ПРОИЗВОДНЫЕ КАМПТОТЕЦИНА С ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2012 года по МПК C07D491/22 A61K31/4741 A61K31/4745 A61P35/00 

Настоящее изобретение относится к новым производным камптотецина, обладающим противоопухолевой активностью, способу их получения, их применению в качестве противоопухолевых лекарственных средств и фармацевтическим композициям, содержащим их.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Камптотецин представляет собой алкалоид, экстрагированный из Camptotheca acuminate (Nyssaceae), который впервые описали Wall и Wani в 1966 г. (J. Am. Chem. Soc. 1966, 88, 3888-3890). Камптотецин, хоть он и наделен широким спектром противоопухолевой активности, особенно против опухоли толстой кишки и других солидных опухолей и лейкемий, не применяют в терапии из-за его высокой токсичности, которая, в частности, проявляется в форме геморрагического цистита, желудочно-кишечной токсичности и миелосупрессии.

Для того чтобы получить соединения, обладающие низкой токсичностью и высокой растворимостью, синтезировали ряд аналогов камптотецина. В настоящее время в клинической практике применяют два препарата, а именно CPT-11 и топотекан. Другие производные, такие как белотекан, рубитекан, эксатекан, гиматекан, пегамотекан, луртотекан, каренитецин, афелетекан, гомокамптотецин, дифломотекан и многие другие, проходят клинические испытания. Соединение CPT-11 представляет собой высокорастворимое пролекарство для 10-гидрокси-7-этилкамптотецина (общеизвестного как SN-38), одобренное для лечения многих солидных опухолей и асцитов (колоректальных, кожных, желудочных, легочных, шейки матки, яичников, не-ходжкинской лимфомы).

Топотекан является растворимым в физиологическом растворе соединением, активным против опухолей легкого, желудка, печени, яичника, молочной железы, предстательной железы, пищевода, прямой кишки, сарком мягких тканей, головы и шеи, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий. Топотекан оказывает, однако, существенные побочные действия, такие как нейтропения и тромбоцитопения.

Луртотекан представляет собой более растворимое производное, обладающее активностью в опухолях шеи, яичника, молочной железы, колоректальной и легочной микроцитомы. Однако луртотекан также обладает кровяной токсичностью.

Рубитекан представляет собой пролекарство для орального применения, эффективное против опухолей поджелудочной железы, яичника и молочной железы.

Камптотецин и его аналоги, также как и все ингибиторы топоизомеразы I, эффективны против опухолей, устойчивых к обычным лекарствам, включая ингибиторы топоизомеразы II; поддерживают высокий уровень топоизомеразы во время всего клеточного цикла; не вызывают мультилекарственную резистентность (Pgo или MRP) или нейтрализацию метаболизма, опосредованного данным ферментом.

Сейчас исследования фокусируются на новых ингибиторах топоизомеразы I, обладающих меньшей токсичностью, чем лекарства, применяемые в настоящее время.

Производные камптотецина с раскрытым кольцом демонстрируют высокое связывание с белками (в частности, с альбумином) и низкое распространение в опухолевых тканях. Вследствие этого продукт аккумулируется в организме, а воздействие на опухоли недостаточно.

Напротив, высокая липофильность лактоновой формы способствует адгезии производных камптотецина на клеточных мембранах, особенно на эритроцитах, влияя на коэффициент распределения между тканью и плазмой. По этой причине исследования фокусируются на двух альтернативных подходах: a) конструирование продуктов со слабым связыванием с белком, при этом с хорошей растворимостью; b) конструирование высокоактивных продуктов, имеющих терапевтический эффект даже в чрезвычайно низких дозах.

Модификации в положениях 7, 9, 10 и 11, как правило, оказываются вполне допустимыми, поскольку не влияют на стабильность тройного комплекса ДНК, топоизомеразы I и камптотецина, образование которого обуславливает противоопухолевую активность соединений.

Продукты с конфигурацией 20R оказываются или неактивными, или гораздо менее активными, чем продукты с конфигурацией 20S, которая совпадает с природной конфигурацией.

Как правило, модификации в положении 5 считаются неблагоприятными для образования тройного комплекса, тогда как о модификациях в пиридоновых кольцах D и E сообщают, что они губительны для активности продукта.

РАСКРЫТИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте настоящее изобретение относится к производным камптотецина общей формулы I:

где

R представляет собой F, Cl, Br, I, -N3, NH2, -NR'R'', -COOR', -CONR'R'', -NHR'''-NR'R'', где R', R'' и R''' могут представлять собой H, алкил, арил, арилалкил, ацил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил;

R1 представляет собой алкил, аминоалкил, гидроксиалкил, нитрил, алкоксимино, арилоксимино, силилалкил;

R2 представляет собой водород, гидроксил, алкокси, аминоалкил;

R3 представляет собой водород, необязательно замещенный гидроксил, алкокси, аминоалкил,

где алкильные, ацильные, алкокси, аминоалкильные или алкоксимино группы могут содержать от 1 до 8, предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода, в прямой или разветвленной цепи, и арильная и арилокси группы могут содержать от 5 до 10 атомов углерода;

их фармацевтически приемлемым солям, изомерам, энантиомерам, диастереомерам и соответствующим смесям.

Соединения настоящего изобретения демонстрируют слабое связывание с белком и обладают хорошей растворимостью и высокой активностью даже в очень низких дозах.

Предпочтительный синтетический способ получения соединения настоящего изобретения показан на схеме I, где:

a) - защита гидроксигрупп предшественника;

b) - превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо;

c) - удаление защитных групп.

Схема I

На схеме I R, R1, R2 и R3 имеют значения, описанные выше, и PG представляет собой гидрокси-защитную группу.

Предшественники могут быть коммерчески доступными или получены, как описано в литературе. Для получения продуктов, модифицированных в 5 положении, можно применять способ, описанный на схеме II, который включает:

a) - защиту гидроксигрупп предшественника;

b) - модификацию в 5 положении посредством образования карбаниона и реакции с электрофильным реагентом;

c) - трансформацию карбонила 16a в тиокарбонил;

d) - снятие защиты с гидроксигрупп;

в котором стадии b) и c) могут быть проведены в обратном порядке.

Схема II

На схеме II R, R1, R2 и R3 имеют значения, описанные выше, и PG представляет собой OH-защитную группу.

Образование карбаниона в 5 положении можно получить, обрабатывая предшественик сильным органическим основанием, предпочтительно LiHMDS.

Карбанион реагирует in situ с электрофилом, таким как источник галогена, азадикарбоксилат, изоцианат, хлоркарбонильное производное, тозилазид.

Превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо можно получить при помощи реакции с 2,4-бис(4-метоксифенил)-1,2,3,4-дитиафосфетан-2,4-дисульфидом (обычно известным как реагент Лаусона) (Cava P.M. et al., Tetrahedron 1985, 41, 5061; Cherkasov RA et al., Tetrahedron 1985 41, 2567; Ghattas AAG et al., Sulfur Lett. 1982, 1, 69; Yde B et al., Tetrahedron 1984, 40. 2047) или с эквивалентным реагентом. Предпочтительным является реагент Лаусона.

В качестве гидрокси-защитных групп предпочтительны силилы и карбаматы или их комбинации.

Соединения по настоящему изобретению были подвергнуты анализу на цитотоксичность на широком спектре опухолевых клеток. В качестве примера приведены данные по цитотоксичности на клеточной линии NCI-H460 (рак NSCL), касающиеся двух соединений формулы (I), с использованием камптотецина и препаратов Топотекан и SN-38 в качестве контроля:

Название Формула NCI-H460 IC50 (мкг/мл)
Количество клеток Камптотецин 0,115±0,0174 Топотекан 0,63±0,44 SN38 0,0865±0,0049 IDN 6070 (тиокамптотецин) 0,05±0,021 IDN 6092 0,3±0,07 IDN 6093 0,72±0,2 IDN 6156 Тио-SN38 0,0095±0,0007 IDN 6180 Тиотопотекан 0,115±0,021 IDN 6181
10-гидрокситиокамптотецин 0,035±0,011

Анализ цитотоксичности показал, что серосодержащие производные камптотецина в среднем в 10 раз более активны, чем несеросодержащие аналоги.

Наиболее активные соединения были определены в анализе расщепления ДНК путем измерения активной концентрации и стойкости повреждения (см. раздел 'Примеры'). Производные формулы (I) неожиданно продемонстрировали более высокую стойкость блокирования репликации ДНК, чем используемые в качестве контроля стандарты (в частности топотекан и камптотецин), при этом сохраняя эффективную цитотоксическую активность.

Более того, серосодержащие производные оказались более активными, чем несеросодержащие аналоги также и в данном случае, поскольку они индуцировали повреждение ДНК в более низких концентрациях, и оно сохранялось дольше.

Соединение тио-SN38 (IDN6156) трансформировали в тио-CPT11 (тиоиринотекан) в соответствии со способом превращения SN38 в CPT11 (иринотекан), описанным в литературе. Полученное в результате соединение тиоиринотекан сравнили in vivo с близким несеросодержащим аналогом в клиническом применении (CPT11) на модели опухоли легкого, высокочувствительной к стандартному контролю.

Данные, приведенные в следующей таблице, показывают, что серосодержащее соединение тио-CPT11 активнее, чем несеросодержащий аналог CPT11, поскольку сохраняет тот же уровень эффективности при лучших переносимости и терапевтическом индексе.

Препарат^а Доза
(мг/кг на инъекцию) TWI%^b LCK^c
(0,5 г) Max^d
BWL% Tox/Tot^e CPT11 50 91 1,8 15 0/5 тио-CPT11 10 94 2,3 9 0/5

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами. Фармацевтические формы, подходящие для орального или парентерального введения соединений (I) могут быть твердыми, предпочтительно капсулы, таблетки и гранулы, или жидкими, предпочтительно инъецируемые или инфузионные растворы.

Подходящим образом составленные в композицию соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения солидных опухолей и лейкемий, в частности опухолей легкого, яичника, молочной железы, желудка, печени, предстательной железы, сарком мягких тканей, головы и шеи, пищевода, поджелудочной железы, толстой кишки, прямой кишки, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий.

ПРИМЕРЫ

Пример I - 20-OTES-камптотецин

Камптотецин (0,100 г, 0,287 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (3 мл) в инертной атмосфере, и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,980 г, 1,44 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,193 мл, 1,15 ммоль) добавляют туда по каплям, после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,040 г, 0,287 ммоль). Через 46 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, (по ТСХ контролируют полное исчезновение реагента, элюент CH₂Cl₂/MeOH = 30/1). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,133 г, 0,287 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,37 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,92 (д, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,82 (т, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,65 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,57 (с, 1H, H-14), 5,67 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,29 (с, 2H, H-5), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,93 (м, 12H), 0,80-0,71 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,6, 152,5, 151,5, 149,0, 145,9, 130,9, 130,4, 130,0, 128,4, 128,1, 128,0, 127,9, 118,9, 94,4, 75,3, 66,0, 50,0, 33,2, 7,9, 7,2, 6,4.

Пример II - 20-OTES-тиокамптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,664 г, 1,44 ммоль), растворяют в безводном ксилоле (20 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,523 г, 1,29 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=4/1, затем 7/2) с получением таким образом искомого продукта (0,578 г, 1,21 ммоль, 84%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,46 (с, 1H, Ar, H-7) 8,29 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,03 (с, 1H, H-14), 7,97 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=21,8 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 6,15 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 5,62 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,57 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,34 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 1,94 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-19), 1,90 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-19), 1,05-0,91 (м, 12Н), 0,82-0,71 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,3, 171,5, 151,9, 149,1, 148,3, 147,2, 130,8, 130,6, 130,6, 130,1, 128,3, 128,2, 128,2, 128,0, 104,5, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5, 7,7, 7,2, 6,4.

Пример III - получение тиокамптотецина (IDN 6070)

20-OTES тиокамптотецин (0,150 г, 0,314 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (10 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,140 мл, 0,816 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 48 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,112 г, 0,307 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,46 (с, 1H, Ar, H-7), 8,27 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,13 (с, 1H, H-14), 7,97 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=21,8 Гц, Ar), 7,70 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 6,25 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 5,62 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,58 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,37 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 3,80 (с, 1H, OH), 1,90 (кв, 2H, H-19), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 172,6, 151,8, 149,1, 148,7, 145,5, 130,9, 130,8, 130,5, 129,9, 128,3 (2 C), 128,2, 128,0, 104,3, 72,3, 69,2, 56,3, 32,0, 7,8.

Пример IV - 20-OTES SN-38

SN-38 (0,100 г, 0,255 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл), в инертной атмосфере, и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,087 г, 1,28 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,171 мл, 1,02 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,031 г, 0,255 ммоль). Через 52 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (CH₂Cl₂/MeOH=10/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,121 г, 0,240 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,26 (уш. с, 1H, OH), 8,14 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,58 (с, 1H, H-14), 7,49 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,2 Гц, H-11), 7,46 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 5,70 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,28 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,23 (с, 2H, H-5), 3,05 (кв, 2H, J=7,5 Гц), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 1,32 (т, 3Н, J=7,5 Гц, Me), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,77-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 149,0, 146,7, 144,6, 143,6, 131,9, 128,7, 126,9, 122,8, 117,9, 105,5, 98,5, 75,4, 65,9, 49,5, 32,9, 23,2, 13,5, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример V - 10-OTBDMS-20-OTES SN-38

20-OTES SN-38 (0,121 г, 0,240 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ = 1:1 (8 мл) в инертной атмосфере. Добавляют туда имидазол (0,081 г, 1,20 ммоль) после чего, через 10 минут, добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl), (0,144 мг, 0,957 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,029 г, 0,240 ммоль). Через 18 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл), и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,127 г, 0,205 ммоль, 85%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,49 (с, 1H, H-14), 7,40 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 7,38 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,5 Гц, H-11), 5,67 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,23 (с, 2H, H-5), 3,11 (кв, 2H, J=7,6 Гц), 1,99-1,82 (м, 2H, H-19), 1,38 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me), 1,04 (с, 9H), 1,00-0,92 (м, 12H), 0,78-0,69 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,9, 157,7, 155,1, 151,5, 150,1, 146,8, 145,6, 143,5, 132,2, 128,2, 126,9, 125,9, 118,0, 110,5, 97,7, 75,4, 66,0, 49,3, 33,2, 25,6, 23,1, 18,3, 13,7, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример VI - 10-OTBDMS 20-OTES тио-SN-38

SN-38 10-OTBDMS 20-OTES (0,127 г, 0,205 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,075 г, 0,184 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 23 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=5/1) с получением таким образом искомого продукта (0,042 г, 0,066 ммоль, 32%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,17 (д, 1H, J=8,9 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,43 (д, 1H, J=2,6 Гц, H-9), 7,41 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,6 Гц, H-11), 6,16 (д, 1H, J=17,1 Гц, H-17), 5,56 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,50 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 3,18 (кв, 2H, J=7,6 Гц), 1,91 (кв, 2H, J=7,4 Гц, H-19), 1,41 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me), 1,05 (с, 9H), 1,03-0,92 (м, 12H), 0,81-0,72 (м, 6H), 0,31 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 171,5, 155,4, 149,4, 149,3, 147,4, 145,7, 143,6, 132,4, 129,9, 128,5, 126,5, 126,2, 110,5, 104,1, 75,0, 68,8, 55,8, 33,5, 25,7, 23,2, 18,4, 13,9, 7,8, 7,2, 6,5, -4,3.

Пример VII - 20-OTES тио-SN-38

10-OTBDMS 20-OTES тио-SN-38 (0,042 г, 0,066 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,013 мл, 0,080 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 3 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt=2/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,034 г, 0,065 ммоль, 99%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,19 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,44 (дд, 1H, J₁=8,8 Гц J₂=2,6 Гц, H-11), 7,43 (д, 1H, J=2,6 Гц, H-9), 6,16 (д, 1H, J=17,1 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,55 (д, 1H, J=19,7 Гц, H-5), 5,49 (д, 1H, J=19,7 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,9 Гц, H-17), 3,16 (кв, 2H, J=7,8 Гц), 1,91 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,39 (т, 3Н, J=7,9 Гц, Me), 1,03-0,92 (м, 12H), 0,81-0,72 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,0, 171,7, 155,6, 149,1, 149,0, 147,3, 145,2, 143,7, 132,5, 130,0, 128,7, 126,7, 122,4, 105,5, 104,2, 75,1, 68,9, 55,8, 33,5, 23,1, 13,7, 7,7, 7,2, 6,4.

Пример VIII - ТиоSN-38 (IDN 6156)

20-OTES ТиоSN-38 (0,034 г, 0,065 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,025 мл, 0,150 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 40 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,026 г, 0,064 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (ТГФ-d₈, 400 МГц) δ 9,23 (уш. с, 1H, OH), 8,06 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,88 (с, 1H, H-14), 7,41 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 7,38 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 6,08 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,67 (уш. с, 1H, OH), 5,50 (с, 2H, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,22 (кв, 2H, J=7,8 Гц), 1,90 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,42 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me), 0,97 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (ТГФ-d₈, 100 МГц) δ 173,0, 172,1, 157,5, 149,6, 149,2, 146,1, 145,0, 142,6, 132,3, 130,1, 128,9, 127,6, 122,3, 104,9, 102,3, 72,3, 68,5, 55,8, 31,7, 22,7, 13,1, 7,3.

Пример IX - 20-OTES топотекан

Топотекан (0,100 г, 0,238 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл) в инертной атмосфере и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,081 г, 1,19 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,160 мл, 0,952 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,029 г, 0,238 ммоль). Через 52 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (CH₂Cl₂/MeOH=10/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CHCl₃ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CHCl₃ (2×15 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,120 г, 0,224 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,65 (уш. с, 1H), 8,26 (с, 1H, Ar, H-7), 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,80 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 7,58 (с, 1H, H-14), 5,67 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,20 (с, 2H, H-5), 4,71 (с, 2Н), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,77-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 157,9, 156,6, 152,1, 150,8, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,1, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример X - 10-OTBDMS 20-OTES топотекан

20-OTES топотекан (0,120 г, 0,224 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ=1:1 (8 мл) в инертной атмосфере. Добавляют имидазол (0,076 г, 112 ммоль), после чего, через 10 минут, трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl) (0,135 мг, 0,896 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,027 г, 0,224 ммоль). Через 21 час реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CHCl₃ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CHCl₃ (2×15 мл). Органические фазы объединяют и сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,116 г, 0,179 ммоль, 80%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,26 (с, 1H, Ar, H-7), 8,14 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,81 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 7,59 (с, 1H, H-14), 5,64 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,19 (с, 2H, H-5), 4,71 (с, 2H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 1,04 (с, 9H), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,7, 155,1, 151,5, 150,0, 146,8, 144,3, 134,3, 131,2, 129,9, 127,9, 123,0, 118,9, 110,1, 98,5, 75,4, 65,9, 51,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XI - 10-OTBDMS 20-OTES тиотопотекан

10-OTBDMS 20-OTES топотекан (0,116 г, 0,179 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,065 г, 0,161 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 23 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=5/1) с получением таким образом искомого продукта (0,047 г, 0,072 ммоль, 40%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,35 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 1,04 (с, 9H), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H), 0,30 (с, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XII - 20-OTES тиотопотекан

10-OTBDMS 20-OTES тиотопотекан (0,047 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,014 мл, 0,086 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 4 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt=2/1). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=2/1, затем 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,039 г, 0,071 ммоль, 99%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,36 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2 H), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,2 Гц, H-19), 0,98-0,88 (м, 12H), 0,77-0,68 (м, 6H). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 75,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XIII - Тиотопотекан (IDN 6180)

Тиотопотекан 10-OH 20-OTES (0,039 г, 0,071 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,026 мл, 0,163 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 40 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,030 г, 0,069 ммоль, 98%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,36 (с, 1H, Ar, H-7), 8,17 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,96 (с, 1H, H-14), 7,85 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-11), 6,16 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 6,02 (уш. с, 1H, OH), 5,52 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,48 (д, 1H, J=21,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 4,73 (с, 2 H), 3,84 (уш. с, 1H, OH), 2,81 (с, 6H, 2 Me), 1,92 (кв, 2H, J=7,6 Гц H-19), 1,03 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,5, 171,5, 155,1, 149,9, 149,4, 147,2, 144,3, 134,3, 132,1, 129,9, 127,9, 126,5, 123,0, 110,1, 104,2, 72,4, 67,9, 55,1, 50,0, 43,9, 32,9, 7,8.

Пример XIV - Получение 20-OTES 10-гидроксикамптотецина

10-Гидроксикамптотецин (0,100 г, 0,275 ммоль) суспендируют в безводном диметилформамиде (5 мл) в инертной атмосфере и к полученной в результате суспензии добавляют имидазол (0,225 г, 3,31 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,460 мл, 275 ммоль), после чего добавляют 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,068 г, 0,550 ммоль). Через 24 часа реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ полное исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=20/1). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением таким образом искомого продукта (0,124 г, 0,259 ммоль, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 400 МГц) δ 8,10 (с, 1H, Ar, H-7), 8,05 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar), 7,50 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,4 Гц, H-11), 7,11 (д, 1H, J=2,2 Гц, H-9), 5,60 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,21 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,15 (с, 2H, H-5), 1,97-1,81 (м, 2H, H-19), 0,98-0,88 (м, 12Н), 0,76-0,68 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃ + 5% CD₃OD, 100 МГц) δ 172,2, 157,8, 156,7, 151,8, 149,2, 146,1, 144,1, 130,9, 129,8, 129,0, 128,6, 123,2, 117,8, 108,8, 98,1, 75,4, 65,8, 50,0, 32,9, 7,7, 7,1, 6,3.

Пример XV - 10-OTBDMS-20-OTES камптотецин

10-Гидрокси-20-OTES-камптотецин (0,105 г, 0,219 ммоль) растворяют в безводной смеси CH₂Cl₂/ТГФ=1:1 (4 мл) и в инертной атмосфере. Добавляют имидазол (0,097 г, 1,42 ммоль), после чего, через 10 минут, добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (TBDMS-Cl) (0,164 мг, 1,10 ммоль), затем 4-диметиламинопиридин (DMAP) (0,040 г, 0,329 ммоль). Через 18 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ полное исчезновение реагента (циклогексан/AcOEt = 1/3). Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и промывают с помощью H₂O и насыщенного NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (2×10 мл). Органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, циклогексан/AcOEt = 1/3) с получением таким образом искомого продукта (0,117 г, 0,197 ммоль, 90%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,22 (с, 1H, Ar, H-7), 8,13 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,51 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,22 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 5,66 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 5,25 (с, 2H, H-5), 5,24 (д, 1H, J=16,5 Гц, H-17), 1,99-1,82 (м, 2H, H-19), 1,03 (с, 9H), 1,00-0,92 (м, 12Н), 0,78-0,69 (м, 6Н), 0,29 (с, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,0, 157,7, 155,1, 151,5, 150,6, 146,1, 145,1, 131,4, 129,4, 129,3, 128,7, 126,7, 118,3, 114,5, 97,7, 75,3, 66,0, 49,9, 33,1, 25,6, 18,3, 7,9, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XVI - 10-OTBDMS-20-OTES тиокамптотецин

10-OTBDMS 20-OTES камптотецин (0,350 г, 0,589 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (10 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR), (0,590 г, 147 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 95°C, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (циклогексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, циклогексан/AcOEt=4/1) с получением таким образом искомого продукта (0,323 г, 0,530 ммоль, 90%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,28 (с, 1H, Ar, H-7), 8,16 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar, H-12), 7,97 (с, 1H, H-14), 7,40 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,26 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 6,15 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,58 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,53 (д, 1H, J=20,0 Гц, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 1,91 (кв, 2H, J=7,4 Гц, H-19), 1,04 (с, 9Н), 1,02-0,92 (м, 12Н), 0,82-0,72 (м, 6Н), 0,30 (с, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,1, 171,5, 155,5, 149,8, 148,6, 147,3, 145,3, 131,5, 130,1, 129,8, 129,1, 128,3, 127,0, 114,5, 104,0, 75,0, 68,8, 56,3, 33,5, 25,6, 18,3, 7,8, 7,2, 6,4, -4,3.

Пример XVII - Получение 10-гидрокситиокамптотецина (IDN 6181)

Тиокамптотецин 10-OTBDMS 20-OTES (0,320 г, 0,524 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,670 мл, 4,19 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 20 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=25/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, CH₂Cl₂/MeОH=25/1, затем 20/1) с получением таким образом искомого продукта (0,189 г, 0,498 ммоль, 95%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (ТГФ-d₈, 400 МГц) δ 9,20 (уш. с, 1H, OH), 8,37 (с, 1H, Ar, H-7), 8,05 (д, 1H, J=9,2 Гц, Ar, H-12), 7,89 (с, 1H, H-14), 7,39 (дд, 1H, J₁=9,2 Гц J₂=2,8 Гц, H-11), 7,22 (д, 1H, J=2,8 Гц, H-9), 6,07 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,70 (уш. с, 1H, OH), 5,47 (с, 2H, H-5), 5,33 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 1,89 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 0,97 (т, 3H, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (ТГФ-d₈, 100 МГц) δ 173,0, 172,1, 157,4, 149,7, 149,0, 146,1, 144,5, 131,3, 130,5, 130,2, 129,7, 128,6, 123,0, 108,9, 102,3, 72,3, 68,5, 56,5, 31,7, 7,3.

Пример XVIII - Гидрохлорид тиотопотекана (IDN 6180)

10-Гидрокситиокамптотецин (0,150 г, 0,421 ммоль) растворяют в смеси безводного CH₂Cl₂ (3,5 мл) и н-пропанола (1,8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют туда по каплям бис(диметиламино)метан (0,092 г, 0,905 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 4 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (CH₂Cl₂/MeOH=25/1). Через приблизительно 5 часов добавляют смесь 0,125 г концентрированной HCl в 1 мл н-пропанола, и смесь реагирует в течение еще 16 часов. Продукт фильтруют и многократно промывают CH₂Cl₂ и Et₂O с получением таким образом искомого продукта (0,168 г, 0,370 ммоль, 88%) в виде красно-оранжевого твердого вещества.

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 11,51 (уш. с, 1H, OH), 9,78 (уш. с, 1H, OH), 9,06 (с, 1H, Ar, H-7), 8,21 (д, 1H, J=8,8 Гц, Ar), 7,76 (с, 1H, H-14), 7,72 (д, 1H, J 8,8 Гц, Ar), 5,91 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,50 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,49 (с, 2H, H-5), 4,73 (с, 1H, CH₂NMe₂), 4,72 (с, 1H, CH₂NMe₂), 2,83 (с, 3Н, Me), 2,82 (с, 3Н, Me), 1,87 (кв, 2H, J=7,6 Гц, H-19), 0,85 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (DMSO-d₆, 100 МГц) δ 172,7, 172,1, 158,8, 149,6, 148,8, 147,0, 144,2, 133,7, 130,6, 130,6, 129,9, 127,5, 123,2, 109,1, 103,6, 72,8, 68,6, 57,4, 51,1, 43,1, 31,2, 8,3.

Пример XIX - 5-F-20-OTES-камптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,260 мл, 0,260 ммоль). Через 20 минут добавляют NFSI (0,089 г, 0,281 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 2 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/2). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 3 часов при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=3/1, затем 2/1 и в конце 1/1), получая таким образом смесь двух изомеров (0,101 г, 0,210 ммоль, 97%) (отношение изомеров 1:1) в виде светло-желтого твердого вещества. Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,47 (д, 1H, ¹J_HF=61,2 Гц, H-5), 7,45 (с, 1H, H-14), 5,62 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,02-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,93 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,4, 157,5, 152,3, 151,1, 150,2 (д, J=1,5 Гц), 150,3 (д, J=1,5 Гц), 143,6 (д, J=5,3 Гц), 133,7, 131,7, 130,2, 128,9, 128,4, 127,9 (д, J=15,0 Гц), 126,3 (д, J=15,0 Гц), 121,8, 98,9, 93,8 (д, ¹J_CF=213,2 Гц, C-5), 75,1, 65,7, 33,1, 7,8, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,51 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,51 (д, 1H, ¹J_HF=60,8 Гц, H-5), 7,42 (с, 1H, H-14), 5,62 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 5,20 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17), 2,02-1,82 (м, 2H, H-19), 1,04-0,93 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,2, 157,8, 152,5, 151,2, 150,3, 143,7, 133,7 (д, J=2,4 Гц), 131,7, 130,2, 128,9, 128,3, 127,9 (д, J=2,3 Гц), 126,3 (д, J=16,7 Гц), 121,8 (д, J=1,5 Гц), 99,0. 93,8 (д, ¹J_CF=214,8 Гц, C-5), 75,0, 65,8, 33,3, 7,9, 7,1, 6,4.

Пример XX - Получение первого диастереомера 5-F-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-F-20-OTES-камптотецина (0,025 г, 0,052 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (5 мл) при перемешивании в инертной атмосфере. Затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,060 мл, 0,368 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 28 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток хроматографируют (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,019 г, 0,051 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,87 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,59 (с, 1H, H-14), 7,46 (д, 1H, ¹J_HF=61,2 Гц, H-5), 5,69 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 2,01-1,81 (м, 2H, H-19), 1,05 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 157,6, 151,1, 151,0, 150,2, 144,1, 133,9, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4, 121,7, 98,8, 93,8 (д, ¹J_CF=214,0 Гц, C-5), 72,5, 66,0, 31,5, 7,8.

Пример XXI - Получение второго диастереомера 5-F-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-F-20-OTES-камптотецина (0,025 г, 0,052 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (5 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,060 мл, 0,368 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 28 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток хроматографируют (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,018 г, 0,050 ммоль, 97%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,52 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,96 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,88 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,69 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,56 (с, 1H, H-14), 7,51 (д, 1H, ¹J_HF=60,4 Гц, H-5), 5,69 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,98-1,78 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,3, 157,7, 151,2, 151,2, 150,2, 144,2, 133,8, 131,9, 130,0, 129,0, 128,5, 127,8, 126,4, 121,6, 98,9, 93,7 (д, ¹J_CF=214,0 Гц, C-5), 72,5, 66,1, 31,6, 7,8.

Пример XXII - получение 5-N3-20-OTES-камптотецина

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,260 мл, 0,260 ммоль). Через 20 минут добавляют тозилазид (TsN₃) (0,055 г, 0,281 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 2 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt=2/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 2 часов 30 минут при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток, содержащий два дастереомера, очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt=3/1, затем 2/1 и в конце 1/1), получая таким образом (0,106 г, 0,210 ммоль, 97%) смеси двух изомеров (отношение изомеров 1:1) в виде светло-желтого твердого вещества. Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,25 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,49 (с, 1H, H-14), 6,97 (с, 1H, H-5), 5,65 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,01-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,94 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,6, 158,3, 152,2, 150,8, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,4, 75,2, 65,7, 33,1, 7,9, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,86 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,46 (с, 1H, H-14), 6,99 (с, 1H, H-5), 5,66 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,02-1,84 (м, 2H, H-19), 1,03-0,94 (м, 12Н), 0,80-0,71 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,4, 158,4, 152,3, 150,9, 150,0, 144,0, 132,9, 131,4, 130,1, 128,6, 128,3, 128,2, 128,1, 120,8, 98,7, 75,3, 75,1, 65,8, 33,3, 7,9, 7,2, 6,4.

Пример XXIII - Получение первого диастереомера 5-N3-20-OH-камптотецина

Диастереомер 1 5-N3-20-OTES-камптотецина (0,070 г, 0,139 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,170 мл, 1016 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 26 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,053 г, 0,136 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,44 (с, 1H, Ar, H-7), 8,24 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,93 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,85 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,67 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,63 (с, 1H, H-14), 6,97 (с, 1H, H-5), 5,70 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,29 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,99 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,6, 158,3, 150,8, 150,7, 149,8, 144,4, 133,1, 131,5, 129,9, 128,6, 128,3, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,4, 72,7, 66,0, 31,5, 7,8.

Пример XXIV - Получение второго диастереомера 5-N3-камптотецина

Диастереомер 2 5-N3-20-OTES-камптотецина (0,055 г, 0,109 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,135 мл, 0,820 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 26 часов при комнатной температуре, контролируя исчезновение исходного реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,042 г, 0,107 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,45 (с, 1H, Ar, H-7), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,95 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,85 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,68 (т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,60 (с, 1H, H-14), 7,00 (с, 1H, H-5), 5,74 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,28 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,04 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,4, 158,4, 150,9, 150,7, 149,8, 144,5, 133,0, 131,5, 129,9, 128,6, 128,4, 128,3, 128,1, 120,6, 98,6, 75,3, 72,6, 66,1, 31,6, 7,8.

Пример XXV - Получение 5-NH₂-камптотецина

Диастереомер 2 5-N3-20-OH-камптотецина (0,050 г, 0,129 ммоль) растворяют в смеси безводного ТГФ (1,5 мл) и безводного MeOH (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют Pd/C (14 мг ~10%) и проводят два цикла в вакууме/H₂ (балонное давление H₂). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 3 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/3) исчезновение реагента, затем фильтруют через целит и промывают с помощью CH₂Cl₂ (2×15 мл). Растворитель выпаривают в вакууме. ¹H ЯМР спектроскопия реакционного материала показала наличие искомого продукта в виде смеси 1:1 двух эпимеров по положению C5. Флеш-хроматография (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH = 35/1, затем 25/1) позволяет разделить смесь двух диастереомеров (0,046 г, 0,126 ммоль, 98%).

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,48 (с, 1H, Ar, H-7), 8,22-8,17 (м, 1H, Ar), 7,95-7,90 (м, 1H, Ar), 7,85-7,78 (м, 1H, Ar), 7,68-7,60 (м, 1H, Ar), 7,58 (с, 0,5H, H-14), 7,54 (с, 0,5H, H-14) 6,50 (с, 0,5H, H-5), 6,47 (с, 0,5H, H-5), 5,74-5,64 (м, 1H, H-17), 5,28-5,22 (м, 1H, H-17), 4,00-2,40 (уш. с, 3Н, OH+NH₂), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,07-1,01 (м, 3Н, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,8 (2 C), 158,5 (2 C), 151,2 (2 C), 150,4 (2 C), 149,7 (2 C), 144,5 (2 C), 132,7 (2 C), 131,0 (2 C), 129,8 (2 C), 128,5 (2 C), 128,3 (2 C), 128,0 (2 C), 127,8 (2 C), 120,2 (2 C), 113,8 (2 C), 97,7 (2 C), 72,7 (2 C), 66,3, 66,0, 31,5 (2 C), 7,8, 7,8.

Пример XXVI - 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецин

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,281 мл, 0,281 ммоль). Через 20 минут добавляют ди-трет-бутилазодикарбоксилат (DTBAC) (0,075 г, 0,324 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 4 часов при -78°C контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. Реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/1) с получением таким образом смеси двух изомеров (0,145 г, 0,210 ммоль, 97%). Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,80 (уш. с, 1H, Ar), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,01 (уш. д, 1H, Ar), 7,90-7,71 (м, 2H, Ar), 7,70-7,45 (м, 2H, Ar+H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,61 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,23 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,03-1,81 (м, 2H, H-19), 1,79-1,08 (уш. с, 18H), 1,06-0,92 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,7, 157,8, 155,5, 155,5, 152,0, 152,0, 151,2, 149,4, 145,0, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7, 128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,7, 81,5, 79,7, 75,2, 65,7, 33,2, 28,3, 27,6, 7,7, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,79 (уш. с, 1H, Ar), 8,23 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 8,01 (уш. д, 1H, Ar), 7,85-7,76 (м, 2H, Ar), 7,65 (уш. т, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,52 (с, 1H, H-14), 6,54 (уш. с, 1H, H-5), 5,61 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,22 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 2,03-1,82 (м, 2H, H-19), 1,76-1,08 (уш. с, 18H), 1,04-0,92 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,5, 157,9, 155,5, 155,5, 152,3, 152,0, 151,2, 149,4, 145,1, 132,1, 130,6, 130,0, 128,7, 128,4, 127,9, 119,9, 98,2, 82,9, 81,5, 79,6, 75,2, 65,8, 33,3, 28,3, 27,4, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XXVII - Получение первого диастереомера 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,050 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (4 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,088 мл, 0,542 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 35 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/2), с получением таким образом искомого соединения (0,041 г, 0,071 ммоль, 98%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Затем продукт очищают путем кристаллизации из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,77 (уш. с, 1H, Ar), 8,16 (уш. д, 1H, J=8,0 Гц, Ar), 7,97 (уш. с, 1H, Ar), 7,86-7,50 (м, 4 H, Ar), 6,51 (уш. с, 1H, H-5), 5,66 (д, 1H, J =16,4 Гц, H-17), 5,24 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,80 (м, 2H, H-19), 1,79-1,13 (уш. с, 18 H), 1,03 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,7, 157,9, 155,5, 155,5, 152,1, 151,3, 150,7, 149,6, 145,7, 132,3, 130,7, 129,9, 128,7, 127,9, 127,6, 120,0, 97,9, 82,8, 81,6, 79,7, 72,7, 66,1, 31,8, 28,3, 27,7, 7,7.

Пример XXVIII - получение второго диастереомера 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-ди-т-бутоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,050 г, 0,072 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (45 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,088 мл, 0,542 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 35 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 3/2) c получением таким образом искомого соединения (0,040 г, 0,069 ммоль, 96%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Затем продукт очищают путем кристаллизации из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,79 (уш. с, 1H, Ar), 8,22 (уш. д, 1H, J=8,4 Гц, Ar), 7,99 (уш. с, 1H, Ar), 7,88-7,50 (м, 4H, Ar), 6,53 (уш. с, 1H, H-5), 5,65 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,26 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 3,80 (уш. с, 1H, OH), 2,00-1,80 (м, 2H, H-19), 1,79-1,13 (уш. с, 18H), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,6, 157,9, 155,4, 155,4, 152,1, 151,3, 150,8, 149,5, 145,6, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,9, 127,8, 119,8, 98,0, 83,0, 81,5, 79,7, 72,7, 66,3, 31,8, 28,3, 27,7, 7,8.

Пример XXIX - Получение 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина

Камптотецин 20-OTES (0,100 г, 0,216 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем охлаждают до температуры -78°C и добавляют туда по каплям 1,0 M раствор LiHMDS в ТГФ (0,281 мл, 0,281 ммоль). Через 20 минут добавляют дибензилазодикарбоксилат (0,097 г, 0,324 ммоль) в безводном ТГФ (2 мл). После 3 часов при -78°C температуре позволяют подняться до 25°C и контролируют исчезновение реагента при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1). Наблюдают образование двух диастереомеров. После 90 минут при комнатной температуре реакцию прерывают добавлением насыщенного NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×15 мл) и органические фазы объединяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 4/1, затем 7/2) с получением таким образом светло-желтого твердого вещества (0,161 г, 0,212 ммоль, 98%). Два изомера разделяют последующей хроматографией. В порядке элюирования:

Первый диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,70 (уш. с, 1H, Ar), 8,39 (уш. с. 1H, Ar), 8,22 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,95 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,83 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,65 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,64-7,00 (м, 11H, Ar+H-14), 6,49 (уш. с, 1H, H-5), 5,57 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,47-4,44 (м, 5H), 1,98-1,82 (м, 2H, H-19), 1,02-0,89 (м, 12Н), 0,80-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,6, 158,0, 156,3, 156,3, 153,0, 152,2, 151,0, 149,6, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6, 130,0, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,4, 79,5, 75,2, 68,4, 67,9, 65,6, 33,0, 7,9, 7,2, 6,4.

Второй диастереомер: ¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,85 (уш. с, 1H, Ar), 8,58 (уш. с. 1H, Ar), 8,20 (уш. с, 1H, Ar), 7,93 (уш. с, Ar), 7,81 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,63 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,56-6,90 (м, 11H, Ar + H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,55 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17), 5,44-4,71 (м, 5H), 1,98-1,80 (м, 2H, H-19), 1,05-0,90 (м, 12Н), 0,81-0,70 (м, 6Н). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,5, 157,9, 156,4, 156,4, 152,9, 152,4, 150,9, 149,4, 144,8, 135,3, 132,1, 130,6, 129,9, 128,6-127,8 (11 C), 119,9, 98,5, 79,3, 75,2, 68,4, 67,8, 65,6, 32,9, 7,8, 7,2, 6,4.

Пример XXX - Получение первого диастереомера 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Первый диастереомер 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,140 г, 0,184 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,225 мл, 1380 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 52 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 1/3). Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1, затем 2/3) с получением таким образом (0,113 г, 0,175 ммоль, 95%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем продукт очищают кристаллизацией из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,67 (уш. с, 1H, Ar), 8,39 (уш. с. 1H, Ar), 8,12 (уш. д, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,95 (уш. с, 1H, Ar), 7,74 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,65-6,66 (м, 12H, Ar+H-14), 6,48 (уш. с, 1H, H-5), 5,55 (д, 1H, J=16,0 Гц, H-17), 5,42-4,44 (м, 5H), 3,86 (уш. с, 1H, OH), 1,92-1,72 (м, 2H, H-19), 0,95 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 158,0, 156,2, 156,0, 153,0, 150,9, 150,9, 149,5, 145,3, 135,4, 132,2, 130,7, 129,8, 128,7-127,8 (11 C), 119,9, 98,2, 79,6, 72,7, 68,5, 68,0, 65,9, 31,6, 7,8.

Пример XXXI - Получение второго диастереомера 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OH-камптотецина

Второй диастереомер 5-дибензилоксикарбонилгидразино-20-OTES-камптотецина (0,140 г, 0,184 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (6 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,150 мл, 0,921 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 55 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ исчезновение реагента (гексан/AcOEt = 3/2). Растворитель выпаривают в вакууме, и остаток очищают флеш-хроматографией (SiО₂, гексан/AcOEt = 1/1), получая таким образом искомое соединение (0,113 г, 0,175 ммоль, 95%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем продукт очищают путем кристаллизации из CH₂Cl₂/пентан = 1/50.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 8,71 (уш. с, 1H, Ar), 8,34 (уш. с. 1H, Ar), 8,18 (уш. с, 1H, Ar), 7,94 (уш. с, 1H, Ar), 7,79 (уш. т, 1H, J=7,6 Гц, Ar), 7,70-6,70 (м, 12H, Ar+H-14), 6,52 (уш. с, 1H, H-5), 5,53 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17), 5,44-4,48 (м, 5H), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,90-1,70 (м, 2H, H-19), 0,99 (т, 3Н, J=7,6 Гц, Me). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,4, 158,0, 156,3, 156,1, 153,0, 151,0, 150,9, 149,6, 145,3, 135,5, 132,3, 130,8, 129,8, 128,7, 127,8 (11 C), 119,8, 98,4, 79,5, 72,7, 68,5, 67,8, 66,0, 31,6, 7,7.

Пример XXXII - Получение 20-OTES-гиматекана

Гиматекан (0,040 г, 0,089 ммоль) растворяют в безводном диметилформамиде (4 мл) в инертной атмосфере и добавляют имидазол (0,030 г, 0,445 ммоль). Смесь перемешивают в течение 10 минут, затем добавляют туда по каплям триэтилсилилхлорид (TES-Cl) (0,060 мл, 0,358 ммоль), после чего добавляют 4- диметиламинопиридин (DMAP) (0,011 г, 0,089 ммоль). Через 75 часов реакционную смесь выпаривают в вакууме, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 1/1) полное исчезновение реагента. Затем твердое вещество повторно растворяют в CH₂Cl₂ и H₂O и насыщенном NH₄Cl, водную фазу экстрагируют с помощью CH₂Cl₂ (3×10 мл). Остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 1/1) с получением таким образом искомого продукта (0,048 г, 0,085 ммоль, 95%) в виде желтого твердого вещества (смесь E/Z=70130).

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,02 (с, 1H, CH=N E) 8,29 (д, 1H, J=8,42 Гц, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,00 (с, 1H, CH=N Z), 7,99 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9Z), 7,83 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E + H-11Z), 7,68 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E + H-10Z), 7,57 (с, 1H, H-14E + H-14Z, 5,67 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E + H-17Z), 5,43 (с, 2H, H-5E), 5,26 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E), 5,25 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17Z), 5,20 (с, 2H, H-5Z), 2,00-1,84 (м, 2H, H-19E + H-19Z), 1,50 (с, 9Н, o^tBuE), 1,35 (S, 9Н, O^tBUZ), 1,02-0,94 (м, 12H, E+Z), 0,80-0,70 (м, 6H, E+Z). ¹³ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 171,9 (E+Z, C-21), 157,5 (E+Z, C-16a), 152,5 (E), 152,3 (Z), 151,3 (E+Z), 149,7 (E), 149,0 (Z), 145,7 (E+Z), 142,2 (CH=N E), 139,4 (CH=N Z), 132,9 (E), 132,1 (Z), 130,9 (E, CH, Ar), 130,6 (Z, CH, Ar), 130,3 (Z, CH; Ar), 130,1 (E, CH, Ar), 128,1 (E+Z, CH, Ar), 125,6 (Z), 125,4 (E), 124,7 (Z, CH, Ar), 122,8 (E, CH, Ar), 119,1 (Z), 118,9 (E), 98,3 (Z, C-14), 98,1 (E, C-14), 81,4 (E, OC(CH₃)₃), 81,2 (Z, OC(CH₃)₃), 75,3 (E+ Z, C-20), 66,0 (E+ Z, C-17), 52,7 (E, C-5), 51,2 (Z, C-5), 33,3 (E, C-19), 33,2 (Z, C-19), 27,6 (OC(CH₃)₃ E), 27,5 (OC(CH₃)₃ Z), 7,9 (E+Z C-18), 7,2 (E+Z), 6,4 (E+Z).

Пример XXXIII - Получение 20-OTES-тиогиматекана

Гиматекан 20-OTES (0,080 г, 0,143 ммоль) растворяют в безводном ксилоле (6 мл) при перемешивании и инертной атмосфере. Затем добавляют реагент Лаусона (LR) (0,087 г, 0,214 ммоль) и нагревают реакцию до 90°C. Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при 90°C, контролируя при помощи ТСХ (гексан/AcOEt = 3/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 4/1) с получением таким образом искомого продукта (0,060 г, 0,102 ммоль, 71%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,06 (с, 1H, CH=M E) 8,33 (д, 1H, J=8,4 Гц, Ar, H-12E), 8,27 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,02 (с, 1H, H-14E), 7,87 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E), 7,73 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E), 7,57 (с, 1H, H-14E + H-14Z), 6,18 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17E), 5,73 (с, 2H, H-5E), 5,35 (д, 1H, J=17,2 Гц, H-17E), 1,93 (кв, 2H, J=7,2 Гц, H-19E), 1,55 (с, 9Н, O^tBUE), 1,06-0,92 (м, 12H, E), 0,82-0,72 (м, 6H, E). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172,4, 171,5, 151,8, 149,8, 148,0, 146,9, 141,9, 132,3, 131,0, 130,7, 130,3, 128,4, 125,6, 125,1, 122,9, 104,3, 81,8, 75,0, 68,9, 59,2, 33,6, 27,6, 7,8, 7,2, 6,5.

Пример XXXIV - получение тиогиматекана

Тиогиматекан 20-OTES (0,060 г, 0,104 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (8 мл) при перемешивании в инертной атмосфере, затем добавляют туда по каплям Et₃N∙3HF (0,127 мл, 0,780 ммоль). Реакционную смесь подвергают реакции в течение 18 часов при комнатной температуре, контролируя при помощи ТСХ (CH₂CL₂/MeOH = 25/1) исчезновение реагента. Растворитель выпаривают в вакууме и остаток очищают флеш-хроматографией (SiO₂, гексан/AcOEt = 211) с получением таким образом искомого продукта (0,048 г, 0,102 ммоль, 95%) в виде ярко-желтого твердого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ 9,02 (с, 1H, CH=ME) 8,28 (д, 1H, J=8,42 Гц, Ar, H-12E + H-12Z), 8,23 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9E), 8,09 (уш. с, 1H, H-14E + H-14Z), 8,08 (с, 1H, CH=NZ), 8,04 (д, 1H, J=7,6 Гц, H-9Z), 7,85 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-11E + H-11Z), 7,70 (т, 1H, J=7,4 Гц, H-10E + H-10Z), 6,26 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17E), 6,24 (д, 1H, J=16,8 Гц, H-17Z), 5,67 (с, 2H, H-5E), 5,51 (с, 2H, H-5Z), 5,37 (д, 1H, J=16,4 Гц, H-17E+ H-17Z), 3,87 (уш. с, 1H, OH), 1,89 (кв, 2H, H-19E + H-19Z), 1,55 (с, 9H, O^tBuZ), 1,42 (с, 9H, O^tBuZ), 1,03 (т, 3Н, J=7,2 Гц, H-18 Z), 1,02 (т, 3Н, J=7,2 Гц, H-18 E). ¹³C ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 173,5, 172,5, 151,7, 149,7, 148,4, 145,2, 141,9 (CH=NE), 139,0 (CH=NZ), 132,3, 130,8, 130,6, 130,5, 128,5, 125,5, 125,0, 122,9, 104,0, 81,8, 72,3, 69,3, 59,2, 32,1, 27,6, 7,7.

Пример XXXV - Анализ ингибирования роста клеток

H460 клетки из человеческой крупноклеточной опухоли легкого культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Чувствительность клеток определяли при помощи анализа ингибирования роста клеток после 1 или 72 часов воздействия препарата. Клетки в логарифмической фазе роста собрали и засевали в двух параллелях в 6-луночном планшете. Через двадцать четыре часа после посева клетки подвергали воздействию препаратов и подсчитывали с помощью счетчика Культера через 72 часа после воздействия препаратов для определения IC₅₀. IC₅₀ определяют как концентрацию, ингибирующую рост клеток на 50% по сравнению с ростом в необработанном контроле.

Пример XXXVI - Анализ топоизомераза-I-зависимого разрыва ДНК

Разрывы ДНК определяли при помощи очищенного геля 751-bp BamHI-EcoRI ДНК SV40 (Beretta GL, Binaschi M, Zagni AND, Capuani L, Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain. Cancer Res 1999; 59:3689-97). Фрагменты ДНК помечали только по 3'. Реакцию разрыва ДНК (20000 имп./мин/образец) проводили в 20 мл смеси 10 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 150 мМ KCl, 5 мМ MgCb, 15 мкг/мл БСА, 0,1 мМ тиотреитола и человеческого рекомбинантного фермента (top1 полной длины) в течение 30 минут при 37°C. Реакцию блокировали при помощи 0,5% ДСН и 0,3 мг/мл протеиназы K в течение 45 минут при 42°C. Стойкость повреждения ДНК определяли в различные моменты, добавляя 0,6 M NaCl, после 30 минут инкубации с 10 мкМ препарата. После осаждения ДНК ресуспендировали в денатурирующем буфере (80% формамид, 10 мМ NaOH, 0,01 M ЭДТА и 1 мг/мл красителя) перед посевом в денатурирующем геле (7% полиакриламид в TBE буфере). Все показатели разрыва ДНК измеряли с помощью Phospholmager model 425 (Molecular Dynamics) (Dallavalle S, Ferrari A, Biasotti B, et al., Novel 7-oxyiminomethyl camptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity. J Med Chem 2001; 44:3264-74).

Стойкость повреждения ДНК (%)

Соединение Время (мин)   0 1 5 10 Топотекан 100 65 20 10 Камптотецин 100 58 23 20 SN-38 100 60 33 28 IDN 6070 100 33 10 10 IDN 6181 100 88 50 22 IDN 6156 100 100 80 60 IDN 6092 100 35 18 15

Изобретение относится к новым 5-замещенным производным тиокамптотецина общей формулы I:

где R представляет собой водород, -N3; R1 представляет собой водород, этил, группу -СН=N-O-С(СН₃)₃; R2 представляет собой водород, -CH₂N(CH₃)₂; R3 представляет собой водород, гидроксил, группу

их фармацевтически приемлемым солям, энантиомерам, диастереомерам и соответствующим смесям, обладающим противоопухолевой активностью, способам их получения, их применению в качестве противоопухолевых лекарственных средств и фармацевтическим композициям, на основе соединений формулы I. 7 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 34 пр.

1. Соединения общей формулы I:

где R представляет собой водород, -N3;
R1 представляет собой водород, этил, группу -CH=N-O-C(CH₃)₃;
R2 представляет собой водород, -СН₂N(СН₃)₂;
R3 представляет собой водород, гидроксилгруппу

их фармацевтически приемлемые соли, энантиомеры, диастереомеры и соответствующие смеси.

2. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:
а) тиокамптотецина;
c) тиоSN38;
d) тиотопотекана;
e) тиоиринотекана;
f) тиогиматекана.

3. Способ получения соединений формулы (I), включающий стадии, показанные на схеме I, где:
a) защита гидроксигрупп предшественника;
b) превращение пиридонового кольца в тиопиридоновое кольцо;
c) удаление защитных групп;

где R, R1, R2 имеют значения указанные в п.1, R3 представляет собой водород или гидроксил, необязательно защищенный группой -Si(СН₃)₂С(СН₃)₃ и PG представляет собой ОН-защитную группу, которая представляет собой -Si(CH₃)₃.

4. Способ получения соединений формулы (I), включающий стадии, показанные на схеме II, где:
a) защита гидроксигрупп предшественника;
b) модификация в 5 положении посредством образования карбаниона и реакции с электрофильным реагентом;
c) трансформация карбонила 16а в тиокарбонил;
d) снятие защиты с гидроксигрупп;
в котором стадии b) и c) могут проводиться в обратном порядке:
Схема II

где R, R1, R2 и R3 имеют значения, указанные в п.3.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение формулы (I) вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение по п.2 вместе с фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами.

7. Фармацевтическая композиция по пп.5 и 6 в форме, подходящей для орального или парентерального введения.

8. Применение соединения по пп.1 и 2 или композиции по пп.5-7 для получения лекарственного препарата для лечения опухолей.

9. Применение по п.8, где указанный препарат применяют для лечения солидных опухолей и лейкемий.

10. Применение по п.9, где солидные опухоли и лейкемии выбирают из опухолей легкого, яичников, молочной железы, желудка, печени, предстательной железы, сарком мягких тканей, пищевода, поджелудочной железы, головы и шеи, глиобластомы, хронических и острых миелоцитарных лейкемий.