ПЕПТИДЫ, ИНГИБИРУЮЩИЕ НЕЙРОННЫЙ ЭКЗОЦИТОЗ Российский патент 2012 года по МПК C07K14/705 C07K14/47 C07K7/06 C07K7/08 A61K8/64 A61Q19/08 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к пептидам, которые могут регулировать нейронный экзоцитоз, и к косметическим или фармацевтическим композициям, содержащим указанные пептиды, пригодным для лечения состояний, требующих регулирования нейронного экзоцитоза, таких как, например, мышечная спастичность, асимметрия лица и/или морщины на лице, предпочтительно мимические морщины.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Одними из самых видимых признаков человеческого старения являются изменения, затрагивающие кожу: сухость, появление пятен, вялость и морщины. Эти эффекты могут быть вызваны внешними агентами, такими как, например, постоянное воздействие солнца, атмосферное загрязнение или контакт с химическими агентами, присутствующими в очищающих продуктах, а также они являются результатом внутренних физиологических, биохимических и гистологических изменений человеческого организма, связанных с уменьшением синтеза белков, таких как коллаген или эластин, с увеличением протеолиза, и с общим разрушением кожного барьера, соединительной ткани и когезии.

Различные активные ингредиенты были описаны для предотвращения и уменьшения симптомов старения, такие как, например, ретиноиды, гидроксикислоты, флавоноиды или производные витаминов С и Е. Указанные соединения обычно действуют, улучшая гидратацию кожи, увеличивая обновление клеток или предотвращая дегенерацию ткани, образующей кожу;

однако их эффективность в предупреждении и лечении лицевых морщин, вызванных мышечным сокращением, ограничена. Основанием или механизмом появления мимических морщин на лице является напряжение эпидермальных мышц внутри кожи. Это мышечное напряжение представляет собой результат гиперактивности нервов, иннервирующих мимические мышцы. Гиперактивность нервов характеризуется неконтролируемым и избыточным высвобождением нейротрансмиттеров, возбуждающих мышечные волокна. С другой стороны, молекулы, регулирующие нейронный экзоцитоз, способствуют релаксации мышечного напряжения и, соответственно, элиминации лицевых морщин.

Поэтому существует потребность в разработке новых активных ингредиентов с доказанной эффективностью для изготовления косметической или фармацевтической композиции для регулирования нейронного экзоцитоза и, таким образом, для лечения мышечной спастичности и уменьшения и/или устранения асимметрии лица и/или лицевых морщин, особенно мимических морщин.

Мимические морщины представляют собой морщины, появляющиеся в результате напряжения мимических мышц, ответственных за мимику на коже лица. Мимические морщины обычно располагаются на лбу, в пространстве между бровями, вокруг рта и/или вокруг глаз. В зависимости от формы лица, частоты смены выражений и наличия тиков (конвульсивные часто повторяющиеся движения, вызванные непроизвольным сокращением одной или нескольких мышц, в данном случае мимических мышц), мимические морщины могут появиться даже во время пубертатного периода. Внешние факторы, такие как воздействие солнца, усиливают их глубину и проявление.

Токсины ботулизма широко используются для уменьшения и/или устранения мимических морщин, особенно серотипа А (косметический препарат ВОТОХ^®, Allergan Inc.) [Canvthers J.D. and Carruthers J.A. (1992) "Treatment of glabellar frown lines with C. botulinum-A exotoxin" J. Dermatol. Surg. Oncol. 18, IT-21; Mendez-Eastman S.K. (2003) "Botox: a review" Plast. Surg. Nurs. 23, 64-69J. Терапевтическое и косметическое лечение препаратом ВОТОХ^® состоит из локализованной инъекции разбавленных фармацевтических препаратов (комплекс ботулинический токсин типа А - гемагглютинин, 500 кДа) в участки, где локализовано мышечное напряжение. Паралитические эффекты токсина являются обратимыми со средней длительностью в 6 месяцев [Jankovic J. and Вrin F.М. (1991) "Therapeutic uses of botulinum toxin" New Engl. J. Med. 324, 1186-1194; Jankovic J. (1994) "Botulmum toxin in movement disorders" Curr. Opm. Neurol. 6, 358-366]. Лечение поэтому требует повторных инъекций ботулинического токсина. Основная проблема этого лечения состоит в возможности запуска иммунной реакции против фармацевтического препарата вследствие того, что его молекулы могут быть распознаны иммунной системой пациента. Появление антител против ботулинического токсина представляет собой серьезную проблему, поскольку оно заметно снижает эффективность лечения [Jankovic J. and Brin F.M. (1991) "Therapeutic uses of botulinum toxin" New Engl. J. Med. 324, 1186-1194; Jankovic J. (1994) "Botulinum toxin in movement disorders" Curr. Opin. Neurol. 6, 358-366; Jankovic J. and Brin M.F. (1997) "Botulinum toxin: historical perspective and potential new indications" Muscle Nerve Suppl. 6, S129-S145; Davis L.E. (1993) "Botulinum toxin-from poison to medicine" West J. Med. 128, 25-28; Hughes A.J. (1994) "Botulinum toxin in clinical practise" Drugs 48, 888-893; Hambleton P. (1992) "Clostridium botulinum toxins a general review of involvement in disease, structure, mode of action and preparation for clinical use" J. Neurol. 239, 16-20; Borodic G.E. and Pearces L.B. (1994) "New concepts in botulinum toxin therapy" Drug Safety 11, 145-152; Brin M.F., Blitzer A., Stewart C., Pine Z., Borg-Stein J., Miller J; Nagalapura N.S. and Rosenfeld D.B. (1993) "Disorders with excessive muscle contraction: Candidates for treatment with intramuscular botulinum toxin (BoTox^®)" Botulinum and Tetanus Neurotoxins (Ed. B.R. DasGupata), 559-576]. Такая потеря эффективности лечения с помощью BOTOX^® влечет за собой необходимость увеличения концентрации препарата при последующих обработках, что, в свою очередь, вызывает усиление иммунного ответа. В качестве альтернативы лечению ботулиническим токсином серотипа А рассматривается применение других серотипов ботулинических токсинов, таких как BoTox В, BoTox F и BoTox E. Однако использование фармацевтических препаратов с другими серотипами нельзя считать решением проблемы, потому что рано или поздно иммунная реакция может появиться снова. Кроме того, лечение ботулиническими токсинами является дорогим, главным образом из-за лабильности и нестабильности содержащих их фармацевтических препаратов.

Поэтому существует острая необходимость в разработке молекул, имитирующих паралитические эффекты ботулинических токсинов, но имеющих более простые и стабильные молекулярные структуры, которые не индуцируют иммунные реакции, и стоимость получения которых является рентабельной. Молекулы пептидной природы соответствуют этим требованиям.

На молекулярном уровне ботулинические токсины представляют собой протеазы, разрушающие нейронные белки, которые вовлечены в механизм активизируемого ионами кальция экзоцитоза [Schiavo G., Rossetto О. and Montecucco С. (1996) "Bases Moleculares del tetanos у del botulismo" Investigacion у Ciencia 234, 46-55; Montecucco С. and Schiavo G. (1994) "Mechanism of action of tetanus and botulinum neurotoxins" Mol. Microbiol. 13, 1-8; Schiavo G., Rosetto O., Benfenati F., Poulain B. and Montecucco, C. (1994) "Tetanus and botulinum neurotoxins are zinc proteases specific for components of the neuroexocytosis apparatus" Ann. NY Acad. Sci. 710, 65-75J. Например, ботулинический токсин А, наиболее часто используемый в клинической практике и косметике в плане его применения для устранения лицевых морщин и асимметрии лица и для того, чтобы ослабить симптоматологию бронхиальных заболеваний, укорачивает нейронный белок SNAP-25. Этот белок SNAP-25 играет важную роль в нейросекреции, поскольку он вовлечен в формирование белкового комплекса (известного как SNARE или комплекс слияния), направляющего и контролирующего высвобождение ацетилхолина, накопленного в везикулах. Ядро указанного слитого комлекса сформировано синтаксином и белками SNAP-25, расположенными в пресинаптической плазматической мембране, и синаптобревином или белком VAMP, локализованными в плазматической мембране везикул [Calakos N. and Scheller R.H. (1996) "Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description" Physiol. Rev. 76, 1-29; Sutton R.B., Fasshauer D., Jahn R. and Brunger A.T. (1998) "Crystal structure of a SNARE complex involved in synaptic exocytosis at 2.4Å resolution" Nature 395, 347-3537. Основная функция комплекса слияния заключается в перемещении везикулы, нагруженной нейротрансмиттером (ацетилхолином), к пресинаптической плазматической мембране и приведение ее в контакт с ней [Calakos N. and Scheller R.H. (1996) "Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description" Physiol. Rev. 76, 1-29; Sutton R.B., Fasshauer D., Jahn R. and Brunger A.T. (1998) "Crystal structure of a SNARE complex involved in synaptic exocytosis at 2.4Å resolution" Nature 395, 347-353]. В ответ на повышение концентрации кальция происходит слияние обеих плазматических мембран, вызывая высвобождение нейротрансмиттера. Указанное слияние везикул и заякоривающего белкового комплекса SNARE, таким образом, является главной мишенью для контролирования нейросекреции. Усечение любого из белков, формирующих комплекс слияния, предотвращает его сборку и тем самым ингибирует везикулярное высвобождение и регулирует нейронный экзоцитоз.

Аналогично, были также описаны синтетические пептиды, полученные в соответствии с рациональным дизайном или путем анализа синтетических химических библиотек, которые могут воздействовать на формирование комплекса SNARE, ингибируя нейронный экзоцитоз [Blanes-Mira С., Pastor M. Т., Valera E., Fernández-Ballester G., Merino J.M., Gutierrez L.M., Perez-Paya E. and Ferrer-Montiel A. (2003) "Identification of SNARE complex modulators that inhibit exocytosis form an α-helix-constrained combinatorial library" Biochem J. 375, 159-166].

Промышленное применение этого типа соединений было ограничено. В косметической промышленности были затрачены значительные усилия для разработки соединений, имитирующих воздействие ботулинических токсинов, с исключительным использованием в лечении и предупреждении образования мимических морщин [Blanes-Mira С., Clemente J., Jodas G., Gil A., Fernández-Ballester G., Ponsati В., Gutierrez L.M., Perez-Paya E. and Ferrer-Montiel, A. (2002) "A synthetic hexapeptide (Argireline^®) with anti-wrinkle activity" Int. J. Cosmetic Res. 24, 303-310]. Более конкретно, в патенте ЕР 1,180,524 Lipotec, S.A., описаны пептиды, полученные из амино-концевого фрагмента белка SNAP-25, обладающие действием против появления морщин, а в международной заявке на патент WO 97/34620 также описаны пептиды, полученные из аминокислотной последовательности белка SNAP-25, конкретно из его карбоксиконцевой области, или из синаптобревина, или из синтаксина, которые могут ингибировать нейронный экзоцитоз.

Ни один из патентов, описанных выше, не относится к необратимо химически модифицированным производными белка SNAP-25 в качестве регулирующих агентов нейронного экзоцитоза. Патент ЕР 1,180,524 описывает потенциально обратимые химические модификации пептидов аминоконцевого фрагмента белка SNAP-25 для целей увеличения его биодоступности и легкости проникновения через гематоэнцефалический барьер и эпителиальную ткань, такие как этерификация боковых цепей аспарагиновых и глутаминовых остатков, которые впоследствии будут разрушены in vivo внутриклеточными эстеразами с высвобождением немодифицированного пептида, отвечающего за биологическую активность. Неожиданно автор настоящего изобретения обнаружил, что химически необратимые модификации амино- и карбоксильных концов указанных пептидов не только придают им большую устойчивость против разрушения внутриклеточными протеазами, обеспечивая тем самым большую длительность их действия в качестве регуляторов нейронного экзоцитоза, но, что удивительно, они также могут увеличивать их эффективность in vitro в 2-30 раз относительно эффективности соответствующего немодифицированного пептида.

Модификация белков липидными цепями описана как необратимая модификация, когда она осуществлена на аминогруппах, присутствующих в их последовательностях, либо по их аминоконцу или в боковых цепях остатков лизина, и считается обратимой, когда она осуществлена на тиольных группах остатков цистеина, поскольку такой модифицированный пептид или белок гидролизуются in vivo соответствующими тиоэстеразами [Маgее A.I. (1990) "Lipid modification of proteins and its relevance to protein targeting" J. Cell Sci. 97, 581-584; Mumby S.M. (1997) "Reversible palmitoylation of signaling proteins" Curr. Opin. Cell Вiоl. 9, 148-154]. В уровне техники описаны примеры необратимых модификаций пептидов производными цепей жирных кислот с целью повышения их эффективности in vivo путем усиления их проникновения через кожу [Lintner К. and Peschard О. (2000) "Biologically active peptides: from a laboratory bench curiosity to a functional skin care product" Int. J. Cosmet. Sci. 22, 207-218] или достижения лучшего иммунологического ответа для их разработки в качестве потенциальных вакцин [Gahery H., Choppin J., Bourgault I., Fischer E., Maillere B. and Guillet J.G. (2005) "HIV preventive vaccine research at the ANRS: the lipopeptide vaccine approach" Therapie 60, 243-248], а также для того, чтобы индуцировать больший цитотоксический эффект в отношении бактерий [Eisenstein B.I. (2004) "Lipopeptides, focusing on daptomycin, for the treatment of Gram-positive infections" Expert Opin. Investig. Drugs 13, 1159-1169] или грибов [Avrahami D. and Shai Y. (2004) "A New Group of Antifungal and Antibacterial Lipopeptides Derived from Non-membrane Active Peptides Conjugated to Palmitic Acid" J. Biol. Chem. 279, 12277-12285]. Этот тип модификаций не всегда приводит к изменению эффективности in vitro указанных пептидов; например, пальмитоилирование трипептида GHK (глицил-L-гистидил-L-лизин) не изменяет его способность индуцировать синтез коллагена в фибробластах [Lintner К. and Peschard О. (2000) "Biologically active peptides: from a laboratory bench curiosity to a functional skin care product" Int. J. Cosmet. Sci. 22, 207-218], таким образом, специалист в данной области техники на момент создания настоящего изобретения не мог бы предсказать, увеличит, уменьшит или оставит без изменения эффективность in vitro модификация пептида группой углеводорода по сравнению с соответствующим немодифицированным пептидом.

Примеры, существующие в уровне техники, описывают модификации пептидов и белков с целью улучшения их фармакологических свойств распределения и элиминирования и, таким образом, улучшения их in vivo биологической активности без изменения их биологической активности in vitro, но никоим образом не предполагают, что потенциальное ПЭГлирование может увеличить биологическую активность белка in vitro, скорее напротив, описаны примеры, такие как в случае ПЭГлированного интерферона, где активность in vitro уменьшается по сравнению с активностью нативного интерферона [Rajender Reddy K., Modi M.W. and Redder S. (1992) "Use of peginterferon alfa-2a (40 KD) (Pegasys) for the treatment of hepatitis C" Adv. Drug Deliv. Rev. 54(4), 571-86].

Неожиданно настоящее изобретение показывает, что необратимая химическая модификация пептидных последовательностей, полученных из белка SNAP-25, может увеличить эффективность указанных последовательностей в отношении ингибирования нейронного экзоцитоза. Нет никакого указания в уровне техники, что указанные модификации должны увеличивать ингибиторный эффект указанных пептидов, поэтому специалист не мог бы сделать вывод относительно природы необходимых модификаций пептидов для увеличения их способности ингибировать нейронный экзоцитоз.

Настоящее изобретение, таким образом, представляет собой новое решение существующих потребностей, включая открытие необратимо химически модифицированных пептидных последовательностей, полученных из белка SNAP-25, которые могут ингибировать нейронный экзоцитоз более эффективным и длительным образом, чем соответствующие немодифицированные пептиды, которые уже известны в уровне техники.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение представляет собой простое, эффективное и надежное решение для регулирования нейронного экзоцитоза, включающее использование в организме млекопитающего композиции, содержащей по меньшей мере один пептид, имеющий аминокислотную последовательность, полученную из аминокислотной последовательности белка SNAP-25, и который необратимо химически модифицирован по его амино- и/или карбоксильному концам.

Таким образом, первый аспект изобретения относится к пептиду, который может регулировать нейронный экзоцитоз, согласно общей формуле (I):

R₁-AA-R₂

(I)

его стереоизомерам и его рацемическим или нерацемическим смесям, и его косметически или фармацевтически приемлемым солям, где

АА представляет собой последовательность 3-40 соседних

аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности SEQ ID No.1;

R₁ выбран из группы, состоящей из Н или алкильной, арильной, аралкильной или ацильной группы;

и R₂ выбран из группы, состоящей из амино, гидроксила или тиола, незамещенных или замещенных алифатическими или циклическими группами;

при условии, что когда R₁ представляет собой Н или ацетил, тогда R₂ не представляет собой незамещенный амино, гидроксил или тиол.

Предпочтительными структурами пептидов, показанных в общей формуле (I), являются структуры, в которых

R₁ представляет собой Н или ацетил, либо насыщенную или ненасыщенную, линейную, разветвленную или циклическую С₃-С₂₄ацильную группу или полиэтиленгликолевый полимер;

R₂ представляет собой амино или гидроксил, возможно замещенный насыщенной или ненасыщенной, линейной, разветвленной или циклической C₁-C₂₄ алифатической группой;

при условии, что, когда R₁ представляет собой Н или ацетил, R₂ не является незамещенным амино или гидроксилом.

Более предпочтительными структурами являются структуры, в которых полиэтиленгликолевый полимер представляет собой

где n может варьировать от 1 до 100, и более предпочтительно он может варьировать между 1 и 5.

Дополнительно, предпочтительными являются структуры, в которых R₁ представляет собой ацильную группу формулы СН₃-(СН₂)_m-СО-, где m может варьировать между 1 и 22.

Пептиды по настоящему изобретению могут существовать в виде стереоизомеров или смесей стереоизомеров; например, образующие их аминокислоты могут иметь L-, D-конфигурацию или могут быть рацемическими независимыми друг от друга. Поэтому возможно получить смеси изомеров, а также рацематы или смеси диастереомеров, либо чистые диастереоизомеры или энантиомеры, в зависимости от числа асимметрических атомов углерода, где присутствуют изомеры или смеси изомеров. Предпочтительные структуры пептидов по изобретению представляют собой чистые изомеры, то есть энантиомеры или диастереоизомеры.

В контексте настоящего изобретения термин "алифатическая группа" относится к насыщенной или ненасыщенной, линейной или циклической группе.

Термин "углеводородная группа" использован в настоящем изобретении как охватывающий, например, алкильные, алкенильные или алкинильные группы.

Термин "алкильная группа" относится к насыщенной, линейной или разветвленной углеводородной группе, включая, например, метил, этил, изопропил, изобутил, mpem-бутил, гептил, додецил, гексадецил, октадецил, амил, 2-этилгексил, 2-метилбутил, 5-метилгексил и т.п..

Термин "алкенильная группа" относится к ненасыщенной, линейной или разветвленной углеводородной группе с одной или более углерод-углеродными двойными связями, такой как винильная группа.

Термин "алкинильная группа" относится к ненасыщенной, линейной или разветвленной углеводородной группе с одной или более углерод-углеродными тройными связями.

Термин "циклическая группа" относится к замкнутому углеводородному кольцу, которое может быть классифицировано как алициклическая, ароматическая или гетероциклическая группа.

Термин "алициклическая группа" относится к циклической углеводородной группе со свойствами, сходными с алифатическими группами.

Термин "ароматическая группа" или "арильная группа" относится к моно- или полициклической ароматической углеводородной группе.

Термин "гетероциклическая группа" относится к замкнутому углеводородному кольцу, в котором один или более атомов кольца представляет собой элемент, иной нежели углерод (например, азот, кислород, сера и т д.).

Термин "полиэтиленгликолевый полимер" относится к замещенным или незамещенным углеводородным цепям, содержащим повторяющиеся звенья группы -СН₂СН₂O-.

Как понимается в этой области техники, существование высокой степени замещения является не только допустимым, но рекомендованным. Поэтому в пептидах по настоящему изобретению могут присутствовать замещения. С целью упрощения настоящего описания изобретения термины "группа" и "блок" будут использованы для того, чтобы дифференцировать химические группировки, допускающие возможность замещения, либо которые могут быть замещены ("группа"), и те, которые не допускают возможность замещения, либо которые не могут быть замещены ("блок"). Таким образом, когда термин "группа" используют для описания химического заместителя, описанный химический материал включает как незамещенную группу, так и группу, содержащую атомы О, N или S.

С другой стороны, когда термин "блок" используют для описания химического соединения или заместителя, в него может быть включен только незамещенный химический материал. Например, выражение "алкильная группа" включает не только насыщенные алкильные заместители с открытой цепью, такие как метил, этил, пропил, изобутил и т.п., но также и алкильные заместители, содержащие другие заместители, известные в уровне техники, такие как гидроксил, алкоксил, амино, карбоксил, карбоксамид, атомы галогенов, циано, нитро, алкилсульфонил и другие. Таким образом, "алкильная группа" включает простую эфирную, галогеноалкильную, спиртовую, тиольную, карбоксильную, аминную, гидроксиалкильную, сульфоалкильную, гуанидиновую и другие группы. С другой стороны, выражение "алкильный блок" включает только насыщенные алкильные заместители с открытой цепью, такие как метил, этил, пропил, изобутил и т.п.

В контексте настоящего изобретения "аминокислотная последовательность, полученная из аминокислотной последовательности белка SNAP-25" означает любую аминокислотную последовательность или фрагмент, содержащийся в аминокислотной последовательности белка SNAP-25, определенной как SEQ ID No. 1, или любую аминокислотную последовательность, отличающуюся от последовательности, содержащейся в SEQ ID No. 1, мутацией, вставкой, делецией или заменой по меньшей мере одной аминокислоты либо вырожденностью генетического кода, при условии, что она соответствует пептиду, имеющему активность белка SNAP-25. Мутации, вставки или замены могут быть осуществлены посредством генетически кодируемых аминокислот или посредством некодируемых аминокислот, природных или синтетических, таких как, например, но без ограничения ими, цитруллин, орнитин, саркозин, дезмозин, норвалин, 4-аминомасляная кислота, 2-аминомасляная кислота, 2-аминоизомасляная кислота, 6-аминогексановая кислота, 1-нафтилаланин, 2-нафтилаланин, 2-аминобензойная кислота, 4-аминобензойная кислота, 4-хлорфенилаланин, 2,3-диаминопропионовая кислота, 2,4-диаминомасляная кислота, циклосерин, карнитин, цистин, пеницилламин, пироглутаминовая кислота, тиенилаланин, гидроксипролин, алло-изолейцин, алло-треонин, изонипекотиновая кислота, изосерин, фенилглицин, статин, β-аланин, норлейцин, N-метиламинокислоты, β-аминокислоты или γ-аминокислоты, а также их производные. Список синтетических аминокислот может быть найден в статье "Unusual amino acids in peptide synthesis" by Roberts D.C. and Vellaccio F., in The Peptides, Vol.5 (1983), Chapter VI, Gross E. and Meienhofer J., Eds, Academic Press, New York, USA, или в коммерческих каталогах компаний, специализирующихся в этом секторе, таких как, например, NeoMPS, Bachem, Novabiochem, Sigma-Aldrich, Peptides International, Advanced ChemTech, Chem-lmpex, Maybridge Chemical, Chirotech Technology, Peninsula Laboratories или RSP Amino Acid Analogues, среди прочего.

Из числа пептидов по изобретению, полученных из аминокислотной последовательности SNAP-25, определенной SEQ ID No. 1 и химически модифицированной необратимым образом, предпочтительными являются последовательности, которые имеют аминокислотную последовательность, содержащуюся в последовательности аминоконцевой области белка SNAP-25, определенной SEQ ID No. 2, или карбоксиконцевой области белка SNAP-25, определенной SEQ ID No. 3, более предпочтительно содержащуюся в области, находящейся между остатками 10-22, определенной SEQ ID No. 4, или содержащуюся в области, находящейся между остатками 25-40, определенной SEQ ID No. 5, или содержащуюся в области, находящейся между остатками 65-81, определенной SEQ ID No. 6, или содержащуюся в области, находящейся между остатками 181-206, определенной SEQ ID No. 7, более конкретно содержащуюся в области, находящейся между остатками 12-19, определенной SEQ ID No. 8, или содержащуюся в области, находящейся между остатками 26-38, определенной SEQ ID No. 9, или содержащуюся в области, находящейся между остатками 68-79, определенной SEQ ID No. 10 SEQ, и, конкретно, содержащуюся в области, находящейся между остатками 12-17, определенной SEQ ID No. 11.

Изобретение также включает пептиды, которые являются по существу гомологичными необратимо химически модифицированным пептидам, полученным из аминокислотной последовательности белка SNAP-25. Под "по существу гомологичными пептидами" понимают аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 60%, предпочтительно на 80% и более предпочтительно на 95% идентичны последовательности SEQ ID No. 1. "Процент идентичности" относится к проценту аминокислот, которые идентичны между двумя аминокислотными последовательностями, которые сравниваются после оптимального выравнивания этих последовательностей, где указанный процент является лишь статистическим, и различия между двумя аминокислотными последовательностями случайным образом распределены по последовательности. Под "оптимальным выравниванием" понимают выравнивание аминокислотных последовательностей, дающее больший процент идентичности. Процент идентичности рассчитывается путем определения числа идентичных положений, в которых аминокислота идентична в двух сравниваемых последовательностях, деления числа идентичных положений на число сравниваемых положений и умножения полученного результата на 100 для получения процента идентичности между этими двумя последовательностями. Сравнение последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями может быть выполнено вручную или посредством компьютерных программ, таких как алгоритм BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), к которому можно получить доступ через Интернет на вебсайте http://www.ncbi nim nlm.gov/BLAST/.

Косметически или фармацевтически приемлемые соли пептидов, предложенных в соответствии с этим изобретением, включены в рамки настоящего изобретения. Термин "косметически или фармацевтически приемлемые соли" включает соли, обычно используемые для получения солей с металлами или солей присоединения кислот, либо солей присоединения органических кислот (таких как, например, ацетат, цитрат, олеат, трифторацетат, оксалат или глюконат) либо солей присоединения неорганических кислот (таких как, например, хлорид, сульфат, борат или карбонат). Природа соли не важна при условии, что она является косметически или фармацевтически приемлемой. Косметически или фармацевтически приемлемые соли пептидов по изобретению могут быть получены обычными способами, которые известны из уровня техники.

Синтез пептидов по изобретению может быть осуществлен обычными способами, известными из уровня техники, такими как, например, варианты способов твердофазного пептидного синтеза [Stewart J.M. and Young J.D. (1984) "Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd edition", Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois. Bodanzsky M. and Bodanzsky A. (1984) "The practice of Peptide Synthesis", Springer Verlag, New York; Lloyd-Williams, P., Albericio, F. and Giralt, E. (1997) "Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptides and Proteins" CRC, Boca Raton (FL, USA)], синтез в растворе, комбинация твердофазного синтеза и методов синтеза в растворе или методов ферментативного синтеза [Kullmann W. (1980) "Proteases as catalysts for enzymic syntheses ofopioid peptides" J. Biol.Chem. 255, 8234-8238]. Пептиды могут также быть получены ферментацией бактериального штамма, который является немодифицированным или модифицирован методами генной инженерии для получения желательных последовательностей, или посредством контролируемого гидролиза белков животного или растительного происхождения, предпочтительно растительного происхождения, который высвобождает фрагменты пептида, содержащие по меньшей мере желательную последовательность.

Например, способ получения пептидов по изобретению представляет собой способ, при котором фрагмент пептида по изобретению, имеющий свободную карбоксильную группу или ее реакционноспособное производное, подвергают взаимодействию с дополнительным фрагментом, имеющим аминогруппу с по меньшей мере одним свободным атомом водорода с последующим образованием амидной связи, где функциональные группы указанных фрагментов, которые не принимают участия в образовании амидной связи, если они присутствуют, удобным образом защищены временными или перманентными защитными группами.

Другой пример способа получения пептидов по изобретению представляет собой способ, при котором фрагмент пептида по изобретению, содержащий уходящую группу, такую как, например, тозил, метилсульфонил и группы галогенов, подвергают взаимодействию с дополнительным фрагментом, имеющим аминогруппу с по меньшей мере одним свободным атомом водорода посредством реакции нуклеофильного замещения, где функциональные группы указанных фрагментов, которые не принимают участия в образовании связи N-С, если они присутствуют, удобным образом защищены временными или перманентными защитными группами. Примеры защитных групп, их введение и удаление описаны в литературе [Greene T.W. (1981) "Protective groups in organic synthesis" John Wiley & Sons, New Cork; Atherton B. and Sheppard R.C. (1989) "Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach" IRL Oxford University Press]. Термин "защитные группы" также включает полимерные подложки, используемые в твердофазном синтезе.

Пептиды по изобретению могут вводиться для регулирования нейронного экзоцитоза каким-либо образом, обеспечивающим контакт соединений с сайтом его действия в теле млекопитающего, предпочтительно человека, в форме, содержащей их композиции. В этом смысле изобретение предлагает косметическую или фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере один пептид общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемые соли. Указанные композиции могут быть получены посредством обычных способов, известных специалистам в данной области техники.

Пептиды по изобретению используют в косметической или фармацевтической композиции по настоящему изобретению в косметически или фармацевтически эффективных концентрациях для достижения желательного эффекта; предпочтительно между 0,00000001% (по массе) и 20% (по массе); предпочтительно между 0,00001% (по массе) и 10% (по массе) и более конкретно между 0,0001% (по масе) и 5% (по массе).

Пептиды по настоящему изобретению имеют различную растворимость в воде в зависимости от природы их последовательности или имеющихся в них модификациях по амино- и карбокситерминальным концам. Пептиды, которые не растворимы в воде, могут быть солюбилизированы в обычных косметически или фармацевтически приемлемых растворителях, таких как, например, этанол, пропанол или изопропанол, пропиленгликоль, глицерин, бутиленгликоль или полиэтиленгликоль.

Фармацевтически эффективное количество пептидов и/или фармацевтических композиций согласно изобретению, которое должно быть введено для лечения патологических состояний, так же как и их дозировка, будет зависеть от ряда факторов, включая возраст, состояние пациента, серьезность нарушения или заболевания, способ и частоту введения и от конкретных пептидов, которые будут применяться.

Фармацевтические композиции, содержащие пептиды по изобретению, могут иметь любую форму для введения, например, твердую или жидкую, и могут быть введены любым подходящим путем, например перорально, интраназально, парентерально, ректально, местно или трансдермально, для чего они будут включать необходимые фармацевтические эксципиенты для изготовления желательной формы введения. В контексте настоящего изобретения термин "перентеральный" включает подкожные, кожные, внутрисосудистые инъекции, такие как, например, внутривенные, внутримышечные, во внутримозговой канал, внутричерепные, внутрисуставные, внутриоболочковые и интраперитонеальные инъекции, так же как любые другие подобные методики инъекции или инфузии. Обзор различных фармацевтических форм введения лекарственных продуктов и необходимых эксципиентов для их изготовления может быть найден, например, в "Tratado de Farmacia Galenica", C. Fault i Trillo, 1993, Luzan 5, S.A. Ediciones, Madrid.

Пептиды по изобретению могут также быть включены в косметические или фармацевтические системы с замедленным высвобождением и/или системы носителей, такие как липосомы, милличастицы, микрочастицы и наночастицы, губки, везикулы, мицеллы, миллисферы, микросферы и наносферы, липосферы, милликапсулы, микрокапсулы и нанокапсулы, а также в микроэмульсии и наноэмульсии, с целью достижения лучшего проникновения активного ингредиента и/или улучшения его фармакокинетических и фармакодинамических свойств. Препараты с контролируемым высвобождением могут быть получены посредством способов, известных в уровне техники, и могут быть введены посредством, например, местного введения, включая адгезивные пластыри, или перорально, ректально или подкожной имплантацией, либо прямой имплантацией в конкретную часть тела, и должны предпочтительно высвобождать относительно постоянное количество пептидов по изобретению. Количество пептида, содержащегося в препарате с контролируемым высвобождением, будет зависеть от, например, сайта введения, кинетики и длительности высвобождения пептида по изобретению, а также от природы состояния, которое лечат или предупреждают.

Пептиды по настоящему изобретению могут также быть адсорбированы на твердых органических полимерных или минеральных подложках, таких как, например, тальк, бентонит, диоксид кремния, крахмал или мальтодекстрин.

Косметические или фармацевтические препараты, содержащие пептиды по настоящему изобретению, могут использоваться в различных типах препаратов для местного применения, таких как, например, без ограничения ими, крема, эмульсии масла и/или силикона в воде, эмульсии воды в масле и/или силиконе, масла, молочко, бальзамы, пена, лосьоны, гели, линименты, сыворотки, мыла, мази, пена, мази, муссы, помады, пластинки, карандаши и спреи, включая "закрепляемые" и "смываемые" препараты, и могут также быть включены посредством методик, известных специалистам в данной области техники, в различные типы твердых носителей, таких как тканые материалы, гидрогели, адгезивные (или неадгезивные) пластыри или маски для лица, или могут быть включены в различные косметические продукты, такие как, например, декоративная косметика, лосьоны, молочко для удаления макияжа, тональные кремы, тени для век и помады.

Пептиды могут также быть включены в материалы для изготовления покрытий, которые находятся в прямом контакте с кожей организма, так что пептиды по изобретению высвобождаются посредством биодеградации системы с закреплением на ткани или посредством трения покрытия с телом, под действием влаги тела, рН кожи или температуры тела. Примеры покрытий, материалов и средств для иммобилизации пептидов в тканях, включая микрокапсулирование, описаны в литературе и известны из уровня техники [Schaab C.K. (1986) "Impregnating Fabrics With Microcapsules", HAPPI May 1986; Nelson G. (2002) "Application of microencapsutation in textiles" Int. J. Pharm. 242, 55-62]. Предпочтительные покрытия представляют собой бандажи.

Косметическая или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть применена в участках тела, требующих лечения или ухода посредством подкожной инъекции, внутрикожной инъекции, паровых обертываний или посредством ионофореза с целью достижения лучшего проникновения активного ингредиента. Область применения определяется природой состояния, которое следует лечить. Предпочтительной областью нанесения является область лба, имеющая мимические морщины, а также пространство между бровями, морщины и тонкие линии вокруг рта и/или вокруг глаз.

Косметическая или фармацевтическая композиция, заявленная в настоящем изобретении, может содержать дополнительные ингредиенты, обычно используемые в композициях для того, чтобы ухаживать, очищать и обрабатывать кожу, такие как, например, без ограничения, эмульгирующие агенты, смягчающие средства, органические растворители, кондиционеры для ухода за кожей, такие как, например, увлажнители, альфа-гидроксикислоты, увлажнители, витамины, пигменты или красители, желирующие полимеры, загустители, пластификаторы, агенты против морщин, агенты, которые могут уменьшать или лечить мешки под глазами, отбеливающие или депигментирующие агенты, отшелушивающие агенты, агенты против старения, агенты, улавливающие свободные радикалы и/или атмосферные загрязнения, агенты, ингибирующие NO-синтазу, антиокислители, компоненты против гликирования, противомикробные агенты, противогрибковые агенты, агенты, стимулирующие синтез дермальных или эпидермальных макромолекул и/или способные ингибировать их разложение, такие как, например, агенты, стимулирующие синтез коллагена, агенты, стимулирующие синтез эластина, агенты, стимулирующие синтез декорина, агенты, стимулирующие синтез ламинина, агенты, ингибирующие разложение коллагена, агенты, ингибирующие разложение эластина, агенты, стимулирующие пролиферацию фибробластов, агенты, стимулирующие пролиферацию кератиноцитов, агенты, стимулирующие дифференцировку кератиноцитов, агенты, стимулирующие синтез липидов, и компоненты рогового слоя кожи (церамиды, жирные кислоты и т д.), расслабляющие кожу агенты, агенты, стимулирующие синтез гликозаминогликана, вещества, придающие плотность, агенты против растяжек, успокаивающие агенты, противовоспалительные агенты, агенты, действующие на капиллярное кровообращение и/или микроциркуляцию, агенты, действующие на метаболизм клеток, агенты, стимулирующие и/или ингибирующие синтез меланина, агенты, предназначенные для улучшения дермального-эпидермального соединения, консерванты, отдушки, хелатирующие агенты, растительные экстракты, эфирные масла, экстракты из морепродуктов, агенты, полученные в результате биоферментации, минеральные соли, клеточные экстракты и солнцезащитные агенты (органические или минеральные фотопротективные агенты, которые активны против ультрафиолетовых А и В лучей), при условии, что они физически и химически совместимы с остальными компонентами композиции и особенно с пептидами общей формулы (I), содержащимися в композиции по настоящему изобретению. Природа указанных дополнительных ингредиентов может быть синтетической или естественной, такой как, например, растительные экстракты, либо они могут являться результатом процесса биоферментации.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей косметически или фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида по изобретению, а также косметически или фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного экстракта с активностью против морщин и/или старения, такого как, например, без ограничения ими, экстракты Vitis vinifera (виноград), Rosa canina (шиповник), Curcuma longa (куркума длинная), Iris pallida (ирис бледный), Theobroma cacao (какао), Ginkgo biloba (гингко билоба) или Dunaliella salina (дуналиелла), или также по меньшей мере одного синтетического соединения, экстракта или продукта биоферментации с активностью против морщин и/или старения, такого как, например, без ограничения ими, Matrixyl^®, производимый Sederma, Vialox^® или Syn-ake^®, производимый Pentapharm, Myoxinol™, производимый Cognis, Algisum С^® или Hydroxyprolisilane CN^®, производимый Exsymol, Argireline^®, LeuphasyI^®, Aldenine^®, Decorinyl^®, Decorinol^® или Lipochroman^®, производимый Lipotec, Kollaren^®, производимый Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Collaxyl^® или Quintescine^®, производимый Vincience, антагонисты Са²⁺ канала, такие как алверин, соли марганца или магния, определенные вторичные или третичные амины, витамин А и его производные, идебенон и его производные, коэнзим Q10 и его производные, босвеллиевая кислота и ее производные, гамма-аминомасляная кислота или агонисты хлоридного канала.

Композиции по настоящему изобретению могут содержать или могут быть введены совместно с анальгетическими соединениями и/или противовоспалительными соединениями для уменьшения опухания и раздражения, ассоциированных с чувствительной кожей. Соединения типа стероидов, такие как гидрокортизон, соединения нестероидного типа, такие как парацетомол или ацетилсалициловая кислота, либо натуральные экстракты или эфирные масла с присущей им анальгетической и противовоспалительной активностью.

Пептиды по изобретению обладают механизмом действия, сходным с механизмом действия ботулинического токсина, ингибирующим нейронный экзоцитоз, поэтому можно полагать, что пептиды окажутся эффективными для лечения лицевых морщин и/или асимметрии лица, а также для лечения состояний, представляющих собой мышечную спастичность, таких как дистония, косоглазие, блефароспазм, кривошея, тики, и т.д.

Дополнительный аспект настоящего изобретения, таким образом, относится к применению по меньшей мере одного пептида общей формулы (I) в изготовлении косметической или фармацевтической композиции для лечения состояний млекопитающих, предпочтительно людей, которые требуют регулирования нейронного экзоцитоза. Другой аспект настоящего изобретения относится к применению по меньшей мере одного пептида общей формулы (I) для получения косметической или фармацевтической композиции для лечения, очистки или ухода за кожей. Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению по меньшей мере одного необратимо химически модифицированного пептида, полученного из аминокислотной последовательности белка SNAP-25, для изготовления косметической или фармацевтической композиции для уменьшения и/или устранения асимметрии лица и лицевых морщин, предпочтительно мимических морщин. Другой дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению по меньшей мере одного необратимо химически модифицированного пептида, полученного из аминокислотной последовательности белка SNAP-25, для изготовления косметической или фармацевтической композиции для лечения неврологических расстройств или патологий, представляющих собой мышечную спастичность, таких как дистония, косоглазие, блефароспазм, кривошея, тики, и т.д.

Другой аспект настоящего изобретения относится к косметическому или фармацевтическому способу лечения тех состояний млекопитающих, которые требуют регулирования нейронного экзоцитоза, предпочтительно людей, включающий введение эффективного количества по меньшей мере одного пептида общей формулы (I), предпочтительно в форме содержащей его косметической или фармацевтической композиции. Настоящее изобретение дополнительно относится к косметическому или фармацевтическому способу уменьшения и/или устранения лицевых морщин или лечения асимметрии лица, включающий нанесение на кожу лица косметической или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один пептид по изобретению или его косметически или фармацевтически приемлемые соли. Настоящее изобретение также относится к косметическому или фармацевтическому способу лечения неврологических нарушений или патологий, связанных с мышечной спастичностью, таких как дистонии, косоглазие, блефароспазм, кривошея, тики, и т.д., включающий применение косметической или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один пептид по изобретению или его косметически или фармацевтически приемлемые соли.

Частота применения может широко варьировать в зависимости от потребностей каждого субъекта, период применения составляет от одного раза в месяц до 10 раз в день, предпочтительно от одного раза в неделю до 4 раз в день, более предпочтительно от трех раз в неделю до двух раз в день, еще более предпочтительно один раз в день.

Предпочтительным косметическим или фармацевтическим способом является способ, при котором применение осуществляют на тех участках лица или лба, где находятся мимические морщины, предпочтительно на морщинах вокруг рта и/или глаз, и/или морщинах на лбу и/или морщинах в пространстве между бровями.

ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг.1 показывает, что в присутствии пептидов по изобретению в концентрации 0,1 мМ высвобождение [³H]-L-глутамата из первичных культур нейронов гиппокампа крысы было ингибировано более чем на 40%, что свидетельствует о том, что эти соединения являются ингибиторами нейронного экзоцитоза. Ингибирование высвобождения [³H]-L-глутамата немодифицированным пептидом, полученным из аминокислотной последовательности белка SNAP-25, определенной в SEQ ID No. 11, в той же самой концентрации, составляло только 5%, при этом концентрации в примерно в 30 раз больше (3 мМ) требовались для достижения уровней ингибирования, который может быть сравним с таковыми для необратимо модифицированных пептидов.

ВОПЛОЩЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следующие приведенные здесь конкретные примеры полезны для иллюстрирования природы настоящего изобретения. Эти примеры включены исключительно для иллюстрации и не должны интерпретироваться как ограничения заявленного изобретения.

Общая методология

Химический синтез

Все процедуры синтеза выполняют в полипропиленовых шприцах, оборудованных пористыми полиэтиленовыми дисками. Все реагенты и растворители имеют качество для синтеза и используются без какой-либо дополнительной обработки. Растворители и реагенты удаляют отсасыванием. Удаление группы Fmoc выполняют в смеси попиперидин-ДМФ (диметилформамид) (2:8, об./об.) (1×1 минута, 1×5 минут; 5 мл/г смолы) [Lloyd-Williams P., Albericio F. and Giralt, E. (1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton (FL, USA)]. Промывание между стадиями удаления защиты, сочетания и еще раз удаления защиты выполняли с помощью ДМФ (3×1 минута), используя 10 мл растворителя/г смолы. Реакции сочетания проводили с 3 мл растворителя/г смолы. Контроль сочетаний выполняют посредством нингидринового теста [Kaiser E., Colescott R.L, Bossinger C.D. and Cook P.I. (1970) "Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides" Anal. Biochem. 34, 595-598J. Все синтетические превращения и промывания выполняли при 25°С.

Масс-спектроскопический анализ с электрораспылением выполняли в приборе LCMS-QP 8000 Shimadzu (Киото, Япония), используя смесь MeCN:H₂O 4:1 (+0,1% TFA) в качестве подвижной фазы и при скорости потока 0,2 мл/мин.

Сокращения

Сокращения, используемые для аминокислот, соответствуют правилам Комиссии IUPAC-IUB по биохимической номенклатуре, представленным в Еur. J. Biochem. (1984) 138, 9-37 и в J. Вiоl. Chem. (1989) 264, 633-673.

AM, 2-[4-аминометил-(2,4-диметоксифенил)]-феноксиуксусная кислота; BoNT А, токсин ботулина серотипа A; cps, сантипуаз; DCM, дихлорметан; DIEA, N,N'-диизопропилэтиламин; DIPCDI, N,N'-диизопропилкарбодиимид; DMF, N,N-диметилформамид; DPPC, дипальмитоилфосфатидилхлорин; экв., эквивалент; Fmoc, флуренилметоксикарбонил; HOBt, 1-гидроксибензотиазол; INCI, Международная Номенклатура Косметических ингредиентов; МВНА, п-метилбензгидриламин; MeCN, ацетонитрил; MLV, многослойные везикулы; МеОН, метанол; NMP, N-метилпирролидон; Pbf, 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил; ПЭГ, полиэтиленгликоль; PEG_n, -[NН-СН₂-(СН₂СН₂O)₃-(СН₂)₃-NН-СО-СН₂СН₂-СО-]_n; об.\мин, обороты в минуту; SNAP-25, ассоциированный с синаптосомами белок (25 кДа); tBu, трет-бутил; TFA, трифторуксусная кислота; THF, тетрагидрофуран; ULV, монослойные везикулы.

ПРИМЕР 1

Получение Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA

151,3 г смолы Fmoc-AM-MBHA с функционализацией 0,628 ммоль/г (95 ммоль, 1 экв.) обрабатывали смесью пиперидин-ДМФ согласно описанному общему протоколу с целью удаления группы Fmoc. 154,1 г Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (237 ммоль, 2,5 экв.) включали в незащищенную смолу в присутствии DIPCDI (36,6 мл, 237 ммоль, 2,5 экв) и HOBt (35,6 г, 237 ммоль, 2,5 экв.) с использованием ДМФ в качестве растворителя в течение 1 часа.

Смолу затем промывали как описано в общих способах и обработку для удаления защитной группы Fmoc повторяли, чтобы включить следующую аминокислоту. Следуя описанным протоколам, 154,1 г Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (237 ммоль, 2,5 экв.), 87,5 г Fmoc-Gln-OH (474 ммоль, 5 экв), 88,2 г Fmoc-L-Met-OH (237 ммоль, 2,5 экв.), 105,3 г Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (237 ммоль, 2,5 экв.) и 105,3 г Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (237 ммоль, 2,5 экв) последовательно сочетали в присутствии в каждом сочетании 36,5 г HOBt (237 ммоль, 2,5 экв) и 36,6 мл DIPCDI (237 ммоль, 2,5 экв.), за исключением стадии включения Fmoc-L-Gln-OH, в которой используют 71,3 г HOBt (474 ммоль, 5 экв.).

Полученный Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-МВНА промывают ДМФ (5×1 минута), DCM (4×1 минута), диэтиловым эфиром (4×1 минута) и сушат в вакууме.

ПРИМЕР 2

Получение CH₃-(CH₂)_m-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH₂

Аминоконцевую группу Fmoc в партии 1,68 г Fmoc-Glu (OtBu)-Glu (OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA (0,5 ммоль, 0,296 ммоль/г, 1 экв.) удаляют, как описано в общих способах, и СН₃-(СН₂)_mСООН (5 ммоль, 10 экв), предварительно растворенный в ДМФ (10 мл), включают в присутствии 770 мг HOBt (5 ммоль, 10 экв.) и 770 мкл DIPCDI (5 ммоль, 10 экв). Взаимодействию давали протекать в течение 15 часов, после чего смолу промывали ТГФ (5×1 минута), DCM (5×1 минута), ДМФ (5×1 минута), МеОН (5×1 минута), ДМФ (5×1 минута), ТГФ (5×1 минута), ДМФ (5×1 минута), DCM (4×1 минута), эфиром (3×1 минута) и сушили в вакууме.

1,00 г сухой пептидильной смолы обрабатывают 15 мл TFA-ⁱPr₃Si-H₂O (90:5.5) в течение 2-х часов при комнатной температуре. Фильтраты собирают в холодном диэтиловом эфире (100 мл), центрифугируют в течение 5 минут при 4000 об/мин и эфирный раствор декантируют. Промывание повторяют с эфиром 5 раз. Конечный осадок сушат в вакууме.

m полученное количество чистота теоретическая MM (мол. масса) экспериментальная MM (мол. масса) 6 291,2 мг 88,2% [М+Н]⁺=972,5 [М+Н⁺]=973,8         [M+2H⁺/2]=487,5 8 240,1 мг 87,2% [М+Н]⁺=1000,5 [М+Н⁺]=1001,8         [M+2H⁺/2]=501,5 12 327,5 мг 80,7% [М+Н]⁺=1056,6 [М+Н⁺]=1057,8         [M+2H⁺/2]=529,5 14 292,8 мг 80,9% [М+Н]⁺=1084,6 [М+Н⁺]=1085,9         [M+2H⁺/2]=543,7 20 233,7 мг 85,1% [М+Н]⁺=1168,74 (М+Н⁺]=1170,0         [M+2H⁺/2]=585,7

ПРИМЕР 3

Получение Ac-ПЭГ_n-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH₂

Аминоконцевую группу Fmoc партии 321,0 мг Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA (0,095 ммоль, 0,296 ммоль/r, 1 экв.) удаляют, как описано в общих способах, и Fmoc-PEG₁-OH (2,5 экв.), предварительно растворенный в NMP, добавляют в присутствии 36,5 мг HOBt (0,237 ммоль, 2,5 экв.) и 36,6 мкл DIPCDI (0,237 ммоль, 2,5 экв.) в течение 40-60 минут. Удаляют аминоконцевую группу Fmoc, как описано в общих способах, и реакции введения Fmoc-PEG₁-OH и удаления Fmoc выполняют (n-1) раз, где n=1-100, чтобы получить различные производные. Ацетилирование аминоконцевой области выполняют с помощью Ac₂O (2,5 экв.) и DIEA (2,5 экв) в ДМФ в течение 30 мин.

Смолу Ac-ПЭГ_n-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA промывают ДМФ (5×1 минута), DCM (4×1 минута), диэтиловым эфиром (4×1 минута) и сушат в вакууме.

22,4 мг Ac-ПЭГ_n-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-AM-MBHA обрабатывают 1,57 мл смеси TFA-ⁱPr₃Si-H₂O (95.2,5 2,5) в течение 5 минут при 0°С, затем 90 минут при комнатной температуре. Фильтраты собирают в холодном диэтиловом эфире (10 мл), центрифугируют в течение 5 минут при 4000 об/мин и эфирный раствор декантируют. Промывание повторяют эфиром 5 раз. Конечный маслянистый остаток повторно растворяют в смеси MeCN:H₂O 1:1 и лиофилизируют.

n полученное количество чистота Теоретическая MM Экспериментальная MM 1 7,7 мг 72% [М+Н]⁺=1191,6 [M+2H ⁺/2]=596,4         [М+3Н ⁺/3]=398,0 2 10,0 мг 60% [М+Н]⁺=1494,7 [M+2H ⁺/2]=747,6         [М+3Н ⁺/3]=498,7 3 10,4 мг 64% [М+Н]⁺=1796,1 [M+2H ⁺/2]=898,7         [М+3Н ⁺/3]=599,6         [М+4Н ⁺/4]=449,8 4 13,7 мг 65% [М+Н]⁺=2099,5 [[M+2H ⁺/2]=1050         [М+3Н ⁺/3]=700,4         [М+4Н ⁺/4]=525,4         [М+5Н ⁺/5]=420,5 5 10,4 мг 65% [М+Н]⁺=2400,3 [M+2H ⁺/2]=1201,1         [М+3H ⁺/3]=801,1         [M+4H ⁺/4 601,0         [М+5Н ⁺/5]=481,0         [М+6Н ⁺/6]=400,9

ПРИМЕР 4

Получение Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH-(CH₂)_s-CH₃

2,10 г Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (3,23 ммоль, 1 экв.), растворенный в 20 мл DCM, в который были добавлены 500 мкл DIEA (2,9 ммоль, 0,90 экв), включают в сухую 2-хлортритильную смолу (2,0 г, 3,3 ммоль). Оставляют перемешиваться в течение 5 минут, после чего добавляют 1 мл DIEA (5,9 ммоль, 1,81 экв). Оставляют взаимодействовать в течение 40 минут. Остающиеся хлоридные группы защищают обработкой 1,6 мл МеОН.

Аминоконцевую группу Fmoc удаляют, как описано в общих способах, и 3,24 г Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (5 ммоль, 5 экв) включают в 1 ммоль аминоацильной смолы Fmoc-L-Arg(Pbf)-CITrt^® в присутствии DIPCDI (770 мкл, 5 ммоль, 5 экв.) и HOBt (770 г, 5 ммоль, 5 экв) с использованием ДМФ в качестве растворителя в течение 1 часа. Смолу затем промывают, как описано в общих способах, и обработку для удаления защитной группы Fmoc повторяют, чтобы включить следующую аминокислоту. Следуя описанным протоколам, 1,84 г Fmoc-L-Gln-ОН (5 ммоль, 5 экв.), 1,86 г Fmoc-L-Met-OH (5 ммоль, 5 экв.), 2,12 г Fmoc-L-Glu (OtBu)-OH и 2,12 г Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (5 ммоль, 5 экв.) сочетают последовательно в присутствии в каждом сочетании 770 мг HOBt (5 ммоль, 5 экв) и 770 мкл DIPCDI (5 ммоль, 5 экв.), за исключением стадии, в которой включают Fmoc-L-Gln-OH и на которой добавляют 1,54 г HOBt (10 ммоль, 10 экв).

Аминоконцевую группу Fmoc удаляют, как описано в общих способах, пептидильную смолу обрабатывают в течение 30 минут 2,36 мл уксусного ангидрида (25 ммоль, 25 экв.) в присутствии 4,28 мл DIEA (25 ммоль, 25 экв.) с использованием DMF в качестве растворителя, промывали DMF (5×1 минута), DCM (4×1 минута), диэтиловым эфиром (4×1 минута) и сушили в вакууме.

Полностью защищенный пептид [Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH] получают, обрабатывая в течение 5 минут пептидильную смолу, предварительно высушенную в вакууме в присутствии КОН, 3%-ным раствором TFA в DCM. Фильтраты собирают в холодном диэтиловом эфире и обработку повторяют три раза. Эфирные растворы упаривают досуха на роторном испарителе при комнатной температуре; осадок повторно суспендируют в 50%-ном MeCN в Н₂O и лиофилизируют. 279 мг сырого полученного продукта (367 мкмоль) взвешивают в баллон, добавляют 3 экв. СН₃-(СН₂)_s-NН₂ и 30 мл безводного DMF. Добавляют 120 мкл DIPCDI (2 экв.) и оставляют взаимодействовать при перемешивании на магнитной мешалке при 47°С. Реакцию контролируют посредством ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) по исчезновению исходного продукта, она завершается после 24 часов. Растворитель выпаривают досуха и совместно упаривают дважды с DCM. Полученный осадок [Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH-(СH₂)_s-СН₃] повторно суспендируют в 50 мл смеси TFA-ⁱPr₃Si-H₂O (90:5.5) и оставляют взаимодействовать в течение 30 минут при комнатной температуре. Добавляют 250 мл холодного диэтилового эфира, растворитель выпаривают на роторном испарителе, проводят два дополнительных совместных выпаривания с эфиром. Осадок растворяют в смеси 50%-ного MeCN в H₂O и лиофилизируют.

s полученное количество чистота Теоретическая MM Экспериментальная MM 11 391,2 мг 92,2% [М+Н]⁺=1058,3 [М+Н⁺]=1057,9         [М+2Н ⁺/2]=529,8 15 424,5 мг 90,5% [M+H]⁺=1114,74 [М+Н⁺]=1114,0         [М+2Н ⁺/2]=557,6

ПРИМЕР 5

Согласно общим протоколам, описанным в Примерах 1-4, рутинным образом варьируя природу реагентов и последовательности пептида, были дополнительно получены следующие необратимо химически модифицированные пептиды, полученные из последовательности белка SNAP-25, включенные в объем настоящего изобретения.

ПРИМЕР 6

Анализ активности необратимо химически модифицированных пептидов, полученных из белка SNAP-25, в отношении нейронного экзоцитоза [³H]-L- глутамата

Для определения того, ингибируют ли пептиды по изобретению нейронный экзоцитоз нейромедиаторов, их активность в отношении высвобождения L-глутамата, нейромедиатора первичных культур нейронов гиппокампа крыс, анализировали следующим образом. Экзоцитоз этого нейромедиатора в нейронных культурах может быть получен посредством электрической деполяризации клеток. Первичные культуры гиппокампа зародышей крыс получали, используя обычные методы [Blanes-Mira С., Merino J.M., Valera E., Fernandez-Ballester G., Gutierrez L.M., Viniegra S., Perez-Paya E. and Ferrer-Montiel A. "Small peptides patterned after the N-terminus domain of SNAP25 inhibit SNARE complex assembly and regulated exocytosis" J. Neurochem. 88, 124-135], и поддерживали в культуре в течение 14 дней в термостате при 37°С и 5%-ном СO₂. Культуры инкубировали с [³H]-L-глутамином для того, чтобы нагрузить их [³Н]-глутаматом, в течение 3 часов при 37°С. Избыток [³H]-L-глутамина затем отмывали и культуры инкубировали с 0,1 мМ исследуемых пептидов в течение 1 часа при 37°С. [³H]-L-глутамат высвобождается посредством деполяризации 75 мМ КСl и 2 мМ CaCl₂, забуференным в физиологическом буфере, в течение 10 минут при 37°С. Культуральную среду собирают и количество [³H]-L-глутамата определяют количественно в измерителе уровня бета-излучения. Результаты нормализуют относительно высвобождения [³H]-L-глутамата в отсутствие пептида и корректировали относительно базального высвобождения в отсутствие кальция.

ПРИМЕР 7

Получение косметической композиции, содержащей CH₃-(CH₂)₁₄-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-CONH₂

Следующую композицию готовили, как описано в настоящем изобретении.

Компоненты Фазы А взвешивали в достаточно большой реактор и смесь нагревали при 80°С, чтобы расплавить воски. Компоненты Фазы В взвешивали в емкость, подходящую для всего содержимого, и нагревали при 70°С. Фазу А медленно добавляли к Фазе В с интенсивным перемешиванием, а затем при перемешивании добавляли Фазу С. По завершении добавления смесь оставляли охлаждаться с осторожным перемешиванием и, когда смесь достигала комнатной температуры, добавляли водный раствор СН₃-(СН₂)14-СО-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-CONH₂ и лецитин, смесь гомогенизировали и рН корректировали триэтаноламином, если требовалось.

Полученный крем имеет рН между 6 и 7 и вязкость 10000-15000 сПз (6/50).

ИНГРЕДИЕНТ (номенклатура INCI) масс.% ФАЗА А   МИНЕРАЛЬНОЕ МАСЛО 8,0 СТЕАРИНОВАЯ КИСЛОТА 2,4 ЦЕТЕАРИЛОВЫЙ СПИРТ 1,6 ПЧЕЛИНЫЙ ВОСК 0,8 ФАЗА В   ГЛИЦЕРИН 2,4 ВОДА 63,4 ФАЗА С   КАРБОМЕР 0,3 ТРИЭТАНОЛАМИН 0,9 ФАЗАО   ВОДА 15,0 CH₃-(CH₂)₁₄-CO-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-CONH₂ (0,05%) 5,0 ЛЕЦИТИН 0,4

ПРИМЕР 8

Получение липосом, содержащих CH₃-(CH₂)₁₄-CO-ELEEMQRRADQLA-NH₂ Дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC) взвешивают и растворяют в хлороформе. Растворитель упаривают в вакууме до получения тонкого слоя фосфолипида, и этот слой гидратируют, обрабатывая при 55°С водным раствором, содержащим пептид в желательной концентрации (содержащий Phenonip^®), получая липосомы MLV (монослойные). Липосомы ULV (многослойные) получают, погружая липосомы MLV в ультразвуковую ванну при 55°С в течение 8 циклов по 2 минуты с 5-минутными интервалами.

ИНГРЕДИЕНТ масс.% ДИПАЛЬМИТОИЛФОСФАТИДИЛХОЛИН 4,0 CH₃-(CH₂)₁₄-CO-ELEEMQRRADQLA-NH₂ 0,2 PHENONIP^® 0,5

Согласно первому аспекту, настоящее изобретение относится к пептиду общей формулы (I):

его стереоизомерам, его косметически и фармацевтически приемлемым солям и их смесям, где:

АА представляет собой последовательность 3-40 соседних аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности SEQ ID No. 1;

R₁ выбран из группы, состоящей из Н или алкильной, арильной, аралкильной или ацильной группы; и

R₂ выбран из группы, состоящей из амино, гидроксила или тиола, незамещенных или замещенных алифатическими или циклическими группами,

при условии, что когда R₁ представляет собой Н или ацетил, R₂ не является незамещенным амино, гидроксилом или тиолом.

Согласно второму важному аспекту, в пептиде общей формулы (I) R₁ представляет собой предпочтительно насыщенный или ненасыщенный, линейный, разветвленный или циклический С₃-С₂₄ацил. R₁ представляет собой предпочтительно ацил формулы СН₃-(СН₂)_m-СО-, где m может варьировать между 1 и 22.

Согласно другому важному аспекту изобретения, в пептиде общей формулы (I) R₁ представляет собой предпочтительно полиэтиленгликолевый полимер.

Согласно другому важному аспекту изобретения, в пептиде общей формулы (I) R₁ представляет собой предпочтительно полиэтиленгликолевый полимер с молекулярной массой от 200 до 35000 дальтон.

Согласно другому важному аспекту изобретения, в пептиде общей формулы (I) R₁ представляет собой предпочтительно полиэтиленгликолевый полимер формулы

где n может варьировать между 1 и 100. В предпочтительном аспекте изобретения n может варьировать между 1 и 5.

Согласно важному аспекту изобретения, в пептиде общей формулы (I) R₂ представляет собой предпочтительно амино или гидроксил, незамещенный или замещенный насыщенными или ненасыщенными, линейными, разветвленными или циклическими С₁-С₂₄алифатическими группами.

Согласно важному аспекту изобретения, в пептиде общей формулы (I) AA предпочтительно состоит из последовательности 3-40 соседних аминокислот, содержащихся в последовательности, выбранной из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей MAEDADMRNELEEMQRRADQL, ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI, ELEEMQRRADQLA, ELEEMQRRADQL, ELEEMQRRADQ, ELEEMQRRAD, ELEEMQRRA, ELEEMQRR, LEEMQRRADQL, LEEMQRRADQ, LEEMQRRAD, LEEMQRRA, LEEMQRR, EEMQRRADQL, EEMQRRADQ, EEMQRRAD, EEMQRRA, EEMQRR, LESTRRMLQLVEE, NKDMKEAEKNLT, KNLTDL, IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG, SNKTRIDEANQRATKMLGSG, TRIDEANQRATKMLGSG, DEANQRATKMLGSG, NQRATKMLGSG и QRATKMLGSG.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к способу получения пептида общей формулы (I), который основан на твердофазном пептидном синтезе.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к способу получения пептида общей формулы (I), в котором используют защитные группы, выбранные из группы, состоящей из Fmoc/mpem-бутил, Fmoc/тритил и Fmoc/аллил.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей косметически или фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида формулы (I) и по меньшей мере один косметически или фармацевтически приемлемый эксципиент или адъювант.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один пептид общей формулы (I), включенный в косметически или фармацевтически приемлемую систему и/или носитель замедленного высвобождения, выбранные из группы, состоящей из липосом, милликапсул, микрокапсул и нанокапсул, губок, везикул, мицелл, миллисфер, микросфер, наночастиц, липосфер, микроэмульсий, наноэмульсий, милличастиц, микрочастиц и наночастиц.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один пептид общей формулы (I), адсорбированный на твердой органической полимерной или неорганической подложке, выбранной из группы, состоящей из талька, бентонита, диоксида кремния, крахмала и мальтодекстрина.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, в которой пептид общей формулы (I) представлен в препарате, выбранном из группы, состоящей из кремов, эмульсий типа масло и/или силикон в воде, эмульсий типа вода в масле и/или силиконе, масел, молочка, бальзамов, пен, лосьонов, гелей, линиментов, сывороток, мыл, мазей, пен, муссов, брусков, карандашей и спреев.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, в которой пептид общей формулы (I) включен в твердые подложки, выбранные из группы, состоящей из влажных салфеток, гидрогелей, клейких пластырей, неклейких пластырей и масок для лица.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, в которой пептид общей формулы (I) включен в ткань, предпочтительно в форме бандажей.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей пептид общей формулы (I), включенный в косметические продукты, выбранные из группы, состоящей из маскирующих средств, тональных кремов, лосьонов для снятия макияжа и косметического молочка, теней для век и губных помад.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей пептид общей формулы (I) в концентрации между 0,00000001 масс.% и 20 масс.%.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, в которой пептид общей формулы (I) предпочтительно присутствует в концентрации между 0,0001 масс.% и 5 масс.%.

Согласно другому важному аспекту настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, содержащей дополнительное косметически или фармацевтически эффективное количество активного компонента, выбранного из группы, состоящей из отшелушивающего агента, увлажняющего агента, депигментирующего агента или отбеливающего агента, про-пигментирующего агента, агента против морщин, агента, который может уменьшать или устранять мешки под глазами, антиоксиданта, антигликирующего агента, ингибитора NО-синтазы, агента против старения, агента, стимулирующего синтез дермальных или эпидермальных молекул и/или для предотвращения их разложения, агента, стимулирующего пролиферацию фибробластов и/или кератиноцитов или стимулирующего дифференциацию кератиноцитов, агента для релаксации кожи, уплотняющего агента, агента против атмосферных загрязнений и/или против свободных радикалов, агента, воздействующего на капиллярное кровообращение и/или микроциркуляцию, успокаивающего агента, противовоспалительного агента, агента, воздействующего на метаболизм клеток, органического или минерального фотопротективного агента, который активен против ультрафиолетовых А- и/или В-лучей, и их смесей. Активный агент предпочтительно является либо синтетическим, либо растительным экстрактом, либо является продуктом биоферментации.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к косметической или фармацевтической композиции, в которой агент против морщин и/или против старения выбран из группы, состоящей из Argireline^®, Leuphasyl^®, Decorinyl^®, Decorinol^®, Lipochroman^® и Aldenine^®, продаваемых Lipotec.

Согласно важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, регулирующей нейронный экзоцитоз.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции для лечения, очищения или ухода за кожей.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей морщины на лице и/или асимметрию лица

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей мимические морщины на лице.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей мимические морщины на лице посредством местного применения на лбу, в пространстве между бровями и/или в морщинах и линиях лица вокруг рта и/или вокруг глаз.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей мимические морщины на лице посредством применения ионофореза на лбу, в пространстве между бровями и/или в морщинах и линиях лица вокруг рта и/или вокруг глаз.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей мимические морщины на лице посредством применения подкожной или внутрикожной инъекции на лбу, в пространстве между бровями и/или в морщинах и линиях лица вокруг рта и/или вокруг глаз.

Согласно другому важному аспекту, настоящее изобретение относится к применению пептида общей формулы (I) или его косметически или фармацевтически приемлемых солей в изготовлении косметической или фармацевтической композиции, уменьшающей и/или устраняющей мышечную спастичность.

Изобретение относится к пептидам общей формулы R₁-AA-R₂, которые могут регулировать нейронный экзоцитоз, их смесям и их косметически или фармацевтически приемлемым солям, где АА представляет собой последовательность 6-40 соседних аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности белка SNAP-25, R₁ выбран из группы, состоящей из Н или ацетила, либо насыщенного или ненасыщенного, линейного, разветвленного или циклического С₃-С₂₄ацила, либо полиэтиленгликолевого полимера, R₂ выбран из группы, состоящей из амино, незамещенного или замещенного насыщенными линейными, или разветвленными, или циклическими С₁-С₂₄ алифатическими группами, при условии, что когда R₁ представляет собой Н или ацетил, тогда R₂ не является незамещенным амино. Изобретение также относится к косметическим или фармацевтическим композициям, содержащим такие пептиды, и их применению для лечения состояний, которые требуют регулирования нейронного экзоцитоза, предпочтительно для лечения кожи. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 8 пр.

1. Пептид общей формулы (I)
R₁-AA-R₂,
его стереоизомеры, их смеси и его косметически и фармацевтически приемлемые соли, отличающийся тем, что АА представляет собой последовательность 6-40 соседних аминокислот, содержащихся в аминокислотной последовательности SEQ ID No.1, выбранную из группы, состоящей из MAEDADMRNELEEMQRRADQL, ADESLESTRRMLQLVEESKDAGI, ELEEMQRRADQLA, ELEEMQRRADQL, ELEEMQRRADQ, ELEEMQRRAD, ELEEMQRRA, ELEEMQRR, LEEMQRRADQL, LEEMQRRADQ, LEEMQRRAD, LEEMQRRA, LEEMQRR, EEMQRRADQL, EEMQRRADQ, EEMQRRAD, EEMQRRA, EEMQRR, LESTRRMLQLVEE, NKDMKEAEKNLT, KNLTDL, IMEKADSNKTRIDEANQRATKMLGSG, SNKTRIDEANQRATKMLGSG, TRIDEANQRATKMLGSG, DEANQRATKMLGSG, NQRATKMLGSG и QRATKMLGSG;
R₁ выбран из группы, состоящей из Н или ацетила, либо насыщенного или ненасыщенного, линейного, разветвленного или циклического С₃-С₂₄ацила, либо полиэтиленгликолевого полимера

где n может варьировать от 1 до 5, и
R₂ выбран из группы, состоящей из амино, незамещенного или замещенного насыщенными линейными, или разветвленными, или циклическими С₁-С₂₄алифатическими группами,
при условии, что когда R₁ представляет собой Н или ацетил, тогда R₂ не является незамещенным амино.

2. Косметическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении нейронного экзоцитоза и содержащая косметически эффективное количество по меньшей мере одного пептида общей формулы (I) по п.1, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере один косметически приемлемый эксципиент или адъювант.

3. Косметическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что пептид общей формулы (I) включен в косметически приемлемую систему замедленного высвобождения или в носитель, выбранные из группы, состоящей из липосом, милликапсул, микрокапсул, нанокапсул, губок, везикул, мицелл, миллисфер, микросфер, наносфер, липосфер, микроэмульсий, наноэмульсий, милличастиц, микрочастиц и наночастиц.

4. Косметическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что пептид общей формулы (I) адсорбирован на косметически приемлемой подложке из органического полимера или твердой минеральной подложке, выбранной из группы, состоящей из талька, бентонита, диоксида кремния, крахмала или мальтодекстрина.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью в отношении нейронного экзоцитоза и содержащая фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного пептида общей формулы (I) по п.1, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент или адъювант.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что пептид общей формулы (I) включен в фармацевтически приемлемую систему замедленного высвобождения или в носитель, выбранные из группы, состоящей из липосом, милликапсул, микрокапсул, нанокапсул, губок, везикул, мицелл, миллисфер, микросфер, наносфер, липосфер, микроэмульсий, наноэмульсий, милличастиц, микрочастиц и наночастиц.

7. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что пептид общей формулы (I) адсорбирован на фармацевтически приемлемой подложке из органического полимера или твердой минеральной подложке, выбранной из группы, состоящей из талька, бентонита, диоксида кремния, крахмала или мальтодекстрина.

8. Применение пептида общей формулы (I) по п.1 в изготовлении косметической композиции, обладающей ингибиторной активностью в отношении нейронного экзоцитоза.

9. Применение пептида общей формулы (I) по п.1 в изготовлении косметической композиции для лечения, очищения или ухода за кожей путем уменьшения и/или устранения мимических морщин на лице.

10. Применение по п.8, которое уменьшает и/или устраняет морщины на лице и/или асимметрию лица.

11. Применение пептида общей формулы (I) по п.1 в изготовлении фармацевтической композиции, обладающей ингибиторной активностью в отношении нейронного экзоцитоза.

12. Применение по п.11, которое уменьшает и/или устраняет мышечную спастичность.