СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭНДОМЕТРИТОВ БАКТЕРИАЛЬНО-МИКОЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ У КОРОВ Российский патент 2011 года по МПК A61K31/00 

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарной гинекологии, в частности к лечению острого гнойно-катарального эндометрита бактериально-микозной этиологии у крупного рогатого скота.

Известны различные способы лечения острого гнойно-катарального эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров, основанные на применении антибиотиков, сульфаниламидов, препаратов нитрофуранового ряда (В.П.Гончаров, В.А.Карпов Профилактика и лечение гинекологических заболеваний у коров. - М.: Россельхозиздат. - 1981. С.104-111.), действующих бактерицидно и бактериостатически. Однако применение этих препаратов не всегда позволяет достигать желаемого терапевтического эффекта из-за устойчивости микроорганизмов и грибов к указанным препаратам, применения неадекватных доз, угнетения иммунной системы и ряда других причин. Кроме того, длительное применение вышеуказанных препаратов приводит к появлению резистентных штаммов микроорганизмов. В частности, известен способ лечения эндометритов у коров препаратом (аналог) «лозеваль» - представляющий собой масленичную жидкость, которая имеет два активно действующих начала - это морфолиний и этоний. Препарат получают путем последовательного растворения двух активнодействующих веществ в растворителе диметилсульфоксида (В.П.Мирошнеченко. Биологическая активность и применение лозеваля в ветеринарии. Диссертация на соиск. уч. степени канд. вет. наук., Краснодар 1999, с.40). Применяется в качестве антибактериального и антимикозного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров в виде внутриматочных введений в дозе 100 мл один раз в сутки в течение 5-6 дней.

Недостатком этого способа является то, что он малоэффективен при эндометритах бактериально-микозной этиологии.

Известен способ, принятый за ближайший аналог, использования препарата йодинол, где йод (действующее вещество) является продуктом присоединения к поливиниловому спирту (наполнитель). Используют водный раствор, содержащий 0,1% йода, 0,3% калия йодида и 0,9% поливинилового спирта. Препарат вводят внутриматочно в дозе 50 мл с интервалом 48 часов, 5-7 введений, при различных гнойных инфекциях и микозных заболеваниях. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», Т.2, с.374.

Недостатком этого способа является, что препараты йода дают низкий терапевтический эффект и длительное применение приводит к появлению резистентных штаммов микроорганизмов.

Задачи

Техническим результатом является повышение эффективности лечения и расширение спектра действия путем антибактериального и антимикозного эффекта за счет использования бисчетвертичных соединений аммония, в частности септабика и бриллианта зеленого. Срок лечения сокращается в среднем на 3,2 дня, терапевтический эффект повышается на 10% и снижается количество дней бесплодия на 16,1 дня по сравнению с препаратами-аналогами.

Сущностью изобретения является использование четвертичного аммонийного соединения, при этом корове внутриматочно вводят смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллиантового зеленого в соотношении 200:1 ежесуточно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Лечебный препарат условно назван «Эндотон».

Способ получения осуществляют путем растворения септабика в дистиллированной воде в пропорции 1:100 соответственно и дальнейшем растворении в полученном растворе бриллиантового зеленого в пропорции 1:200 соответственно. Полученный препарат представляет собой раствор зеленого цвета, со специфическим запахом мыла, при встряхивании образуется пена. Водородный показатель 8,0-8,4. Массовая доля активнодействующего вещества 29-32%, золы - не более 1% (таблица 1).

Таблица 1 Физико-химические свойства эндотона №/№ Наименование показателя Норма по НТД 1 Описание препарата Раствор со специфическим запахом мыла 2 Прозрачность и цветность Раствор зеленого цвета, при встряхивании образуется пена 3 Кислотность Водородный показатель 8,0-8,4 4 Специфическая активность Проявляет антимикробное и антимикозное действие 5 Безвредность LD₅₀=2000 мг/кг. 3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76

Изучение стабильности препарата в процессе хранения - при комнатной температуре, в защищенном от света месте проводили, в течение 18 месяцев. Определение параметров препарата «эндотон»: внешнего вида, цвета, запаха, вкуса, концентрации водородных ионов и безвредность исследовались через каждые 3 месяца (таблица 2).

Таблица 2 Результаты изучения стабильности препарата эндотон Показатель Характеристика (норма) Исследовано на месяце хранения 1 3 6 9 12 15 18 Внешний вид и цвет Раствор зеленого цвета, при встряхивании образуется пена + + + + + + + Запах Раствор со специфическим запахом мыла. + + + + + + + Вкус Мыла + + + + + + + Концентрация водородных ионов, рН 8,0-8,4 8,1 8,1 8,1 8,1 8,0 8,0 8,0 Безвредность в тест-дозе на одну мышь, мл 0,2 - - - - - - -

На протяжении всего периода исследования эндотон сохранял цвет и внешний вид - зеленый раствор, при встряхивании которого образовывалась пена; специфический запах мыла; безвредность определяли в тест-дозе 0,2 мл на одну мышь; концентрацию ионов водорода рН была в пределах 8,0-8,4.

Проведенными исследованиями установлено, что все показатели препарата эндотон во все месяцы исследований соответствовали первоначальным показателям.

Антимикробные свойства препарата проверяли методом диффузии в агар с использованием лунок и последовательных серийных разведений в жидкой питательной среде.

При определении бактерицидной и фунгицидной активности бромацида в жидкой питательной среде делали его дробные (кратные) разведения в МПБ и среде Сабуро. В бульон, содержащий препарат в убывающей концентрации от 5000 до 39,1 мкг/мл (разведение от 1:2 до 1:256), вносились тест-культуры. Микробная нагрузка составляла 1 млрд микробных тел в 1 мл. Пробирки с питательной средой инкубировали в термостате в течение 18-20 часов при температуре 37°С. Активность препарата определяли по интенсивности ингибиции роста и гибели микроорганизмов. За минимальную бактерицидную (МБцК) и бактериостатическую (МБсК) активность принимали наименьшее количество препарата, задерживающего рост микроорганизмов или вызывающего их гибель.

Эндотон обладает выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием в концентрации 312,5 мкг/мл по отношению к культуре Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumonia, а также в концентрации 625 мкг/мл по отношению к культуре Shigella dysenteriae. МБцК для Escherihia coli и Proteus vulgaris составила 625 мкг/мл, а МБсК - 312,5 мкг/мл (таблица 3).

Чувствительность выявленной микрофлоры в матке коров к антибиотикам устанавливали in vitro при помощи следующих методов: диффузии в агар с использованием лунок и методом дисков. В качестве тест-культур использовали суточные полевые очищенные изоляты микроорганизмов, выделенные от коров острым гнойно-катаральным эндометритом.

Результаты проведенных исследований отражены в таблице 4.

Анализируя полученные результаты исследований по определению чувствительности условно-патогенной микрофлоры к лекарственным препаратам установлено, что наиболее активно препятствует росту микрофлоры такие антибиотики, как цефазолин, абактан, ципрофлоксацин, энрофлоксацин, левомецитин, энроцид; из нитрофурановых препаратов - фурадонин, фурагин; из четвертичных аммонийных соединений - эндотон, лозеваль; из комплексных препаратов - йодинол, йодовет, жироформ-БМ, энроцид. Антимикозным действием обладали йодинол, эндотон, лозеваль, жироформ-БМ.

Рассмотрев чувствительность некоторых видов микрофлоры к лекарственным препаратам, можно сказать, что St.aureus чувствителен к таким препаратам, как энрофлоксацин, эндотон, цефазолин, фурагин, абактан, ципрофлоксацин, жироформ-БМ, энроцид (31,6 мм-20,3 мм); Str.pyogenes - цефазолин, энрофлоксацин, эндотон (24,7 мм-20,3); Е.coli - энрофлоксацин, лозеваль, абактан, левомецитин, ципрофлоксацин, фурадонин, ампициллин, цефазолин, йодовет, жироформ-БМ (27,8 мм-21,4 мм); Р.vulgaris - энрофлоксацин, абактан, эндотон, фурадонин, йодовет (25,3 мм-20,8 мм); K.pneumoniae - энрофлоксацин, ципрофлоксацин, абактан, эндотон, жироформ-БМ, энроцид (25,4 мм-18,3 мм).

Таблица 4 Определение чувствительности микроорганизмов к различным лекарственным препаратам Препараты Зона задержки роста в мм St. aureus Str. pyogenes E. coli P. vulgaris K. pneumoniae Candida albicans Aspergillus fumigatus Mucor racemosus Левомецитин 15,3 14,6 24,3 - 12,7 - - - Ципрофлоксацин 21,4 18,7 22,5 14,7 24,6 - - - Канамицин 18,2 8,9 14,1 16,8 12,7 - - - Эритромицин 15,7 - 9,6 - 4,3 - - - Ампициллин 17,2 - 22,8 - - - - - Цефазолин 24,1 24,7 21,6 - 14,6 - - - Стрептомицин 20,0 10,7 17,7 10,1 - - - - Гентамицин 20,5 13,4 14,2 15,6 14,3 - - - Абактан 22,4 18,7 25,4 24,8 23,6 - - - Фурагин 22,7 20,2 19,3 11,4 15,7 - - - Фурадонин 14,0 14,6 22,3 20,8 19,9 - - - Фуразолидон 12,4 11,6 16,1 19,8 12,3 - - - Энрофлоксацин 31,6 20,9 27,8 25,3 25,4 - - - Йодинол 12,1 10,2 16,4 19,3 10,7 15,3 12,1 17,6 Йодовет 15,6 14,2 18,7 21,2 16,4 20,1 15,3 16,2 Эндотон 24,7 20,3 20,5 20,8 21,6 24,3 19,7 25,3 Лозеваль 20,2 18,6 25,4 15,5 14,6 9,3 10,4 10,3 Телозинокар 23,1 14,7 12,3 5,4 8,6 - - - Жироформ-БМ 20,6 18,3 21,4 18,7 19,5 12,9 10,6 15,3 Ихтиоловые палочки 14,0 11,4 10,8 11,6 10,3       Энроцид 20,3 15,7 16,8 15,9 18,3 - - - Диометр 15,7 14,3 10,2 14,3 16,7 - - -

К грибам Candida albicans проявляли антимикозное действие следующие препараты: эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ (24,3 мм - 12,9 мм); к грибам Aspergillus fumigatus - эндотон йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль (19,7 мм - 10,4 мм); к грибам Mucor racemosus - эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль (25,3 мм - 10,3 мм).

Таким образом, отмечено, что энрофлоксацин, левомецитин, ципрофлоксацин, ампициллин, абактан обладали антибактериальными свойствами, а препараты эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль обладали как антибактериальными, так и антимикозными свойствами.

Проверка эндотона на безвредность.

В процессе проведения опыта было установлено, что после введения препарата животным в дозах 2000, 3000, 3800 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15-30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения эндотон в дозе 3800 мг/кг у животного наблюдали клинические судороги, непроизвольное мочеиспускание. Животное не отвечало на внешние раздражители и через несколько минут констатировали гибель животного.

Исходя из факта гибели подопытного животного №8, не перенесшего дозу 3800 мг/кг живой массы, и оставшегося в живых животного №6 - 2000 мг/кг живой массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами.

После предварительного нахождения LD₅₀ доза 2000 мг/кг живой массы была введена 10 крысам, подобранным по принципу пар-аналогов по полу и живой массе. С соблюдением всех условий, как в опыте по предварительному нахождению смертельной дозы. По результатам опыта установлена гибель 50% животных.

Доза 1800 мг/кг живой массы тела, не вызвавшая гибель животных, является максимально переносимой дозой препарата при его однократном пероральном введении (LD₀).

Доза 2000 мг/ кг живой массы является средней смертельной дозой при однократном введении (LD₅₀). Доза 3000 мг/кг массы тела является абсолютно смертельной LD(₁₀₀).

Следовательно, препарат эндотон по классификации химических веществ, при однократном оральном пути введения относится к III классу токсичности - умеренно токсические вещества.

Терапевтическую эффективность эндотона изучали в сравнение с широко применяемыми препаратами: йодовет, лозеваль, рихометрин, фуразолидоновые палочки. Все эти препараты использовались согласно инструкции по их применению. Опыты проведены на фермах 2 хозяйств Краснодарского края.

Опыт проводили по следующей схеме: 100 коров-аналогов (по возрасту, продуктивности, породности и т.д.) с острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом разделили на 5 групп по 20 животных.

Первой группе животных вводили йодовет, второй группе животных - эндотон, животным в третьей группе - лозеваль, четвертой - рихометрин, пятой - фуразолидоновые палочки (которые предварительно растворяли в 200 мл дистиллированной воды). Препарат эндотон (смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллианта зеленого в соотношении 200:1 смесь водного раствора готовили предварительно при t 50°С) вводили в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Остальные препараты вводили согласно инструкции по их применению. За животными вели постоянное клиническое наблюдение до их плодотворного осеменения, учитывая срок лечения, кратность введения антимикробных препаратов и терапевтическую эффективность. Полученные результаты отражены в таблице 5.

Таблица 5 Терапевтическая эффективность препаратов Вводимые препараты Кол-во животных в группах Срок лечения (дней) Кратность введения препаратов Терапевтическая эффективность (%) Кол-во дней бесплодия Иодовет 20 11,4 11,4 80 127,4 Эндотон 20 5,4 5,4 90 94,5 Лозеваль 20 8,6 2,4 80 110,6 Рихометрин 20 14,7 4,6 70 119,3 Фуразолидоновые палочки 20 20,0 20,0 60 156,5

В результате наблюдения за животными установлено: у коров второй группы, где применяли препарат эндотон терапевтический эффект оказался наилучшим и составил 90%, в первой и третьей группах эффективность лечения находится на одном уровне 80%, однако количество дней лечения в первой группе выше на 2,8 дня, а кратность введения препарата на 9 дней, количество дней бесплодия выше на 16,8 дней по сравнению с третьей группой, где применялся лозеваль. Наиболее низкие показатели терапевтической эффективности были в четвертой и пятой группах 70% и 60%, а количество дней бесплодия составило 119,3 и 156,5 дней, соответственно.

В ходе опыта проводился постоянный клинический осмотр животных, который показал, что у коров первой группы отмечено резкое увеличение выделений гнойно-катарального экссудата из матки на 4-5 день после начала лечения, на 7-8 день лечения количество маточных выделений уменьшалось, они становились прозрачными и к 10-11 дню лечения прекращались. Во второй группе увеличение выделений гнойно-катарального экссудата регистрировали на 1-2 день лечения, а на 5-6 день выделений не регистрировалось. В третьей группе усиленное выделение экссудата отмечали в 1-3 день, постепенно количество маточных выделений уменьшалось, они становились прозрачными и к 8-9 дню выделения прекращались. В четвертой и пятой группе коров гнойно-катаральные выделения из матки были незаметными и выделялись небольшими порциями, в основном после ночного отдыха. Примесь гноя в маточной слизи регистрировали до 9-10 дня лечения. Появления чистой прозрачной, очень липкой слизи, отмечали на 10-12 день, а ее полное прекращение на 14-20 день.

При ректальном исследовании матки коров установили, что ее сократительная способность в первой и третьей группе восстанавливается на 4-5 день, во второй группе на 2-3, а в четвертой и пятой группах на 5-8 день лечения.

Пример. Нами было взято на курацию животное (корова), больное эндометритом бактериально-микозной этиологии. Для лечения использовали препарат эндотон (смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллианта зеленого в соотношении 200:1, смесь водного раствора готовили предварительно при t 50°С), который вводили внутриматочно в дозе 100 мл. ежедневно в течение 5 дней. В результате клинических исследований было установлено, что на 2 день лечения происходит увеличение выделений гнойно-катарального экссудата, а на 4 день выделения не регистрировались. При ректальном исследовании матки коровы установили, что ее сократительная способность восстановилась на 2 день, а к четвертому дню лечения матка была в тазовой полости и полностью реагировала сокращением на ректальный массаж.

Таким образом, применение препарата эндотон при лечении эндометрита бактериально-микозной этиологии уменьшает срок лечения, а также ускоряет нормализацию некоторых показателей крови. В 5-10% случаев требуется применение повторного курса лечения.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает использование четвертичного аммонийного соединения. При этом в качестве четвертичного аммонийного соединения используют септабик. Предварительно готовят водный раствор септабика при соотношении воды и препарата 100:1. В полученный раствор добавляют бриллиантовый зеленый в соотношении 200:1. Полученную смесь вводят корове внутриматочно ежедневно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Способ позволяет сократить срок лечения в среднем на 3,2 дня, повысить терапевтический эффект на 10%, снизить количество дней бесплодия на 16,1 дней по сравнению с известными способами. 1 з.п. ф-лы, 5 табл.

1. Способ лечения эндометритов бактериально-микозной этиологии у коров, включающий использование четвертичного аммонийного соединения, отличающийся тем, что корове внутриматочно вводят смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и в дальнейшем растворении в полученном растворе бриллиантового зеленого в соотношении 200:1 ежесуточно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь водного раствора готовят предварительно при t 50°C.