СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА Российский патент 2012 года по МПК A61K33/38 A61K31/4409 A61J3/00 A61K47/30 A61K47/36 A61P31/06 B82B1/00 B82B3/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным противотуберкулезным средствам, и может быть использовано при получении препаратов на основе изониазида для лечения лекарственно-устойчивых форм туберкулеза.

К основным проблемам лечения туберкулеза относятся ограниченность арсенала противотуберкулезных средств, быстрое развитие устойчивых форм микобактерий туберкулеза (МБТ) на фоне лечения и, как следствие, рост числа больных, инфицированных первично устойчивыми МБТ к основным противотуберкулезным препаратам. Поэтому постоянно идет поиск новых противотуберкулезных препаратов, а также путей повышения эффективности известных.

Для устранения лекарственной устойчивости противотуберкулезные средства применяют в композиции с веществами потенцирующего действия.

Так, известен препарат RU 2003335 С1 («Способ лечения деструктивного туберкулеза легких с массивным бактериовыделением», ЯКУТСКИЙ ФИЛИАЛ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОГО ОБЪЕДИНЕНИЯ «ФТИЗИОПУЛЬМОНОЛОГИЯ»), заключающийся в растворении противотуберкулезных препаратов в серебряной воде. Серебряную воду для этого получают электролитическим путем. Следовательно, в процессе электролиза в воду переходят ионы металла, крайне нестабильные во времени, склонные к окислению и химическому взаимодействию с компонентами противотуберкулезной системы.

В CN 101225533 А описан способ получения наноразмерных частиц серебра электрохимическим путем с добавлением стабилизаторов, например цитрата аммония. Способ включает смешивание нитрата серебра с цитратом аммония, погружение в указанную смесь двух серебряных электродов.

При использовании нитрата серебра часть соли остается в продукте - растворе наночастиц серебра. Несмотря на стабильность наноразмерных частиц серебра, получаемых указанным способом, применение нитрата серебра делает невозможным использование таких частиц в составе противотуберкулезного лекарственного средства ввиду токсичности нитрата серебра. В отличие от данного метода предлагаемый нами способ получения противотуберкулезного препарата позволяет не только синтезировать коллоидный раствор наночастиц серебра, не содержащий посторонних примесей, но и добиться его совместимости с изониазидом. Кроме того применение противотуберкулезного препарата, полученного по заявляемому способу, позволяет добиться максимального терапевтического эффекта.

Из WO 2002085385 А2 известно добавление хитозана к антимикробным нанокристаллическим порошкам металла, в частности серебра, которые используются для лечения туберкулеза. В указанном семействе патентов рассматривается ингаляционное применение антимикробных нанокристаллических порошков. В отличие от указанного патента заявляемый способ приготовления противотуберкулезного лекарственного средства позволяет получать продукт, содержащий водный раствор стабилизированных наночастиц серебра и изониазид, допустимый к парентеральному введению (инъекции). Кроме того, как уже указывалось выше, заявляемый способ позволяет получать нетоксичный не содержащий солей металлов препарат.

Ближайшим к заявляемому изобретению является препарат RU 2008142461 А («Комбинированный лекарственный препарат противотуберкулезного действия, ООО «НПО «ЛИКОМ»), заключающийся в совместном применении изониазида и наночастиц серебра. Следует отметить, что для приготовления противотуберкулезного препарата используются наночастицы серебра, полученные из водного раствора путем вакуумирования, что нарушает не только оболочку, сформированную из стабилизатора, но и первоначальные свойства наночастиц серебра.

Целью предлагаемого изобретения является создание высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, содержащего помимо известных химиотерапевтических средств компоненты, оказывающие синергетический эффект и снижающие резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам, а также расширение его спектра действия.

Поставленная цель достигается следующим образом.

В дистиллированной воде растворяются органические стабилизаторы (5-40% мас.), выбранные из желатина, полиэтиленгликолей, и неорганический стабилизатор (цитрат аммония однозамещенный, 0,1% мас.), хитозан (1-5% мас.), затем в полученном растворе проводится электрохимическое растворение серебряного анода. Изониазид в количестве 6-10% мас. вводится либо перед электролиза, либо после него.

Получение водного раствора наночастиц серебра электрохимическим методом в присутствии органических и неорганических стабилизаторов позволяет создать препарат с высокими противомикробными свойствами, оказывающий синергетическое действие при совместном применении с другими лекарственными средствами. Кроме того, наночастицы серебра имеют развитую поверхность массообмена, что дает максимальный эффект подавления микрофлоры. Оболочка из стабилизатора предотвращает окисление и химическое взаимодействие с другими компонентами системы, увеличивая тем самым срок полезного действия препарата.

Введение в систему природного полисахарида хитозана придает ей уникальные свойства. Хитозан - производное хитина, легко растворимое в воде, обладает противомикробными свойствами, значительно сокращает рост бактерий, что позволяет достичь наибольшего лечебного эффекта от применения заявляемой композиции. Кроме того, он и играет роль сорбента, значит, выполняет еще и транспортную функцию, обеспечивая быструю и точную доставку лекарственного средства к органу-мишени.

Пример 1.

В дистиллированной воде при перемешивании растворяют изониазид в количестве 6% мас. и природный полисахарид хитозан в количестве 3% мас. Затем при нагревании до 45-55°С вводят полиэтиленгликоль с молекулярной массой 4000 в количестве 10% и перемешивают до полного растворения. Потом охлаждают до температуры 20-25°С. В полученный раствор при перемешивании добавляют цитрат аммония из расчета 1,0 г на 1 л раствора при перемешивании. Затем в полученную среду помещают электродную систему, где анодом служит пластина из серебра (ГОСТ Р ИСО 9001-2001), а катодом - пластина из нержавеющей стали (ГОСТ 5582-95 марка 12Х18Н10Т). При перемешивании на электроды подают стабилизированный постоянный ток плотностью 10-20 А/кв. м и напряжением 10-20 В. Электрохимическое растворение серебра ведут в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л раствора. Размер получаемых частиц составляет 5-60 нм, что подтверждают данные дисперсионного анализа, полученные с помощью анализатора размера частиц Nanotrac (рис.1).

Пример 2.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 5% мас., а в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас.

Пример 3.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 2% мас., а изониазид в количестве 10% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 4.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что хитозан берется в количестве 1% мас., в качестве органического стабилизатора используется желатин в количестве 5% мас., а изониазид в количестве 7% мас. добавляется по завершении процесса электролиза.

Пример 5.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.1, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 8% мас., хитозан в количестве 2% мас., а в качестве органического стабилизатора используется полиэтиленгликоль с молекулярной массой 400 в количестве 40% мас.

Пример 6.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата по п.5, отличающийся тем, что изониазид берется в количестве 6% мас., хитозан в количестве 1% мас., а полиэтиленгликоль в количестве 35% мас.

Пример 7. Прототип.

Изучение подавления роста лекарственно-устойчивых изолянтов МБТ проводили методом абсолютных концентраций с использованием плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена. Материал для исследования был получен в лаборатории ГУЗ ЯО «Областная туберкулезная больница» от 50 больных различными формами туберкулеза легких. Все выделенные штаммы МБТ (740 шт.) имели лекарственную устойчивость к различным противотуберкулезным препаратам. МБТОценку результатов исследования проводили подсчетом колоний в экспериментальных пробах (примеры 1-4) в сравнении с контрольной (пример 5-прототип), где различали четыре степени подавления роста МБТ (полное, значительное, умеренное подавление и отсутствие подавления).

Результаты исследований приведены в табл.1.

Данные табл.1 подтверждают увеличение положительного эффекта от применения заявляемой композиции при лечении лекарственно устойчивых форм туберкулеза.

Помимо исследования подавляющей способности заявляемого препарата были оценены его противовирусные свойства, в частности его влияние на показатели течения ВИЧ-инфекции. На базе «Ярославского областного центра по профилактике и борьбе со СПИДом» были проведены исследования in vitro, в ходе которых взят анализ крови у 8 больных, состоящих на учете. У 6 из них - сопутствующее заболевание гепатит С. Проба I была взята вначале исследования, пробы II и III - после 2-месячного и 6-месячного применения заявляемого препарата, соответственно.

Результаты исследований отражены в табл.2 и 3.

Согласно табл.2 и 3 после 2 месяцев исследований наблюдается снижение вирусной нагрузки и увеличение количества клеток CD-4-лимфоцитов в крови.

Важно отметить, что применение заявляемого препарата не оказало никаких побочных эффектов на формулу крови и биохимические показатели.

Таблица 1 Результаты испытания подавляющей способности противотуберкулезных препаратов на рост ЛУ МБТ Степень подавления роста ЛУ штаммов МБТ Пример 1 Пример 2 Пример 3 Пример 4 Пример 5 Пример 6 Пример 7 Полное, % 82,5 73,8 77,5 81,4 79,4 77,1 37,4 Значительное, % 15 21,2 18,8 15,6 16,8 20,0 30,4 Умеренное, % 2,5 3,7 3,7 2,7 3,3 2,9 9,7 Отсутствие. % 0 1,3 0 0,3 0,5 0 2,5 Всего 100 100 100 100 100 100 100

Таблица 2 Вирусная нагрузка до и после применения препарата № пациента № пробы Вирусная нагрузка пример 1 пример 2 пример 3 пример 4 пример 5 пример 6 пример 7 1 I 16754 16760 16757 16723 16754 16755 16750 II 15643 14233 15782 16007 15290 15673 16774 III 14712 12651 12227 13514 13741 14111 16723 2 I 5417 5403 5521 5629 5424 5479 5428 II 5128 5200 5478 5015 5138 5003 5410 III 4380 4456 4901 4781 4500 4289 5400 3 I 10982 10927 10956 10783 10789 10892 10990 II 9891 10113 9903 9567 9561 9800 10993 III 7562 8251 8560 8014 8001 8236 10981 4 I 8814 8725 8898 8856 8821 8867 8913 II 8712 8400 8361 8224 8367 8009 8874 III 6065 5814 7511 6996 7006 7159 8870 5 I 50873 50096 51114 50527 50078 51001 50548 II 45620 42790 46573 43561 46081 47207 50500 III 32081 30098 34219 35800 34200 35692 50481 6 I 21863 21513 21744 21762 21901 21872 21007 II 18034 18001 19540 18992 18650 18900 20984 III 16590 15300 17016 16003 16520 17007 20900 7 I 30025 30112 30277 30671 31009 30810 30019 II 28549 29310 28780 29006 28379 27964 29921 III 25800 26755 25555 27953 26300 25019 29956 8 I 78923 78214 79900 78160 79042 78231 78615 II 73005 65060 72187 71923 73116 72000 78593 III 61290 58116 64253 67500 60067 63214 78550

Таблица 3 Количество CD-4-лейкоцитов до и после применения препарата № пациента № пробы Количество CD-4-клеток пример 1 пример 2 пример 3 пример 4 пример 5 пример 6 пример 7 1 I 321 314 330 319 328 334 315 II 367 360 378 353 369 357 320 III 450 423 440 468 455 441 324 2 I 532 541 529 538 542 550 533 II 580 613 687 592 590 601 537 III 670 668 690 667 681 684 550 3 I 333 337 341 346 350 332 337 II 384 390 378 384 392 379 343 III 449 432 456 449 461 448 351 4 I 478 463 444 435 459 442 430 II 521 512 498 470 507 515 447 III 584 567 558 555 572 564 479 5 I 200 205 207 221 237 216 214 II 267 254 267 281 265 254 226 III 312 353 300 378 362 320 250 6 I 316 323 317 311 320 327 315 II 347 378 389 376 383 367 327 III 479 456 428 420 431 448 349 7 I 298 301 274 293 311 281 285 II 349 370 338 328 338 348 299 III 401 427 390 411 420 420 307 8 I 187 190 188 191 205 183 201 II 253 215 227 249 254 240 215 III 302 284 300 305 308 300 229

Изобретение относится способу приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, содержащего изониазид и наночастицы серебра. Заявленный способ заключается в том, что последовательно растворяется в дистиллированной воде 1-5% мас. хитозана и/или 6-10% мас. изониазида, раствор нагревается до 45-55°С, добавляется стабилизатор, выбранный из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40% мас. и все перемешивается до полного их растворения. Затем добавляется цитрат аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проводится электрохимическое растворение серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л и добавляется изониазид, если ранее он не был добавлен. Изобретение обеспечивает получение высокоэффективного препарата для лечения туберкулеза, в котором компоненты препарата проявляют синергетический эффект и снижают резистентность микобактерий туберкулеза к различным антибиотикам. 3 табл., 1 ил., 7 пр.

Способ приготовления противотуберкулезного лекарственного препарата, включающий смешение изониазида и наночастиц серебра, отличающийся тем, что в целях повышения эффективности дополнительно содержит хитозан, наночастицы серебра вводятся в виде их водного раствора, а процесс получения препарата заключается в последовательном растворении в дистиллированной воде изониазида в количестве 6-10 мас.% и хитозана в количестве 1-5 мас.% или хитозана в количестве 1-5 мас.%, нагреве до 45-55°С, добавлении стабилизаторов, выбранных из полиэтиленгликоля или желатина, в количестве 5-40 мас.% и перемешивании до полного их растворения, добавлении цитрата аммония в количестве 1 г на 1 л раствора при перемешивании, проведении электрохимического растворения серебряного анода в течение 10-30 мин из расчета выхода наночастиц серебра в водный раствор стабилизаторов 2-15 мг на 1 л, добавлении изониазида в количестве 6-10% в случае, если ранее он не был добавлен.