СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ ЭНАЛАПРИЛА И РЕЗВЕРАТРОЛА ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2007 года по МПК A61K31/401 A61K31/01 A61P9/12 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью эналаприла, относящегося к ингибиторам АПФ, описанный Агеевым Ф.Т., Овчинниковым А.Г. "Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. (Квинаприл и эндотелиальная дисфункция)", Глава II. Дисфункция эндотелия, Часть V. ИАПФ при эндотелиальной дисфункции: экспериментальные данные. М., 2001 г. Изд-во компании "Пфайзер", http://www.viagra.nnov.ru/info/10911-ingibitors4.html|, который заключается в пероральном приёме этих препаратов у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является узкая патогенетическая направленность и опосредованность действия эналаприла при эндотелиальной дисфункции, связанная с его низкой афинностью (сродством) к тканевой (эндотелиальной) ренинангиотензинальдостероновой системе (РААС), в то время как основная причина развития данного патофизиологического состояния - снижение активности клеток сосудистого эндотелия в образовании оксида азота (NO), остаётся некомпенсированной. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при недостаточности NO-синтаз с помощью эналаприла неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование эналаприла, относящегося к ингибиторам АПФ, и активатора NO-синтазы - резвератрола.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится её коррекция внутрижелудочным введением эналаприла в дозе 0,5 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением активатора NO-синтазы резвератрола в дозе 2 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как резвератрол является активатором фермента NO-синтазы, посредством которого образуется NO, в сосудистом эндотелии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ.

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и эналаприла (0,5 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к оптимальному снижению показателей исходных значений АД (САД - 183,9±11,4, ДАД - 138,9±7,0 мм рт.ст.), а в экспериментах, где ещё дополнительно вводился резвератрол (2 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия, так как исходные цифры АД были существенно ниже: САД - 175,9±13,2, ДАД - 132,6±10,6 мм рт.ст. (таблица 1).

Таблица 1Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции эналаприлом с использованием резвератролаГруппы животныхФункциональные пробыСАД, мм рт.ст.ДАД, мм рт. ст.ЧСС, уд. в минИнтактныеИсходные137,7±3,7101,9±4,3420,0±9,0ЭЗВ с АХ84,3±4,538,7±2,8416,0±14,0ЭНЗВ с НП83,0±3,742,1±4,4415,0±10,0Получавшие L-NAME (25 мг/кг)Исходные190,3±6,7*145,0±3,9*428,0±11ЭЗВ с АХ110,6±5,2*82,8±6,6*426,0±14,0ЭНЗВ с НП88,7±4,750,8±4,2426,0±13,0L-NAME(25 мг/кг)+Эналаприл (0,5 мг/кг)Исходные183,9±11,4*138,9±7,0*377,0±9,0ЭЗВ с АХ98,0±3,3*61,6±4,7*381,0±11,0ЭНЗВ с НП88,7±4.042,7±3,3381,0±11,0L-NAME+Эналаприл (0,5 мг/кг) +резвератрол (2 мг/кг)Исходные175,9±13,2**132,6±10,6**374,0±12,0ЭЗВ с АХ85,0±7,5**53,0±5,7**326,0±14,0ЭНЗВ с НП84,8±7,846,7±3,0378,0±11,0* - р<0,05 в сравнении с группой интактных ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+эналаприл

Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ. Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только эналаприл, это отношение соответствовало значению 3,2±0,1, а в группе с дополнительным введением к эналаприлу резвератрола - 1,5±0,1 (таблица 2).

Таблица 2Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME эналаприлом и эналаприлом в сочетании с резвератроломГруппы животныхФункциональные пробыПрирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)Время сосудистой реакции (сек)Площадь сосудистой реакции (усл.ед)Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НПL-NAME +эналаприлАХ80,1±5,535,0±1,71405,5±97,53,2±0,1НП109,0±8,098,7±5,65123,9±121,8L-NAME+эналаприл+резвератролАХ76,0±8,646,3±4,51742,2±165,21,5±0,1*НП79,0±6,071,5±7,62329,1±185,3* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+эналаприл

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции эналаприла при сочетанном его применении с резвератролом.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Моделируют дисфункцию ежедневным, в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам линии Wistar в дозе 25 мг/кг. На фоне моделирования дисфункции осуществляют ее коррекцию одновременным введением эналаприла внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и резвератрола внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг однократно в сутки. При этом степень развития дисфункции и активизацию ее коррекции с помощью указанных средств оценивают по соотношению эндотелийнезависимой (ЭНЗВ) и эндотелийзависимой вазодилатации (ЭЗВ). Способ обеспечивает возможность изучения эндотелиопротективных эффектов резвератрола и активации эндотелиальной NO-синтазы на стадии моделирования эндотелиальной дисфункции и их оценки с помощью вышеуказанного соотношения ЭНЗВ и ЭЗВ. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение эналаприла, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным, в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам линии Wistar в дозе 25 мг/кг, оценивая степень развития дисфункции по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, и на фоне этого вводят эналаприл внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и резвератрол внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг однократно в сутки.