам, последовательно подвергали сочетанию 13,63 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (22 ммоль, 2,5 экв.) и 6,85 г Fmoc-βAla-OH (22 ммоль, 2,5 экв.) с присутствием при каждом сочетании 3,37 г HOBt (22 ммоль, 2,5 экв.) и 3,39 мл DIPCDI (22 ммоль, 2,5 экв.).

Снимали защиту с N-концевой Fmoc группы, как описано в общих способах, обрабатывали пептидильную смолу в течение 30 мин уксусным ангидридом (2,1 мл, 22 ммоль) в присутствии DIEA (7,53 мл, 22 ммоль), используя DMF в качестве растворителя, промывали ее DMF (5×1 мин), DCM (4×1 мин), диэтиловым эфиром (4×1 мин) и сушили под вакуумом.

12,36 г сухой пептидильной смолы обрабатывали 87 мл TFA-ⁱPr₃Si-H₂O (90:5:5) в течение 2 часов при комнатной температуре. Фильтраты собирали на холодном диэтиловом эфире (700 мл), фильтровали их через пористую пластинку и 5 раз промывали осадок диэтиловым эфиром (500 мл). Конечный осадок сушили под вакуумом.

Анализ посредством HPLC в градиенте MeCN (+0,07% TFA) в H₂O (+0,1% TFA) от 2 до 32% показал время удерживания 12,63 минуты и чистоту более 85%. Его молекулярную массу определяли посредством ES-MS [(М+Н)⁺ _{теоретическая} 509,19, (М+H)⁺ _эксп. 509,2].

ПРИМЕР 2

Синтез Palm-βAla-His-Ser-His-NH₂

0,685 мг смолы Fmoc-AM-MBHA с функционализацией 0,73 ммоль/г (0,5 ммоль) обрабатывали пиперидином-DMF согласно описанному общему протоколу с целью отщепления группы Fmoc. В данную смолу включали в течение 1 часа 1,58 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (2,5 ммоль, 5 экв.) в присутствии DIPCDI (385 мкл, 2,5 ммоль, 5 экв.) и HOBt (385 мг, 2,5 ммоль, 5 экв.), используя в качестве растворителя DMF.

Затем промывали данную смолу, как описано в общих способах, и повторяли обработку для снятия защиты с Fmoc группы для включения следующей аминокислоты. Следуя описанным протоколам, последовательно подвергали сочетанию 0,95 г Fmoc-L-Ser(tBu)-OH (2,5 ммоль, 5 экв.), 1,59 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (2,5 ммоль, 5 экв.) и 0,77 г Fmoc-βAla-OH (2,5 ммоль, 5 экв.) с присутствием при каждом сочетании 385 мг HOBt (2,5 ммоль, 5 экв.) и 385 мкл DIPCDI (2,5 ммоль, 5 экв.).

Снимали защиту с N-концевой Fmoc группы, как описано в общих способах, и включали 1,28 г пальмитиновой кислоты (5 ммоль, 10 экв.), предварительно растворенной в DMF (10 мл), в присутствии 770 мг HOBt (5 ммоль, 10 экв.) и 770 мкл DIPCDI (5 ммоль, 10 экв.). Оставляли смолу реагировать в течение 15 часов, после чего промывали ее THF (5×1 мин), DCM (5×1 мин), DMF (5×1 мин), МеОН (5×1 мин), DMF (5×1 мин), THF (5×1 мин), DMF (5×1 мин), DCM (4×1 мин), диэтиловым эфиром (3×1 мин) и сушили под вакуумом.

1,17 г сухой пептидильной смолы обрабатывали 15 мл TFA-ⁱPr₃Si-H₂O (90:5:5) в течение 2 часов при комнатной температуре. Фильтраты собирали на холодном диэтиловом эфире (100 мл), центрифугировали в течение 5 мин при 4000 об/мин и сливали эфирный раствор. Промывки диэтиловым эфиром повторяли 5 раз. Конечный осадок сушили под вакуумом.

Анализ посредством HPLC в градиенте MeCN (+0,07% TFA) в H₂O (+0,1% TFA) от 5 до 95% показал время удерживания 19,3 мин и чистоту более 70%. Его молекулярную массу определяли посредством ES-MS [(М+Н)⁺ _{теоретическая} 688,45, (М+Н)⁺ _эксп. 688,7].

ПРИМЕР 3

Получение Ac-βAla-His-Ser-His-NH-(CH₂)₉-CH₃

2,0 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (3,23 ммоль, 1 экв.), растворенного в 20 мл DCM, к которому было добавлено 500 мкл DIEA (1,1 ммоль, 0,33 экв.), включали в сухую 2-хлортритиловую смолу (2,0 г, 3,3 ммоль). Оставляли ее перемешиваться в течение 5 мин, после чего добавляли 1 мл DIEA (2,2 ммоль, 0,67 экв.). Давали ей реагировать в течение 40 мин. Остающиеся хлоридные группы блокировали путем обработки 1,6 мл МеОН.

Снимали защиту с аминоконцевой Fmoc группы на 1 ммоль аминоацильной смолы, как описано в общих способах, и включали 1,95 г Fmoc-L-Ser(tBu)-OH (5 ммоль, 5 экв.) в присутствии DIPCDI (770 мкл, 5 ммоль, 5 экв.) и HOBt (770 мг, 5 ммоль, 5 экв.), используя DMF в качестве растворителя, в течение 1 часа. Затем промывали данную смолу, как описано в общих способах, и повторяли обработку для снятия защиты с Fmoc группы для включения следующей аминокислоты. Следуя описанным протоколам, последовательно подвергали сочетанию 3,09 г Fmoc-L-His(Trt)-OH (5 ммоль, 5 экв.) и 1,60 г Fmoc-βAla-OH (5 ммоль, 5 экв.) с присутствием при каждом сочетании 770 мг HOBt (5 ммоль, 5 экв.) и 770 мкл DIPCDI (5 ммоль, 5 экв.).

Снимали защиту с N-концевой Fmoc группы, как описано в общих способах, и обрабатывали пептидильную смолу в течение 30 мин 2,36 мл уксусного ангидрида (25 ммоль, 25 экв.) в присутствии 4,28 мл DIEA (25 ммоль, 25 экв.), используя в качестве растворителя DMF, промывали ее DMF (5×1 мин), DCM (4×1 мин), диэтиловым эфиром (4×1 мин) и сушили под вакуумом.

Получали полностью защищенный пептид [Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His(Trt)-OH] путем обработки пептидильной смолы, предварительно высушенной под вакуумом в присутствии КОН, 3%-ным раствором TFA в DCM в течение 5 мин. Собирали фильтраты на холодном диэтиловом эфире и повторяли данную обработку три раза. Эфирные растворы выпаривали на роторном испарителе досуха при комнатной температуре, осадок ресуспендировали в 50%-ном MeCN в H₂O и лиофилизировали. Полученный неочищенный продукт анализировали посредством HPLC в градиенте MeCN (+0,07% TFA) в H₂O (+0,1% TFA) от 5 до 95%, показывающей время удерживания 24,1 мин и чистоту более 88%. Его молекулярную массу определяли посредством ES-MS [(М+H)⁺ _{теоретическая} 1034,2, (М+Н)⁺ _эксп. 1034,0].

380 мг Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His(Trt)-OH (367 мкмоль) взвешивали в стеклянной колбе, добавляли 350 мг дециламина (3 экв.) и 30 мл безводного DMF. Добавляли 120 мкл DIPCDI (2 экв.), и давали ему реагировать при перемешивании магнитной мешалкой при 47°С. Ход реакции контролировали посредством HPLC по исчезновению Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His(Trt)-OH, которое было полным через 2,5 часа. Растворитель выпаривали досуха и дважды совместно выпаривали с DCM. Полученный остаток [Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His(Trt)-NH-(CH₂)₉-CH₃] ресуспендировали в 50 мл смеси TFA-DCM-анизол (49:49:2) и давали ему реагировать в течение 30 минут при комнатной температуре. Добавляли 250 мл холодного диэтилового эфира, выпаривали растворитель на роторном испарителе и проводили два дополнительных совместных выпаривания с диэтиловым эфиром. Остаток растворяли в 50%-ной смеси MeCN в H₂O и лиофилизировали.

Анализ посредством HPLC в градиенте MeCN (+0,07% TFA) в H₂O (+0,1% TFA) от 5 до 85% показал время удерживания 16,6 мин и чистоту более 71%. Его молекулярную массу определяли посредством ES-MS [(М+Н)⁺ _{теоретическая} 632,4, (М+Н)⁺ _эксп. 632,6].

ПРИМЕР 4

Получение Ac-βAla-His-Ser-His-OH

Пептид из Примера 4 получали, следуя тому же самому протоколу синтеза, что и в Примере 1 (количества, растворители, избытки и реагенты), но включая в качестве второй аминокислоты Fmoc-L-Ser(tBu)-OH (8,43 г, 22 ммоль) вместо Fmoc-L-Cys(Trt)-OH. Как только синтез завершался, смолу промывали DMF (5×1 мин), DCM (4×1 мин), диэтиловым эфиром (4×1 мин) и сушили под вакуумом.

Данный пептид выделяли из твердой подложки, следуя тому же самому протоколу синтеза, что и в Примере 1 (количества, растворители, избытки и реагенты).

Анализ посредством HPLC в градиенте MeCN (+0,07% TFA) в H₂O (+0,1% TFA) от 0 до 10% показал чистоту более 90%, и его молекулярную массу определяли посредством ES-MS [(М+H)⁺ _{теоретическая} 493,22, (M+H)⁺ _эксп. 493,2].

ПРИМЕР 5

Получение косметической композиции, содержащей Ac-βAla-His-Ser-His-OH

Следующую композицию получали, как описано в настоящем изобретении.

Масла, поверхностно-активные вещества и карбомеры взвешивали в достаточно большом реакторе. Пептид взвешивали в другом реакторе, растворяли его в воде и добавляли к нему консервант (Phenonip®). Раствор пептида выливали на раствор масла при постоянном энергичном перемешивании. Как только добавление было завершено, pH доводили до 6,5-7,0 триэтаноламином.

ИНГРЕДИЕНТ (Номенклатура INCI) % ПО МАССЕ КРОССПОЛИМЕР АКРИЛАТОВ/С10-30 АЛКИЛАКРИЛАТОВ 0,3 КАРБОМЕР 0,3 С12-15АЛКИЛБЕНЗОАТ 17,6 ЭТИЛГЕКСИЛКОКОАТ 2,4 ПОЛИАКРИЛАМИД, С13-14 ИЗОПАРАФИН, ЛАУРЕТ-7 1,0 ЖИДКОСТЬ (ВОДА) сколько необходимо до 100 PHENONIP^® 0,5 Ac-βAla-His-Ser-His-OH 0,01 ТРИЭТАНОЛАМИН 0,7

ПРИМЕР 6

Получение косметической композиции, содержащей Ac-βAla-His-Cys-His-OH

Следующую композицию получали, как описано в настоящем изобретении.

Масла, воски, силиконы и карбомеры взвешивали в достаточно большом реакторе. Данную смесь нагревали до 65-70°С для того, чтобы расплавить воски. Взвешивали в другом реакторе глицерин, ресуспендировали его в воде и консерванте (Phenonip®) и добавляли триэтаноламин. Данную смесь нагревали до 65-70°С при постоянном энергичном перемешивании посредством приложения сдвигающего усилия. Как только добавление было завершено, позволяли ей охлаждаться при медленном перемешивании, и, когда смесь достигала температуры 40°С, добавляли водный раствор Ac-βAla-His-Cys-His-ОН. Давали крему охладиться до комнатной температуры, и корректировали pH, если это было необходимо, триэтаноламином.

ИНГРЕДИЕНТ (Номенклатура INCI) % ПО МАССЕ МИНЕРАЛЬНОЕ МАСЛО 10,0 СТЕАРИНОВАЯ КИСЛОТА 3,0 ПЧЕЛИНЫЙ ВОСК 2,0 ДИМЕТИКОН 0,2 КАРБОМЕР 0,2 ГЛИЦЕРИН 3,0 ЖИДКОСТЬ(ВОДА) сколько необходимо до 100 PHENONIP^® 0,5 Ac-βAla-His-Cys-His-OH 0,005 ТРИЭТАНОЛАМИН 2,0

ПРИМЕР 7

Клиническое исследование косметической композиции, описанной в Примере 5, проведенное на 20 субъектах, имеющих мешки, образовавшиеся под глазами, показало, что данная композиция может уменьшить размер мешков, образовавшихся под глазами. Данных субъектов проинструктировали по поводу нанесения косметической композиции на участок под краем глаза мягкими массажными движениями один раз в сутки в течение двух месяцев. Объективные измерения степени гидратации кожи посредством корнеометра (Skinlab^®) и эластичности кожи посредством эластометра проводили в момент времени 0 и 15, 30 и 60 суток после начала обработки, и дерматолог также наблюдал за размером мешков под глазами.

Количественная оценка результатов показала 5,8%-ное увеличение индекса гидратации, а также 35%-ное повышение индекса эластичности через 60 суток обработки. Субъективная оценка дерматологом внешнего вида мешков под глазами согласно тесту Фридмана [Cristoni A. (2001) La significativitá del risultato sperimentale. Quali test usare? Cosmetic News 130, January/February рр.30-32] подтвердила, что у 70% добровольцев наблюдалось уменьшение мешков под глазами только через 15 суток, причем данный процент возрастал до 95% добровольцев после 60 суток лечения (у 30% слабое уменьшение, у 30% отчетливое уменьшение и у 35% значительное уменьшение).

Согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к пептиду общей формулы (I):

его стереоизомерам, его косметически и дермофармацевтически приемлемым солям и их смесям, где

- Х выбран из группы, образованной цистеинилом, серилом, треонилом и аминобутирилом;

- R₁ выбран из группы, образованной Н или алкильной, арильной, аралкильной и ацильной группой и,

- R₂ выбран из группы, образованной амино, гидрокси и тиолом, незамещенной или замещенной алифатическими или циклическими группами.

Согласно второму важному аспекту в пептиде общей формулы (I) R₁ предпочтительно представляет собой насыщенный или ненасыщенный, разветвленный или циклический, линейный С₂-С₂₄ацил.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) R₂ предпочтительно представляет собой амино или гидрокси, незамещенный или замещенный насыщенными или ненасыщенными, разветвленными или циклическими, линейными алифатическими C₁-С₂₄группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) X предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой Н, и R₂ представляет собой амино, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) X предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой ацетил, и R₂ представляет собой амино, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) X предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой пальмитоил, и R₂ представляет собой амино, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) X предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой Н, и R₂ представляет собой гидрокси, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) X предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой ацетил, и R₂ представляет собой гидрокси, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно важному аспекту данного изобретения в пептиде общей формулы (I) Х предпочтительно представляет собой L-серил, R₁ представляет собой пальмитоил, и R₂ представляет собой гидрокси, незамещенный или замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к способу получения пептида общей формулы (I), основанному на твердофазном синтезе пептидов.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к способу получения пептида общей формулы (I) с использованием защитных групп, выбранных из группы, образованной Fmoc/трет-бутилом, Fmoc/тритилом и Fmoc/аллилом.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или дермофармацевтической композиции, содержащей косметически или дермофармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида формулы (I) и по меньшей мере один косметически или дермофармацевтически приемлемый эксципиент или адъювант.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или дермофармацевтической композиции, содержащей пептид общей формулы (I), включенный в косметически или дермофармацевтически приемлемый носитель, выбранный из группы, образованной липосомами, милликапсулами, микрокапсулами и нанокапсулами, губками, миллисферами, микросферами, наносферами, милличастицами, микрочастицами и наночастицами.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или дермофармацевтической композиции, представленой в виде препарата, выбранного из группы, образованной эмульсиями "масло в воде", эмульсиями "вода в масле", кремами, разными видами молочка, лосьонами, гелями, мазями, жидкими мазями, сыворотками, муссами, бальзамами, пенами, маслами для тела, мылами, кусками мыла, карандашами и спреями.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или дермофармацевтической композиции, содержащей пептид общей формулы (I), включенный в твердые подложки, выбранные из группы, образованной салфетками, гидрогелями, пластырями и масками для лица.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или дермофармацевтической композиции, содержащей пептид общей формулы (I), включенный в продукты серии для макияжа, выбранные из группы, образованной маскирующими кремами, тональными кремами, лосьонами и лосьонами для удаления макияжа.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к применению пептида формулы (I) в изготовлении косметической или дермофармацевтической композиции для лечения кожи.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к применению пептида формулы (I) в изготовлении косметической или дермофармацевтической композиции для лечения кожи лица.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к применению пептида формулы (I) в изготовлении косметической или дермофармацевтической композиции для уменьшения или устранения мешков, образующихся под нижним краем глаз.

Изобретение относится к пептидам, имеющим общую формулу (I), и к их косметически или дермофармацевтически приемлемым солям, где Х выбран из группы, образованной цистеинилом, серилом, треонилом и аминобутирилом; R₁ выбран из группы, образованной Н или насыщенной линейной С₂-С₂₄ацильной группой; R₂ выбран из группы, образованной аминогруппой, которая возможно замещена C₁-C₂₄алкилом, или гидроксигруппой. Также изобретение относится к способу получения указанных пептидов, к их косметическим или дермофармацевтическим композициям, предназначенным для уменьшения или устранения мешков, образующихся под глазами. 4 н. и 8 з.п. ф-лы.

1. Пептид общей формулы (I):

его косметически и дермофармацевтически приемлемые соли, характеризующийся тем, что
Х выбран из группы, образованной цистеинилом, серилом, треонилом и аминобутирилом;
R₁ выбран из группы, образованной Н или насыщенной линейной C₂-C₂₄ацильной группой;
R₂ выбран из группы, образованной аминогруппой, которая возможно замещена C₁-C₂₄алкилом, или гидроксигруппой.

2. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой Н, и R₂ представляет собой амино, возможно замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

3. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой ацетил, и R₂ представляет собой амино, возможно замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

4. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой пальмитоил, и R₂ представляет собой амино, возможно замещенный метильной, или этильной, или додецильной, или гексадецильной группами.

5. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой Н, и R₂ представляет собой гидрокси.

6. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой ацетил, и R₂ представляет собой гидрокси.

7. Пептид по п.1, характеризующийся тем, что Х представляет собой L-Ser, R₁ представляет собой пальмитоил, и R₂ представляет собой гидрокси.

8. Способ получения пептида общей формулы (I) по любому из пп.1-7, характеризующийся тем, что его проводят в твердой фазе.

9. Способ получения пептида общей формулы (I) по п.8, характеризующийся тем, что в нем используют защитные группы, выбранные из группы, образованной Fmoc/mpem-бутилом, Fmoc/тритилом и Fmoc/аллилом.

10. Косметическая или дермофармацевтическая композиция для уменьшения или устранения мешков, образующихся под нижним краем глаз, характеризующаяся тем, что она содержит косметически или дермофармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида формулы (I) по любому из пп.1-7 и по меньшей мере один косметически или дермофармацевтически приемлемый эксципиент или адъювант.

11. Косметическая или дермофармацевтическая композиция по п.10, характеризующаяся тем, что она содержит препарат, выбранный из группы, образованной эмульсиями "масло в воде" и эмульсиями "вода в масле".

12. Применение пептида формулы (I) по любому из пп.1-7 в изготовлении косметической или дермофармацевтической композиции для уменьшения или устранения мешков, образующихся под нижним краем глаз.