ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2011 года по МПК A61K38/02 A61K33/38 B82B1/00 A61P7/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано как иммуностимулирующее средство.

В настоящее время в целях профилактики и терапии инфекционных заболеваний используется ряд иммуностимулирующих лекарственных средств. По происхождению выделяют иммуностимуляторы микробные (вакцина БЦЖ, пирогенал, продигиозан, лизаты, ликопид, представляют из себя полисахариды бактериологического происхождения), костномозговые (миелопид - набор из 6 миелопептидов), растительные (препараты на основе эхинацеи пурпурной), цитокины (Лейкинферон, Суперлимф, Бета-лейкин, Ронколейкин и Лейкомакс - сложный комплекс эндогенных иммунорегуляторных молекул), нуклеиновые кислоты (дезоксирибонуклеат натрия), химически чистые вещества (Галавит - производное фталгидразида). Из перечисленных наибольшее применение находят иммуностимуляторы природного происхождения, не оказывающие токсического действия на организм и не вызывающие аллергических реакций.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является иммуномодулятор полипептидной природы тактивин. Применение тактивина увеличивает образование антителообразующих клеток в селезенке, повышает показатели клеточного иммунитета.

Целью заявляемого изобретения является создание иммуностимулирующего препарата с широким спектром действия, подавление бактерий и вирусов.

Поставленная цель достигается использованием в качестве иммуностимулятора композиции, состоящей из тактивина и водного раствора стабилизированных наночастиц серебра.

Технический результат, который может быть получен от использования заявляемой композиции, - это усиление функциональной активности препарата, в том числе повышение стимулирующего влияния не только на клеточный, но и на гуморальный иммунитет за счет проявления стимулирующего действия как на индуктивную, так и на продуктивную фазы иммунного ответа. Кроме того, введение наночастиц серебра придает композиции дополнительный противомикробный и противовирусный эффект. Назальное применение препарата (в виде капель и спрея) предотвращает заражение инфекционными заболеваниями, передающимися воздушно-капельным путем (ОРЗ, вирусные инфекции, пневмония, туберкулез, гепатит, гельминит, астма и т.д.).

Новым является то, что совместное применение тактивина и наночастиц серебра впервые предложено для использования в качестве иммуностимулирующего препарата.

Наночастицы серебра получают способом, описанным в RU 2008127628/15 (033886), решение о выдаче патента от 11.01.2010.

Заявляемая иммуностимулирующая композиция включает в свой состав в качестве активных веществ тактивин и наночастицы серебра при следующем соотношении компонентов, г:

Тактивин 0,01 Наночастицы серебра 0,0004-0,0025 Вода до 100

Несмотря на то что компоненты заявляемой иммуностимулирующей композиции применяются отдельно друг от друга (или входят в состав различных лекарственных форм), однако сама композиция, имеющая заявленное сочетание компонентов при определенном их количественном соотношении, ранее не была известна.

Заявляемый иммуностимулятор получают следующим образом.

В водную среду, содержащую стабилизированные наночастицы серебра, при перемешивании последовательно вводили расчетное количество тактивина в порошкообразном виде. Перемешивание продолжали до полного растворения последнего.

Пример 1.

Навеску 0,01 г т-активина растворяли в 99,99 г водной среды, содержащей 0,0004 г наночастиц серебра.

Пример 2.

Навеску 0,01 г т-активина растворяли в 99,99 г водной среды, содержащей 0,0025 г наночастиц серебра.

Пример 3.

Тактивин

Для установления иммуностимулирующих свойств заявляемой композиции было изучено ее влияние на гуморальный иммунный ответ, клеточный иммунный ответ, а также на неспецифическую резистентность организма.

Эксперименты по изучению влияния на гуморальный иммунный ответ были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 20-22 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 1, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 2, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали 0,01%-ный раствор тактивина - прототип, который вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл. При изучении гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×10⁸/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения заявляемой композиции, раствора тактивина или дистиллированной воды. На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×10⁶) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей. Результаты представлены в таблице 1. Анализ результатов показывает, что после 5-дневного введения заявляемой иммуностимулирующей композиции общая клеточность лимфоидного органа возросла. Также повышено относительное и абсолютное содержание антителообразующих клеток по сравнению с контрольной группой мышей и группой, получавших прототип.

Эксперименты по изучению влияния на клеточный иммунный ответ были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 20-22 г. Животные были разделены на 4 группы, 10 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 1, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 2, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали 0,01%-ный раствор тактивина - прототип, который вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Через 24 часа после последнего введения экстрактов животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×10⁷ в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×10⁸ в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. В контралатеральную лапу в качестве контроля вводили физиологический раствор в равном объеме. Учет интенсивности воспалительной реакции осуществляли через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Индекс воспаления (ИВ) определяли по разнице масс опытной и контрольной лап. Результаты эксперимента сведены в таблицу 2. Данные таблицы 2 свидетельствуют о существенном стимулирующем влиянии заявляемого иммуностимулятора на процесс образования антиген-специфических T-лимфоцитов.

Эксперименты по изучению влияния иммуностимулирующей композиции на неспецифическую резистентность организма были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 20-22 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 1, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали иммуностимулирующую композицию, приготовленную по примеру 2, которую вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл; 10 мышей получали 0,01%-ный раствор тактивина - прототип, который вводили животным в течение 5 дней в объеме 0,2 мл. Оценку неспецифической резистентности проводили путем изучения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в тесте поглощения частиц латекса на 4 и 7 сут после окончания введения. Результаты эксперимента приведены в таблице 3. Приведенные в таблице 3 результаты показывают, что заявляемая иммуностимулирующая композиция существенно стимулирует поглотительную активность нейтрофилов периферической крови (по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей прототип) как за счет увеличения количества нейтрофилов, так и за счет увеличения количества поглощенных каждой клеткой частиц как на 4, так и на 7 сутки эксперимента.

Была проведена оценка противомикробного действия заявляемой иммуностимулирующей композиции на лекарственноустойчивые штаммы микобактерий туберкулеза. Эксперимент проводили методом абсолютных концентраций с использованием плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена. Выделенные штаммы МБТ (740 шт) имели лекарственную устойчивость к различным противотуберкулезным препаратам (от моноустойчивости до обширной лекарственной устойчивости). Оценку результатов исследования проводили подсчетом колоний в экспериментальных пробах, где различали четыре степени подавления роста МБТ (полное, значительное, умеренное подавление и отсутствие подавления). Результаты исследований сведены в таблицу 4. Таблица 4 доказывает наличие противомикробного эффекта от применения заявляемой иммуностимулирующей композиции на примере лекарственноустойчивых штаммов микобактерий туберкулеза.

Таблица 1 Влияиние на гуморальный иммунный ответ Группа ОКС, 10⁶/орган АОК, 10⁶/орган АОК, % Контроль 4 сут 213,33±12,6 10,89±0,60 5,1±0,31   7 сут 186,12±7,45 9,14±0,11 4,91±0,11 Пример 1 4 сут 315,54±20,18 77,33±1,27 24,51±0,37   7 сут 303,28±14,30 75,50±1,06 24,89±0,22 Пример 2 4 сут 312,53±18,60 76,0±0,71 24,32±0,27   7 сут 302,87±13,0 73,95±0,77 24,42±0,23 Пример 3 4 сут 271,86±24,19 42,28±1,25 15,55±0,19   7 сут 254,17±10,66 35,56±0,93 13,99±0,16

Таблица 2 Влияние на клеточный иммунный ответ Группа мышей Индекс воспаления Контроль 19,36±1,18 Пример 1 31,67±1,47 Пример 2 30,22±1,64 Пример 3 24,70±1,15

Таблица 3 Влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей Группа мышей Фагоцитарное число Фагоцитарный индекс Контроль 21,18±0,30 2,08±0,11 Пример 1 67,23±8,21 11,33±0,42 Пример 2 66,88±7,34 9,67±0,5 Пример 3 46,55±4,73 8,56±0,51

Таблица 4 Противомикробное действие иммуностимулирующей композиции и тактивина Степень подавления роста ЛУ штаммов МБТ Пример 1 Пример 2 Пример 3 Полное, % 42,3 40,4 0 Значительное, % 53,9 40,4 0 Умеренное, % 3,8 5,7 38,5 Отсутствие, % 0 0 61,5 Всего 100 100 100

Изобретение относится к медицине и фармакологии и представляет собой иммуностимулирующую композицию, содержащую в качестве активного компонента иммуномодулятор полипептидной природы, отличающуюся тем, что с целью повышения иммуностимулирующей активности и противомикробного эффекта дополнительно содержит наночастицы серебра, причем компоненты в средстве находятся в определенном соотношении в г. Изобретение обеспечивает усиление функциональной активности, повышение стимулирующего влияния не только на клеточный, но и на гуморальный иммунитет за счет проявления стимулирующего действия как на индуктивную, так и на продуктивную фазы иммунитета. 4 табл.

Иммуностимулирующая композиция, содержащая в качестве активного компонента иммуномодулятор полипептидной природы, отличающаяся тем, что, с целью повышения иммуностимулирующей активности и противомикробного эффекта, дополнительно содержит наночастицы серебра при следующем соотношении компонентов, г:
Иммуномодулятор полипептидной   природы тактивин 0,01 Наночастицы серебра 0,0004-0,0025 Вода До 100