СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2011 года по МПК A61B10/00 G09B23/28 A61K36/00 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к патофизиологии, акушерству, перинатологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронической плацентарной недостаточности.

Неблагоприятное течение беременности независимо от этиологических факторов чаще всего приводит к развитию хронической гипоксии плода и, как следствие, к хронической фетоплацентарной недостаточности (ФПН). Учитывая частоту перинатальных осложнений, среди которых хроническая ФПН и гипоксия плода занимают одно из ведущих мест, безусловный интерес представляет разработка новых методических подходов для изучения патогенеза и применение эффективных фармакологических корректоров.

Механизмы действия гипоксии на клетки организма изучены достаточно хорошо. В результате гипоксического воздействия изменяется нормальный баланс нейромедиаторов (глутамата, дофамина, серотонина, ацетилхолина и др.) и продуктов их обмена в особо чувствительных структурах или нарушаются структурно-функциональные свойства клеточных мембран, что само по себе может приводить к гибели клеток. Кроме того, гипоксия изменяет работу генетического аппарата клетки и может инициировать транскрипцию специфических генов, ответственных за программируемую гибель клетки. При этом патологические изменения в ЦНС зависят от длительности гипоксического воздействия и от этапа онтогенетического развития ЦНС, на котором это воздействие применялось.

Пренатальная гипоксия, как и материнский стресс, приводит к нарушениям формирования поведенческих реакций, развитию двигательной активности, ослаблению способности к обучению, снижению массы тела у потомства. Кислородная недостаточность в период беременности снижает адаптационные возможности в постнатальном периоде, обуславливая гибель и рождение физиологически незрелого и отстающего в развитии потомства с выраженными и долгосрочными неврологическими осложнениями.

Из практики медицины известны способы лечения плацентарной недостаточности: применение на фоне медикаментозной терапии биологически активных добавок (БАД) «Литовит» (RU 2228749 С1, 20.05.2004), внутривенное введение нимотола и нимодипина (RU 2270011 С2, 10.07.2005), использование энтеросорбента (альгиново-кислый натрий-кальций) дополнительно к традиционному лечению (RU 2149592 С1, 27.05.2000), применение фитофармакопрепарата (спиртовой экстракт фитоэкдистероидов) по 3-этапной схеме (RU 2188661 С1, 10.09.2002).

Недостатками данных способов является высокая медикаментозная нагрузка на организм беременной, наличие аллергических реакций и побочных эффектов на фоне проводимого лечения, имеющиеся противопоказания к применению.

Весьма актуальной остается проблема внедрения методов воздействия на мать и плод, снижающих медикаментозную нагрузку. Среди них следует отметить регулирующие методы лечения, такие как антигомотоксическая терапия (гомотоксикология), представляющие собой синтез современных достижений медицины и гомеопатического подхода к лечению больных. Этот метод позволил логически и практически обосновать и реализовать принципы холистической медицины, предусматривающей комплексный подход к лечению человека как единой биологической системы. Лечение антигомотоксическими препаратами объединяет в себе лучшие традиции, представляемые как гомеопатией, так и аллопатической медициной. Высокая эффективность этих препаратов, безопасность (отсутствие побочных и аллергических реакций), отсутствие противопоказаний и возрастных ограничений позволяют широко использовать их у беременных женщин и новорожденных детей.

Основными принципами гомеопатии являются закон подобия, принцип «малых доз» и принцип индивидуального подхода.

К числу наиболее широко используемых препаратов относится комплексный антигомотоксический препарат «Траумель С», который создан на основе натуральных компонентов, с выраженным противовоспалительным, антиэкссудативным действием. Он улучшает процессы микроциркуляции в любом органе и системе, мягко воздействует на иммунную систему. Данное лекарственное средство хорошо сочетается с другими антигомотоксическими препаратами, что повышает общую терапевтическую эффективность клинического применения препарата «Траумель С».

Антигомотоксический препарат «Траумель С» выпускается в виде таблеток, капель, в ампулах для внутримышечного и внутривенного введения, а также в виде мази для наружного применения. Составляющие компоненты препарата: Arnica D2, Calendula D2, Hamamelis D2, Millefolium D3, Atropa belladonna D4, Aconitum D3, Mercurius solubilis Hahnemanni D8, Hepar sulphuris D8, Chamomilla recutita D3, Symphytum D8, Bellis perennis D2, Echinacta angustifolia D2, Echinacta purpureae D2, Hypericum D2.

Механизм действиия препарата Траумель С формируется из комплексного эффекта его компонентов и характеризуется:

- противовоспалительным и противовирусным действием;

- повышением тонуса сосудов, устранением венозного стаза и противотромбозным эффектом, остановкой кровотечений, нормализацией протромбина в сыворотке крови;

- активацией клеточного дыхания и процессов окисления;

- стимуляцией защитных систем организма;

- активацией заживления ран и преодоления последствий шока;

- обезболивающим эффектом;

- восстановлением нервно-мышечной проводимости.

Целью предложенного изобретения является оптимизация лечения хронической плацентарной недостаточности путем применения препаратов природного происхождения.

Поставленная цель в изобретении достигается тем, что у беременных крыс, начиная с 10 дня гестации, ежедневно в течение 2 часов моделируют хроническую плацентарную недостаточность в барокамере проточного типа, в условиях, соответствующих высоте 6000 метров, половине из них подкожно через 1 день вводят 0,2-0,3 мл комплексного гомеопатического препарата «Траумель С» на протяжении 12-13 дней, затем на 23-24 день беременности всех самок подвергают эвтаназии и проводят морфометрическое исследование плодов и плацент, гистологическое исследование плацент и на основании замедленной прибавки массы тела самок на 25%, снижения массы плодов и плацент на 25% и 17,5% соответственно по сравнению с нормой, уменьшения толщины плацент в 2 раза констатируют развитие хронической плацентарной недостаточности, а при отсутствии вышеперечисленных изменений на фоне применения препарата природного происхождения «Траумель С» свидетельствуют об эффективности проводимой терапии.

Предлагаемый способ прошел успешную аппробацию на 40 лабораторных беспородных белых крысах-самках, 10 животных составили группу контроля (1 группа), 20 животных, подвергавшихся гипоксии с 10 по 22 день беременности, разделили на 2 равные группы: животные 2-й группы, получавшие препарат «Траумель С» по 0,2-0,3 мл в/м через 1 день; животные 3-й - группы, не получавшие препарат «Траумель С». В четвертую группу вошли 10 животных, получавших препарат «Траумель С», но не подвергавшихся гипоксии. Гипоксию моделировали в барокамере проточного типа объемом 10 л. Крыс основной группы наблюдения поднимали на высоту 6000 м со скоростью 50 м/с. Скорость подъема оценивали с помощью самолетного альтиметра и высотометра. Экспозиция на высоте составляла 2 ч. Поглотителем СО₂ служит 40% КОН.

Перед началом эксперимента животные содержались в карантине (1 месяц) с обязательным клиническим обследованием и выбраковкой подозрительных на заболевание особей. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта был составлен в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP); он соответствует этическим нормам, изложенным в Женевской конвенции (1971 г.), «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием лабораторных животных» (1985 г.) и в соответствии с приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г. №755).

Bo избежание преждевременных родов самок подвергали эфтаназии путем внутрибрюшного введения 40 мг/кг этаминала натрия на 22-23 день беременности, проводили морфомерическое исследование плодов и плацент, а также гистологическое исследование плацент. Материал был законсервирован в 10% формалине. После стандартной гистологической обработки ткань была залита в парафин. Изготовленные с парафиновых блоков препараты были окрашены гематоксилином и эозином. Исследование проводилось путем осмотра серийного среза под электронным микроскопом.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Microsoft Exel 7.0 для Windows 98 и программы Sigma Stat 3.0. Данные анализировали с помощью описательной статистики, которая оценивала среднее арифметическое значение и ошибку среднего арифметического. Проверку гипотезы о равенстве средних в случаях с нормальным распределением осуществляли при помощи критерия Стьюдента. В других случаях использовали непараметрический критерий Манна-Уитни-Вилкоксона. Оценку качественных признаков проводили по критерию Фишера. Различия считали статистически достоверными при 5% уровне значимости.

Показатели пренатального периода под влиянием гипоксии (M±m) представлены в таблице 1.

При гистологическом исследовании в ткани плаценты можно обнаружить все слои, присутствующие в крысиной хориоаллантоисной плаценте в норме (см. схему).

Основным по толщине слоем плацент является лабиринтный слой, в котором обнаруживалось большое количество резко полнокровных анастомозирующих сосудов.

Следующим по выраженности в ткани плаценты был слой спонгиотрофобласта, в котором определялись компактно расположенные скопления базофильных клеток спонгиотрофобласта. Клетки спонгиотрофобласта окружали округлой и неправильной формы сливающиеся очаги, представленные светлыми клетками с пикнотичным ядром, и содержащие расширенные полнокровные сосуды с тонкой стенкой.

Децидуальный слой являлся самым периферическим слоем плацентарной ткани и был представлен тонкой прослойкой преимущественной уплощенных децидуальных клеток. Слой хориальной пластинки был не всегда хорошо различим. Он был представлен отечной волокнистой тканью с крупными полнокровными сосудами (см. табл.2).

Подсчет и обсуждение полученных результатов измерения слоев проводили исходя из толщины основных трех слоев плацент: лабиринтного слоя, слоя спонгиотрофобласта и децидуального слоя, соотношения толщины трех основных слоев плаценты крысы в %.

Проведенные на данной модели исследования показали, что на фоне пренатальной гипоксии отмечалась замедленная прибавка массы тела у самок к 22 дню беременности во 2-й группе на 12,5% (р > 0,05), а в 3-й - на 25,2% по сравнению с нормой (р < 0,05). При регистрации соматических показателей установлено, что масса плодов достоверно снижена по сравнению с контролем у животных 3-й группы на 25,8% (р < 0,05), а масса плацент в 3-й группе наблюдения на 17,5% меньше, чем в контроле(р < 0,05). Полученные данные согласуются с данными литературы, свидетельствующими, что снижение массы плаценты зависит от степени тяжести и длительности патологического процесса (см. табл. №1). Увеличение массы плаценты в 4-й группе наблюдения, в основном, за счет лабиринтного слоя (0,53±0,02 против 0,51±0,05 в контроле) обусловлено стимулирующим воздействием препарата «Траумель С» (р > 0,05).

В то же время значительное уменьшение массы и объема плаценты чаще отмечается при беременности, осложненной внутриутробной задержкой роста плода, причем степень уменьшения четко коррелирует с выраженностью гипотрофии плода. Подобные изменения свидетельствуют о нарушении трофической функции плаценты и развитии вторичной плацентарной недостаточности. Поэтому отдельное значение имеет изучение особенностей морфологического строения плаценты крысы в условиях гипоксии, а также влияние препаратов природного происхождения на строение и функцию плаценты.

Максимальная толщина плаценты отмечалась в 1 и 4 исследуемых группах (2546,91±177,51 и 2787,76±199,79 µm соответственно). Выявлено достоверное уменьшение толщины плаценты в 3-й группе наблюдения на 34,1% (р < 0,001), во 2-й группе на 17,8% (р > 0,05).

Максимальная толщина слоя лабиринта наблюдалась в 1 и 4 исследованных группах, в то время как в 2 и 3 группах толщина лабиринтного слоя была в 1,5 и 2 раза меньше (р < 0,05) и (р < 0,001) соответственно. Слой лабиринта является основным и крайне важным для снабжения эмбриона питательными веществами и осуществления газообмена.

Слой спонгиотрофобласта в меньшей степени влияет на процессы обмена. Его толщина находилась в пределах 400-600 µm. При этом минимальные значения были получены в 3 группе - 442,45 µm (p > 0,05), a максимальные в 4 исследованной группе - 562,18 µm (р > 0,05).

Толщина децидуальной ткани варьировала в пределах от 150 до 300 pm. Максимальная ее толщина была обнаружена в 3 исследованной группе - 262,48 µm (p < 0,05) по сравнению с контролем. В трех других группах толщина децидуального слоя была приблизительно одинаковой (151,72 µm в 1 группе, 152,34 µm в 4 группе и 172,32 µm во 2 группе).

Результаты измерения, представленные в относительных величинах в виде соотношения слоев и выраженные в %, подтвердили имеющие место тенденции, обнаруженные при сравнении абсолютных значений, полученных при измерении слоев в исследованных плацентах.

Максимальная толщина хориальной пластинки при возможности проведения измерений составила 235,76 µm, минимальная 132,51 µm. Провести измерения удалось не во всех случаях.

Подобная ситуация повторилась в отношении слоя гигантских клеток. Это было связано с тем, что этот слой не имел четких границ и состоял из 2-3 отдельно располагавшихся клеток с обильной цитоплазмой и одиночным крупным ядром с хорошо выраженным ядрышком.

Следовательно, можно сделать заключение, что хроническая гипоксия во 2-ой половине беременности приводит к задержке внутриутробного роста и развития плода, снижению плацентарных показателей, что свидетельствует о развитии плацентарной недостаточности.

Таким образом, проведенные на данной модели экспериментальные исследования показали, что гипоксия пренатального периода оказывает резко отрицательное влияние на течение беременности, формирование плаценты, развитие плода, следствием чего является внутриутробная задержка роста и развития плода, снижение плацентарных параметров, свидетельствующих о развитии плацентарной недостаточности. В то же время применение комплексного антигомотоксического препарата «Траумель С» во время беременности, протекающей на фоне хронической гипоксии, способствует улучшению течения беременности, оптимизации параметров физического развития плода, стимулирует развитие компенсаторно-приспособительных механизмов в плаценте, приводящих к увеличению ее массы, оказывает положительное влияние на формирование плаценты. Комплексный антигомотоксический препарат «Траумель С», в состав которого входят средства растительного и природного происхождения, используемые в малых дозах, что делает данный препарат абсолютно безопасным и нетоксигенным, может применяться у беременных женщин с целью профилактики и лечения хронической плацентарной недостаточности.

Таблица №1. Показатель Контроль 2-я группа 3-я группа 4-я группа Прибавка массы тела к 22 дню беременности (г) 66,3±4,7 58,0±6,3 49,6±4,9* 64,8±5,8 Масса плодов (г) 3,1±0,07 2,9±0,09 2,3±0,02* 3,3±0,1 Масса плаценты (г) 0,51±0,05 0,48±0,03 0,42±0,01* 0,53±0,02 Примечание. Здесь и в табл.2: * - данные статистически значимы по отношению к контролю (р < 0,05); ** - (р < 0,001).

Изобретение относится к области медицины, а именно патофизиологии, акушерству, перинатологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения хронической плацентарной недостаточности. Для этого в эксперименте у беременных крыс, начиная с 10 дня гестации, ежедневно в течение 2 часов моделируют хроническую плацентарную недостаточность в барокамере проточного типа в условиях, соответствующих высоте 6000 метров. Одной половине крыс подкожно через 1 день вводят 0,2-0,3 мл препарата «Траумель С» на протяжении 12-13 дней. Затем на 23-24 день беременности крыс подвергают эвтаназии и проводят морфометрическое исследование плодов и плацент и гистологическое исследование плацент. При установлении замедленной прибавки массы тела самок на 25%, снижения массы плодов и плацент на 25% и 17,5% соответственно по сравнению с нормой, уменьшения толщины плацент в 2 раза, констатируют развитие хронической плацентарной недостаточности. Отсутствие вышеперечисленных изменений на фоне введения препарата «Траумель С» свидетельствует об эффективности проводимой терапии. Способ обеспечивает возможность изучения хронической плацентарной недостаточности при определенных условиях моделирования гипоксии, а также оптимизацию лечения путем использования такого препарата природного происхождения, как «Траумель С». 2 табл.

Способ оценки эффективности лечения хронической плацентарной недостаточности в эксперименте, характеризующийся тем, что у беременных крыс, начиная с 10 дня гестации, ежедневно в течение 2 ч моделируют хроническую плацентарную недостаточность в барокамере проточного типа в условиях, соответствующих высоте 6000 м, половине из них подкожно через 1 день вводят 0,2-0,3 мл комплексного гомеопатического препарата «Траумель С» на протяжении 12-13 дней, затем на 23-24 день беременности всех самок подвергают эвтаназии и проводят морфометрическое исследование плодов и плацент, гистологическое исследование плацент, и на основании замедленной прибавки массы тела самок на 25%, снижения массы плодов и плацент на 25% и 17,5% соответственно по сравнению с нормой, уменьшения толщины плацент в 2 раза констатируют развитие хронической плацентарной недостаточности, а отсутствие вышеперечисленных изменений на фоне применения препарата природного происхождения «Траумель С» свидетельствует об эффективности проводимой терапии.