СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ОСТЕОПОРОЗА И ПРОФИЛАКТИКИ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ОСТЕОПОРОТИЧЕСКИХ ПЕРЕЛОМОВ РЕЗВЕРАТРОЛОМ В КОМБИНАЦИИ С ЭНАЛАПРИЛОМ Российский патент 2011 года по МПК G09B23/28 A61K31/45 A61K31/401 A61P19/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов эналаприлом (Пат. RU 2369390, МПК⁷ А61К 31/401. Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов эналаприлом / Покровский М.В., Гудырев О.С., Файтельсон А.В. и др.; заявители и патентообладатели Покровский М.В., Гудырев О.С., Файтельсон А.В. - №2008122134/14; заявл. 02.06.08; опубл. 10.10.09. Бюл. №28).

Основными недостатками способа является то, что отсутствует оценка антиостеопоротического действия комбинации эналаприла и резвератрола у самок крыс линии Wistar, не проводилось изучение влияния указанной комбинации препаратов на степень кровоснабжения костной ткани, а также ширину костных трабекул.

Задачей изобретения является разработка способа коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов, включающего использование резвератрола в комбинации с эналаприлом.

Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования остеопороза в эксперименте с помощью билатеральной овариэктомии у самок крыс линии Wistar проводится его коррекция в течение восьми недель ежедневным, однократно в сутки, внутрибрюшинным введением резвератрола в дозе 2 мг/кг, обладающим антиоксидантной, эстрогенной, антиагрегационной и эндотелиотропной активностью, и внутрижелудочным введением эналаприла в дозе 0,5 мг/кг, который, влияя на активность ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС), тормозит превращение ангиотензина I в ангиотензин II, что в совокупности непосредственно уменьшает вазоконстрикторную активность циркулирующих и тканевых компонентов РААС и приводит к периферической вазодилатации, вызывает повышение кровоснабжения костной ткани и увеличение ширины костных трабекул,

Способ осуществляется следующим образом.

Опыты проводили на крысах самках линии Wistar массой 200-250 г. Овариэктомия проводилась под наркозом (раствор хлоралгидрата внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг из расчета 0,1 мл раствора на 100 г массы животного). Внутрибрюшинное введение резвератрола в дозе 2 мг/кг и внутрижелудочное введение эналаприла в дозе 0,5 мг/кг начинали на следующий день после операции и осуществляли ежедневно в течение восьми недель. На 57 день от начала эксперимента под наркозом (хлоралгидрат внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг) проводили измерение микроциркуляции в проксимальном метафизе правого бедра. Уровень микроциркуляции измеряли при помощи оборудования компании Biopac systems: полиграф МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивным датчиком TSD144, и программы AcqKnowledge версии 3.8.1. После измерения микроциркуляции производился забор бедренных костей для гистологического исследования; гистологические препараты проксимальных метафизов бедренных костей окрашивали гематоксилином и эозином. Проводилась оптическая микроскопия препаратов с помощью микроскопа Leica CME (увеличение ×100) с фотографированием препаратов при помощи фотоаппарата Olympus SP-350 (разрешение 3264×2448). Морфометрическое исследование полученных фотоснимков производили при помощи программы ImageJ версии 1.39, в ходе которого оценивали ширину костных трабекул.

Полученные значения сравнивали с интактными животными (ложная операция овариэктомии), а также контрольными животными, у которых посредством проведения билатеральной овариэктомии моделировали генерализованный остеопороз.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартной ошибки. Различия считали достоверными при р < 0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Средний уровень микроциркуляции в проксимальном метафизе бедра у интактных (ложно-оперированных) животных составлял 100,5±4,4 перфузионных единиц (ПЕ); средняя ширина костной трабекулы равнялась 97,7±1,0 мкм (таблица 1).

Билатеральная овариэктомия через восемь недель после начала эксперимента приводила у контрольных животных к достоверному снижению среднего уровня микроциркуляции по сравнению с интактными до значения 61,5±3,7 ПЕ. Присутствовали признаки развития остеопороза: средняя ширина костной трабекулы составляла 61,7±1,2 мкм (таблица 1). Обнаруженный факт уменьшения кровоснабжения в костной ткани является дополнительным фактором развития остеопороза при гипоэстрогенном состоянии, что приводит к возникновению остеопоротических переломов.

В группе животных, ежедневно получавших в течение восьми недель после овариэктомии внутрибрюшинно резвератрол в дозе 2 мг/кг и внутрижелудочно эналаприл в дозе 0,5 мг/кг, наблюдалось достоверное повышение среднего уровня микроциркуляции в проксимальном метафизе бедра по сравнению с контрольной группой до 108,6±19,0 ПЕ. В то же время наблюдалось достоверное увеличение средней ширины костной трабекулы по сравнению с животными контрольной группы до 94,2±2,9 мкм (таблица 1).

Таблица 1. Динамика показателей среднего уровня микроциркуляции в проксимальном метафизе бедра и средней ширины костной трабекулы при моделировании остеопороза и его коррекции резвератролом в комбинации с эналаприлом (М±m). Группы животных Средний уровень микроциркуляции, ПЕ Средняя ширина костной трабекулы, мкм Интактные (ложно-оперированные) 100,5±4,4 97,7±1,0 Не получавшие лечения (контрольные) 61,5±3,7* 61,7±1,2* Получавшие в течение 8 недель резвератрол 2 мг/кг и эналаприл 0,5 мг/кг 108,6±19,0** 94,2±2,9** Примечание: * - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных; ** - р < 0,05 в сравнении с группой контрольных животных.

Таким образом, резвератрол в комбинации с эналаприлом на фоне билатеральной овариэктомии увеличивает уровень микроциркуляции в проксимальном метафизе бедра до уровня интактных животных и благодаря усилению кровоснабжения костной ткани замедляет развитие остеопороза при гипоэстрогенном состоянии, что, в свою очередь, приводит к уменьшению вероятности возникновения остеопоротических переломов.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов. Исследование проводят на самках крыс линии Wistar. Моделирование остеопороза осуществляют с помощью билатеральной овариэктомии. Коррекцию остеопороза проводят путем введения в течение восьми недель после овариэктомии ежедневно однократно в сутки внутрибрюшинно резвератрола в дозе 2 мг/кг и внутрижелудочно эналаприла в дозе 0,5 мг/кг. Оценивают остеопротективное действие резвератрола в комбинации с эналаприлом по уровню микроциркуляции в костной ткани и ширине костных трабекул. При выбранных дозах и режиме введения указанных препаратов способ обеспечивает улучшение кровоснабжения и микроархитектоники костной ткани при гипоэстрогенном состоянии. 1 табл.

Способ коррекции остеопороза и профилактики возникновения остеопоротических переломов, отличающийся тем, что на фоне моделирования остеопороза в эксперименте с помощью билатеральной овариэктомии самкам крыс линии Wistar в течение восьми недель после овариэктомии вводят ежедневно однократно в сутки внутрибрюшинно резвератрол в дозе 2 мг/кг и внутрижелудочно эналаприл в дозе 0,5 мг/кг, оценивая остеопротективное действие резвератрола в комбинации с эналаприлом по уровню микроциркуляции в костной ткани и ширине костных трабекул.