СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ С СИНДРОМОМ ПОРТАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ Российский патент 2011 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть применено для получения модели цирроза печени с синдромом портальной гипертензии.

Лечение осложнений портальной гипертензии, обусловленной циррозом печени, остается актуальной проблемой хирургической гепатологии. Наиболее фатальным осложнением цирроза печени является кровотечение из варикозно расширенных вен пищевода и кардии, ведущим фактором в патогенезе развития кровотечений при этом является высокое портальное давление (Котив Б.Н. Хирургическая профилактика и лечение пищеводно-желудочных кровотечений при портальной гипертензии: дис. … докт. мед. наук. - Санкт-Петербург, 1998. - 232 с.).

Для повышения эффективности лечения больных циррозом печени необходимо решение ряда задач в опытах на животных путем создания модели заболевания.

Моделирование цирроза печени с синдромом портальной гипертензии является достаточно сложной задачей, обусловленной многообразием функций печени и особенностями ее васкуляризации, представленной двумя самостоятельными системами - воротной веной и печеночной артерией.

Известен способ моделирования цирроза печени путем длительного введения малых доз гепатотропного яда в виде четыреххлористого углерода (CCl₄). При вскармливании собак 2 раза в неделю с пищей по 3-5 мл раствора CCl₄ цирроз развивается спустя 6 месяцев (Фишер А. Физиология и экспериментальная патология печени. - Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1961. - 215 с.).

Портальную гипертензию, вызванную внутрипеченочным блоком, воспроизвести труднее всего. Она может возникнуть у животных с выраженным некрозом печени, особенно развившимся на фоне центролобулярного некроза. В этих условиях воспроизводимость портальной гипертензии невелика и не превышает 30-40%, следовательно, результаты опыта практически непрогнозируемы.

Известен способ моделирования цирроза печени по методике Д.С. Саркисова (Руководство по экспериментальной хирургии / С.А. Шалимов, А.П. Радзиховский, Л.В. Кейсевич. - М.: Медицина, 1989. - 272 с.). По методике Д.С. Саркисова (1965) моделирование цирроза печени проводилось введением подопытным кроликам 40% раствора четыреххлористого углерода в персиковом масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю. При этом процесс формирования цирроза печени начинается через 1,5-2 мес от начала эксперимента с отчетливым выражением патологического процесса спустя 3-4 месяца.

Прототипом изобретения является способ моделирования цирроза печени по методике С.А. Шалимова с соавт. (1989) путем селективной катетеризации внутрипеченочных разветвлений воротной вены и их эмболизации микросферами, заключающийся в эндоваскулярной окклюзии воротной вены с введением спирали Гиантурко. Воспроизводимость патологического процесса в данном случае тоже невысока и составляет 50-55% (Руководство по экспериментальной хирургии / С.А. Шалимов, А.П. Радзиховский, Л.В. Кейсевич. - М.: Медицина, 1989. - 272 с.).

Однако проведение моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии вышеназванными методиками вызывает трудности, связанные с необходимостью длительного эксперимента, с применением дорогостоящих инвазивных ангиографических и эндоваскулярных вмешательств.

Задачей изобретения является разработка способа ускоренного моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии.

Технический результат - сокращение времени моделирования и повышение воспроизводимости цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, возможность изучения механизмов возникновения заболевания.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, включающем эмболизацию ветвей воротной вены экспериментальных животных, согласно изобретению эмболизацию ветвей воротной вены проводят путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру с селективной катетеризацией ветвей портальной вены печени с применением гемостатической губки, дополнительно проводят сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен, после чего подкожно вводят 40% раствор четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю.

Предлагаемый способ моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии осуществляют следующим образом. У экспериментального животного проводят хирургическое вмешательство под внутривенным наркозом с применением: рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг, при необходимости добавляют стадол, с предварительной премедикацией путем внутримышечного введения коктейля следующего состава: анальгин 50-70 мг/кг (2 мл 50% раствора), димедрол 1,5 мг/кг (0,15 мл 1% раствора), дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25% раствора) и 0,01-0,03 мг/кг сульфата атропина (1-2 мл 0,1% раствора).

Проводят эмболизацию ветвей воротной вены путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру катетером Cobra 5F под рентгенконтролем с селективной катетеризацией ветвей портальной вены печени экспериментальных животных. При этом продвижение катетера в воротную вену до нужного уровня проводят визуально и пальпаторно. Для эмболизации ветвей портальной вены применяют гемостатическую губку.

Одновременно проводят сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40% раствора четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю. При проведении эмболизации явления наступившей эмболизации ветвей портальной вены были отмечены уже во время операции.

В результате проведенных исследований получена экспериментальная модель цирроза печени с синдромом портальной гипертензии по ускоренной методике с расширением брыжеечных вен и развитием асцита.

До начала экспериментов и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене и выполняли трепанобиопсию печени.

После экспериментального моделирования цирроза печени нами каждые 3-5 сутки в течение 1 месяца производилась трепанобиопсия печени экспериментальных животных под контролем УЗИ при помощи трепана диаметром иглы G-18. Всего было проведено по 4 биопсии у всех экспериментальных животных, с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. Анализированы 144 гистологических материала, где у 95,6% экспериментальных животных вышеописанной серии на 17-21 сутки верифицированы изменения, характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз.

Следовательно, при эмболизации ветвей воротной вены в сочетании с перевязкой печеночных вен и дополнительном введении четыреххлористого углерода получена ускоренная модель формирования цирроза печени с явлениями портальной гипертензии, асцитом, расширением брыжеечных вен, где развитие процесса отмечено к началу 3 недели эксперимента.

Давление в воротной вене до начала моделирования цирроза печени варьировало в пределах 91,4±14,2 мм вод.ст. С моделью хронической внутрипеченочной портальной гипертензии этот показатель составил 269,3±17,8 мм вод.ст.

Предлагаемая методика не представляет технических трудностей, и проведенные исследования доказали возможность моделирования цирроза печени в эксперименте по ускоренной методике путем эмболизации ветвей воротной вены в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четыреххлористого углерода. Таким образом, уже к началу 3 недели - на 17-21 сутки - сформировывался центролобулярный некроз с переходом в цирроз с повышением давления в воротной вене с 91,4±14,2 до 269,3±17,8 мм вод.ст.

Исследования данным способом выполнены у 38 беспородных собак обоего пола весом 15-35 кг, и получена экспериментальная модель цирроза печени с синдромом портальной гипертензии.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено сведений об известности способа моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, включающего эмболизацию ветвей воротной вены гемостатической губкой в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четыреххлористого углерода. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».

Исследованиями авторов доказано, что моделирование цирроза печени путем эмболизации ветвей воротной вены гемостатической губкой в комбинации с дополнительной перевязкой печеночных вен и введением четыреххлористого углерода сокращает время формирования модели, обеспечивает высокую воспроизводимость цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, изучение механизмов возникновения заболевания. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Пример 1. Собака, кобель, вес 18 кг. После стандартной подготовки животного к операции проводили премедикацию внутримышечным введением коктейля следующего состава: анальгин 70 мг/кг (2 мл 50% раствора), димедрол 1,5 мг/кг (0,15 мл 1% раствора), дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25% раствора) и 0,03 мг/кг сульфата атропина (2 мл 0,1% раствора). После трехкратной обработки операционного поля 3% настойкой йода произведена срединная лапаротомия. Хирургическое вмешательство проводили под внутривенным наркозом с применением: рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг с добавлением стадола. Проводили визуальную оценку состояния органов брюшной полости. Затем под рентгенконтролем выполнили селективную катетеризацию брыжеечной вены по Сельдингеру катетером Cobra 5F с эмболизацией ветвей портальной вены с применением нарезанных кусочков гемостатической губки. Одновременно проводили сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40% раствора четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю. При проведении эмболизации интраоперационно отмечены явления наступившей эмболизации ветвей портальной вены.

После экспериментального моделирования цирроза печени каждые 3-5 сутки в течение 1 месяца производилась трепанобиопсия печени экспериментального животного под контролем УЗИ при помощи трепана диаметром иглы G-18. Всего было проведено по 4 биопсии, с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. При этом в биоптате, выполненном на 18 сутки, верифицированы изменения, характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз. Во время канюляции брыжеечной вены и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене, что составило от 97,2 до 283,4 мм вод.ст. соответственно.

В послеоперационном периоде также отмечено ухудшение показателей печеночного обмена в биохимических анализах крови.

Пример 2. Собака, сука, вес 16 кг. Проводилась стандартная подготовка животного к операции. Премедикация с внутримышечным введением коктейля следующего состава: анальгин 60 мг/кг (2 мл 50% раствора), димедрол 1,5 мг/кг (0,15 мл 1% раствора), дроперидол 0,5 мг/кг (0,2 мл 0,25% раствора) и 0,02 мг/кг сульфата атропина (1 мл 0,1% раствора). После трехкратной обработки операционного поля 3% настойкой йода произведена срединная лапаротомия. Операцию проводили под внутривенным наркозом с применением: рамитар 0,15 мл/кг, пропофол 13,5 мг/кг. После визуальной оценки состояния органов брюшной полости под рентгенконтролем выполнили селективную катетеризацию брыжеечной вены по Сельдингеру катетером Cobra 5F с эмболизацией ветвей портальной вены с применением нарезанных кусочков гемостатической губки. Одновременно проводили вмешательство, направленное на сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен в сочетании с подкожным введением 40% раствора четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю.

После экспериментального моделирования цирроза печени в течение 1 месяца каждые 3-5 сутки производили трепанобиопсию печени экспериментального животного под контролем УЗИ при помощи трепана диаметром иглы G-18. Всего было проведено 4 биопсии, с каждого полученного биоптата готовились по 3 среза с разных участков. При этом в биоптате, выполненном на 17 сутки, верифицированы изменения, характерные для центролобулярного некроза печени с переходом в цирроз. Во время канюляции брыжеечной вены и после формирования цирроза печени с развитием портальной гипертензии измеряли давление в воротной вене, что составило от 96,8 до 277,9 мм вод.ст. соответственно.

В послеоперационном периоде также отмечено ухудшение показателей печеночного обмена в биохимических анализах крови.

Предлагаемый и апробированный в эксперименте способ является эффективной ускоренной методикой моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии. Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях эксперимента. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «промышленная применимость».

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии. Для этого выполняют эмболизацию ветвей воротной вены экспериментальных животных путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру с селективной катетеризацией портальной вены печени с применением гемостатической губки. Дополнительно проводят сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен. После этого подкожно вводят 40% раствор четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю. Способ обеспечивает сокращение времени моделирования, повышение воспроизводимости цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, а также обеспечивает возможность изучения механизмов возникновения заболевания.

Способ моделирования цирроза печени с синдромом портальной гипертензии, включающий эмболизацию ветвей воротной вены экспериментальных животных, отличающийся тем, что эмболизацию ветвей воротной вены проводят путем катетеризации брыжеечной или селезеночной вены по Сельдингеру с селективной катетеризацией ветвей портальной вены печени с применением гемостатической губки, дополнительно проводят сужение полой вены проксимальнее впадения печеночных вен с обтурацией устьев печеночных вен, после чего подкожно вводят 40%-ный раствор четыреххлористого углерода в подсолнечном масле из расчета 2,0 мл/кг два раза в неделю.