СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДДЕРЖИВАЮЩЕЙ ТЕРАПИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ ИЗ ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ИКРЫ МОРСКИХ ЕЖЕЙ Российский патент 2011 года по МПК A61K35/12 A61P43/00 

Описание патента на изобретение RU2414914C1

Группа изобретений относится к фармакологии, в частности к технологии получения биологически активного вещества, и касается способа выделения из лиофилизированной икры морских ежей средства для поддерживающей терапии и представляющего собой пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 300 до 3000 Да, которое может быть использовано в медицинской практике для профилактики и коррекции возрастных нарушений функций иммунной системы, головного мозга, сердца, репродуктивной системы.

В изобретении используется термин «поддерживающая терапия», принятый в той области, к которой относится использование целевого продукта, полученного по предлагаемой технологии. Термин «поддерживающая терапия» подразумевает использование полученного по предлагаемой технологии средства в комплексном лечении различных заболеваний с целью поддержания функции различных органов и тканей [см. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Позняковский В.М. Биологически активные добавки в питании человека (оценка качества и безопасности, эффективность, характеристика, применение в профилактической и клинической медицине). Томск, 1999, 295 с.].

Известно, что старение человека является результатом целого комплекса изменений в биохимическом статусе организма человека. В связи с тем, что настоящее время в соответствии с демографическими тенденциями сохраняется неуклонный рост людей пожилого и старческого возраста, в мире ведется активная работа по поиску и внедрению в практику новых фармакологических препаратов, биологически активных веществ, действие которых направлено на компенсацию возникающего с возрастом дефицита эндогенных протекторных факторов. Как указывалось выше, основной причиной возникновения многих заболеваний является переизбыток свободных окислительных радикалов. Кроме того, известно, что такой же процесс происходит и при старении организма. Свободные радикалы в первую очередь повреждают мембраны клеток, их липидные структуры, обусловливая нарушение гомеостаза.

Неконтролируемому образованию свободных радикалов (помимо системы защитных сил организма) противостоят биологически ценные белки, полиненасыщенные жирные кислоты, витамины A, E, C, и др., а также минеральные вещества Ca, K, Mg, Fe, Se, Zn, J и др., которые содержатся в продуктах моря.

В последние годы большие значение и спрос приобретают геропротекторные препараты на основе природных компонентов, обладающие по сравнению с синтетическими препаратами более мягким действием на организм. Необходимо отметить, что к указанным природным компонентам относят также гидробионты, которые используются в качестве сырья при разработке технологии выделения биологически активных веществ.

Известно, что морской еж как пищевой продукт не представляет интереса из-за своего специфического вкуса, но икра морских ежей является лечебно-профилактическим продуктом, в котором в зависимости от сезона добычи содержится 12-20% белка, 10-35% жира и до 3,5% минеральных веществ, оказывающих тонизирующее действие на организм.

Известна лечебно-профилактическая композиция, обладающая общеукрепляющим и омолаживающим действием [патент РФ №2276986], содержащая сублимированную икру морских ежей, сублимированные фрагменты бурых водорослей из полости морских ежей, сублимированную внутриполостную жидкость морских ежей и сублимированную морскую капусту при определенном соотношении компонентов. Согласно изобретению, описанному в патенте РФ №2276986, лечебно-профилактическая композиция выполнена в форме порошка, капсул, таблеток и получена путем сушки компонентов в замороженном состоянии в условиях глубокого вакуума, после чего компоненты измельчают и смешивают. Полученный таким образом препарат нормализует обменные процессы у лиц, находящихся в экстремальных метаболических условиях.

Лечебно-профилактическая композиция, полученная путем сушки компонентов в замороженном состоянии в условиях глубокого вакуума, описанная в патенте РФ №2276986, принята в качестве прототипа предлагаемого средства для поддерживающей терапии и способа его получения.

Следует отметить, что при разработке технологии выделения целевого продукта, получаемого из морских ежей, необходимо учитывать тот факт, что предприятия по производству лекарственных средств, и предприятия, добывающие морских ежей, обычно территориально находятся на значительном отдалении друг от друга. Поэтому заготовка сырья и его последующая обработка является наиболее важными стадиями процесса выделения биологически активного вещества для сохранения его биологической активности.

Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, состоит в разработке технологии выделения из лиофилизированной икры морских ежей пептидного комплекса с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов не более 3000 Да, очищенного от белковых, нуклеиновых и липидных примесей.

Технический результат заключается в том, что согласно предлагаемому способу, включающему использование в качестве сырья лиофилизированной икры морских ежей, и определенную последовательность технологических операций, а также условий их осуществления, получают средство, представляющее собой пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов от 300 до 3000 Да, очищенный от белковых, нуклеиновых и липидных примесей и обладающий выраженным протекторным действием на основные системы организма, основанным на иммуностимулирующей, кардиопротекторной, церебропротекторной активности целевого продукта и его влиянии на репродуктивную систему.

Для решения поставленной задачи и достижения указанного технического результата предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом.

Одним из аспектов предлагаемой группы изобретений является способ получения средства для поддерживающей терапии, включающий обработку сырья путем сушки в замороженном состоянии, характеризующийся тем, что икру морских ежей замораживают не позднее чем через 2 часа после ее сбора при температуре не менее минус 40°C и лиофилизируют, к лиофилизированному сырью добавляют 5% раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 10 объемов раствора уксусной кислоты к 1 объему лиофилизированного сырья, повышают температуру суспензии до 60÷70°C и проводят экстракцию пептидов в раствор при постоянном перемешивании в течение не менее 2 часов, затем надосадочную жидкость сифонируют и фильтруют через ткань, имеющую плотность не менее 125 г/м2, для удаления макрочастиц размером более 5 мкм, после чего очищенный экстракт направляют на тангенциальную микрофильтрацию, которую проводят с использованием микрофильтрационных модулей на основе трековых мембран с номинальным размером пор 0,3÷0,4 мкм при скорости рециркуляции суспензии в камере концентрата 30÷38 л/ч и скорости фильтрации 1,8÷2,5 л/ч; полученный фильтрат направляют на твердофазную экстракцию, которую проводят с использованием ионообменного сорбента, сульфированного сополимера стирола и дивинилбензола с содержанием дивинилбензола 8÷10 моль%; при этом для проведения твердофазной экстракции сорбент помещают в массообменники колоночного типа, а фильтрат подают на массообменник насосом снизу в режиме рециркуляции со скоростью 3÷4 л/ч при температуре 25÷30°C таким образом, что сорбент находится в форме взвешенного слоя; твердофазную экстракцию проводят в течение 3 часов, после чего осуществляют вытеснение фильтрата из экстрактора и отмывку сорбента в условиях взвешенного слоя сорбента 5% водным раствором уксусной кислоты, которую подают в колонку снизу тем же насосом, до выхода из колонки прозрачного бесцветного раствора; после получения прозрачного промывочного раствора 5% водный раствор уксусной кислоты подают в массообменник через верхний штуцер и таким образом укладывают сорбент на нижний дренаж ровным слоем; затем последовательно замещают раствор кислоты деминерализованной водой, проводят десорбцию пептидов с катионита в режиме вытеснительной ионообменной хроматографии, при этом в качестве вытеснителя используют катион аммония, а вытеснение осуществляют вначале нейтральным аммиачным буферным раствором при pH 5,5 и затем щелочным буферным раствором при pH 12,5, а хроматографию осуществляют со скоростями, не превышающими 4 мл/ч·см2 сечения колонки, на выходе из колонок собирают фракции растворов, при этом фракции, содержащие пептидные компоненты, объединяют и направляют на вакуум-выпарную установку при температуре в системе не выше 42±3°C, после чего полученный целевой продукт, характеризующийся pH 5,5÷7,0, содержанием пептидных компонентов с молекулярной массой в пределах от 300 до 3000 Да, лиофилизируют.

Другим аспектом изобретения является средство для поддерживающей терапии, полученное вышеописанным способом из лиофилизированной икры морских ежей и представляющее собой пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 300 до 3000 Да, поддерживающий функцию иммунной системы, сердца, головного мозга, мужской репродуктивной системы.

Необходимо отметить, что в отличие от известных, предлагаемый способ позволяет получить средство, представляющее собой пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов от 300 до 3000 Да, обладающий выраженным протекторным действием, направленным на поддержание функций определенных систем организма, что достигается предлагаемой последовательностью технологических операций с использованием микрофильтрационного оборудования и условиями их осуществления, включая температурные, временные и иные характеристики, а также использование веществ, включая исходное сырье, определенный экстрагент и сорбент.

Сущность изобретения поясняется таблицей и примерами.

В Таблице показано влияние пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, на развитие эксплантатов в органотипических культурах различных тканей.

Ниже приведены примеры конкретного выполнения изобретения: пример осуществления способа - пример 1 - способ получения пептидных комплексов из лиофилизированной икры морских ежей, а также пример 2, подтверждающий биологическую активность полученных пептидных комплексов, выделенных из лиофилизированной икры морских ежей.

Пример 1. Способ получения пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, обладающего общеукрепляющим действием.

В качестве сырья используют икру морских ежей, которую не позднее чем через 2 часа после ее сбора замораживают при температуре не менее минус 40°C и лиофилизируют.

Лифилизированное сырье в количестве 350 г помещают в стеклянную термостатируемую емкость с мешалкой объемом 4 л и заливают 5% водным раствором уксусной кислоты до суммарного объема 3 л. Затем повышают температуру суспензии до 60-70°C и при постоянном перемешивании проводят экстракцию в течение не менее 2 часов.

Надосадочную жидкость сифонируют и фильтруют через ткань, имеющую плотность не менее 125 г/м2, для удаления макрочастиц (размером более 5 мкм) из экстракта. Полученный очищенный экстракт из икры морских ежей направляют на тангенциальную микрофильтрацию с использованием микрофильтрационных модулей на основе трековых мембран с номинальным размером пор 0,3-0,4 мкм, при этом скорость рециркуляции суспензии в камере концентрата составляет 30-38 л/ч, а скорость фильтрации - 1,8-2,5 л/ч.

Полученный фильтрат направляют на твердофазную экстракцию, которую проводят с использованием ионообменного сорбента - сульфированного сополимера стирола и дивинилбензола с содержанием дивинилбензола 8-10 моль%; при этом для проведения твердофазной экстракции сорбент помещают в массообменники колоночного типа, а фильтрат подают на массообменник перистальтическим насосом снизу в режиме рециркуляции со скоростью 3-4 л/ч при температуре 25-30°C так, что сорбент находится в форме взвешенного слоя для однородного обтекания гранул сорбента. Твердофазную экстракцию проводят в течение 3 часов, затем отбирают пробу из циркулирующего раствора и сохраняют ее при температуре 2-4°C для последующего анализа. Вытеснение фильтрата из экстрактора и отмывку сорбента проводят в условиях взвешенного слоя сорбента 5% водным раствором уксусной кислоты, подавая его в колонку снизу тем же насосом, до выхода из колонки прозрачного бесцветного раствора. После получения прозрачного промывочного раствора 5% водный раствор уксусной кислоты подают в массообменник через верхний штуцер, укладывая сорбент на нижний дренаж ровным слоем; затем последовательно замещают раствор кислоты деминерализованной водой.

Десорбцию пептидов икры морских ежей с катеонита проводят в режиме вытесни-тельной ионообменной хроматографии, используя катион аммония в качестве вытеснителя, причем вытеснение осуществляют аммиачными буферными растворами в две стадии - вначале нейтральным (pH 5,5) и затем щелочным (pH 12,5), а хроматографию осуществляют со скоростями, не превышающими 4 мл/ч·см2 сечения колонки, что позволяет значительно сконцентрировать целевые пептиды. На выходе из колонок собирают фракции растворов, при этом фракции, содержащие пептидные компоненты, объединяют и направляют на вакуум-выпарную установку для удаления летучих компонентов и воды при температуре в системе не выше 42±3°C, после чего полученный целевой продукт лиофилизируют.

Выход целевого продукта (пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей) составляет 300,0 г на 1 кг исходного сырья.

Целевой продукт (пептидный комплекс, выделенный из лиофилизированной икры морских ежей) представляет собой порошок от светло-кремового до желтовато-кремового цвета и содержит биологически активные пептидные компоненты. Целевой продукт умеренно растворим в воде, pH раствора 5,7-6,1.

Для более подробной характеристики пептидного комплекса, полученного предлагаемым способом, проведено изучение его состава, основных физико-химических свойств, специфической биологической активности.

Молекулярную массу пептидных компонентов, входящих в пептидный комплекс, определяют методом гель-хроматографии на сефадексах G-25 и G-50 («Pharmacia», Швеция). Для калибровки колонки 1,6x60 см используют набор маркеров Peptide Molecuar Weight Kit MS III («Serva», Германия). Установлено, что в состав пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, входят вещества с молекулярной массой не более 3000 Да. С помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила (сорбент «Lichrosorb C18», колонка 2×62 мм) установлено, что в состав пептидного комплекса входят преимущественно низкомолекулярные пептидные фракции (от 70 до 90%), а высокомолекулярные компоненты в пептидном комплексе отсутствуют. По данным электрофореза в 15%-ном полиакриламидном геле молекулярная масса пептидных компонентов пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, составляет от 300 до 3000 Да.

Для определения подлинности пептидного комплекса навеску целевого продукта 10 мг помещают в пробирку, растворяют при тщательном перемешивании в 5 мл воды. Раствор фильтруют через бумажный фильтр. Для приготовления биуретового реактива растворяют 90 г калия-натрия тартрата в 400 мл 0,2 н. раствора едкого натрия, прибавляют 10 г меди сернокислой 5-водной, после растворения добавляют 10 г йодида калия и доводят объем раствора 0,2 н. раствором едкого натра до 2 л. К исследуемому раствору добавляют 5 мл биуретового реактива. В качестве вещества сравнения используют воду. Окрашивание раствора в фиолетовый цвет свидетельствует об имеющихся в комплексе пептидных связях.

Идентификацию активного пептидного комплекса проводят с помощью ультрафиолетовой спектрофотометрии. Для этого 10 мг пептидного комплекса растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. На спектрофотометре измеряют ультрафиолетовый спектр пептидного комплекса в кварцевых кюветах с толщиной слоя 10 мм в области длин волн от 250 до 300 нм. В качестве раствора сравнения используют воду. Спектр должен иметь выраженный максимум при длине волны (270±5) нм. Соотношение оптических плотностей при длинах волн 275 нм (Д275) и 260 нм (Д260) - Д275260 - должно быть не менее 1,0. В полученном целевом продукте - пептидном комплексе, выделенном из лиофилизированной икры морских ежей, соотношение оптических плотностей Д275260 составило 1,12.

Пример 2. Биологическая активность пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей

Для изучения биологической активности пептидного комплекса, выделенного предлагаемым способом из лиофилизированной икры морских ежей, исследовали влияние целевого продукта на рост органотипических культур различных тканей молодых (3-месячных) половозрелых крыс линии "Wistar" с массой тела 150-200 г и старых крыс (24-месячных) с массой тела 420-450 г.

Отпрепарированные в стерильных условиях фрагменты различных тканей (хрящей, сердца, тимуса, коры головного мозга, шишковидной железы, поджелудочной железы, щитовидной железы, предстательной железы, семенников, почек, мочевого пузыря, сосудов, яичников, слизистой оболочки бронхов, слизистой оболочки желудка, надпочечников) крыс разделяли на более мелкие части величиной около 1 мм3, которые помещали в чашки Петри с коллагеновым покрытием дна. Питательная среда состояла из 35% среды Игла, 35% раствора Хенкса, 25% фетальной телячьей сыворотки, 5% куриного эмбрионального экстракта, 0,6% глюкозы, 100 ед/мл гентамицина. Исследуемый пептидный комплекс, выделенный из икры морских ежей, вводили в культуральную среду в концентрациях от 0,01 до 20 нг/мл для выявления его эффективных концентраций.

В чашки Петри с экспериментальными эксплантатами добавляли по 3 мл питательной среды, содержащей пептидный комплекс, выделенный из лиофилизированной икры морских ежей, в исследуемой концентрации, а в чашки Петри с контрольными эксплантатами - по 3 мл питательной среды без пептидного комплекса; таким образом, экспериментальные и контрольные эксплантаты развивались в одинаковых объемах питательной среды. Чашки Петри помещали в термостат при температуре (37±0,5)°C и через 3 сут просматривали под фазово-контрастным микроскопом. Определяли индекс площади (ИП), который рассчитывали в условных единицах как отношение площади всего эксплантата вместе с зоной выселяющихся клеток к площади центральной зоны эксплантата. Для визуализации эксплантатов применяли микротеленасадку для микроскопа (серия 10, МТН-13 "Альфа-Телеком", Россия).

Для расчета индекса площади эксплантатов использовали программу Photo М 1.2. Достоверность различий в индексах площади контрольных и экспериментальных эксплантатов оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Значения индекса площади выражали в процентах, контрольное значение ИП принимали за 100%. При использовании пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, в концентрациях 0,01 и 10 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов сердца на 26-28% у молодых животных и на 21-23% - у старых крыс; эксплантатов тимуса - на 34-35% у молодых животных и на 30-31% - у старых крыс; эксплантатов коры головного мозга - на 22-23% у молодых животных и на 21-23% - у старых крыс; эксплантатов семенников -на 25-27% у молодых животных и на 22-23% - у старых крыс по сравнению с соответствующими контрольными значениями ИП.

Полученные данные представлены в Таблице.

Следует отметить, что добавление пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, в эффективной концентрации в питательную среду органотипических культур других тканей крысы (хрящей, шишковидной железы, поджелудочной железы, щитовидной железы, предстательной железы, почек, мочевого пузыря, сосудов, яичников, слизистой оболочки бронхов, слизистой оболочки желудка, надпочечников) не приводило к достоверному увеличению ИП эксплантатов.

Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что в отношении тканей сердца, тимуса, коры головного мозга и семенников пептидный комплекс, выделенный из лиофилизированной икры морских ежей, оказывает стимулирующее действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов соответствующих тканей, что подтверждает проявление биологической активности пептидного комплекса по отношению к основным системам организма. Это позволяет считать показанным использование пептидного комплекса в качестве средства для поддерживающей терапии.

Таблица Органотипическая культура Возраст крыс Кол-во эксплантатов Концентрация пептидного комплекса, выделенного из лиофилизированной икры морских ежей, нг/мл 0,01 0,1 1,0 10,0 Сердце Молодые 24 25,8±1,9* 11,5±1,6 13,1±1,5 28,1±1,5* Старые 23 23,2±1,5* 11,8±1,6 10,3±1,2 22,6±1,9* Тимус Молодые 25 36,3±2,6* 9,4±1,5 12,8±1,8 33,8±2,5* Старые 26 32,6±1,5* 14,5±1,7 11,7±1,9 31,7±2,2* Кора головного мозга Молодые 23 22,1±1,7* 12,7±1,1 10,0±1,2 21,1±1,4* Старые 25 20,7±1,2* 10,7±1,4 9,5±1,3 22,0±2,1* Семенники Молодые 23 24,9±1,6* 9,2±1,3 7,1±1,1 26,8±1,9* Старые 25 21,8±2,1* 8,6±1,3 9,4±1,3 24,1±1,8* Шишковидная железа Молодые 27 7,1±1,5 8,1±1,1 8,3±1,5 6,7±1,3 Старые 25 4,2±1,1 3,7±1,0 4,3±1,2 6,3±1,6 Поджелудочная железа Молодые 26 5,2±1,7 6,4±0,9 5,5±1,5 4,1±,1 Старые 24 6,2±1,5 4,1±1,3 6,8±1,2 2,7±1,1 Щитовидная железа Молодые 27 9,4±1,6 7,1±1,5 6,9±0,5 5,7±1,7 Старые 25 5,2±1,6 6,3±1,4 4,1±1,2 6,5±1,3 Предстательная железа Молодые 24 7,8±1,8 4,2±1,9 7,3±0,6 5,6±1,3 Старые 26 9,2±1,5 7,3±1,6 10,8±2,6 9,5±1,9 Почки Молодые 26 7,5±1,4 6,7±1,3 2,5±0,4 3,2±1,5 Старые 27 6,1±1,5 5,4±1,5 3,5±1,6 5,5±0,6 Мочевой пузырь Молодые 25 10,4±1,5 12,1±1,6 10,3±1,7 9,7±1,4 Старые 24 5,7±1,2 7,6±1,3 7,1±1,5 5,8±1,5 Сосуды Молодые 25 8,1±1,2 7,7±1,6 9,1±1,5 7,7±1,3 Старые 26 2,6±0,1 2,5±0,6 1,9±0,4 2,8±0,4 Яичники Молодые 27 14,2±1,9 15,1±1,9 12,4±1,7 10,7±1,6 Старые 23 10,4±1,3 11,3±1,5 13,1±1,8 14,2±1,5 Слизистая оболочка желудка Молодые 25 4,7±0,5 5,6±1,1 7,5±1,5 6,4±1,1 Старые 24 3,2±0,9 4,1±0,7 2,1±0,4 2,4±0,5 Надпочечники Молодые 26 4,2±1,1 6,7±1,3 5,4±1,3 3,8±1,4 Старые 24 6,1±1,2 8,1±1,7 4,3±1,6 5,3±1,7 Слизистая оболочка бронхов Молодые 25 9,3±1,5 8,4±1,7 3,1±1,1 4,8±1,6 Старые 26 7,2±0,7 6,4±1,4 4,7±1,4 7,3±1,1 * - p<0,05 по сравнению с контролем.

Похожие патенты RU2414914C1

название год авторы номер документа
СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДДЕРЖИВАЮЩЕЙ ТЕРАПИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ ИЗ ЗАМОРОЖЕННОЙ ИКРЫ МОРСКИХ ЕЖЕЙ 2009
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Шатаева Лариса Константиновна
  • Соловьев Андрей Юрьевич
  • Рыжак Галина Анатольевна
  • Козлов Ленар Васильевич
RU2420212C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СРЕДСТВО, ПОЛУЧЕННОЕ ДАННЫМ СПОСОБОМ (ВАРИАНТЫ) 2009
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Шатаева Лариса Константиновна
  • Соловьев Андрей Юрьевич
  • Рыжак Галина Анатольевна
  • Козлов Ленар Васильевич
RU2415676C1
СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ ФУНКЦИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2302871C1
СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ У МУЖЧИН, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2302874C1
СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ ФУНКЦИИ ПОЧЕК, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2302868C1
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2301071C1
СРЕДСТВО, НОРМАЛИЗУЮЩЕЕ ФУНКЦИИ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2302872C9
СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГЕРОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2006
  • Хавинсон Владимир Хацкелевич
  • Малинин Владимир Викторович
  • Рыжак Галина Анатольевна
RU2302870C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПЕПТИДОВ ОБЛАДАЮЩИХ НЕЙРОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2017
  • Канаев Павел Андреевич
  • Маркина Инна Валерьевна
  • Сурнин Сергей Александрович
  • Фонарёв Михаил Юрьевич
RU2669692C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ГЛИКОЗИЛИРОВАННЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ 2014
  • Пожарицкая Ольга Николаевна
  • Шиков Александр Николаевич
  • Макарова Марина Николаевна
  • Макаров Валерий Геннадьевич
  • Фомичев Юрий Сергеевич
RU2545703C1

Реферат патента 2011 года СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДДЕРЖИВАЮЩЕЙ ТЕРАПИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ ИЗ ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ИКРЫ МОРСКИХ ЕЖЕЙ

Группа изобретений относится к фармакологии. Способ выделения из лиофилизированной икры морских ежей средства для поддерживающей терапии включает замораживание икры морских ежей не позднее чем через 2 часа после ее сбора при температуре не менее минус 40°С. Затем проводят лиофилизацию и к лиофилизированному сырью добавляют 5% раствор уксусной кислоты. Повышают температуру суспензии до 60-70°С и проводят экстракцию пептидов в раствор. Затем надосадочную жидкость сифонируют и фильтруют через ткань, после чего очищенный экстракт направляют на тангенциальную микрофильтрацию. Полученный фильтрат направляют на твердофазную экстракцию. Хроматографию осуществляют со скоростями, не превышающими 4 мл/ч·см2 сечения колонки. На выходе из колонок собирают фракции растворов, при этом фракции, содержащие пептидные компоненты, объединяют и направляют на вакуум-выпарную установку. Полученный целевой продукт, характеризующийся рН 5,5-7,0, содержанием пептидных компонентов с молекулярной массой в пределах от 300 до 3000 Да, лиофилизируют. Полученное средство применяют для поддержания функции иммунной системы, сердца, головного мозга, мужской репродуктивной системы. 2 н.п. ф-лы, 1 табл.

Формула изобретения RU 2 414 914 C1

1. Способ получения средства для поддерживающей терапии, включающий обработку сырья путем сушки в замороженном состоянии, отличающийся тем, что икру морских ежей не позднее чем через 2 ч после ее сбора замораживают при температуре не менее минус 40°С и затем лиофилизируют, после чего к лиофилизированному сырью добавляют 5%-ный раствор уксусной кислоты в объемном соотношении 10 объемов раствора уксусной кислоты к 1 объему лиофилизированного сырья, повышают температуру суспензии до (60±70)°С и проводят экстракцию пептидов в раствор при постоянном перемешивании в течение не менее 2 ч, затем надосадочную жидкость сифонируют и фильтруют через ткань, имеющую плотность не менее 125 г/м2, для удаления макрочастиц размером более 5 мкм, после чего очищенный экстракт направляют на тангенциальную микрофильтрацию, которую проводят с использованием микрофильтрационных модулей на основе трековых мембран с номинальным размером пор 0,3÷0,4 мкм при скорости рециркуляции суспензии в камере концентрата 30÷38 л/ч и скорости фильтрации 1,8÷2,5 л/ч; полученный фильтрат направляют на твердофазную экстракцию, которую проводят с использованием ионообменного сорбента, сульфированного сополимера стирола и дивинилбензола с содержанием дивинилбензола 8-5-10 моль%; при этом для проведения твердофазной экстракции сорбент помещают в массообменники колоночного типа, а фильтрат подают на массообменник насосом снизу в режиме рециркуляции со скоростью 3÷4 л/ч при температуре 25-30°С таким образом, что сорбент находится в форме взвешенного слоя; твердофазную экстракцию проводят в течение 3 ч, после чего осуществляют вытеснение фильтрата из экстрактора и отмывку сорбента в условиях взвешенного слоя сорбента 5%-ным водным раствором уксусной кислоты, которую подают в колонку снизу тем же насосом, до выхода из колонки прозрачного бесцветного раствора; после получения прозрачного промывочного раствора 5%-ный водный раствор уксусной кислоты подают в массообменник через верхний штуцер и таким образом укладывают сорбент на нижний дренаж ровным слоем; затем последовательно замещают раствор кислоты деминерализованной водой, проводят десорбцию пептидов с катионита в режиме вытеснительной ионообменной хроматографии, при этом в качестве вытеснителя используют катион аммония, а вытеснение осуществляют вначале нейтральным аммиачным буферным раствором при рН 5,5 и затем щелочным буферным раствором при рН 12,5, а хроматографию осуществляют со скоростями, не превышающими 4 мл/(ч·см2) сечения колонки, на выходе из колонок собирают фракции растворов, при этом фракции, содержащие пептидные компоненты, объединяют и направляют на вакуум-выпарную установку при температуре в системе не выше (42±3)°С, после чего полученный целевой продукт, характеризующийся рН 5,5÷7,0, содержанием пептидных компонентов с молекулярной массой в пределах 300 до 3000 Да, лиофилизируют.

2. Средство для поддерживающей терапии, характеризующееся тем, что оно получено способом по п.1 и представляет собой пептидный комплекс с молекулярной массой входящих в него пептидных компонентов в пределах от 300 до 3000 Да, поддерживающий функцию иммунной системы, сердца, головного мозга, мужской репродуктивной системы.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2011 года RU2414914C1

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ОБЩЕУКРЕПЛЯЮЩИМ И ОМОЛАЖИВАЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ 2004
  • Масленников Борис Николаевич
  • Масленников Антон Борисович
  • Разводов Владимир Васильевич
  • Разводова Наталья Владимировна
RU2276986C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ ИЗ ИКРЫ МОРСКИХ ЕЖЕЙ 2004
  • Юрьева Марина Иннокентьевна
  • Ковалев Николай Николаевич
  • Якуш Евгений Валентинович
  • Акулин Валерий Николаевич
  • Врищ Эдуард Антонович
RU2273435C1
ПРИМЕНЕНИЕ ИКРЫ МОРСКИХ ЕЖЕЙ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ЭРИТРОПОЭЗА 2001
  • Юрьева М.И.
  • Акулин В.Н.
  • Лисаковская О.В.
  • Кропотов А.В.
RU2195944C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИЩЕВОГО ПРОДУКТА С ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ ИЗ ИКРЫ ГИДРОБИОНТОВ 1997
  • Лебская Т.К.
  • Толкачева В.Ф.
  • Ильина Л.П.
RU2182448C2

RU 2 414 914 C1

Авторы

Хавинсон Владимир Хацкелевич

Шатаева Лариса Константиновна

Соловьев Андрей Юрьевич

Рыжак Галина Анатольевна

Козлов Ленар Васильевич

Даты

2011-03-27Публикация

2009-12-09Подача