СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХИМИЧЕСКОГО ГАСТРИТА Российский патент 2012 года по МПК G09B23/28 A61K31/196 A61K31/375 A61P43/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к ветеринарной гастроэнтерологии, экспериментальной медицине, патологической физиологии, и может быть использовано для изучения патогенеза химического гастрита, вызванного приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) у животных и проведения доклинической апробации новых методов лечения этой патологии.

Известно несколько вариантов моделирования химического гастрита, вызванного приемом НПВП в эксперименте. Blandizzi et аl. моделировали химический гастрит у крыс мужского пола линии Спрейг-Доули, используя перорально следующие агенты: диклофенак (60 ммоль/кг), пироксикам 150 ммоль/кг (Blandizzi, С. Lansoprazole prevents experimental gastric injury induced by non-steroidal anti-inflammatory drugs through a reduction of mucosal oxidative damage /C.Blandizzi, M.Fornai, R.Colucci et al. //World J. Gastroenterol. - 2005. - Vol.11. - №26. - P.4052-4060). При этом авторы отмечают у экспериментальных животных появление воспалительной инфильтрации в слизистой оболочке желудка (полиморфноядерными лейкоцитами), в том числе собственной пластинки, эрозии и язвы слизистой оболочки желудка. Однако по современным данным эрозии и язвы слизистой оболочки желудка, возникающие в результате моделирования химического гастрита по данной методике при использовании различных НПВП, не являются типичными для химического гастрита.

Наиболее близким аналогом является способ моделирования данной патологии, предложенный Vaananen et al., 1992, при котором у крыс, получавших перорально однократно индометацин в дозе 20 мг/кг, отмечалось формирование макроскопически видимых повреждений слизистой оболочки желудка (СОЖ) (Vaananen, P.M. Pharmacological investigation of the role of leukotrienes in the pathogenesis of experimental NSAID gastropathy /P.M.Vaananen, C.M.Keenan, M.B.Grisham, J.L.Wallace //Inflammation. - 1992, Jun. - Vol.16. - №3. - P.227-240). Одновременно у другой экспериментальной группы использовали внутривенное введение индометацина в дозе 20 мг/кг. Наибольшие повреждения слизистой оболочки желудка были получены при пероральном введении препарата.

Недостатками данного способа являются использование индометацина - НПВП, как препарата, чрезвычайно редко применяемого в ветеринарии для воспроизведения в эксперименте химического гастрита, и отсутствие таких патогномоничных для химического гастрита, вызванного приемом НПВП, гистологических признаков, как изменения ямочного эпителия и гипертрофия гладких мышц в стенке желудка на фоне минимально выраженных воспалительных явлений в СОЖ (Sobala, G.M. Reflux gastritis in the intact stomach /Sobala G.M., King R.F., Axon A.T., Dixon M.F.//J.Clin. Pathol. - 1990, Apr. - Vol.43. - 34. - P.303-306. Комптон К.К. Гастрит: новое в патоморфологической классификации и диагностике. /К.К.Комптон. //Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1998. - №3. - С.84-80). Поэтому разработка оптимального, приближенного к реальным условиям варианта моделирования химического гастрита, вызванного приемом НПВП, является на сегодняшний день актуальной научно-практической задачей ветеринарной науки.

Технический результат: создание модели, наиболее полно отражающей морфологическую картину поражения слизистой оболочки желудка при химическом гастрите, вызванном приемом НПВП, у животных с использованием НПВП, применяемых в повседневной ветеринарной практике.

Указанная задача достигается путем перорального введения неинбредным белым крысам в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки смеси 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен («МЕРИАЛ», Франция; международное непатентованное название - Кетопрофен) из расчета 5 мг/кг.

Способ осуществляют следующим образом. Неинбредным белым крысам (самцам и самкам) в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки вводят смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен («МЕРИАЛ», Франция; международное непатентованное название - Кетопрофен) из расчета 5 мг/кг. По окончании эксперимента животных забивают под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, материал (стенку желудка) фиксируют в 10% забуференном по Лилли (рН 7,2) формалине. Используя общепринятые методики, готовят гистологические препараты, в которых выявляют типичные гистологические признаки химического гастрита: гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, увеличение количества обкладочных (париетальных) клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток, отек собственной пластинки слизистой оболочки.

Эксперимент выполнен на 50 животных - самцах и самках неинбредных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Животные были разделены на 2 экспериментальные группы, состав групп был следующий:

I группа - контрольная (интактные животные), n=25;

II группа - животные, получавшие в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен («МЕРИАЛ», Франция; международное непатентованное название - Кетопрофен) из расчета 5 мг/кг, n=25.

На 22-й день от начала эксперимента животных выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. При проведении аутопсии гистологические образцы, полученные из различных отделов желудка крысы (пищеводный, кардиальный, пилорический отделы), фиксировали в 10% забуференном по Лилли формалине (рН 7,2), обезвоживали в спиртах восходящей крепости, заливали в парафин, срезы (3-4 мкм) получали на ротационном микротоме, наносили на стекла с адгезивным покрытием (яичный альбумин), окрашивали гематоксилином, и эозином, и пикрофуксином по ван Гизону.

При проведении гистологического исследования у всех животных, получавших в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен («МЕРИАЛ», Франция; международное непатентованное название - Кетопрофен) из расчета 5 мг/кг, отмечали появление гистологических признаков, патогномоничных для химического гастрита: уменьшение количества главных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка на фоне увеличения количества эозинофильно окрашенных париетальных клеток, продуцирующих соляную кислоту, гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток и ее отек.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Самке неинбредной белой крысы, массой 186 г, в течение 21 дня перорально в течение 21 дня за 1 ч до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен из расчета 5 мг/кг. На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При исследовании гистологических образцов в проходящем свете светового микроскопа выявлены выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка отмечались гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, увеличение количества париетальных клеток в дне желез слизистой оболочки желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладких миоцитов. Выявленные изменения соответствуют гистологической картине химического гастрита, вызванного приемом НПВП.

Пример 2. Самцу неинбредной белой крысы, массой 178 г, в течение 21 дня перорально за 1 час до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен из расчета 5 мг/кг. На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга с соблюдением правил эвтаназии, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При микроскопии гистологических образцов отмечались выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка выявлены гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, уменьшение количества главных клеток за счет преобладания обкладочных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладкомышечных клеток.

Таким образом, у данного животного ежедневное пероральное введение 5% раствора аскорбиновой кислоты в сочетании с нестероидным противовоспалительным препаратом (Кетофен) также привело к развитию химического гастрита, что было подтверждено результатами гистологического исследования.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в создании экспериментальной модели химического гастрита, обусловленного приемом НПВП, часто используемых в ветеринарной практике, обладающей 100%-ной воспроизводимостью и соответствующей по гистологической картине химического гастрита, наблюдаемого в ветеринарной практике.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, ветеринарии и касается моделирования химического гастрита у животных. Для этого неинбредным белым крысам в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен из расчета 5 мг/кг за 1 час до кормления 1 раз в сутки. Способ обеспечивает создание модели, обладающей 100% воспроизводимостью и наиболее полно отражающей морфологическую картину поражения слизистой оболочки желудка при химическом гастрите у животных в ветеринарной практике, что может быть использовано для изучения патогенеза гастрита у животных и исследования эффективности новых методов лечения данной патологии.

Способ моделирования химического гастрита путем перорального введения крысам нестероидного противовоспалительного препарата, отличающийся тем, что неинбредным белым крысам в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5%-ного раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Кетофен из расчета 5 мг/кг за 1 ч до кормления 1 раз в сутки.