СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИЦЕЛИЯ Ganoderma lucidum Российский патент 2012 года по МПК C12N1/14 A01G1/04 G01N21/00 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскохозяйственному производству, в частности к грибоводству.

Известен способ получения посевного мицелия съедобных грибов (см. Патент РФ RU 2249614, опубл. 21.03.2003 г.), включающий выращивание посевного мицелия на картофельно-пшеничную питательную среду следующего состава (вес. ч.): мука - 20 г, картофельный отвар - из расчета 200 г картофеля на 1 л воды. Культуру выращивали при температуре 26°С в течение трех дней. В качестве стимулятора роста мицелия использовали суспензию бактерий Azospirillum brasilense Sp 7, выращенного на синтетической жидкой среде следующего состава (г/л): KH₂PO₄ - 13,61; NaOH - 1,7; FeSO₄·7Н₂О - 0,01; CaCl₂ - 0,026; Na₂MoO₄ - 0,002; MgSO₄ - 0,2; KNO₃ - 0,05; биотин - 10^-4; фруктоза - 1,44; рН 6,8. Выращивание осуществляли при температуре 30-35°С. Недостатком данного способа являются трудоемкость получения мицелия из-за необходимости выращивания культуры на картофельно-пшеничной питательной среде с использованием стимулятора роста бактерий Azospirillum brasilense Sp 7, а также увеличение материальных затрат. Известен способ выращивания мицелия высших грибов, включающий высевание базидиоспор на питательную среду и инкубирование их до образования мицелия. Предварительно пастеризованный или стерилизованный субстрат смешивают с мицелием и вносят в жесткую емкость для культивирования, выстланную изнутри гибкой прокладкой, обладающей водостойкими свойствами. Проращивание мицелия происходит внутри замкнутого гибкой прокладкой пространства в условиях повышенной влажности и микроаэрофильных условий, что является оптимальным для развития субстратного мицелия. (RU, патент 2101913, кл. А01G 1/04, 1998 г.). Недостатком данного способа является его значительная трудоемкость и технологическая сложность прохождения этапов данного способа, что в значительной степени увеличивает продолжительность способа и увеличивает материальные затраты. Наиболее близким является способ получения посевного мицелия съедобных грибов (см. Патент РФ №2183056 по МПК А01G 1/04, опуб. 10.06.2002 г.), включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде в присутствии стимулятора роста, в качестве которого используют иммуноцитофит в концентрации 5,2·10^-5 мг/мл действующего вещества, причем стимулятор вводят на начальной стадии получения посевного материала, а именно в агаризованную питательную среду. Продолжительность выращивания посевного материала составляет 6 дней. Недостатком данного способа является необходимость использования в качестве стимулятора роста химического вещества иммуноцитофита, в основе которого лежит этиловый эфир арахидоновой кислоты, что не обеспечивает получение экологически чистого продукта питания.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа выращивания мицелия Ganoderma lucidum с целью сокращение сроков выращивания первичного мицелия, а также увеличения воздушно-сухой массы мицелия без каких - либо химических добавок, что позволяет выращивать экологически чистый продукт с конкурентоспособными свойствами.

Объектом наших исследований стал один из известных базидиальных грибов Ganoderma lucidum, используемый в лечебных целях более двух тысяч лет народами Юго-Восточной Азии. Его применяли при разнообразных заболеваниях, в том числе бронхиальной астме, неврастении, гастрите, болезнях печени. Трутовик лакированный имеет множество имен. В Китае и Корее он известен, как «лин-чжи» (гриб/трава бессмертия), в Японии этот гриб наиболее известен под именами «рейши» (гриб духовной силы).

Интенсивные исследования G. lucidum в течение последних десятилетий показали, что биологически активные вещества, выделенные из этого гриба, оказывают иммунорегулирующее, противоопухолевое, противовирусное, антибиотическое, гиполипидемическое, гипогликемическое, гепатопротекторное, генопротекторное, противовоспалительное, противоаллергенное, антиоксидантное действие, способны регулировать работу сердечно-сосудистой, дыхательной и нервной систем.

Плодовые тела и мицелий G. lucidum содержат углеводы (восстанавливающие сахара и полисахариды), аминокислоты, пептиды, белки, тритерпены, включая стероиды, липиды, алкалоиды, гликозиды, летучие эфирные масла, витамины, микроэлементы, такие как магний, марганец, молибден, кальций, цинк, калий, натрий, железо, медь, сера, германий. Предлагаемый способ выращивания мицелия реализуется следующим образом. В заявленном изобретении используют стандартную, агаризованную питательную среду (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), которая готовится путем добавления в нее необходимого количества дистиллированной воды и автоклавирования 15-30 мин при 1-1,5 атм. Для выращивания мицелия используют стеклянные чашки Петри, после предварительной стерилизации в сухожаровом шкафу 2 ч 20 мин при 160°С остужают их и разливают питательную среду так, чтобы дно чашки было полностью покрыто на 1-2 мм, эту и все дальнейшие процедуры проводим в стерильных условиях (ламинарном боксе). Чашки оставляют на некоторое время в ламинарном боксе (на 10-15 минут), для того чтобы среда застыла. На застывшую питательную среду, в центр чашки Петри высаживают мицелий определенного штамма Ganoderma lucidum.

После посева чашки Петри закрывают парафилмом (пленкой для герметизации открытых сосудов) и экспонируют сутки в темноте при температуре 24-26°С. Следующим этапом является стимуляция роста селективным светом с длиной волны 620-680 нм, по 30-120 мин ежедневно, при температуре 24-26°С, чашки при этом выставляют на специальные световые установки (световая установка представляет собой стеллаж с полками, регулируемыми по высоте, каждая из которых имеет подсветку (лампы располагаются в горизонтальной плоскости, сверху, установка закрыта темной, непроницаемой тканью со всех сторон, исключая этим проникновение дневного или любого другого света во время проведения эксперимента), остальное время чашки находятся в темноте при той же температуре. Эта процедура продолжается до полного обрастания поверхности субстрата (5-7 дней).

На рисунке 1 изображена разница показаний воздушно-сухой массы мицелия Ganoderma lucidum, выращенного при 30-минутном освещении красным селективным светом. На рисунке 2 представлены данные 5-дневного эксперимента с мицелием Ganoderma lucidum, выращенного при ежедневном освещении красным селективным светом, который отличается от данных контроля выросшего в темноте.

Ниже приведены примеры конкретного осуществления.

Пример 1

Способ выращивания мицелия Трутовика лакированного (Ganoderma lucidum), включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), при температуре 24-26°С. В качестве посевного материала используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 30 мин красным селективным светом (620 нм), интенсивностью 60 мкмоль/см²·с, при температуре 24-26°С до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 5-7 дней.

Пример 2

Способ выращивания мицелия Трутовика лакированного (Ganoderma lucidum), включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде (Malt Extract Agar фирмы Mycomedia), при температуре 24-26°С. В качестве посевного материала используют кусочек агаризованной среды с культурой 5×5 мм, который помещают в центре чашки Петри со средой. Культуру инкубируют в темноте, ежедневно освещая по 2 часа (120 мин) красным селективным светом (680 нм), интенсивностью 100 мкмоль/см²·с при температуре 24-26°С до полного зарастания поверхности субстрата. Продолжительность выращивания 5-7 дней.

Использование данного способа выращивания позволяет существенно ускорить выход мицелия, без поражения его на этапе разрастания низшими грибами, за счет полной стерильности процесса, а также отсутствия химических добавок для культивирования позволяет обеспечить его экологическую чистоту, а также увеличить выход воздушно-сухой массы мицелия.

Способ выращивания мицелия Ganoderma lucidum включает приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде в присутствии стимулятора роста. В качестве стимулятора роста используют селективный свет с длиной волны 620-680 нм, интенсивностью 60-100 мкмоль/см²·с в течение 30-120 минут. Выращивание мицелия осуществляют при температуре 24-26°С в течение 5-7 дней. Способ позволяет увеличить выход воздушно-сухой массы мицелия. При 30 мин экспозиции выход воздушно-сухой массы мицелия составляет около 160 мг. 2 ил., 2 пр.

Способ выращивания мицелия Ganoderma lucidum, включающий приготовление посевного материала на агаризованной питательной среде в присутствии стимулятора роста, отличающийся тем, что в качестве стимулятора роста используют селективный свет с длиной волны 620-680 нм, интенсивностью 60-100 мкмоль/(см²·с) в течение 30-120 мин при температуре 24-26°С, 5-7 дней.