Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к медицинскому применению каркаса клеточной стенки Nocardia rubra, особенно к его новому применению для приготовления лекарств против вируса папилломы человека (ВПЧ).
Уровень техники
Вирус папилломы человека (ВПЧ) - это ДНК-содержащий вирус, который размножается (поддерживается) только в коже и в чешуйчатом эпителии комплекса слизистой оболочки. Вне тела его не удавалось успешно культивировать. ВПЧ индуцирует различные доброкачественные папиллярные опухоли или бородавки кожи и слизистой, некоторые из которых обладают потенциальной канцерогенностью.
В настоящее время идентифицированы 120 типов ВПЧ. Вирусы классифицированы как типы вируса кожи и типы вируса генитальных отверстий в соответствии с инфицируемой ими частью эпителия тела. Среди них около 35 типов ВПЧ могут инфицировать генитальное отверстие у женщин и из них около 20 типов связаны с образованием опухоли. В соответствии со степенью опасности различных типов ВПЧ их разделяют на типы ВПЧ с высокой степенью опасности и типы ВПЧ с низкой степенью опасности. Типы ВПЧ с низкой степенью опасности включают, например, ВПЧ 6, 11, 42, 43, 44, СР8304 и подобные им, которые индуцируют в генитальных отверстиях доброкачественные поражения, такие как кондиломы, в том числе CIN-I (внутриэпителиальные новообразования шейки, cervical intra-epithelial neoplasia). Типы ВПЧ с высокой степенью опасности включают ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 и подобные им, которые индуцируют CIN-II, CIN-III и рак шейки матки, особенно это характерно для ВПЧ 16 и 18.
Инфекция ВПЧ - одно из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающихся половым путем и связанных с половой жизнью. Специалисты в данной области полагают, что инфекция ВПЧ является главной причиной рака шейки матки. Инфекция ВПЧ серьезно нарушает здоровье людей и даже приводит к смерти.
Число вновь инфицированных каждый год может составлять около 10-15% от общего числа женщин в мире. Во многих странах инфекция ВПЧ очень широко распространена. Наиболее велика вероятность заражения для молодых женщин, имеющих частые половые сношения; возраст, соответствующий максимальной частоте заражения, составляет 18-28 лет. У большинства женщин латентный период короток, обычно он составляет 8-10 месяцев. Однако у 10-15% женщин в возрасте свыше 35 лет имеется тенденция к затянутому латентному периоду. У этих женщин с длительной латентной инфекцией высока опасность перерастания инфекции в рак шейки матки.
Согласно отчетам число зараженных ВПЧ людей каждый год составляет 630 млн в мире. Из них 20 млн - жители США. Кроме того, каждый год в Америке более чем у 5,5 млн человек ставится диагноз инфекции ВПЧ, из них более чем у 1 млн имеются бородавки гениталий. Инфекция ВПЧ становится проблемой общественного здравоохранения.
Согласно представленной Всемирной организацией здравоохранения статистике индуцированная раком шейки матки смертность находится на втором месте среди вызываемых раком смертельных случаев, а в некоторых развивающихся странах она даже стоит на первом месте. Каждый год регистрируются более 0,5 млн случаев рака шейки матки, около 0,2 млн людей умирают от рака шейки матки и 80% из них приходится на развивающиеся страны. Из злокачественных опухолей у женщин рак шейки матки составляет 24% в развивающихся странах и 7% в развитых странах. В 21-м столетии рак шейки матки становится одним из серьезнейших заболеваний в мире, разрушающим здоровье женщин.
Согласно предварительным статистическим данным в Китае имеется 138 тысяч женщин, страдающих раком шейки матки, и около 50 тысяч женщин ежегодно умирают от рака шейки матки, что составляет 25% от общего числа смертельных случаев в мире. Однако врачей тревожит то, что у многих пациентов диагноз может быть поставлен только в поздней стадии, когда из-за несовершенных методов ранней диагностики важный период раннего лечения пропущен и, кроме того, пациенты с новыми случаями рака шейки матки становятся моложе.
Предотвращение и лечение инфекции ВПЧ
Для предотвращения этого заболевания не существует специального способа. Вообще говоря, эффективно прерывание пути переноса в соответствии с путем переноса ВПЧ.
Индуцированные ВПЧ небольшие бородавки могут исчезать спонтанно, поэтому лечение здесь не требуется.
Но хирургическое удаление кондилом (condyloma acuminatum) необходимо, поскольку вероятность их злокачественного перерождения высока. Однако при этом методе высока частота рецидивов. Могут применяться также физиотерапевтические методы, как гальваническая процедура и лазерная терапия.
С одной стороны, не существует эффективного способа лечения инфекции ВПЧ и не существует эффективного лекарства для лечения рака шейки матки. Однако, с другой стороны, рак шейки матки - первый тип рака, для которого стала известной сепатология и чей метод скрининга безупречен. Поэтому на основании общего обследования весьма вероятно достижение ранней диагностики и осуществление раннего лечения. Рак шейки матки может стать первым типом рака, с которым справилось человечество.
Кроме того, для предотвращения и лечения рака шейки матки во многих странах применяют «вакцину». Использование вакцины, в особенности специальной комбинированной иммунной вакцины, для стимуляции сильной иммунной реакции организма может ликвидировать инфекцию ВПЧ и раковые клетки, оставшиеся после операции.
В настоящее время в мире для лечения или предотвращения инфекции ВПЧ используются следующие типы вакцин:
1. Предупредительная (превентивная) вакцина - вирусоподобная гранульная вакцина, используемая как антиген-мишень в предупредительной вакцине ВПЧ, которая представляет собой основной капсидный белок L1 и минорный белок L2 ВПЧ. Поскольку при экспрессии белков L1 и L2 может осуществляться их самосборка с образованием вирусоподобных гранул, похожих по характерной структуре и эпитопу на природную вирусную гранулу, но не содержащих ДНК ВПЧ, получается хороший иммунологический эффект, что продемонстрировано во многих опытах на животных. Были разрешены клинические испытания I/II стадий и заявители планируют провести в Европе испытания III/IV стадий.
2. Вакцина с профилактической и терапевтической активностью в виде химерных вирусоподобных гранул, представляющая собой химерные вирусные гранулы Е7, состоящие из капсидного белка L1 и полипептида Е7, обладающие профилактической и терапевтической активностью. Химерные вирусные гранулы не только стимулируют продукцию нейтрализующих антител, но индуцируют также более сильную специальную реакцию CTL (цитолитических Т-лимфоцитов) на Е7 и противоопухолевую активность организма. В настоящее время один тип вакцины из вирусоподобных химерных гранул, содержащих белки L1 и L2 вируса ВПЧ16 и антиген-мишень Е7, будет проверен в фазе I клинических испытаний.
3. Один из типов терапевтической вакцины - это вакцина с вирусом коровьей оспы (vaccinia) в качестве носителя - наиболее распространенный вирусный носитель, используемый как вирус оспы для нейтрализации человеческого вируса натуральной оспы и имеющий многолетнюю историю введения людям. В Англии были проведены клинические испытания I фазы по терапии рака шейки матки с использованием рекомбинантной вакцины с вирусом оспы в качестве носителя и белками Е6 и Е7, экспрессируемыми ВПЧ16 и ВПЧ18. Не было обнаружено никаких побочных эффектов. У некоторых подвергнутых испытаниям пациенток регистрировались специфические антитела, реакция CTL и появление цитокинов, отличающихся друг от друга и, возможно, связанных с разными стадиями рака. Недостаток состоял в ингибировании повторной иммунизации.
4. Полипептидная вакцина также представляет собой тип терапевтической вакцины. При исследованиях антигенов был определен эпитоп, распознаваемый в реакции CTL, что дало шанс для разработки полипептидной вакцины. Таким образом можно усилить продукцию специфических к опухоли CTL путем использования для иммунизации полипептидов Е6 или Е7 вируса ВПЧ16. Клинические испытания вакцины из полипептидов ВПЧ для препятствования развитию связанных с ВПЧ опухолей находятся в стадиях I/II, при этом не наблюдалось заметных побочных эффектов. Для индивидуумов с различной генетической основой следует использовать различные полипептидные вакцины, подстроенные к ВПЧ.
5. ДНК-вакцина также представляет собой тип терапевтической вакцины. Функция ДНК-вакцины состоит в создании экспрессирующей плазмиды, вносящей в организм нужный ген и вызывающей специфическую иммунную реакцию на экспрессируемый in vivo антиген. В настоящее время в качестве гена в ДНК-вакцине для лечения ВПЧ используют ген Е7 вируса типа ВПЧ16. Этот тип вакцины, вводимой внутримышечно, проходит клинические испытания в фазе I/II. Следует отметить слабую иммуногенную активность этой вакцины и проблемы с безопасностью ее введения в организм.
Для исследования вакцины ВПЧ в Китае (в виде превентивной вакцины) было завершено конструирование рекомбинантного штамма палочковидного вируса с белками L1 и L1/L2 вируса типа ВПЧ16, который экспрессируется в клетках насекомых; было проведено наблюдение образования вирусных гранул под электрическим зеркалом; было осуществлено успешное конструирование рекомбинанта копии с экспрессией L1/L2 и некопируемого типа вакцинного штамма поксвируса. В аспекте исследований терапевтической вакцины был сконструирован рекомбинант копии ВПЧ16, экспрессирующего белок Е6/Е7, и некопируемого типа вакцинного штамма поксвируса.
Во всем мире лечение инфекции ВПЧ и рака шейки матки вакциной является желаемым и обнадеживающим методом. Однако требуется много времени, чтобы довести вакцину до клинического применения. ВПЧ, вызывающий рак шейки матки, имеет много типов, однако в настоящее время исследования ограничены типом вируса ВПЧ16. Все еще имеются некоторые ограничения в применении и для введения пациентам имеются ограничения по возрасту. Поэтому требуется приготовление более эффективного и безопасного лекарства, а также усовершенствованный способ лечения заболевания.
Препарат из каркаса клеточной стенки Nocardia rubra - хорошо известное лекарство. Ранее оно применялось для лечения грибковых инфекций, а также для лечения инфекции, вызванной Candida albicans, или же оно применялось также для лечения изъязвлений шейки матки и как средство против вируса простого герпеса и вируса герпеса зостер. Однако нет ни одного свидетельства его применения в лечении инфекции ВПЧ.
Сущность изобретения
Цель изобретения состоит в том, чтобы предоставить вид лекарства для лечения инфекции ВПЧ, содержащего каркас клеточной стенки Nocardia rubra и фармацевтически приемлемый носитель. Конкретно изобретение направлено на то, чтобы обеспечить применение каркаса клеточной стенки Nocardia rubra в приготовлении лекарств против инфекции ВПЧ.
Указанные лекарства содержат каркас клеточной стенки Nocardia rubra и фармацевтически приемлемый носитель.
Носители включают наполнитель, предпочтительно декстран.
Лекарства согласно настоящему изобретению представляют собой препараты для местного применения, в том числе мази, кремы, пластыри, желе, лосьоны, настойки, жидкие мази (линименты), масла, припарки и аэрозоли. Предпочтительны лосьоны, настойки и линименты.
В 1 мл или 1 мг лекарства содержится от 0,001 до 1 мг каркаса клеточной стенки Nocardia rubra.
Фармакологический механизм действия лекарства для лечения инфекции ВПЧ достаточно сложен. Он не только нацелен на патогенез вируса, но также соответствует иммунорегуляторному характеру действия препаратов из Nocardia rubra. Поэтому лекарство активно в ликвидации инфекции ВПЧ.
Большинство из пациентов, инфицированных ВПЧ, способно через некоторое время преодолеть инфекцию за счет собственного иммунитета. Однако некоторые пациенты не могут преодолеть инфекцию за счет собственного иммунитета и в течение длительного времени страдают от инфекции ВПЧ, которая может далее развиться в серьезное заболевание. Очевидно, что слабый или сильный собственный иммунитет является решающим фактором. Другими словами, для преодоления инфекции ВПЧ решающим фактором является то, способен ли индивидуум регулировать свой иммунологический потенциал или нет.
Согласно многолетним исследованиям препарат каркаса клеточной стенки Nocardia rubra предлагается как неспецифический иммунорегулятор, имеющий особенно выраженную иммуностимулирующую активность в коже и системе слизистых оболочек.
После нанесения на пораженное место препарата каркаса клеточной стенки Nocardia rubra он может быстро активировать иммунную систему организма и приводить к накоплению в пораженной области большого числа макрофагов и клеток - естественных киллеров (клеток NK) и далее усиливать способность макрофагов и клеток NK убивать и удалять больные клетки. Более того, препарат может также индуцировать продукцию цитотоксических лимфоцитов и большого числа цитокинов, которые могут специфическим образом убивать и удалять клетки, зараженные вирусом, а также очевидным образом усиливать иммунную способность биологических жидкостей.
Известно, что эффективная активация цитотоксических лимфоцитов играет очень важную роль в ликвидации инфекции ВПЧ и лечении поражений чешуйчатого эпителия, вызванных инфекцией ВПЧ.
Дегенерация CIN происходит при наличии нейтрализующих антител к ВПЧ16, которые могут ингибировать повторное заражение клеток копированным ВПЧ, снижать вирусные нагрузки и далее ингибировать развитие поражений, связанных с патологическим изменением шейки матки, связанным с ВПЧ.
Из некоторых научных публикаций известно, что около 87% раковых опухолей шейки матки обнаруживается в переходной зоне. Количество клеток Лангерганса у склонных к негативной реакции на ВПЧ пациенток больше, чем у позитивных по ВПЧ пациентов. Таким образом, количество клеток Лангерганса в переходной зоне может влиять на степень остроты инфекции ВПЧ, тогда как каркас клеточной стенки Nocardia rubra способствует возрастанию числа и активации клеток Лангерганса.
Хотя каркас клеточной стенки Nocardia rubra не способен сам по себе непосредственно убивать и удалять вирус, он точным и сложным образом функционирует, усиливая иммунную систему, убивающую и удаляющую вирус. То что механизм действия состоит в непрямой регуляции иммунитета, дополнительно свидетельствует о безопасности лекарства.
Согласно использованным в данном изобретении методам определяется действие каркаса клеточной стенки Nocardia rubra на вирус ВПЧ.
Известно, что в данной области для детектирования ВПЧ используются следующие методы:
1. Цитологическое определение в мазке
Этот метод называется также «детектирование окрашиванием РАР» или «детектирование в мазках» и состоит в сборе секрета шейки матки, нанесении его мазком на стекло и наблюдении под микроскопом для обнаружения клеток с вакуолями или ороговевших клеток с эффективностью обнаружения 70-76%.
2. Цитологическое определение с помощью Thinprep (ТСТ)
Метод включает использование специальной щетки для сбора образцов из шейки матки, отделение примесей от образца с помощью раствора для консервирования клеток, получение ультратонкого и прозрачного мазка, чтобы определить вирус ВПЧ и его тип. Этот метод называется также TCT, его эффективность составляет 70-95%.
3. Иммуногистохимическое определение
В инфицированном ВПЧ животном следует обнаружить антиген ВПЧ с помощью поликпональных антител в методе РАР для обнаружения вирусного белка (вирусного антигена). Если реакция на белок ВПЧ положительна, в клетках эпителия можно обнаружить слабую положительную реакцию, а в ядрах вакуольных клеток видны коричневые гранулы, что свидетельствует о положительной реакции. Однако эффективность обнаружения составляет всего 40-60% и чувствительность также низка. При этом определить тип вируса нельзя.
4. Определение ВПЧ по ДНК
(1) Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Выделения из шейки матки собирают с помощью шпателя или куска ваты, смоченного NS, затем после центрифугирования и промывок получают ДНК ВПЧ, после чего проводят амплификацию в ПЦР и электрофорез в геле, чтобы получить результат, который можно сравнить с образцом и осуществить диагноз. Хотя этот метод прост, его нельзя применять как ориентирующий без знания того, убит вирус или нет.
(2) ПЦР с гибридизацией ДНК
Это - метод гибридизации ДНК ВПЧ, называемый методом иммунной гибридизации СР-14. Более 3 позитивных фосфорных точек можно наблюдать в флуоресцентном микроскопе при увеличении 400х. Для определения нуклеотидной последовательности ДНК ВПЧ можно использовать гибридизацию нуклеиновых кислот, а для определения специфической зоны амплификации ДНК ВПЧ может быть использована ПЦР. Однако - это сложный и дорогостоящий метод, который к тому же требует специального оборудования и специальных условий.
В настоящем изобретении препарат каркаса клеточной стенки Nocardia rubra применен для лечения инфекции ВПЧ путем наружного применения, инъекции и инъекции в эпидермис. Для различных стадий заболевания применено лечение различной длительности и получен хороший результат. Предварительные опыты показали, что это лекарство эффективно как в случае инфекции ВПЧ с высокой степенью опасности, так и в случае инфекции ВПЧ с невысокой степенью опасности.
Как утверждается, препарат каркаса клеточной стенки Nocardia rubra может быть использован для эффективного лечения инфекции ВПЧ и, более того, для предотвращения рака шейки матки. Изобретение предоставляет новый способ лечения венерического заболевания, индуцированного ВПЧ, и дает надежду пациентам, страдающим раком шейки матки.
Изобретение основано на том представлении, что инфекция ВПЧ является ключевым фактором в индукции рака шейки матки. Было проведено много опытов с использованием препарата каркаса клеточной стенки Nocardia rubra для получения устойчивости к ВПЧ, для борьбы с инфекцией ВПЧ был предложен набор способов, дающих хороший эффект. Таким образом разработан новый путь борьбы с инфекцией ВПЧ.
Преимущества использования препарата клеточной стенки Nocardia rubra для борьбы с инфекцией ВПЧ включают:
1. Высокую степень безопасности: побочные эффекты не наблюдались и не было отмечено в ходе лечения никаких неприятных ощущений.
2. Высокую степень пригодности: поверхностное применение для поверхностного заболевания, чтобы избежать генерализованной реакции организма.
3. Высокую степень уместности: поражения возникают на коже и слизистой, тогда как лекарство является хорошим иммуностимулятором, когда оно наносится на эти области, и поэтому лекарство в высокой степени уместно.
4. Неспецифичность: при применении настоящего способа обнаружена высокая активность в лечении любого типа инфекции ВПЧ.
5. Высокую эффективность: эффективность в подавлении инфекции ВПЧ составляет 72,7%, а эффективность излечения составляет 45,5%.
6. Легкость в использовании и распространении: для лечения необходимы только доступные медицинские приспособления.
7. Пригодность для настолько раннего лечения, насколько это возможно: способ удовлетворяет принципу лечения рака шейки матки при раннем обнаружении и раннем начале лечения.
8. Предупреждение: противодействие инфекции ВПЧ - это первое, что надлежит делать, в соответствии с тем принципом, что предупреждение важнее лечения.
Детальное описание изобретения
В нижеследующих примерах была осуществлена диагностика пациенток с целью установления наличия инфекции ВПЧ с помощью изложенных выше методов, затем зараженным ВПЧ пациенткам давали коммерческий препарат каркаса Nocardia rubra, имеющий название «Nikejar», путем непосредственного покрывающего нанесения на поражение или путем инъекции в пораженный участок, или путем инъекции в эпидермис затронутого участка, причем возможны также многократные инъекции небольших количеств препарата. «Nikejar» - это средство или препарат каркаса клеточной стенки Nocardia rubra (продукция фармацевтической компании Sun Bell Corn pharmaceutical Co. Ltd.).
За один цикл лечения был принят период в 20 дней комплексного лечения. Женщины в период менструации не должны были использовать лекарство. Как правило, инфекция в легкой стадии могла быть излечена после одного цикла лечения; инфекция средней степени тяжести могла быть устранена после двух циклов лечения; инфекция в тяжелой степени излечивается после трех циклов лечения. Для пациенток с очень серьезным заболеванием при необходимости следует применять операцию наряду с применением лекарств.
Клинический опыт, касающийся инфекции ВПЧ, проводится следующим образом. Индивидуумами были инфицированные женщины в возрасте 26-46 лет, имевшие инфекцию ВПЧ низкой степени опасности или инфекцию ВПЧ высокой степени опасности. Индивидуумы или пациентки в этом возрастном периоде все подвергаются высокой опасности быть зараженными; для лиц старше 30 лет особенно трудно излечиться самопроизвольно. Число введений лекарства и длительность интервалов для испытуемых групп несколько различались. Как правило, первое введение начинали после окончания менструации и пациентку обследовали повторно после окончания второй менструации. В ходе лечения половая жизнь возбранялась или же сексуальный партнер обязан был использовать кондом. Контрольная группа не подвергалась ничему, кроме наблюдения и обнаружения вируса. Из испытуемой группы 11 пациенток были доведены до конца лечения, а в контрольной группе 5 случаев были доведены до конца. Далее приводятся результаты.
Испытуемая группа:
(1) Среди 11 случаев применения настоящего лекарства для лечения инфекции ВПЧ в 5 случаях было полное прекращение инфекции, в 3 случаях инфекция типа I была ослаблена, в 3 случаях изменений не наблюдалось.
(2) Для 3 случаев в испытуемой группе, где не было получено изменений, объяснение может состоять в том, что инфекция была серьезной, время применения лекарства было слишком коротким и число введений было недостаточным. Если бы применение лекарства было продолжено, эффект мог бы быть хорошим.
(3) Статистика в испытуемой группе:
Эффективность излечения - 45,5%, эффективность воздействия на инфекцию - 72,7%. По 7 типам вируса, включая ВПЧ6, 11, 16, 31, 56, 58 и 59, было получено исчезновение инфекции (пациентки становились вирус-негативными). Из них 5 пациенток были с высокой степенью опасности (71,4% от общего числа пациенток в группе) и 2 пациентки - с низкой степенью опасности (28,6% от общего числа пациенток в группе).
(4) Новый вирус, обнаруженный у пациентки №003, может быть новым типом инфекции.
Контрольная группа:
(1) Контрольная группа не подвергалась ничему, кроме наблюдения и обнаружения вируса.
(2) Метод обнаружения вируса для контрольной группы был таким же, как и для испытуемой группы.
(3) Возраст пациенток в контрольной группе был таким же, как и в испытуемой группе, среди пациенток некоторые также были более старшего возраста.
(4) В течение периода лечения у 5 пациенток, выбранных из контрольной группы, позитивность по вирусу не изменилась.
Результаты испытаний препарата «Nikejar» для лечения пациенток в испытуемой группе и наблюдения пациенток в контрольной группе приведены соответственно в таблице 1 и таблице 2.
Результаты наблюдений в контрольной группе (параллельно испытаниям препарата «Nikejar» при лечении инфекции ВПЧ в испытуемой группе)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к применению каркаса клеточной стенки Nocardia rubra для приготовления лекарства против вируса папилломы человека (ВПЧ). Применение каркаса клеточной стенки Nocardia rubra обеспечивает повышение безопасности и эффективности препарата, облегчает применение, а также уменьшает срок терапии и повышает спектр активности препарата. 7 з.п. ф-лы, 2 табл.
1. Применение каркаса клеточной стенки Nocardia rubra для приготовления лекарства против вируса папилломы человека (ВПЧ).
2. Применение по п.1, отличающееся тем, что лекарство против ВПЧ содержит терапевтически эффективное количество каркаса клеточной стенки Nocardia rubra и фармацевтически приемлемые носители.
3. Применение по п.2, отличающееся тем, что носители включают наполнитель.
4. Применение по п.3, отличающееся тем, что наполнителем является декстран.
5. Применение по п.1, отличающееся тем, что лекарство приготовлено в форме препарата для местного применения.
6. Применение по п.5, отличающееся тем, что препарат для местного применения включает мазь, крем, пластырь, желатин (студень), лосьон, настойку, линимент, маслянистое средство, припарку и аэрозоль.
7. Применение по п.5, отличающееся тем, что препарат для местного применения представляет собой лосьон или линимент.
8. Применение по п.1, отличающееся тем, что 1 мл или 1 мг лекарства содержит от 0,001 до 1 мг каркаса клеточной стенки Nocardia rubra.
| Mahdavi A | |||
| et al | |||
| Vaccines against human papillomavirus and cervical cancer: promises and challenges | |||
| Oncologist | |||
| Способ обработки целлюлозных материалов, с целью тонкого измельчения или переведения в коллоидальный раствор | 1923 |
|
SU2005A1 |
| МИКРОФЛЮИДИЗИРОВАННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ИНДУКЦИИ СПЕЦИФИЧНОГО ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО Т-ЛИМФОЦИТНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА И ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ | 1995 |
|
RU2201253C2 |
| Способ получения 2,6-бис- (оксиметил)-пиридина | 1983 |
|
SU1094288A1 |
