ПРОИЗВОДНЫЕ 2-ТИОКСАНТИНА, ДЕЙСТВУЮЩИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ МРО Российский патент 2011 года по МПК C07D473/22 A61K31/522 A61P11/00 A61P25/28 A61P29/00 A61P9/00 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым производным тиоксантина, композициям, содержащим их, и их применению в терапии.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Миелопероксидаза (МРО) представляет собой гемсодержащий фермент, обнаруживаемый преимущественно в полиморфно-ядерных лейкоцитах (PMN). МРО является одним из членов многообразного белкового семейства пероксидаз млекопитающих, которое также включает эозинофильную пероксидазу, тиреоидную пероксидазу, слюнную пероксидазу, лактопероксидазу, простагландин-Н-синтазу и другие. Зрелый фермент представляет собой димер, состоящий из идентичных половинок. Каждая половина молекулы содержит присоединенный ковалентной связью тем, который проявляет необычные спектральные свойства, ответственные за характерный зеленый цвет МРО. В результате расщепления дисульфидного мостика, связывающего две половинки МРО, получается полуфермент, проявляющий спектральные и каталитические свойства, не отличающиеся от свойств целого фермента. Фермент использует пероксид водорода для окисления хлорида до хлорноватистой кислоты. Другие галогениды и псевдогалогениды (типа тиоцианата) также являются физиологическими субстратами для МРО.

PMN особенно важны для борьбы с инфекциями. Эти клетки содержат МРО, обладающую документально подтвержденным бактерицидным действием. PMN действуют неспецифично посредством фагоцитоза с целью поглощения микроорганизмов, заключают их в вакуоли, называемые фагосомами, которые сливаются с гранулами, содержащими миелопероксидазу, с образованием фаголизосом. В фаголизосомах ферментативная активность миелопероксидазы приводит к образованию хлорноватистой кислоты, мощного бактерицидного соединения. Сама по себе хлорноватистая кислота является окислителем и наиболее "жадно" взаимодействует с тиолами и простыми тиоэфирами, а также превращает амины в хлорамины и хлорирует ароматические аминокислоты. Макрофаги представляют собой большие фагоцитарные клетки, которые подобно PMN способны к фагоцитозу микроорганизмов. Макрофаги могут генерировать пероксид водорода и в результате активации также продуцировать миелопероксидазу. МРО и пероксид водорода также могут высвобождаться наружу из клеток, где в результате взаимодействия с хлоридом может индуцироваться повреждение соседней ткани.

Связь миелопероксидазной активности с заболеванием подразумевалась для неврологических заболеваний с нейровоспалительным ответом, включая рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и удар, а также для других воспалительных заболеваний или состояний типа астмы, хронической обструктивной болезни легких, кистозного фиброза, атеросклероза, ишемической болезни сердца, сердечной недостаточности, воспалительного заболевания кишечника, гломерулярного повреждения почек и ревматоидного артрита. Предполагали, что рак легкого также ассоциирован с высокими уровнями МРО.

Рассеянный склероз (MS)

МРО-позитивные клетки в большой степени присутствуют в кровотоке и в ткани, подвергающейся воспалению. Более конкретно, МРО-содержащие макрофагы и микроглия были документально подтверждены в ЦНС (центральной нервной системе) во время заболевания: рассеянного склероза (Nagra RM. et al., Journal of Neuroimmunology 1997, 78(1-2):97-107), болезни Паркинсона (Choi D-K. et al., J. Neurosci. 2005, 25(28); 6594-600) и болезни Альцгеймера (Green PS. et al., Journal of Neurochemistry 2004, 90(3):724-33). Предполагается, что некоторые аспекты хроническим образом продолжающегося воспаления приводят к огромной деструкции, при которой важную роль играют агенты реакций с участием МРО.

Фермент высвобождается как во внеклеточную область, так и в фаголизосомы в нейтрофилах (Hampton MB, Kettle AJ, Winterbourn CC, Blood 1998, 92(9):3007-17). Необходимым условием для проявления активности МРО является наличие пероксида водорода, генерируемого под действием NАDРН(никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма)-оксидазы и последующей супероксид-дисмутации. Окисленный фермент способен использовать большой избыток разных субстратов, из которых наиболее признанным является хлорид. В результате этой реакции образуется сильный нерадикальный окислитель - хлорноватистая кислота (HOCl). HOCl очень эффективно окисляет серосодержащие аминокислоты типа цистеина и метионина (Peskin AV, Winterbourn CC, Free Radical Biology and Medicine 2001, 30(5):572-9). Кроме того, с аминогруппами она образует хлорамины как в белках, так и в других биомолекулах (Peskin AV. et al., Free Radical Biology and Medicine 2004, 37(10): 1622-30). Она хлорирует фенолы (типа тирозина) (Hazen SL. et al., Mass Free Radical Biology and Medicine 1997, 23(6): 909-16) и ненасыщенные связи в липидах (Albert CJ. et al., J.Biol. Chem. 2001, 276(26): 23733-41), окисляет железные центры (Rosen H, Klebanoff SJ, Journal of Biological Chemistry 1982, 257(22): 13731-354) и перекрестно сшивает белки (Fu X, Mueller DM, Heinecke JW, Biochemistry 2002, 41(4): 1293-301).

Протеолитические каскады участвуют как в инфильтрации клеток через ВВВ (гематоэнцефалический барьер), так и в деструкции ВВВ, миелина и нервных клеток (Cuzner ML, Opdenakker G, Journal of Neuroimmunology 1999, 94(1-2):1-14; Yong VW. et al., Nature Reviews Neuroscience), что достигается вследствие действия вышестоящих в каскаде протеаз, а также вследствие окисления дисульфидного мостика (Fu X. et al., J.Biol. Chem. 2001, 276(44): 41279-87; Gu Z. et al., Science 2002, 297(5584): 1186-90). Это окисление может представлять собой либо нитрозилирование, либо HOCl-опосредованное окисление. Обе реакции могут являться результатом активности МРО. В некоторых сообщениях высказывается предположение о роли ММР (матриксных металлопротеаз) в целом и ММР-9, в частности, в воздействии на инфильтрацию клеток, а также на тканевое повреждение (разрушение ВВВ и демиелинизацию) как при MS, так и при ЕАЕ (экспериментальный аллергический энцефаломиелит) (в качестве обзора см. Yong VW. et al, выше). Важное значение этих конкретных типов механизмов при MS вытекает из исследований, в которых были выявлены повышенная активность и присутствие протеаз в ткани головного мозга и CSF (цереброспинальная жидкость) при MS. Кроме того, подтверждающие данные были получены в результате проведения исследований ЕАЕ на мышах, дефицитных по некоторым из протеаз, вовлеченных в участие в MS-патологии, или путем использования фармакологических подходов. Полагают, что демиелинизация зависит от цитотоксических Т-клеток и токсичных продуктов, образующихся под действием активированных фагоцитов (Lassmann H.J., Neurol. Neurosurg. Psychiatry 2003, 74(6):695-7). Таким образом, на аксональные потери оказывают влияние протеазы и реакционноспособные кислородные и азотные промежуточные соединения. В тех случаях, когда МРО присутствует, она, очевидно, будет обладать способностью как активировать протеазы (как непосредственно, так и вследствие дезингибирования путем влияния на ингибиторы протеазы), так и генерировать реакционноспособные разновидности.

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ)

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) представляет собой болезненное состояние, характеризуемое ограничением воздушного потока, которое не является полностью обратимым. Обычно ограничение воздушного потока является как нарастающим, так и ассоциированным по отношению к аномальной воспалительной реакции легких на вредные частицы или газы. ХОБЛ является основной проблемой здоровья населения. Она является четвертой ведущей причиной хронической заболеваемости и смертности в Соединенных Штатах, и представляется, что в 2020 году она будет пятой в списке по тяжести заболеванием во всем мире. В Соединенном Королевстве распространенность ХОБЛ составляет 1,7% у мужчин и 1,4% у женщин. ХОБЛ охватывает диапазон тяжести от средней до очень тяжелой, при этом стоимость лечения быстро возрастает с увеличением тяжести.

Уровни МРО в мокроте и BAL (бронхоальвеолярный лаваж) у пациентов с ХОБЛ значительно выше по сравнению с обычными, некурящими контрольными пациентами (Keatings V.M., Barnes P.J, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997, 155:449-453; Pesci A. et al., Eur. Respir. J. 1998, 12:380-386). Уровни МРО повышаются еще больше при обострениях заболевания (Fiorini G. et al., Biomedicine & Pharmacotherapy 2000, 54:274-278; Crooks S.W. et al., European Respiratory Journal, 15(2): 274-80, 2000). Вероятно, что роль МРО более важна при обострениях ХОБЛ (Sharon S.D. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001, 163: 349-355).

В дополнение к деструктивной способности МРО имеется сильная клиническая связь с сосудистым заболеванием (Baldus S. et al., Circulation 2003, 108: 1440-5). Дисфункциональные МРО-полиморфизмы ассоциированы со сниженным риском смертности от заболевания коронарных артерий (Nikpoor В. et al., Am. Heart. J. 2001, 142: 336), а пациенты с высокими уровнями МРО в сыворотке имеют более высокий риск острого коронарного синдрома. Воздействия МРО на сосудистое заболевание могут распространяться до ХОБЛ, поскольку имеется строгое доказательство того, что легочная сосудистая сеть представляет собой одно из самых ранних вовлекаемых мест в легком курильщиков. Описаны убедительные изменения во внутренней оболочке легочных артерий, которые демонстрируют дозозависимость от курения (Hale K.A., Niewoehner D.E., Cosio M.G., Am. Rev. Resp.Dis. 1980, 122: 273-8). Физиологическую функцию МРО связывают с присущей реципиенту защитной реакцией. Однако эта роль не является критической, поскольку в большинстве случаев у МРО-дефицитных пациентов наблюдаются симптомы в относительно легкой форме (Parry M.F. et al., Ann. Int. Med. 1981, 95: 293-301; Yang, K.D., Hill, H.R. Pediatr. Infect. Dis. J. 2001, 20: 889-900). Кратко: имеется существенное доказательство того, что повышенные уровни МРО при ХОБЛ могут вносить вклад в заболевание посредством нескольких механизмов. Следовательно, ожидается, что избирательный ингибитор МРО будет смягчать как острые, так и хронические воспалительные аспекты ХОБЛ и может ослабить развитие эмфиземы.

Атеросклероз

Ингибитор МРО будет уменьшать атеросклеротическое бремя и/или уязвимость имеющихся атеросклеротических поражений и тем самым снижать риск острого инфаркта миокарда, нестабильной стенокардии или удара, и ослаблять ишемию/реперфузионное поражение во время острого коронарного синдрома и ишемических цереброваскулярных событий. Имеются разнообразные данные в поддержку роли МРО при атеросклерозе. МРО экспрессируется в плечевых зонах и некротическом ядре атеросклеротических поражений у человека, и из образцов, полученных после аутопсии поражений у человека, был выделен активный фермент (Daugherty A. et al. (1994) J. Clin. Invest. 94(1): 437-44). В разрушенных и разорванных поражениях человека, по сравнению с жировыми прожилками, было продемонстрировано наличие повышенного количества МРО-экспрессирующих макрофагов, что предполагает особенную роль МРО в острых коронарных синдромах (Sugiyama S. et al. (2001) Am. J. Pathol. 158(3): 879-91). У пациентов с подтвержденным заболеванием коронарных артерий уровни МРО в плазме и лейкоцитах выше, чем у здоровых контрольных пациентов (Zhang R. et al. (2001) Jama 286(17): 2136-42). Более того, в двух больших предстоящих исследованиях уровни МРО в плазме предсказывали риск будущих коронарных событий или реваскуляризации (Baldus S. et al. (2003) Circulation 108(12): 1440-5; Brennan M. et al. (2003) N. Engl. J. Med. 349(17): 1595-604). Среди людей общая распространенность индивидуумов с дефицитом МРО составляет 1 на 2000-4000 индивидуумов. Эти индивидуумы производят впечатление в основном здоровых людей, но имеется сообщение о нескольких случаях тяжелой инфекции Candida. Интересно, что МРО-дефицитные люди меньше подвергаются сердечно-сосудистому заболеванию, чем контрольные пациенты с нормальными уровнями МРО (Kutter D. et al. (2000) Acta Haematol. 104(1)). Полиморфизм в МРО-промоторе оказывает влияние на экспрессию, что приводит к высокому и низкому уровню экспрессии МРО у индивидуумов. В трех разных исследованиях сильно экспрессирующий генотип был ассоциирован с повышенным риском сердечно-сосудистого заболевания (Nikpoor В. et al. (2001) Am. Heart. J. 142(2): 336-9; Makela R., P.J.Karhunen et al. (2003) Lab. Invest. 83(7): 919-25; Asselbergs F.W., et al. (2004) Am. J. Med. 116(6): 429-30). Данные, накопленные за последние десять лет, указывают на то, что проатерогенные действия МРО включают окисление липопротеинов, индукцию эндотелиальной дисфункции посредством потребления оксида азота и дестабилизацию атеросклеротических поражений путем активации протеаз (Nicholls S.J. and S.L.Hazen (2005) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 25(6): 1102-11). Совсем недавно некоторые исследования сфокусировались на нитро- и хлортирозиновых модификациях липопротеинов LDL (липопротеины низкой плотности) и HDL (липопротеины высокой плотности). Поскольку под действием хлорноватистой кислоты, продуцируемой МРО, in vivo могут быть генерированы только хлортирозиновые модификации, эти модификации рассматриваются в качестве специфических маркеров активности МРО (Hazen S.L. and J.W.Heinecke (1997) J.Clin. Invest. 99(9): 2075-81). Частицы LDL, подвергнутые действию МРО in vitro, образуют агрегаты, что приводит к облегченному захвату с помощью фагоцитарных рецепторов макрофагов и формированию пенистых клеток (Hazell L.J. and R. Stocker (1993) Biochem. J. 290 (Pt.1): 165-72). Хлортирозиновая модификация ароА1, основного аполипопротеина холестерина HDL, приводит к ослабленному действию в качестве акцептора холестерина (Bergt С.S. et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA; Zheng L. et al. (2004) J. Clin. Invest. 114(4): 529-41).

Систематические исследования этих механизмов показали, что МРО связывается и перемещается с ароА1 в плазме. Более того, МРО конкретно нацелена на такие тирозиновые остатки ароА1, которые физически взаимодействуют с макрофагальным АТФ-связывающим кассетным транспортером типа А1 АВСА1 во время оттока холестерина из макрофага (Bergt С. et al. (2004) J.Biol. Chem. 279(9): 7856-66; Shao В. et al. (2005) J.Biol. Chem. 280(7): 5983-93; Zheng et al. (2005) J.Biol. Chem. 280(1): 38-47). Таким образом, МРО, по-видимому, играет двойную приводящую к ухудшению роль при атеросклеротических поражениях, то есть увеличивающую аккумуляцию липидов посредством агрегации частиц LDL и уменьшающую обратный транспорт холестерина посредством воздействия на белок ароА1 HDL.

Настоящее изобретение раскрывает новые тиоксантины, которые демонстрируют полезные свойства в качестве ингибиторов фермента МРО. Кроме того, новые соединения по настоящему изобретению демонстрируют либо одно, либо более чем одно из следующего: (1) улучшенную селективность по отношению к ТРО (триптофан-пероксидаза); (2) неожиданно высокую ингибирующую активность по отношению к МРО; (3) улучшенную проницаемость в головном мозге; (4) улучшенную растворимость и/или (5) улучшенный период полувыведения; при сравнении с известными тиоксантинами. Такие тиоксантины раскрыты, например, в WO 03/089430 и WO 05/037835.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно настоящему изобретению предложено соединение формулы (I)

где R¹ выбран из C₁-С₆алкила, и указанный C₁-С₆алкил замещен С₁-С₆алкокси;

и по меньшей мере один указанный С₁-С₆алкил или указанный С₁-С₆алкокси является разветвленным;

или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или сольват его соли.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения С₁-С₆алкил в R¹ представляет собой С_2-4алкил.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения указанный алкил выбран из изобутила, этила и пропила.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения указанный алкил замещен С_1-3алкокси.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения указанный алкил замещен С₁-алкокси.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения указанный алкил замещен С₂-алкокси.

Согласно одному воплощению настоящего изобретения указанный алкил замещен пропокси или изопропокси.

Настоящее изобретение также относится к соединению, выбранному из группы, состоящей из:

3-(2-этокси-2-метилпропил)-2-тиоксантина;

3-(2-пропокси-2-метилпропил)-2-тиоксантина;

3-(2-метокси-2-метилпропил)-2-тиоксантина;

3-(2-изопропоксиэтил)-2-тиоксантина;

3-(2-этоксипропил)-2-тиоксантина;

3-(2S-этоксипропил)-2-тиоксантина;

3-(2R-этоксипропил)-2-тиоксантина;

или его фармацевтически приемлемой соли, сольвату или сольвату его соли.

Соединения формулы (I) могут существовать в таутомерных формах. Все такие таутомеры и смеси таутомеров включены в объем настоящего изобретения.

Соединения формулы (I) могут существовать в энантиомерных формах. Следует понимать, что все энантиомеры, диастереомеры, рацематы и их смеси включены в объем данного изобретения.

Если не указано иное, термин "C₁-С₆алкил", который упоминается в данном описании, означает алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, имеющую от 1 до 6 атомов углерода. Примеры таких групп включают метил, этил, н-пропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил и гексил. Термин "C₂-C₄алкил" следует интерпретировать аналогично. Следует понимать, что в тех случаях, когда алкил означает С₁- или С₂-алкил, такие алкилы не могут быть разветвленными.

Если не указано иное, термин "C₁-С₆алкокси", который упоминается в данном описании, означает группу алкокси с прямой или разветвленной цепью, имеющую от 1 до 6 атомов углерода. Примеры таких групп включают метокси, этокси, 1-пропокси, 2-пропокси, 1-бутокси, изобутокси, трет-бутокси и пентокси. Термин "C₁-С₃алкокси" следует интерпретировать аналогично. Следует понимать, что в тех случаях, когда алкокси означает С₁- или C₂-алкокси, такие группы алкокси не могут быть разветвленными. Настоящее изобретение также относится к применению новых соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики заболеваний или состояний, при которых полезно ингибирование фермента МРО.

Согласно следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики нейровоспалительных расстройств, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств и заболевания периферических артерий, сердечной недостаточности и респираторных расстройств, таких как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ).

Согласно другому следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики рассеянного склероза. Лечение может включать замедление прогрессирования заболевания.

Согласно другому следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики болезни Паркинсона. Лечение может включать замедление прогрессирования заболевания.

Согласно другому следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических поражений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления прогрессирования имеющихся поражений и бляшек.

Согласно другому следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики атеросклероза путем изменения состава бляшек с целью снижения риска разрыва бляшек и атеротромботических событий.

Согласно другому следующему аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики респираторных расстройств, таких как хроническая обструктивная болезнь легких. Лечение может включать замедление прогрессирования заболевания.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или снижения риска возникновения заболеваний или состояний, при которых полезно ингибирование фермента МРО, включающий введение субъекту, страдающему от указанного заболевания или состояния или подверженному указанному заболеванию или состоянию, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли.

Кроме того, также предложен способ лечения или снижения риска возникновения нейровоспалительных расстройств, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств или заболевания периферических артерий, или сердечной недостаточности, или респираторных расстройств, таких как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния или подверженного указанному заболеванию или состоянию, включающий введение данному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли.

Кроме того, также предложен способ лечения или снижения риска возникновения рассеянного склероза у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния или подверженного указанному заболеванию или состоянию, включающий введение данному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли.

Кроме того, также предложен способ лечения или снижения риска возникновения болезни Паркинсона у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния или подверженного указанному заболеванию или состоянию, включающий введение данному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических поражений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления прогрессирования имеющихся поражений и бляшек у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния или подверженного указанному заболеванию или состоянию, включающий введение данному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли.

Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения атеросклероза путем изменения состава бляшек с целью снижения риска разрыва бляшек и атеротромботических событий у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния или подверженного указанному заболеванию или состоянию, включающий введение данному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике заболеваний или состояний, при которых полезно ингибирование фермента МРО.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике нейровоспалительных расстройств.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике рассеянного склероза, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств, и заболевания периферических артерий, и сердечной недостаточности, и респираторных расстройств, таких как хроническая обструктивная болезнь легких. В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике атеросклероза путем предупреждения и уменьшения образования новых атеросклеротических поражений и/или бляшек и/или путем предупреждения или замедления прогрессирования имеющихся поражений и бляшек.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или сольвата его соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике атеросклероза путем изменения состава бляшек с целью снижения риска разрыва бляшек и атеротромботических событий.

Кроме того, настоящее изобретение относится к терапиям для лечения:

нейродегенеративных расстройств(а), включая, но не ограничиваясь этим, болезнь Альцгеймера (AD), деменцию, нарушение познавательной способности при шизофрении (CDS), умеренное когнитивное расстройство (MCI), связанное с возрастом нарушение памяти (AAMI), возрастное когнитивное нарушение (ARCD), когнитивное нарушение без деменции (CIND), рассеянный склероз, болезнь Паркинсона (PD), постэнцефалитический паркинсонизм, болезнь Гентингтона, боковой амиотрофический склероз (ALS), заболевания мотонейронов (MND), множественную системную атрофию (MSA), кортикобазальную дегенерацию, прогрессирующий супрануклеарный паралич, синдром Гийена-Барре (GBS) и хроническую воспалительную демиелинизирующую полиневропатию (CIDP). Деменция включает, но не ограничивается этим, синдром Дауна, сосудистую деменцию, деменцию с тельцами Леви, ВИЧ-деменцию, лобно-височную деменцию паркинсонова типа (FTDP), болезнь Пика, болезнь Ниманна-Пика, травматическое поражение головного мозга (TBI), деменцию боксеров, болезнь Крейтцфельдта-Якоба и прионные заболевания.

Кроме того, настоящее изобретение относится к терапиям для лечения:

нейровоспалительных расстройств(а), включая, но не ограничиваясь этим, рассеянный склероз (MS), болезнь Паркинсона, множественную системную атрофию (MSA), кортикобазальную дегенерацию, прогрессирующий супрануклеарный паралич, синдром Гийена-Барре (GBS), хроническую воспалительную демиелинизирующую полиневропатию (CIDP). Рассеянный склероз (MS) включает рецидивирующий ремиттирующий рассеянный склероз (RRMS), вторичный прогрессирующий рассеянный склероз (SPMS) и первичный прогрессирующий рассеянный склероз (PPMS).

Кроме того, настоящее изобретение относится к терапиям для лечения:

когнитивных расстройств(а), включая, но не ограничиваясь этим,

а) деменцию, включая, но не ограничиваясь этим, болезнь Альцгеймера (AD), синдром Дауна, сосудистую деменцию, болезнь Паркинсона (PD), постэнцефалитический паркинсонизм, деменцию с тельцами Леви, ВИЧ-деменцию, болезнь Гентингтона, амиотрофический боковой склероз (ALS), заболевания мотонейронов (MND), лобно-височную деменцию паркинсонова типа (FTDP), прогрессирующий супрануклеарный паралич (PSP), болезнь Пика, болезнь Ниманна-Пика, кортикобазальную дегенерацию, травматическое поражение головного мозга (TBI), деменцию боксеров, болезнь Крейтцфельдта-Якоба и прионные заболевания;

б) нарушение познавательной способности при шизофрении (CDS);

в) умеренное когнитивное расстройство (MCI);

г) связанное с возрастом нарушение памяти (AAMI);

д) возрастное когнитивное нарушение (ARCD);

е) когнитивное нарушение без деменции (CIND).

Кроме того, настоящее изобретение относится к терапиям для лечения:

поведенческих расстройств(а) с дефицитом внимания и разрушающих поведенческих расстройств(а), включая, но не ограничиваясь этим, синдром дефицита внимания (ADD), синдром дефицита внимания с гиперактивностью (ADHD) и аффективные расстройства.

Настоящее изобретение также относится к лечению приведенных ниже заболеваний и состояний, которые могут быть подвергнуты лечению соединениями по настоящему изобретению:

дыхательные пути: обструктивных заболеваний дыхательных путей, включая: астму, в том числе бронхиальную, аллергическую, наследственную бронхиальную, приобретенную бронхиальную, индуцированную физической нагрузкой, индуцированную приемом лекарств (включая индуцированную приемом аспирина и NSAID (нестероидного противовоспалительного препарата)) и индуцированную пылью астму как перемежающуюся, так и устойчивую, и всех степеней тяжести, и другие случаи гиперчувствительности дыхательных путей; хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ); бронхита, в том числе инфекционного и эозинофильного бронхита; эмфиземы; бронхоэктаза; кистозного фиброза; саркоидоза; экзогенного аллергического альвеолита и родственных заболеваний; гиперчувствительного пневмонита; пневмофиброза, в том числе криптогенного фиброзного альвеолита, идиопатической интерстициальной пневмонии, фиброза, являющегося осложнением противоопухолевой терапии и хронической инфекции, включая туберкулез и аспергиллез и другие грибковые инфекции; осложнений легочной трансплантации; васкулитоподобных и тромботических расстройств легочной сосудистой сети и легочной гипертензии; противокашлевая активность: в том числе к лечению хронического кашля, ассоциированного с воспалительными и секреторными состояниями дыхательных путей, и ятрогенного кашля; острого и хронического ринита, в том числе медикаментозного ринита и вазомоторного ринита; круглогодичного и сезонного аллергического ринита, в том числе нервного ринита (сенная лихорадка); назального полипоза; острой вирусной инфекции, в том числе насморка, и инфекции вследствие респираторного синцитиального вируса, вируса гриппа, коронавируса (включая вызывающего SARS (атипичная пневмония)) и аденовируса;

кости и суставы: артритов, ассоциированных с остеоартритом/остеоартрозом или включающих остеоартрит/остеоартроз как первичный, так и вторичный по отношению, например, к врожденной дисплазии тазобедренного сустава; цервикального и поясничного спондилита и боли в нижней области спины и шеи; ревматоидного артрита и болезни Стилла; серонегативных спондилоартропатий, в том числе анкилозирующего спондилоартрита, псориатического артрита, реактивного артрита и недифференцируемой спондилоартропатий; септического артрита и других ассоциированных с инфекцией артропатий и заболеваний кости, таких как туберкулез, в том числе болезнь Пота и полиартрит Понсе; острого и хронического индуцируемого отложением кристаллов синовита, в том числе уратной подагры, заболевания вследствие отложения пирофосфата кальция и воспаления сухожилий, синовиальной сумки и синовиальной жидкости, ассоциированного с апатитом кальция; болезни Бехчета; первичного и вторичного синдрома Шегрена; системного склероза и ограниченной склеродермии; системной красной волчанки, заболевания соединительной ткани смешанного типа и недифференцируемого заболевания соединительной ткани; воспалительных миопатий, в том числе дерматомиозита и полимиозита; ревматической полимиалгии; юношеского артрита, в том числе идиопатических воспалительных поражений кожи ревматического происхождения для суставов любой локализации и ассоциированных синдромов, и ревматической лихорадки и ее системных ic-осложнений; воспалений кожи при васкулите (vasculitide), в том числе гигантоклеточного артериита, синдрома Такаясу, синдрома Черга-Штраусса, полиартериита узлов, микроскопического полиартериита и поражений кожи при васкулите, ассоциированных с вирусной инфекцией, гиперчувствительными реакциями, криоглобулинами и парапротеинами; боли низа спины; семейной средиземноморской лихорадки, синдрома Макла-Вэлла (Muckle-Well), семейной ирландской лихорадки, болезни Кикучи; индуцированных приемом лекарств артралгий, поражений кожи при тендините и миопатий.

Кроме того, настоящее изобретение относится к комбинированным терапиям, где соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, или фармацевтические композицию или препарат, содержащие соединение формулы (I), вводят одновременно или последовательно с терапией и/или агентом для лечения любого из кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств и заболевания периферических артерий.

Настоящее изобретение включает соединения формулы (I), а также указанные соединения в форме их солей. Подходящие соли включают соли, образованные с органическими или неорганическими кислотами либо органическими или неорганическими основаниями. Обычно такие соли будут фармацевтически приемлемыми, хотя соли фармацевтически неприемлемых кислот или оснований могут найти применение при получении и очистке рассматриваемых соединений. Таким образом, соли присоединения кислоты включают, среди прочих, соли, образованные из соляной кислоты. Соли присоединения основания включают соли, в которых катионом, среди прочих, является натрий или калий.

Соединения по изобретению и промежуточные соединения к ним могут быть выделены из своих реакционных смесей и, при необходимости, далее очищены путем использования стандартных методик.

Соединения формулы (I) могут существовать в энантиомерных формах. Следовательно, все энантиомеры, диастереомеры, рацематы, таутомеры и их смеси включены в объем изобретения. Различные оптические изомеры можно выделить путем разделения рацемической смеси соединений с использованием традиционных методик, например фракционной кристаллизацией или HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография). Альтернативно, различные оптические изомеры можно непосредственно получить путем использования оптически активных исходных веществ.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются полезными, поскольку они обладают фармакологической активностью в качестве ингибиторов фермента МРО.

Для упомянутых выше терапевтических показаний вводимую дозу несомненно будут варьировать в зависимости от используемого соединения, способа введения и желаемого лечения. Однако, в общем, удовлетворительные результаты получают, когда соединения вводят в твердой форме в дозировке от 1 мг до 2000 мг в сутки.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые производные могут быть использованы сами по себе или в форме подходящих фармацевтических композиций, в которых соединение или производное находится в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. Таким образом, другое воплощение изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей новое соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. Введение может быть осуществлено посредством энтерального (включая пероральный, сублингвальный или ректальный), интраназального, ингаляционного, внутривенного, местного или других парентеральных путей, но не ограничивается ими. Традиционные методики выбора и приготовления подходящих фармацевтических композиций описаны, например, в "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M.E.Aulton, Churchill Livingstone, 1988. Фармацевтическая композиция предпочтительно содержит менее чем 80% и более предпочтительно менее чем 50% соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, предложен способ получения такой фармацевтической композиции, включающий смешивание ингредиентов.

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль могут быть введены вместе с соединениями, выбранными из одной или более чем одной из следующих групп:

1) противовоспалительные агенты, например

а) NSAID (например, ацетилсалициловая кислота, ибупрофен, напроксен, флурбипрофен, диклофенак, индометацин);

б) ингибиторы синтеза лейкотриенов (ингибиторы 5-LO (5-липоксигеназа), например AZD4407, Зилеутон, ликофелон, CJ13610, CJ13454; ингибиторы FLAP (5-липоксигеназа-активирующий белок), например BAY-Y-1015, DG-031, MK591, МК886, А81834; ингибиторы 1-ТА4(лейкотриен А4)-гидролазы, например SC56938, SC57461A);

в) антагонисты лейкотриеновых рецепторов (например, СР195543, амелубант, LY293111, акколат, МК571);

2) гипотензивные агенты, например

а) бета-блокаторы (например, метопролол, атенолол, соталол);

б) ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (например, каптоприл, рамиприл, хинаприл, эналаприл);

в) блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дитиазем, фелодипин, амлодипин);

г) антагонисты рецепторов ангиотензина II (например, ирбесартан, кандесартан, телемисартан, лосартан);

3) антикоагулянты, например

а) ингибиторы тромбина (например, ксимелагатран), гепарины, ингибиторы фактора Ха;

б) ингибиторы агрегации тромбоцитов (например, клопидогрел, тиклопидин, прасугрел, AZD6140);

4) модуляторы метаболизма липидов, например

а) сенсибилизаторы инсулина, такие как агонисты PPAR (рецептор, активируемый пролифератором пероксисом) (например, пиоглитазон, розиглитазон, Галида, мураглитазар, гефемрозил, фенофибрат);

б) ингибиторы HMG-СоА(3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент А)-редуктазы, статины (например, симвастатин, правастатин, аторвастатин, розувастатин, флувастатин);

в) ингибиторы абсорбции холестерина (например, эзетимиб);

г) ингибиторы IBAT (транспорта желчных кислот в подвздошной кишке) (например, AZD-7806);

д) агонисты LXR (печеночный Х-рецептор) (например, GW-683965A, Т-0901317);

е) модуляторы рецепторов FXR (фарнезоидный Х-рецептор);

ж) ингибиторы фосфолипазы;

5) антистенокардитические агенты, например нитраты и нитриты;

6) модуляторы окислительного стресса, например антиоксиданты (например, пробукол AGI 1067).

Способы получения

Согласно изобретению далее предложен способ получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата, энантиомера, диастереомера или рацемата, где R¹ является таким, как определено в формуле (I).

Повсюду в следующем далее описании таких способов следует понимать что там, где это целесообразно, подходящие защитные группы будут добавлены к различным реагентам и промежуточным соединениям и впоследствии удалены от них с использованием метода, который будет понятен специалисту в области органического синтеза без какого-либо труда. Традиционные методики использования таких защитных групп, а также примеры подходящих защитных групп описаны, например, в "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W.Green, P.G.M.Wuts, Wiley-lnterscience, New York (1999). Также следует понимать, что превращение группы или заместителя в другую(ой) группу или заместитель посредством химической манипуляции может быть проведено в любом промежуточном или конечном продукте на пути синтеза конечного продукта, для которого возможный тип превращения ограничен только собственной несовместимостью других функциональных групп, присутствующих в молекуле на данной стадии, с используемыми для осуществления превращения условиями или реагентами. Такие собственные несовместимости и пути их преодоления посредством выполнения подходящих превращений и стадий синтеза в подходящей последовательности будут понятны специалисту в области органического синтеза без какого-либо труда. Примеры превращений приведены ниже, и следует понимать, что описанные превращения не ограничены только общими группами или заместителями, для которых представлены примеры данных превращений. Ссылки на другие подходящие превращения и описания других подходящих превращений приведены в "Comprehensive Organic Transformations - A Guide to Functional Group Preparations" R.C.Larock, VHC Publishers, Inc. (1989). Ссылки на другие подходящие реакции и описания других подходящих реакций приведены в руководствах по органической химии, например "Advanced Organic Chemistry", March 4th ed. McGraw Hill (1992) или "Organic Synthesis", Smith, McGraw Hill, (1994). Методики очистки промежуточных и конечных продуктов включают, например, нормально- и обращеннофазовую хроматографию на колонке или вращающейся пластине, перекристаллизацию, дистилляцию и экстракцию типа жидкость-жидкость или твердое вещество-жидкость, которые будут понятны специалисту в данной области техники без какого-либо труда. Определения заместителей и групп такие, как в формуле (I), за исключением тех случаев, когда они определены иначе. Термины "комнатная температура" и "температура окружающей среды" будут означать, если не указано иное, температуру в диапазоне от 16 до 25°С. Термин "кипячение с обратным холодильником" или "температура дефлегмации" будет означать, если не указано иное, использование в отношении применяемого растворителя температуры, равной или слегка превышающей температуру кипения указанного растворителя. Очевидно, что для нагревания реакционных смесей можно использовать микроволновое излучение. Термины "флэш-хроматография" или "колоночная флэш-хроматография" будут означать препаративную хроматографию на диоксиде кремния с использованием органического растворителя или их смесей в качестве подвижной фазы.

Получение конечных продуктов

1. Способ получения соединения формулы (I), где R¹ является таким, как определено в формуле (I), показан на Схеме 1:

Соединения формулы (II), (III), (IV), (V) и (VI) являются полезными промежуточными соединениями при получении соединения формулы (I), где R¹ является таким, как определено в формуле (I). Соединения формулы (II)-(VI) либо имеются в продаже, либо могут быть получены или из имеющихся в продаже соединений, или из описанных в литературе соединений (Ouwerkerk et al. Eur. J. Org. Chem. 2002, 14, 2356).

a) Взаимодействие этилцианоацетата (II) с тиомочевиной формулы (III), где R¹ является таким, как определено в формуле (I). В этом способе этилцианоацетат (II) и соответствующую тиомочевину (III) растворяют или суспендируют в подходящем спирте, таком как этанол, и добавляют алкилат, такой как этилат натрия. Температура реакционной смеси обычно составляет от 70°С до температуры дефлегмации включительно.

b) Взаимодействие тиоурацила формулы (IV), где R¹ определен выше, с нитритом натрия в кислотном растворе. В этом способе тиоурацил (IV) суспендируют в растворителе, таком как уксусная кислота (10-100%-ный водный раствор) и соляная кислота (1М водн.), и перемешивают при подходящей температуре от 0°С до 85°С в течение 10-20 минут, после чего по каплям добавляют растворенный в воде нитрит натрия.

c) Восстановление нитрозосоединения формулы (V), где R¹ определен выше. В этом способе восстановление нитрозосоединения формулы (V) может быть осуществлено с использованием подходящего восстановителя, такого как дитионит натрия или газообразный водород (Н₂ (газ)), в смеси подходящих растворителей, таких как вода и раствор аммиака или гидроксид натрия (1н. водн.), при температуре в диапазоне от комнатной температуры до 75°С в течение от 30 минут до 24 часов. Альтернативно, дитионит натрия может быть добавлен непосредственно в условиях, которые используют на стадии b.

d) Взаимодействие диамина формулы (VI), где R¹ определен выше, с 1) муравьиной кислотой, 2) формамидин-ацетатом или с 3) триалкилортоэфиром описано ниже:

(1) в способе (d) диамин формулы (VI) обрабатывают муравьиной кислотой (98%-ной) при подходящей температуре от температуры окружающей среды до температуры дефлегмации реакционной смеси. Этот способ осуществляют в течение подходящего периода времени, обычно в течение 20-30 минут. Обработка подходящим водным основанием после удаления муравьиной кислоты, например 10%-ным водным раствором гидроксида натрия, приводит к получению соединения формулы (I). Обработку основанием проводят в течение подходящего промежутка времени при подходящей температуре, например в течение от приблизительно 30 минут до 90 минут при температуре от температуры окружающей среды до температуры дефлегмации реакционной смеси. Альтернативно, взаимодействие может быть осуществлено в растворителе, таком как вода, к которому добавляют муравьиную кислоту и серную кислоту. Затем реакционную смесь нагревают при температуре дефлегмации в течение ночи, получая после нейтрализации соединение формулы (I);

(2) в способе (d) диамин формулы (VI) обрабатывают формамидинацетатом в растворителе, таком как диметилсульфоксид (DMSO), при подходящей температуре, например 70°С, до тех пор, пока реакция не завершится, обычно в течение 1-3 ч;

(3) в способе (d) диамин формулы (VI) обрабатывают при подходящей температуре избытком соответствующего ортоэфира, такого как триэтилортоформиат и трипропилортоформиат, возможно в присутствии подходящего растворителя, такого как спирт, до тех пор, пока реакция не завершится. Температуру обычно поднимают включительно до температуры дефлегмации реакционной смеси, а продолжительность реакции обычно составляет от 30 минут до проведения реакции в течение ночи.

Другие способы превращения диамина формулы (VI) в соединение формулы (I) описаны в литературе и будут известны специалисту в данной области техники.

2. Способ получения соединения формулы (I), где R¹ является таким, как определено в формуле (I), (Suzuki et al. Chem. Pharm. Bull. 2002, 50, 1163) показан на Схеме 2:

Соединения формулы (VII), (VIII), (IX) и (X) являются полезными промежуточными соединениями в получении соединения формулы (I), где R¹ является таким, как определено в формуле (I). Соединения формулы (VII)-(X) либо имеются в продаже, либо могут быть получены или из имеющихся в продаже соединений, или из описанных в литературе соединений.

a) В результате взаимодействия 5-амино-4-имидазолкарбоксамида (VII) с соответствующим альдегидом формулы (VIII), где R¹ является таким, как определено в формуле (I), и подходящим боргидридом, таким как цианоборгидрид натрия или ацетоксиборгидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как метанол, с возможным добавлением уксусной кислоты, при комнатной температуре или при нагревании от 10 до 50°С включительно получали промежуточное соединение формулы (IX).

b) В результате взаимодействия промежуточного соединения формулы (IX), где R¹ является таким, как определено в формуле (I), с изотиоцианатом, таким как бензоилизотиоцианат или этоксикарбонилизотиоцианат, в растворителе, таком как дихлорметан и метанол, при комнатной температуре получали промежуточное соединение формулы (X).

c) В результате взаимодействия промежуточного соединения формулы (X), где R¹ является таким, как определено в формуле (I), с основанием, таким как гидроксид натрия или аммиак (7н. в метаноле), при температуре от температуры окружающей среды до 80°С и до температуры дефлегмации растворителя получали соединение формулы (I), где R¹ является таким, как определено в формуле (I).

Общие методы

Все использованные растворители были аналитической степени чистоты, и для проведения реакций, как принято, использовали имеющиеся в продаже безводные растворители. Реакции обычно проводили в инертной атмосфере азота или аргона.

¹H и ¹³С ЯМР-спектры регистрировали при 400 МГц для протона и 100 МГц для углерода-13 либо на ЯМР-спектрометре Varian Unity+ 400, оборудованном 5 мм измерительной головкой с наблюдением в широком диапазоне частот (ВВО) с Z-градиентами, либо на ЯМР-спектрометре Bruker Avance 400, оборудованном измерительной головкой с двойным обращенным потоком 60 мкл с Z-градиентами, либо на ЯМР-спектрометре Bruker DPX400, оборудованном 4-х ядерной измерительной головкой с Z-градиентами. Если в примерах не указано конкретно, спектры регистрировали при 400 МГц для протона и 100 МГц для углерода-13. Использовали следующие базовые сигналы: осевая линия DMSO-d₆ δ 2.50 (¹Н), δ 39.51 (¹³С); осевая линия CD₃OD δ 3.31 (¹Н) или δ 49.15 (¹³С); ацетон-d₆ 2.04 (¹H), 206.5 (¹³С); и CDCl₃ δ 7.26 (¹H), осевая линия CDCl₃ δ 77.16 (¹³С) (если не указано иначе).

Масс-спектры регистрировали на приборе для жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LCMS) Waters, состоящем из Alliance 2795 (LC), Waters PDA (фотодиодная матрица) 2996 и детектора ELS (детектор рассеивания света при испарении) (Sedex 75) и ZMD одноквадрупольного масс-спектрометра. Масс-спектрометр был оснащен источником ионизации электрораспылением (ES), работающим в режиме положительных или отрицательных ионов. Напряжение на капилляре составляло 3 кВ, а напряжение на конусе составляло 30 В. На масс-спектрометре осуществляли сканирование в диапазоне m/z 100-600 со временем считывания 0,7 с. Температуру колонки устанавливали 40°С. С использованием диодного матричного детектора осуществляли сканирование в диапазоне 200-400 нм. Температуру детектора ELS устанавливали 40°С, а давление 1,9 бар (190 кПа). Для LC-разделения применяли линейный градиент, начиная от 100% А (А:10 мМ ацетат аммония (NH₄OAc) в 5% ацетонитрила (MeCN)) и заканчивая при 100% В (В:MeCN) через четыре минуты. Использовали колонку X-Terra MS C8; 3,0×50; 3,5 мкм (Waters) при скорости 1,0 мл/мин.

Альтернативно, масс-спектры снимали на приборе для газовой хроматографии с масс-спектрометрией (GC-MS) (GC 6890, 5973N MSD), поставляемом Agilent Technologies. Использовали колонку VF-5 MS, ID (внутренний диаметр) 0,25 мм × 30 м; 0,25 мкм (Varian Inc.). Применяли линейный температурный градиент, начиная от 40°С (выдерживали 1 мин) и заканчивая при 300°С (выдерживали 1 мин), 25°С/минута. Масс-спектрометр был оснащен источником химической ионизации (CI), а газообразным реагентом был метан. На этом масс-спектрометре осуществляли сканирование в диапазоне m/z 50-500; скорость сканирования устанавливали 3,25 скан./с. Масс-спектрометр был оснащен источником ионизации электронным ударом (EI). На этом масс-спектрометре осуществляли сканирование в диапазоне m/z 50-500; скорость сканирования устанавливали 3,25 скан./с. Напряжение (electron voltage) устанавливали 70 эВ.

HPLC-анализ проводили на системе Agilent HP1100, состоящей из вакуумного микродегазатора G1379A, сдвоенного насоса G1312A, автоматического пробоотборника для луночного планшета G1367A, термостатируемой камеры для колонки G1316A и диодного матричного детектора G1315B, Колонка: X-Terra MS, Waters, 3,0×100 мм; 3,5 мкм. Температуру колонки устанавливали 40°С, а скорость потока 1,0 мл/мин. С использованием диодного матричного детектора осуществляли сканирование в диапазоне 210-300 нм, шаг и ширину пика устанавливали равными 2 нм и 0,05 мин соответственно. Применяли линейный градиент, начиная от 100% А (А:10 мМ NH₄OAc в 5% МеСN) и заканчивая 100% В (В: MeCN), в течение 6 минут.

GC-MS-анализ проводили на приборе GC 6890, 5973N MSD, поставляемом Agilent Technologies. Использовали колонку VF-5 MS, ID 0,25 мм × 30 м; 0,25 мкм (Varian Inc.). Применяли линейный температурный градиент, начиная от 40°С (выдерживали 1 мин) и заканчивая при 300°С (выдерживали 1 мин), 25°С/минута. Масс-спектрометр был оснащен CI-источником ионов, а газообразным реагентом был метан. На этом масс-спектрометре осуществляли сканирование в диапазоне m/z 50-500; скорость сканирования устанавливали 3,25 скан./с. Напряжение (electron voltage) устанавливали 70 эВ.

Микроволновое нагревание выполняли в Initiator или Smith Synthesizer с одномодовой микроволновой камерой, дающей непрерывное излучение при 2450 МГц.

Типичная процедура обработки после реакции состояла из экстракции продукта растворителем, таким как этилацетат, промывки водой с последующей сушкой органической фазы над сульфатом магния (MgSO₄) или сульфатом натрия (Na₂SO₄), фильтрования и концентрирования раствора в вакууме.

Тонкослойную хроматографию (TLC) проводили на TLC-пластинках Merck (силикагель 60 F254) с визуализацией пятен в УФ. Флэш-хроматографию проводили на Combi Flash® Companion™ с использованием RediSep™ флэш-колонок с нормальной фазой. Обычные растворители, использованные для флэш-хроматографии, представляли собой смеси хлороформ/метанол, дихлорметан/метанол и гептан/этилацетат.

Препаративную хроматографию осуществляли на HPLC-системе автоматической очистки Waters с диодным матричным детектором. Колонка: XTerra MS C8; 19×300 мм; 10 мкм. Использовали узкие градиенты MeCN/(95:5 0,1М NH₄OAc:MeCN) при скорости потока 20 мл/мин. Альтернативно, использовали другую колонку: колонку Atlantis C18, 19×100 мм, 5 мкм. Градиент ацетонитрил/0,1М ацетат аммония в 5% ацетонитрила в воде MilliQ, от 0% до 35-50% ацетонитрила, пропускали в течение 15 мин. Скорость потока: 15 мл/мин. Альтернативно, очистку выполняли на полупрепаративной HPLC-системе Shimadzu LC-8A с детектором Shimadzu SPD-10A с визуализацией в УФ, оснащенной колонкой Waters Symmetry® (C18; 5 мкм; 100 мм × 19 мм).

Использовали узкие градиенты MeCN/0,1% трифторуксусная кислота в воде MilliQ при скорости потока 10 мл/мин.

Были использованы следующие сокращения:

водн. водный; m-СРВА 3-хлорпероксибензойная кислота; экв. эквивалент; DEAD диэтилазодикарбоксилат; DMF N,N-диметилформамид; DMSO диметилсульфоксид; НОАс уксусная кислота; NaCNBH₃ цианоборгидрид натрия; Na₂SO₄ сульфат натрия; кт комнатная температура; в теч. ночи в течение ночи; THF тетрагидрофуран; Boc₂O ди-трет-бутилдикарбонат; МеОН метанол; EtOH этанол; EtOAc этила цетат; TFA трифторуксусная кислота; DIPEA N,N-диизопропилэтиламин; CH₂Cl₂ метиленхлорид; CHCl₃ хлороформ; TEMPO 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси; HCl соляная кислота.

Использованные исходные вещества были либо приобретены из коммерческих источников, либо получены согласно литературным методикам и имели экспериментальные характеристики, соответствующие приведенным в них данным.

ПРИМЕРЫ

Данное изобретение проиллюстрировано, но никоим образом не ограничено, следующими далее примерами.

Пример 1

3-(2-Этокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

(a) 2-Бром-1,1-диэтокси-2-метилпропан

Продукт синтезировали согласно модифицированной методике, описанной в US 3652579.

Бромную воду (2,95 мл; 57,6 ммоль) по каплям добавляли к изомасляному альдегиду (4,82 г; 66,8 ммоль) в EtOH (22 мл), и полученную смесь перемешивали при кг в течение 40 минут. Добавляли дополнительное количество бромной воды (0,3 мл; 5,86 ммоль). Реакционную смесь нейтрализовывали путем добавления карбоната кальция (3,5 г; 25,3 ммоль). Оставшийся карбонат кальция отфильтровывали, и фильтрат выливали на смесь лед-вода. Водную фазу экстрагировали CH₂Cl₂, сушили с Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. После вакуумной дистилляции указанный в заголовке продукт получали с выходом 67% (10,10 г).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 4.43 (s, 1Н), 3.80-3.73 (m, 2H), 1.64 (s, 6H), 1.15 (t, 6H).

(b) 2-Этокси-2-метилпропаналь

Продукт синтезировали согласно методике, описанной в US 3652579.

2-Бром-1,1-диэтокси-2-метилпропан (5,63 г; 25 ммоль), полученный на стадии 1а, по каплям добавляли к битартрату калия (2,35 г; 12,5 ммоль) в деионизированной воде при температуре дефлегмации (22,5 мл) в течение 50 минут. Полученную смесь оставляли кипятиться с обратным холодильником в течение 1 ч 10 минут. Растворитель и продукт отгоняли. К смеси продукт-растворитель добавляли сульфат аммония (суммарно 8,5 г). Смесь перемешивали в течение некоторого времени. Разделяли две фазы, и верхнюю фазу отгоняли от хлорида кальция, получая 55% (1,60 г) указанного в заголовке продукта. MS(CI) m/z 117 (М+1).

(с) 4-[(2-Этокси-2-метилпропил)аминоИН-имидазол-5-карбоксамид

NaCNBH₃ (0,077 г; 1,23 ммоль) добавляли к гидрохлориду 5-амино-4-имидазолкарбоксамида (0,200 г; 1,23 ммоль) и уксусной кислоте (141 мкл; 2,46 ммоль) в метаноле (1,5 мл). По каплям добавляли 2-этокси-2-метилпропаналь (0,286 г; 2,46 ммоль), полученный в Примере 1(b). Через 1,5 ч добавляли дополнительное количество 2-этокси-2-метилпропаналя (0,300 г; 2,58 ммоль), затем через 0,5 ч еще раз 2-этокси-2-метилпропаналь (0,424 мг; 3,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кг в течение 17 ч, после чего ее концентрировали и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (CHCl₃/МеОН; 20:1-9:1), получая указанное в заголовке соединение в виде масла с выходом 90% (0,251 г). MS (ESI) m/z 227 (М+1).

(d) 3-(2-Этокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

Этоксикарбонилизотиоцианат (0,171 г; 1,30 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 4-[(2-этокси-2-метилпропил)амино]-1H-имидазол-5-карбоксамида (0,246 г; 1,09 ммоль), который был получен в Примере 1(с), в CH₂Cl₂ (1,1 мл) при кг в течение 0,5 ч, затем реакционную смесь оставляли без перемешивания при 4°С в течение 16 ч. Реакционную смесь нагревали до кг в течение 1 ч, растворитель выпаривали, остаток растворяли в 2%-ном гидроксиде натрия (водн.) (27 мл), и реакционную смесь нагревали при 50°С в течение 5,5 ч. Конц. HCl и 1М HCl устанавливали нейтральное значение рН. Осадок собирали фильтрованием, промывали водой и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (CHCl₃/МеОН; 20:1), получая указанное в заголовке соединение с выходом 47% (96 мг).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 13.76 (br s, 1H), 12.42 (s, 1H), 8.13 (s, 1 H), 4.69 (br s, 2H), 3.54 (q, 2H), 1.21 (s, 6H), 1.02 (t, 3H). MS (ESI) m/z 267 (M-1).

Пример 2

3-(2-Пропокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

(а) 2-Бром-2-метил-1,1-дипропоксипропан

2-Бром-2-метил-1,1-дипропоксипропан получали согласно модифицированному способу, описанному в US 3652579.

Изомасляный альдегид (7,2 г; 0,10 моль) и 1-пропанол (12 мл) охлаждали в ледяной бане. По каплям в течение 20 мин добавляли бром (4,4 мл; 0,086 моль). Перемешивание продолжали при температуре окружающей среды в течение 5 мин, а затем при 55°С в течение 30 мин. Порциями добавляли карбонат кальция (3 г; 0,030 моль). Полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Смесь фильтровали, и твердые вещества промывали диэтиловым эфиром. Затем добавляли воду (15 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме при температуре окружающей среды. Этот неочищенный продукт (13,5 г; 53%) использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ млн^-1 4.40 (s, 1H), 3.73-3.79 (m, 2H), 3.51-3.57 (m, 2H), 1.73 (s, 6H), 1.60-1.66 (m, 4H), 0.93-0.97 (m, 6H).

(b) 2-Метил-2-пропоксипропаналь

2-Метил-2-пропоксипропаналь получали согласно модифицированному способу, описанному в патенте US 3652579. Суспензию, состоящую из 2-бром-2-метил-1,1-дипропоксипропана, полученного в Примере 2(а), (6,5 г; 0,026 моль), гидротартрата калия (4,8 г; 0,026 моль) в воде (75 мл), нагревали при температуре дефлегмации в течение 7 ч. Монтировали установку для проведения дистилляции, и жидкость, которую перегоняли в диапазоне 82-90°С, собирали. Органическую фазу отделяли. Полученный неочищенный продукт (1,9 г; 56%) использовали без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (COCl₃) δ млн^-1 9.58 (s, 1H), 3.31-3.34 (m, 2H), 1.54-1.64 (m, 2H), 1.26 (s, 6H), 0.92-0.96 (m, 3H).

(c) 4-[(2-Метил-2-пропоксипропил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамид

Реакционную смесь из 2-метил-2-пропоксипропаналя, полученного в Примере 2(b), (1,0 г; 8,3 ммоль), 5-амино-4-имидазолкарбоксамида (0,5 г; 4,0 ммоль), цианоборгидрида натрия (0,25 г; 4,0 ммоль) и уксусной кислоты (0,45 мл; 7,9 ммоль) в 10 мл метанола перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Растворитель удаляли в вакууме. Добавляли воду (20 мл) и этилацетат (20 мл). Органическую фазу отделяли, и растворитель удаляли в вакууме. После очистки на флэш-системе от ISCO (EtOAc. гептан, элюирование градиентом от 1:1 до 100% EtOAc) получали 0,19 г (20%) указанного в заголовке соединения.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ млн^-1 6.98 (s, 1Н), 6.39 (br s, 1H), 3.40 (t, 2H, J=6,7 Гц), 3.14 (d, 2H, J=4,3 Гц), 1.56-1.65 (m, 2H), 1.22 (s, 6H), 0.95 (t, 3H, J=7,5 Гц); MS (ESI)m/z 241 (M+1).

(d) 3-(2-Пропокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

4-[(2-Метил-2-пропоксипропил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамид, полученный в Примере 2(с), (0,19 г; 0,78 ммоль) растворяли в 7 мл дихлорметана. Полученный раствор перемешивали при температуре окружающей среды. Порциями в течение 6 ч добавляли бензоилизотиоцианат (0,50 г; 3,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, и затем в вакууме удаляли растворитель. Добавляли аммиак в метаноле (7 мл 7М раствора), и полученный раствор нагревали при 50°С в течение 3 ч, а затем при 80°С в течение 3 ч в колбе для работы под давлением. Охлажденную реакционную смесь концентрировали, и неочищенный продукт очищали обращенно-фазовой HPLC. Продукт получали с выходом 22% (48 мг).

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 13.70 (очень br s, 1H), 12.39 (br s, 1H), 8.12 (s, 1H), 4.69 (brs, 2H), 3.41 (t, 2H, J=6,6 Гц), 1.36-1.44 (m, 2H), 1.21 (s, 6H), 0.81 (t, 3H, J=7,5 Гц);

¹³C ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 175.3, 152.5, 149.9, 140.7, 111.0, 75.9, 62.7, 53.5, 25.4, 23.2, 10.6; MS (ESI) m/z 283 (M+1).

Пример 3

3-(2-Метокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

(a) 2-Метокси-2-метилпропаналь

Продукт синтезировали согласно методике, описанной в US 3652579.

(b) 4-[(2-Метокси-2-метилпропил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамид

Гидрохлорид 5-амино-4-имидазолкарбоксамида (0,162 г; 1,0 ммоль) и 2-метокси-2-метилпропаналь, полученный в Примере 3(а), (0,204 г; 2,0 ммоль) смешивали в метаноле (3 мл) при кт. Затем добавляли уксусную кислоту (141 мкл; 2,46 ммоль), и смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин с последующим добавлением NaCNBH₃ (0,063 г; 1,0 ммоль). Через 3 ч добавляли дополнительное количество 2-метокси-2-метилпропаналя (0,060 г; 0,59 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 17 ч, затем концентрировали и очищали флэш-хроматографией на силикагеле (CHCl₃:МеОН=5:1). Указанное в заголовке соединение получали в виде масла с выходом 73% (0,155 г). MS (ESI) m/z 213 (M+1).

(с) 3-(2-Метокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин

Этоксикарбонил-изотиоцианат (0,144 г; 1,1 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 4-[(2-метокси-2-метилпропил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамида (0,155 г; 0,73 ммоль), полученного в Примере 3(b), в CH₂Cl₂ (2,5 мл) при кт в течение 16 ч. Растворитель выпаривали, затем остаток растворяли в 2%-ном водном растворе гидроксида натрия (NaOH) (10 мл) и нагревали при 50°С в течение 3 ч. 2М HCl устанавливали нейтральное значение рН, и полученные осадки собирали фильтрованием с последующей очисткой препаративной HPLC. Указанное в заголовке соединение получали в виде белого твердого вещества с выходом 32% (60 мг).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 12.41 (s, 1Н), 8.13 (s, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.21 (s, 3Н), 1.20 (s, 6H). MS (ESI) m/z 255 (M+1).

Пример 4

3-(2-Изопропоксиэтил)-2-тиоксантин

(а) 4-[(2-Изопропоксиэтил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамид

Трихлорциануровую кислоту (1,23 г; 5,29 ммоль) добавляли к раствору 2-изопропоксиэтанола (0,50 г; 4,80 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл). Реакционную смесь охлаждали до 0°С и осторожно небольшими порциями добавляли TEMPO (0,015 г; 0,09 ммоль). Смесь перемешивали при кт в течение 20 минут, затем фильтровали через Целит и промывали CH₂Cl₂. Во время фильтрования фильтрат поддерживали в охлажденном состоянии (0°С). Полученный раствор альдегида добавляли к перемешиваемой смеси гидрохлорида 4-амино-1H-имидазол-5-карбоксамида (0,78 г; 4,80 ммоль), полученного в Примере 3(b), при 0°С в МеОН (5 мл). Смесь перемешивали в течение 20 минут, затем добавляли NaCNBH₄ (0,30 г; 4,80 ммоль). После перемешивания при кт в течение 5 ч смесь концентрировали и очищали флэш-хроматографией (градиент CH₂Cl₂/метанол; от 0 до 5% метанола), получая указанное в заголовке соединение (0,39 г; 38%) в виде масла.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 7.58-7.45 (1H, m), 6.84-6.66 (2H, m), 6.23 (1H, br s), 3.59-3.49 (1H, m), 3.49-3.43 (2H, m), 3.35-3.28 (2H, m), 1.10-1.06 (6H, m); MS (ESI) m/z 213 (M+1).

(b) 3-(2-Изопропоксиэтил-2-тиоксо-1,2,3,7-тетрагидро-6Н-пурин-6-он

4-[(2-Изопропоксиэтил)амино]-1Н-имидазол-5-карбоксамид, полученный в Примере 4(а), (0,37 г; 1,74 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл). Добавляли этоксикарбонилизотиоцианат (0,27 г; 2,09 ммоль), и смесь перемешивали при кт в течение 30 минут. Смесь концентрировали в вакууме и растворяли в 2М гидроксиде натрия (2 мл). Реакцию проводили в микроволновом реакторе при 120°С в течение 10 минут. 2М HCl устанавливали нейтральное значение рН раствора, и осадок собирали фильтрованием и промывали водой. Очищали препаративной HPLC, получая указанное в заголовке соединение (0,14 г; 32%) в виде твердого вещества.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 13.82 (1Н, br s), 12.44 (1H, br s), 8.16 (1H, s), 4.72-4.51 (2H, m), 3.80-3.67 (2H, m), 3.67-3.56 (1H, m), 1.04 (6H, d, J=6,0 Гц); MS (ESI) m/z 255 (M+1).

Пример 5

3-(2-Этокси-пропил)-2-тиоксантин

(а) (2-Этокси-пропил)-тиомочевина

2-Этокси-пропиламин (1,50 г; 14,5 ммоль) и бензоилизотиоцианат (2,61 г; 16,0 ммоль) в хлороформе (50 мл) нагревали при 75°С в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли метанол (15 мл) и воду (30 мл). Добавляли карбонат калия (2,0 г; 14,5 ммоль), и смесь нагревали при 75°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь нейтрализовывали 2М серной кислотой, и при пониженном давлении удаляли растворитель. Неочищенный продукт растворяли в метаноле, и нерастворившийся материал удаляли фильтрованием. Растворитель отгоняли, и полученное твердое вещество промывали дихлорметаном и растворяли в этаноле. Нерастворившийся материал удаляли фильтрованием, а растворитель удаляли при пониженном давлении. В результате получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (1,6 г; выход 59%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 7.52 (1H, уширенный s), 7.02 (2H, уширенный s), 3.58-3.33 (5Н, m), 1.09 (3Н, t, J=6,95 Гц), 1.03 (3Н, d, J=6,06 Гц); MS (ES) m/z 161 (M-1).

(b) 6-Амино-1-(2-этокси-пропил)-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пиримидин-4-он

(2-Этокси-пропил)-тиомочевину (1,5 г; 1,4 ммоль), полученную в Примере 5(а), и этилцианоацетат (1,75 г; 15,5 ммоль) добавляли к раствору этилата натрия (приготовленного из натрия (0,35 г; 15,2 ммоль) и абсолютного этанола (15 мл)). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду и полученную смесь нейтрализовывали 2М серной кислотой. Полученный осадок собирали фильтрованием, и твердое вещество промывали водой, получая желаемый продукт (1,2 г; выход 71%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 11.86 (1Н, уширенный s), 6.73 (2Н, уширенный s), 4.91 (1Н, s), 4.54 (1Н, уширенный s), 4.00-3.85 (1Н, m), 3.66-3.46 (1Н, m), 3.39-3.23 (2Н, m), 1.12 (3H, d, J=6,32 Гц), 1.03 (3H, t, J=7,07 Гц); MS (ES) m/z 230 (M+1).

(c) 6-Амино-1-(2-этокси-пропил)-5-нитрозо-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пиримидин-4-он

6-Амино-1-(2-этокси-пропил)-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пиримидин-4-он (1,1 г; 4,8 ммоль), полученный в Примере 5b, суспендировали в 10%-ной уксусной кислоте (20 мл), и смесь перемешивали в течение 15 минут. Добавляли нитрит натрия (0,36 г; 5,3 ммоль), и полученную смесь нагревали при 75°С в течение 1 ч. Реакционная смесь становилась розовой, затем фиолетовой. Смесь охлаждали до комнатной температуры, и фиолетовое твердое вещество собирали фильтрованием и промывали водой, получая указанное в заголовке соединение (1,05 г; выход 70%). Это твердое вещество использовали в Примере 5(d) без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 13.16 (1Н, уширенный s), 12.61 (1Н, уширенный s), 4.50 (1Н, уширенный s), 4.24 (1Н, уширенный s), 3.96-3.84 (1Н, m), 3.56-3.43 (1Н, m), 3.34-3.20 (2Н, m), 1.13 (3Н, d, J=6,32 Гц), 0.95 (3Н, t, J=6,95 Гц); MS (ES) m/z 259 (M+1).

(d) 5,6-Диамино-1-(2-этокси-пропил)-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пириимидин-4-он

6-Амино-1-(2-этокси-пропил)-5-нитрозо-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пиримидин-4-он (1,0 г; 3,9 ммоль), полученный в Примере 5(с), суспендировали в 32%-ном аммиаке (5 мл) и добавляли воду (10 мл). Эту смесь нагревали при 75°С и небольшими порциями добавляли дитионит натрия (1,7 г; 9,7 ммоль). После нагревания в течение следующих 5 минут реакционную смесь удаляли из масляной бани и перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. 2М H₂SO₄ устанавливали нейтральное значение рН смеси. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и сушили с получением диамина (0,6 г; выход 41%). Этот продукт использовали в Примере 5(е) без дополнительной очистки.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 5.91 (2Н, уширенный s), 4.59 (1Н, уширенный s), 4.11 (1Н, уширенный s), 3.99-3.85 (1Н, m), 3.68-3.42 (3Н, m), 3.39-3.20 (2Н, m), 1.14 (3Н, d, J=6,32 Гц), 1.03 (3Н, t, J=6,95 Гц); MS (ES) m/z 245 (M+1).

(e) 3-(2-Этокси-пропил)-2-тиоксантин

5,6-Диамино-1-(2-этокси-пропил)-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-пиримидин-4-он (0,60 г; 2,45 ммоль), полученный в Примере 5(d), суспендировали в муравьиной кислоте (6 мл), и полученный раствор нагревали при 70°С в течение 2 ч. Избыток муравьиной кислоты выпаривали при пониженном давлении. К твердому веществу добавляли 10%-ный гидроксид натрия (6 мл), и полученный раствор нагревали при 70°С в течение 2 ч. 2М серной кислотой устанавливали нейтральное значение рН раствора. Полученный осадок собирали фильтрованием и промывали водой. После очистки препаративной HPLC указанное в заголовке соединение (0,18 г; выход 29%) получали в виде твердого вещества.

¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 13.77 (1Н, уширенный s), 12.41 (1Н, уширенный s), 8.13 (1Н, s), 4.64-4.51 (1Н, m), 4.47-4.33 (1Н, m), 4.25-4.12 (1Н, m), 3.58-3.42 (1Н, m), 3.43-3.31 (1Н, m), 1.06 (3Н, d, J=6,32 Гц), 0.95 (3Н, t, J=6,95 Гц); ¹³С ЯМР (DMSO-d₆) δ млн^-1 174.22, 152.96, 150.18, 141.54, 111.16, 71.15, 63.78, 52.13, 18.33, 15.80; MS (ES) m/z 255 (M+1).

Пример 6

3-(2S-Этокси-пропил)-2-тиоксантин и 3-(2-этокси-пропил)-2-тиоксантин

Раствор рацемического 3-(2-этокси-пропил)-2-тиоксантина (5 мг/мл), полученного в Примере 6, разделяли на два его энантиомера, используя хиральную HPLC на колонке Chiralpak AD (21,2×250 мм; 10 мкм). В качестве подвижной фазы использовали 100%-ный метанол, а скорость потока составляла 8 мл/мин. Вводимый объем составлял 2 мл.

Энантиомером, который элюировался первым, был 3-(2S-этокси-пропил)-2-тиоксантин, и этот энантиомер был определен с помощью методики дифракции на монокристалле при 200K, е.е. (энантиомерный избыток) 98%; MS (ES) m/z 255 (M+1).

Энантиомером, который элюировался вторым, был 3-(2R-этокси-пропил)-2-тиоксантин, е.е. 98%; MS (ES) m/z 255 (M+1).

Скрининги

Способы определения МРО-ингибирующей активности раскрыты в заявке на патент WO 02/090575. Фармакологическую активность соединений по изобретению тестировали в следующем способе скрининга, при котором соединения тестировали либо поодиночке, либо в присутствии добавленного тирозина.

Буфер для анализа: 20 мМ натрий/калий-фосфатный буфер, рН 6,5, содержащий 10 мМ таурин и 100 мМ NaCl.

Обнаруживающий реагент: 2 мМ 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМВ), 200 мкМ KI, 200 мМ ацетатный буфер, рН 5,4, с 20% DMF.

К 10 мкл соединений, разведенных в буфере для анализа, добавляли 40 мкл МРО человека (конечная концентрация 2,5 нМ) с добавлением или без добавления 20 мкМ тирозина (конечная концентрация, если он присутствует, 8 мкМ), и смесь инкубировали в течение 10 минут при температуре окружающей среды. Затем добавляли 50 мкл H₂O₂ (конечная концентрация 100 мкМ) или только буфер для анализа в качестве контроля. После инкубирования в течение 10 минут при температуре окружающей среды реакцию останавливали, добавляя 10 мкл каталазы (0,2 мг/мл; конечная концентрация 18 мкг/мл). Реакционную смесь оставляли на 5 минут, после чего добавляли 100 мкл ТМВ в качестве обнаруживающего реагента. Затем, приблизительно через 5 минут, используя абсорбционную спектроскопию при примерно 650 нМ, измеряли количество образовавшегося окисленного 3,3',5,5'-тетраметилбензидина. Далее, используя стандартные методики, определяли величины IC₅₀.

После тестирования соединений Примеров 1-6 по, по меньшей мере, одной версии приведенного выше скрининга получали величины IC₅₀ менее чем 60 мкМ, указывающие на то, что у них ожидается появление полезной терапевтической активности. Репрезентативный результат показан в следующей ниже Таблице.

Соединение Ингибирование МРО (в присутствии тирозина), IC₅₀, мкМ Пример 5 0,5

Настоящее изобретение относится к новым производным 2-тиоксантина, а именно к соединению формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, представляющее собой: 3-(2-этокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин; 3-(2-пропокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин; 3-(2-метокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин; 3-(2-изопропоксиэтил)-2-тиоксантин; 3-(2-этоксипропил)-2-тиоксантин; 3-(2S-этоксипропил)-2-тиоксантин; 3-(2R-этоксипропил)-2-тиоксантин. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на основе соединения формулы I, к применению соединения формулы I в изготовлении лекарственного средства. Технический результат: получены новые производные 2-тиоксантина, полезные для ингибирование фермента МРО (миелопероксидазы). 5 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Соединение формулы (I)

представляющее собой:
3-(2-этокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин;
3-(2-пропокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин;
3-(2-метокси-2-метилпропил)-2-тиоксантин;
3-(2-изопропоксиэтил)-2-тиоксантин;
3-(2-этоксипропил)-2-тиоксантин;
3-(2S-этоксипропил)-2-тиоксантин;
3-(2R-этоксипропил)-2-тиоксантин;
или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики заболеваний или состояний, при которых полезно ингибирование фермента МРО (миелопероксидазы), содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль, возможно, в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

3. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики заболеваний или состояний, при которых полезно ингибирование фермента МРО (миелопероксидаза).

4. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики воспалительных расстройств.

5. Применение по п.4, где воспалительное расстройство представляет собой нейровоспалительные расстройства.

6. Применение по п.5, где указанное нейровоспалительное расстройство представляет собой рассеянный склероз или болезнь Паркинсона.

7. Применение по п.3, где указанное заболевание или состояние представляет собой кардио- и цереброваскулярные атеросклеротические расстройства или заболевание периферических артерий, сердечную недостаточность или респираторные расстройства.

8. Применение по п.7, где указанное заболевание или состояние представляет собой хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), бронхит, включая инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфизему; бронхоэктаз или кистозный фиброз.

9. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики удара.